第十一章经典液相色谱法.ppt

《第十一章经典液相色谱法.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《第十一章经典液相色谱法.ppt（48页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、第十一章经典液相色谱法现在学习的是第1页，共48页液相色谱法（液相色谱法（LC）：以液体为流动相的色谱法：以液体为流动相的色谱法回顾回顾液相色谱液相色谱柱色谱法柱色谱法平面色谱法平面色谱法纸色谱法薄层色谱法现在学习的是第2页，共48页一、吸附色谱法一、吸附色谱法1.1.要求要求：固定相固定相吸附剂（硅胶或吸附剂（硅胶或Al2O3）具表面活性吸附中心具表面活性吸附中心2.2.分分离离机机制制：利利用用吸吸附附剂剂对对不不同同组组分分的的吸吸附附能力差异能力差异而实现分离而实现分离吸附系数吸附系数注：注：注：注：KKa a与组分的性质、吸附剂的活性、流动相的性质及温度有关与组分的性质、吸附剂的活性

2、、流动相的性质及温度有关与组分的性质、吸附剂的活性、流动相的性质及温度有关与组分的性质、吸附剂的活性、流动相的性质及温度有关 吸附平衡吸附平衡吸附平衡吸附平衡 X Xmm+nY+nYa aXXa a+nY+nYmm 第一节第一节 基本原理与分类基本原理与分类（一）分离原理（一）分离原理现在学习的是第3页，共48页一、吸附色谱法一、吸附色谱法3.流动相的洗脱能力流动相的洗脱能力:与溶剂极性有关与溶剂极性有关 溶剂极性溶剂极性越强越强，洗脱能力，洗脱能力越强越强组分组分ka越小越小 柱色谱：柱色谱：tR越短越短组分越组分越快快流出流出 平面色谱：平面色谱：Rf越大越大展开越快（展距越长）展开越快（

3、展距越长）4.洗脱顺序洗脱顺序 色谱柱一定，色谱柱一定，Ka大大，即，即极性越强极性越强的组分的组分吸附力越强吸附力越强 柱色谱：柱色谱：tR越长越长洗脱慢；反之洗脱慢；反之Ka小，极性越弱组分先被洗脱。小，极性越弱组分先被洗脱。平面色谱：平面色谱：Rf越小越小展开慢；展开慢；反之反之Ka小，极性越弱组分展开快。小，极性越弱组分展开快。现在学习的是第4页，共48页v附：常见化合物极性附：常见化合物极性v见登山图见登山图1v 双键双键，吸附力，吸附力v 分子内氢键，吸附力分子内氢键，吸附力二甲胺二甲胺酯酯酮酮酰胺酰胺醛醛硫醇硫醇胺类胺类醇醇酚酚羧酸羧酸硝基化合物硝基化合物醚醚烯烃烯烃烷烃烷烃取代

4、基极性取代基极性登山图登山图1现在学习的是第5页，共48页v附：常见溶剂极性附：常见溶剂极性石油醚石油醚环已烷环已烷四氯化碳四氯化碳苯苯甲苯甲苯乙醚乙醚氯仿氯仿醋酸乙酯醋酸乙酯正丁醇正丁醇丙醇丙醇乙醇、甲醇乙醇、甲醇水水流动相极性流动相极性登山图登山图2乙腈乙腈现在学习的是第6页，共48页（二）固定相（二）固定相-吸附剂吸附剂常用吸附剂常用吸附剂 1.1.硅胶硅胶 2.2.氧化铝氧化铝 3.3.聚酰胺聚酰胺现在学习的是第7页，共48页1.1.硅胶硅胶（SiO2xH2O）-极性吸附剂极性吸附剂,弱酸性弱酸性结构结构：内部内部硅氧交联结构硅氧交联结构多孔结构多孔结构 表面表面有硅醇基有硅醇基氢键作

5、用氢键作用吸附活性中心吸附活性中心 1）与极性物质或不饱和化合物形成氢键）与极性物质或不饱和化合物形成氢键 物质极性物质极性，吸附能力，吸附能力不易展开，不易展开，K大，大，Rf越小越小 吸附活性次序：束缚型吸附活性次序：束缚型游离型游离型 硅醚无活性硅醚无活性 2 2）含水量越大，活性越低，吸附能力越低）含水量越大，活性越低，吸附能力越低 加热失水加热失水活化活化:105110OC(30分钟分钟)-(可逆失水可逆失水)200OC-(不可逆失水不可逆失水)活性丧失活性丧失适用：适用：适用：适用：分析酸性或中性物质分析酸性或中性物质，如如有机酸、氨基酸、甾体等有机酸、氨基酸、甾体等 选择性保留碱

