培养基及其配制讲稿.ppt

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1、关于培养基及其配制第一页，讲稿共五十一页哦培养基形态不同：固体培养基、液体培养基培养过程不同：初代培养基、继代培养基其作用不同：诱导培养基、增殖培养基、生根培养基 营养水平不同：基本培养基、完全培养基一一、培养基的种类第二页，讲稿共五十一页哦二、培养基的组成二、培养基的组成 植物体内至少含有几十种化学元素，其中大部分元素在植物体内起到一定的生理作用：a、组成各种化合物，参与机体的建造，成为结构结构物质；b、构成一些特殊的生理活性物质，参与活跃的新陈代谢；c、元素之间相互协调，以维持离子浓度平衡、胶体稳 定、电荷平衡等点化学方面的作用；d、发育方面，特定的元素影响植物的形态发生和组织、器官建成。

2、第三页，讲稿共五十一页哦其它添加物其它添加物其它添加物其它添加物固化剂固化剂固化剂固化剂植物生长调节剂植物生长调节剂植物生长调节剂植物生长调节剂有机营养成分有机营养成分有机营养成分有机营养成分无机营养成分无机营养成分无机营养成分无机营养成分培养基组成培养基组成无机营养成分+有机营养成分=基本培养基第四页，讲稿共五十一页哦国内外公认的高等植物所必需的营养元素有16（17）种：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S、Fe、B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl、（Ni）在植物中含量差别很大，同一元素在植物不同时期、不同条件下含量也不同。第六页，讲稿共五十一页哦根据植物体内含量多少，可把这些元素分为大量营

3、养元素：占干物质重量的0.1%以上；C C、H H、O O、N N、P P、K K、CaCa、MgMg、S S 9种微量营养元素：占干物质重量的0.1%以下 有的只含0.1mg/kg FeFe、B B、MnMn、CuCu、ZnZn、MoMo、ClCl 7种按照国际植物生理协会的建议：按照国际植物生理协会的建议：所需浓度所需浓度 0.5mmol/L 0.5mmol/L的元素为大量元素的元素为大量元素 所需浓度所需浓度 0.5mmol/L 0.5mmol/L的元素为微量元素的元素为微量元素第七页，讲稿共五十一页哦1、大量元素、大量元素N N是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、是蛋白质、酶、叶

4、绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱等的组成成分，在植物生命活动中占有重生物碱等的组成成分，在植物生命活动中占有重要的位置。要的位置。P P是磷脂的主要成分。培养基中常用是磷脂的主要成分。培养基中常用KHKH2 2POPO4 4 NaH NaH2 2POPO4 4等。等。K K对碳水化合物合成，转移，以及氮素代谢等有对碳水化合物合成，转移，以及氮素代谢等有密切关系。密切关系。第八页，讲稿共五十一页哦MgMg、S S、CaCa是叶绿素的组成成分，又是激酶的活是叶绿素的组成成分，又是激酶的活化剂，对核蛋白体结构具有稳定作用；化剂，对核蛋白体结构具有稳定作用；S S是含是含S S氨基酸的蛋白质的组成成分

5、。氨基酸的蛋白质的组成成分。CaCa是构成细胞壁的成分，对细胞分裂，稳定质膜是构成细胞壁的成分，对细胞分裂，稳定质膜结构有显著作用，此外，结构有显著作用，此外，CaCa及钙调素在细胞信号及钙调素在细胞信号转导中起重要作用。转导中起重要作用。第九页，讲稿共五十一页哦2、微量元素、微量元素 在微量元素中，在微量元素中，铁铁的使用最大的使用最大 ：一些氧化酶的组成成分一些氧化酶的组成成分 叶绿素形成的必要条件叶绿素形成的必要条件 使用乙二胺四乙酸铁（使用乙二胺四乙酸铁（EDTA-FeEDTA-Fe）鳌合）鳌合物防止铁的沉淀物防止铁的沉淀第十页，讲稿共五十一页哦硼硼与蛋白质合成、糖类运输有着密切的关系

6、与蛋白质合成、糖类运输有着密切的关系铜铜是某些氧化酶的成分，能够促进离体根的生长是某些氧化酶的成分，能够促进离体根的生长锰锰参与植物的光合、呼吸代谢参与植物的光合、呼吸代谢钼钼参与氮素的代谢参与氮素的代谢氯氯是光合作用水光解的活化剂是光合作用水光解的活化剂微量元素的主要作用是作为微量元素的主要作用是作为酶的辅助因子或激活剂酶的辅助因子或激活剂参与代谢的参与代谢的调节。调节。第十一页，讲稿共五十一页哦缺铁症状：叶面呈绿色网纹状失绿。随病势发展，叶缺铁症状：叶面呈绿色网纹状失绿。随病势发展，叶片失绿程度加重，出现整叶变为白色，叶缘枯焦，引片失绿程度加重，出现整叶变为白色，叶缘枯焦，引起落叶。严重缺

7、铁时，新梢顶端枯死。起落叶。严重缺铁时，新梢顶端枯死。桃桃树树第十二页，讲稿共五十一页哦缺铜症状：缺铜症状：新梢顶端叶片的叶尖失绿新梢顶端叶片的叶尖失绿变黄，叶片出现褐色斑点至扩变黄，叶片出现褐色斑点至扩大变成深褐色，引起落叶。大变成深褐色，引起落叶。枝顶端生长不良，其下部的枝顶端生长不良，其下部的芽开始生长，形成丛生的细枝。芽开始生长，形成丛生的细枝。菊花菊花第十三页，讲稿共五十一页哦3、碳源、碳源 碳源物质包括糖类物质、醇类物质和有机酸，以碳源物质包括糖类物质、醇类物质和有机酸，以糖类糖类物质最重要。物质最重要。糖类物质特点：糖类物质特点：具有热易变的性质具有热易变的性质利于吸收和利用利于

8、吸收和利用 使用浓度一般在使用浓度一般在2%2%5%5%提供能源和调节渗透压提供能源和调节渗透压第十七页，讲稿共五十一页哦4、维生素类、维生素类 以各种以各种辅酶辅酶的形式存在的形式存在 参与多种代谢活动参与多种代谢活动 对生长，分化等有很好的促进作用对生长，分化等有很好的促进作用 主要分为主要分为脂溶性维生素脂溶性维生素和和水溶性维生素水溶性维生素 常用维生素有常用维生素有V VB1B1和和V VB6B6 第十八页，讲稿共五十一页哦5、肌醇、肌醇 环己六醇环己六醇 细胞壁的构建材料细胞壁的构建材料 参与碳水化合物、磷脂代谢及离子平衡等生理活参与碳水化合物、磷脂代谢及离子平衡等生理活动动 促进

9、活性物质发挥作用促进活性物质发挥作用第十九页，讲稿共五十一页哦6、氨基酸、氨基酸 蛋白质的组成成分蛋白质的组成成分 有机氮源有机氮源 可直接被细胞吸收利用可直接被细胞吸收利用 培养基中常用的是培养基中常用的是甘氨酸甘氨酸7、天然复合物、天然复合物 促进某些愈伤组织和器官的生长促进某些愈伤组织和器官的生长 化学成分不明、复杂化学成分不明、复杂 天然营养混合物天然营养混合物如：水解酪蛋白、玉米胚乳、酵母提取物如：水解酪蛋白、玉米胚乳、酵母提取物第二十页，讲稿共五十一页哦8、琼脂、琼脂 是使用最普遍的凝固剂是使用最普遍的凝固剂用量一般在用量一般在6 610g/L10g/L之间之间颜色以浅、透明度高好

10、，洁颜色以浅、透明度高好，洁净为上品净为上品 除了琼脂外，在组织培除了琼脂外，在组织培养中还可以使用琼脂糖、结养中还可以使用琼脂糖、结冷胶等。冷胶等。第二十一页，讲稿共五十一页哦9、活性炭、活性炭 吸附培养基及培养物分泌物中的抑制物质吸附培养基及培养物分泌物中的抑制物质 抑制外植体褐变抑制外植体褐变 防止玻璃苗的产生防止玻璃苗的产生 促进培养物生长和分化促进培养物生长和分化 促进生根促进生根缺点：缺点：没有选择性没有选择性10、抗生素、抗生素 防止外植体内生菌造成的污染防止外植体内生菌造成的污染活性炭活性炭第二十二页，讲稿共五十一页哦11、生长素类、生长素类 促进细胞伸长和分裂促进细胞伸长和分