6、性物质选择性保留碱性物质,如胺类如胺类硅醚硅醚现在学习的是第8页，共48页2.氧化铝氧化铝强极性吸附剂强极性吸附剂(一般得拖尾峰一般得拖尾峰)碱性氧化铝碱性氧化铝 pH 910 适于分析碱性、中性物质适于分析碱性、中性物质 中性氧化铝中性氧化铝 pH7.5 适于分析酸性碱性和中性物质适于分析酸性碱性和中性物质 酸性氧化铝酸性氧化铝 pH 45 适于分析酸性、中性物质适于分析酸性、中性物质3.聚酰胺聚酰胺 氢键作用氢键作用 氢键能力氢键能力强，组分展开越慢强，组分展开越慢 应用：分离酚、酸、硝基、醌类应用：分离酚、酸、硝基、醌类 如：如：黄酮类黄酮类化合物化合物活化温度活化温度:200400(0

7、.5h)应用应用：分离生物碱、挥发油、萜类、甾体、甙、分离生物碱、挥发油、萜类、甾体、甙、酯、内酯等酯、内酯等现在学习的是第9页，共48页硅胶含水量%氧化铝含水量%活性级别吸附活性(能力)051525380361015大(强)小(弱)4.吸附剂的活性吸附剂的活性v吸附剂含水量越高，吸附活性越低，吸附能力越弱，活性吸附剂含水量越高，吸附活性越低，吸附能力越弱，活性 级数越大，同一组分和流动相，其级数越大，同一组分和流动相，其K K越小越小 加热失水加热失水活化活化 加水加水减活或失活减活或失活v分离极性小的组分分离极性小的组分选吸附活性大的吸附剂选吸附活性大的吸附剂v分离极性大的组分分离极性大的

8、组分选吸附活性小的吸附剂选吸附活性小的吸附剂现在学习的是第10页，共48页1.分离机制分离机制 利利用用组组分分在在流流动动相相和和固固定定相相间间溶溶解解度度差别实现分离差别实现分离 狭义分配系数狭义分配系数二、分配色谱法二、分配色谱法液液分配色谱（液液分配色谱（LLC）：）：K与与流动相流动相的性质（极性的性质（极性 及种类）有关及种类）有关 气液分配色谱（气液分配色谱（GLC）：）：K与与固定相极性和柱温固定相极性和柱温有关有关现在学习的是第11页，共48页1）要求）要求：固定相固定相固定液固定液 机械涂渍在惰性载体上的液体（易流失）机械涂渍在惰性载体上的液体（易流失）化学反应键合在载体

9、表面化学反应键合在载体表面化学键合相化学键合相 流动相流动相必须与固定相不为互溶（必须与固定相不为互溶（LLC）载体载体惰性，性质稳定惰性，性质稳定 不与固定相和流动相发生化学反应不与固定相和流动相发生化学反应2.2.固定相和流动相固定相和流动相2）液液分配色谱的类别）液液分配色谱的类别：正相分配色谱正相分配色谱固定相极性固定相极性大于大于流动相流动相 反相分配色谱反相分配色谱固定相极性固定相极性小于小于流动相流动相 v正相分配色谱正相分配色谱:极性性弱弱的组分先被洗脱的组分先被洗脱v反相分配色谱反相分配色谱:极性极性强强的组分先被洗脱的组分先被洗脱3)3)洗脱顺序：极性相似相溶洗脱顺序：极性

10、相似相溶现在学习的是第12页，共48页洗脱顺序洗脱顺序极性大的组分，极性大的组分，K小小 tR短，先出柱短，先出柱 正相液正相液液分配色谱液分配色谱 反相液反相液液分配色谱液分配色谱固定相固定相强极性溶剂强极性溶剂:水、醇类等水、醇类等弱极性溶剂弱极性溶剂:辛烷、氯仿等辛烷、氯仿等流动相流动相强极性化合物强极性化合物 弱极性至非极性物质弱极性至非极性物质 极性小的组分，极性小的组分，K小小 tR短，先出柱短，先出柱分离对象分离对象弱极性溶剂弱极性溶剂:苯、甲苯、环己烷等苯、甲苯、环己烷等强极性溶剂强极性溶剂:缓冲溶液、醇类等缓冲溶液、醇类等现在学习的是第13页，共48页vv化学键合相：化学键合

11、相：v 将固定液的官能团键合在载体的表面，而构成键合将固定液的官能团键合在载体的表面，而构成键合相。相。v 以化学键合相为固定相的色谱法称为以化学键合相为固定相的色谱法称为化学键合相色谱化学键合相色谱法。法。v 化学键合相既有化学键合相既有 分配作用又有吸附作用分配作用又有吸附作用 正相键合相色谱法正相键合相色谱法 如如氰基氰基与与氨基氨基化学键合相化学键合相 流动相用流动相用烷烃烷烃，加适量极性调整剂而构成，加适量极性调整剂而构成 反相化学键合相反相化学键合相 如如十八烷基十八烷基键合相键合相 流动相常用流动相常用甲醇甲醇水或乙腈水或乙腈水水现在学习的是第14页，共48页三、离子交换色谱法三

12、、离子交换色谱法1.分分离离机机制制：依依据据被被测测组组分分与与离离子子交交换换剂剂交交换能力（亲和力）换能力（亲和力）不同不同选择性系数选择性系数 注：注：KA/B越大，越大，A离子交换能力越大，越易保留，离子交换能力越大，越易保留，t tR R越长越长 以阳离子交换树脂为例以阳离子交换树脂为例 RSORSO3 3-HH+X+X+RSO RSO3 3-X X+H+H+固定离子固定离子可交换离子可交换离子B待测离子待测离子A通式：通式：通式：通式：R-B +A R-A +BR-B +A R-A +B现在学习的是第15页，共48页3.影响保留行为的因素：影响保留行为的因素：vKA/B与与离离子

13、子的的电电荷荷数数、水水合合离离子子半半径径、流流动动相相性性质质、离离子子 交交换换树脂性质以及温度有关树脂性质以及温度有关 1 1）离子价态越高）离子价态越高Ka越大越大tR越长越长 2）价态相同，水合离子半径越小，）价态相同，水合离子半径越小，Ka越大越大tR越越长长 3）交换能力强的离子组成的流动相洗脱能力交换能力强的离子组成的流动相洗脱能力强强t tR R越短越短 4）离子强度大的流动相）离子强度大的流动相洗脱能力洗脱能力强强t tR R越短越短2.固定相固定相离子交换剂离子交换剂 经典离子交换色谱：离子交换树脂经典离子交换色谱：离子交换树脂 HPLC：化学键合离子交换剂：化学键合离

14、子交换剂 流动相流动相水为溶剂的缓冲溶液水为溶剂的缓冲溶液现在学习的是第16页，共48页四、分子（空间）排阻色谱法四、分子（空间）排阻色谱法要求：要求：固定相固定相多孔性凝胶多孔性凝胶凝胶色谱凝胶色谱 流动相流动相水水凝胶凝胶过滤过滤色谱色谱(GFC)流动相流动相有机溶剂有机溶剂凝胶凝胶渗透渗透色谱色谱(GPC)v分离机制：根据被测组分分离机制：根据被测组分分子大小的分子大小的 不同分离不同分离分子筛原理分子筛原理渗透系数渗透系数Kp 注：注：注：注：KKp p仅取决于待测仅取决于待测仅取决于待测仅取决于待测分子尺寸和凝胶孔径大小分子尺寸和凝胶孔径大小分子尺寸和凝胶孔径大小分子尺寸和凝胶孔径大

15、小，与流动相的性质无关与流动相的性质无关与流动相的性质无关与流动相的性质无关 Kp=0：尺寸太大全被排阻：尺寸太大全被排阻Kp=1：尺寸太小全被保留：尺寸太小全被保留 0Kp1现在学习的是第17页，共48页v空间排阻色谱法的分类：空间排阻色谱法的分类：1、凝胶渗透色谱法、凝胶渗透色谱法GPC：v 分离分离亲脂亲脂性物质性物质v 固定相固定相:亲脂亲脂性凝胶如甲基交联葡聚糖凝胶性凝胶如甲基交联葡聚糖凝胶v 流动相流动相:有机溶剂有机溶剂2、凝胶过滤色谱法、凝胶过滤色谱法GFC：v 分离分离水溶水溶性物质性物质v 固定相固定相:亲水亲水性凝胶如葡聚糖凝胶性凝胶如葡聚糖凝胶v 流动相流动相:水水现在