11、裂 促进生根、抑制器官脱落、性别控制、延长休眠、促进生根、抑制器官脱落、性别控制、延长休眠、顶端优势、单性结实顶端优势、单性结实 诱导愈伤组织形成诱导愈伤组织形成 溶于溶于95%95%酒精或酒精或0.1mol/L0.1mol/L的的NaOHNaOH中，后者的溶解中，后者的溶解效果更好效果更好 常用的生长素：常用的生长素：IAA(IAA(吲哆乙酸吲哆乙酸)NAA(NAA(奈乙酸奈乙酸 )2,4-D(2,4-D(二氯苯氧乙酸二氯苯氧乙酸)IBA(IBA(吲哆丁酸吲哆丁酸)第二十三页，讲稿共五十一页哦生长素作用强弱顺序：IAANAAIBA2,4-D强强弱弱2，4-D常用于诱导愈伤组织，IBA和NAA

12、常用于生根第二十四页，讲稿共五十一页哦12、细胞分裂素类 促进细胞分裂和分化 诱导胚状体和不定芽的形成 延缓组织的衰老并增强蛋白质的合成 用于离体成花的调控 溶于0.51.0mol/L的盐酸或稀薄的NaOH中 常用的细胞分裂素：KT(激动素)BA(6-卞基腺嘌呤)ZT(异戊烯氨基嘌呤)玉米素第二十五页，讲稿共五十一页哦13、赤霉素类和脱落酸 A、赤霉素类 组织培养中不常使用 加速细胞的伸长生长 促进细胞的分裂 主要是GA3 B、脱落酸 抑制细胞分裂和伸长 促进脱落和衰老 促进休眠和提高抗逆能力第二十六页，讲稿共五十一页哦14、水作用：作用：是植物原生质体的组成成分，也是一是植物原生质体的组成成

13、分，也是一切代谢过程的介质和溶媒。切代谢过程的介质和溶媒。注意：注意：用蒸馏水，最好是双蒸水；以保持培用蒸馏水，最好是双蒸水；以保持培养基成分的精确性。大规模生产时可用自养基成分的精确性。大规模生产时可用自来水。来水。第二十七页，讲稿共五十一页哦1、MS培养基培养基 无机盐浓度高无机盐浓度高高含量的氮、钾，尤其是硝酸盐高含量的氮、钾，尤其是硝酸盐含有一定数量的铵盐含有一定数量的铵盐营养丰富营养丰富不需要添加更多的有机附加物不需要添加更多的有机附加物（一）、几种常见培养基的特点（一）、几种常见培养基的特点第二十八页，讲稿共五十一页哦（二）、（二）、White培养基培养基19431943年由年由W

14、hiteWhite为培养番茄根尖而设计为培养番茄根尖而设计 19631963年作了改良，提高年作了改良，提高MgSOMgSO4 4的浓度和增加硼元素的浓度和增加硼元素 无机盐浓度较低无机盐浓度较低 使用广泛使用广泛 在生根培养、胚胎培养中有良好的效果在生根培养、胚胎培养中有良好的效果第二十九页，讲稿共五十一页哦（三）、（三）、B5培养基培养基 19681968年由年由GamborgGamborg等为培养大豆根细胞而设等为培养大豆根细胞而设计计 含有较低的铵盐含有较低的铵盐 较高的硝酸盐和盐酸硫胺素较高的硝酸盐和盐酸硫胺素第三十页，讲稿共五十一页哦（四）、（四）、N6培养基培养基 1974 19

15、74年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养设年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养设计计 成分较简单，成分较简单，成分较简单，成分较简单，KNO3KNO3KNO3KNO3和（和（和（和（NH4NH4NH4NH4）2SO42SO42SO42SO4含量高。在国内含量高。在国内含量高。在国内含量高。在国内已广泛应用于小麦、水稻及其他禾谷类植物的花粉和花已广泛应用于小麦、水稻及其他禾谷类植物的花粉和花已广泛应用于小麦、水稻及其他禾谷类植物的花粉和花已广泛应用于小麦、水稻及其他禾谷类植物的花粉和花药培养。药培养。药培养。药培养。第三十一页，讲稿共五十一页哦AgNO3:作用：抑制乙烯活性，防止玻璃化苗的出现浓

16、度：1-10mg/L抗生素：抗生素：种类：青霉素、链霉素、庆大霉素等。作用：可防止外植体内生菌污染。浓度：520mg/L。第三十二页，讲稿共五十一页哦1、母液母液(stocksolution)的配制和保存的配制和保存v所谓所谓母液母液是欲配制液的是欲配制液的浓缩液浓缩液。v意义意义:保证各物质成分的准确性保证各物质成分的准确性 配制时的快速移取配制时的快速移取 便于低温保藏。便于低温保藏。三、三、培养基的配制培养基的配制第三十三页，讲稿共五十一页哦单配法：单配法：将培养基配方中的各种成分分别配成一定浓度的将培养基配方中的各种成分分别配成一定浓度的母液。一般用母液。一般用mg/ml。混配法：混配

17、法：将几类营养成分按配方中的用量扩大一定倍将几类营养成分按配方中的用量扩大一定倍数称量，分别溶解后再混合成母液。数称量，分别溶解后再混合成母液。母液配制时可分别配成母液配制时可分别配成大量元素、微量元素、大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等铁盐、有机物和激素类等母液的配制方法：母液的配制方法：第三十四页，讲稿共五十一页哦 培养基母液的配制第三十五页，讲稿共五十一页哦vMS母液配制：vMSI 大量元素 20X MSII 微量元素 200X MSIII铁 盐 200X MSIV有机 物 200X MSV肌 醇 200X 激 素 0.1mg/ml第三十六页，讲稿共五十一页哦将将1、2、4、5称

18、称好放入烧杯分别好放入烧杯分别溶解混合，将溶解混合，将3最最后混合，再定容后混合，再定容到到1L，放入试剂，放入试剂瓶贴标签，备用瓶贴标签，备用500mL甲甲1、2、4、5500mL乙乙3定容定容贴标签贴标签1L MSI IX202013.9.26HXH注：注：Ca2+和和S042-混合后易沉淀。混合后易沉淀。第三十七页，讲稿共五十一页哦将将17称好放入烧杯分别溶称好放入烧杯分别溶解混合，定容到解混合，定容到1L，放入试，放入试剂瓶贴标签，备用剂瓶贴标签，备用1000mL17定容定容贴标签贴标签1L MSIIIIX2002013.9.26HXH第三十八页，讲稿共五十一页哦MS(铁盐铁盐)配方用

19、量配方用量mg/L200X（mg）称量称量(g)1.FeSO47H2O27.855605.562.Na2EDTA2H2O37.374607.46将将1称好放入烧称好放入烧杯甲溶解，将杯甲溶解，将2放入烧杯乙溶放入烧杯乙溶解，再混合定解，再混合定容到容到1L，放入试，放入试剂瓶贴标签，备剂瓶贴标签，备用用1L500mL甲甲1500mL乙乙2混合定容混合定容贴标签贴标签 MSI IX2002013.9.26HXH第三十九页，讲稿共五十一页哦将将1、2、3、4称称好放入烧杯分好放入烧杯分别溶解混合，别溶解混合，定容到定容到1L，放入，放入试剂瓶贴标签，试剂瓶贴标签，备用备用1000mL14定容定容贴

20、标签贴标签1L MSIVIVX2002013.9.26HXH第四十页，讲稿共五十一页哦将肌醇称好放入将肌醇称好放入烧杯溶解定容到烧杯溶解定容到1L，放入试剂瓶，放入试剂瓶贴标签，备用贴标签，备用1000mL1溶解定容溶解定容贴标签贴标签1L MSV VX2002013.9.26HXH第四十一页，讲稿共五十一页哦v母液配制时应注意事项：母液配制时应注意事项：母液配好后放人冰箱内母液配好后放人冰箱内低温保存低温保存（4），用时），用时再按比例稀释。再按比例稀释。其中其中III、IV、以及激素类物质应以、以及激素类物质应以棕色瓶棕色瓶盛装。盛装。母液母液使用前摇动瓶子使用前摇动瓶子，如有沉淀、絮状物

21、、微生，如有沉淀、絮状物、微生物污染应停止使用物污染应停止使用取样时移液管要取样时移液管要对应取样，对应取样，防止交叉污染防止交叉污染第四十二页，讲稿共五十一页哦第四十三页，讲稿共五十一页哦2、培养基的配制：MSBA2NAA0.2糖3.0琼脂0.7 pH=5.8MS：MS I 50 mlMS II 5 mlMS III 5 mlMS IV 5 mlMS V 5 ml BA：20ml;NAA：2ml 糖：30g;琼脂：7gV贮备液用量贮备液用量V V配制配制/浓缩倍数浓缩倍数V V激素贮备液激素贮备液C激素激素*V V配制配制/0.1/0.1mg/mlmg/ml第四十四页，讲稿共五十一页哦感感谢谢大大家家观观看看第五十一页，讲稿共五十一页哦