16、学习的是第18页，共48页分离对象：大分子量（分离对象：大分子量（2000）的化合物）的化合物 有机聚合物（如有机聚合物（如 聚烯烃、聚苯乙烯和聚酰胺等）聚烯烃、聚苯乙烯和聚酰胺等）生物大分子（如蛋白质、核酸、低聚糖、肽类等）生物大分子（如蛋白质、核酸、低聚糖、肽类等）局限：局限：不能分离大小相近的化合物不能分离大小相近的化合物 为得到良好的分离，组分的分子量应相差为得到良好的分离，组分的分子量应相差10%以上以上。应用应用Kp尺寸尺寸相对分子质量相对分子质量 可应用于高分子分子量的测定可应用于高分子分子量的测定现在学习的是第19页，共48页 结论结论：v四种色谱的分离机制各不相同，分别形成四

17、种色谱的分离机制各不相同，分别形成吸附平衡、分吸附平衡、分配平衡、离子交换平衡和渗透平衡配平衡、离子交换平衡和渗透平衡 K分别为分别为吸附系数，狭义分配系数，选择性系数和吸附系数，狭义分配系数，选择性系数和 渗透系数渗透系数v除了凝胶色谱法中的除了凝胶色谱法中的K仅与待测分子大小尺寸、凝胶仅与待测分子大小尺寸、凝胶 孔径大小有关外，其他三种孔径大小有关外，其他三种K值都受组分的性质、流值都受组分的性质、流 动相的性质、固定相的性质以及柱温的影响动相的性质、固定相的性质以及柱温的影响现在学习的是第20页，共48页第三节第三节 平面色谱法平面色谱法分分 类：类：平面色谱平面色谱薄层色谱薄层色谱(T

18、LC)纸色谱纸色谱（PC）薄层电泳法薄层电泳法吸附薄层色谱吸附薄层色谱分配薄层色谱分配薄层色谱分子排阻薄层色谱分子排阻薄层色谱P236P236现在学习的是第21页，共48页一、平面色谱参数一、平面色谱参数（一）定性参数（一）定性参数 1 1、比移值（、比移值（R Rf f）Rf=0:组分在原点，完全被固定相保留组分在原点，完全被固定相保留 Rf=1:组分在前沿，完全不被固定相保留组分在前沿，完全不被固定相保留 最佳范围：最佳范围：0.3-0.5 可用范围：可用范围：0.2-0.8LALBL0现在学习的是第22页，共48页v讨论讨论 1）Rf与与K有有关关，即即与与组组分分性性质质（溶溶解解度度

19、）以以及及薄薄层层板板和展开剂和展开剂的性质有关的性质有关 2）K大，大，Rf小小 3）薄层板一定，对于极性组分）薄层板一定，对于极性组分 展开剂展开剂极性极性大，大，Rf大大（容易展开）（容易展开）展开剂展开剂极性极性小，小，Rf小小（不容易展开）（不容易展开）色谱条件一定，色谱条件一定，Rf只与组分性质有关只与组分性质有关 薄层色谱定性参数薄层色谱定性参数 Rf 值与组分性质、薄层板性质、展开剂性质、展开室内展开剂蒸气值与组分性质、薄层板性质、展开剂性质、展开室内展开剂蒸气饱和程度、温度等有关饱和程度、温度等有关现在学习的是第23页，共48页续前续前2.2.相对比移值相对比移值Rst 讨论

20、讨论参考物与被测组分在完全相同条件下展开参考物与被测组分在完全相同条件下展开 可以消除系统误差，大大提高重现性和可靠性可以消除系统误差，大大提高重现性和可靠性；参考物可以是后加入纯物质，也可是样品中已知组分参考物可以是后加入纯物质，也可是样品中已知组分相相对对比比移移值值Rst与与组组分分、参参考考物物性性质质及及色色谱谱条条件件有有关关，范范围围可以可以大于或小于大于或小于1 1现在学习的是第24页，共48页定义式：定义式：R=2d/（W1+W2）=2(L2-L1)/（W1+W2）W1,W2：各斑点直径：各斑点直径 完全分离：完全分离：R1.5基本分离：基本分离：R1.0最佳分离：最佳分离：

21、R=2.0（二）分离度（二）分离度薄层扫描图dW1 W2L0现在学习的是第25页，共48页 柱色谱柱色谱柱色谱柱色谱 平面色谱平面色谱平面色谱平面色谱属性属性属性属性定距洗脱定距洗脱定距洗脱定距洗脱定时展开定时展开定时展开定时展开流动相名称流动相名称流动相名称流动相名称保留时间保留时间保留时间保留时间t tR R 比移值比移值比移值比移值R Rf f(展开距离展开距离展开距离展开距离)定性参数定性参数定性参数定性参数洗脱剂洗脱剂洗脱剂洗脱剂展开剂展开剂展开剂展开剂K越小越小tR 越短越短洗脱越快洗脱越快展开顺序展开顺序展开顺序展开顺序K越小越小 Rf越大越大展开越快展开越快现在学习的是第26页

22、，共48页 二、薄层色谱法二、薄层色谱法定义：将固定相均匀地涂铺在具有光洁表面的玻璃、塑定义：将固定相均匀地涂铺在具有光洁表面的玻璃、塑料或料或 金属上形成薄层，在此薄层上进行色谱分离的金属上形成薄层，在此薄层上进行色谱分离的方法方法薄层板：铺好固定相层的板薄层板：铺好固定相层的板特点：特点：1、分离能力强，斑点集中；、分离能力强，斑点集中；2、灵敏度高；、灵敏度高；3、展开时间短；、展开时间短；4、试样预处理简单；、试样预处理简单；5、上样量大；、上样量大；6、仪器简单操作方便、仪器简单操作方便现在学习的是第27页，共48页（一）吸附薄层色谱法的吸附剂和展开剂（一）吸附薄层色谱法的吸附剂和展

23、开剂v常用吸附剂常用吸附剂 1.1.硅胶硅胶 2.2.氧化铝氧化铝 3.3.聚酰胺聚酰胺二、薄层色谱法二、薄层色谱法现在学习的是第28页，共48页（二）展开剂的选择（同液固吸附色谱流动相选择）（二）展开剂的选择（同液固吸附色谱流动相选择）（二）展开剂的选择（同液固吸附色谱流动相选择）（二）展开剂的选择（同液固吸附色谱流动相选择）根据被测组分、吸附剂和展开剂本身的极性根据被测组分、吸附剂和展开剂本身的极性根据被测组分、吸附剂和展开剂本身的极性根据被测组分、吸附剂和展开剂本身的极性现在学习的是第29页，共48页吸附剂和流动相的选择：吸附剂和流动相的选择：依据被测组分、吸附剂和流动相的性质依据被测组

24、分、吸附剂和流动相的性质依据被测组分、吸附剂和流动相的性质依据被测组分、吸附剂和流动相的性质 1.被测组分性质（极性大小）：被测组分性质（极性大小）：烃烃 -羧酸羧酸2.吸附剂的活性：吸附剂的活性：吸附剂的活性吸附剂的活性大，对组分的吸附能力大，对组分的吸附能力强，强，K 大大 强极性物质强极性物质强极性物质强极性物质选择弱吸附剂选择弱吸附剂选择弱吸附剂选择弱吸附剂 弱极性物质弱极性物质弱极性物质弱极性物质选择强吸附剂选择强吸附剂选择强吸附剂选择强吸附剂3.流动相的极性：流动相的极性：流动相极性流动相极性大，对组分的展开能力大，对组分的展开能力大大,K 小小 “相似相溶相似相溶相似相溶相似相溶

25、”原则原则原则原则 ：根据组分性质、吸附剂的活性，选择根据组分性质、吸附剂的活性，选择适当极性的流动相适当极性的流动相现在学习的是第30页，共48页4.4.4.4.三者关系图示：三者关系图示：三者关系图示：三者关系图示：组分组分 吸附剂吸附剂 流动相流动相 极性极性 活性小活性小 极性极性 非非(弱弱)极性极性 活性大活性大 非极性或弱极性非极性或弱极性5.5.展开顺序展开顺序展开顺序展开顺序:固定相、展开剂一定固定相、展开剂一定固定相、展开剂一定固定相、展开剂一定 极性越小者极性越小者极性越小者极性越小者 R Rf f越大越大越大越大,展开快展开快展开快展开快 极性越大者极性越大者极性越大者

26、极性越大者R Rf f越小越小越小越小,展开慢展开慢展开慢展开慢6.6.吸附剂活性越大，吸附剂活性越大，吸附剂活性越大，吸附剂活性越大，R Rf f 展开剂极性越大，展开剂极性越大，展开剂极性越大，展开剂极性越大，R Rf f现在学习的是第31页，共48页例例.硅胶板分离生物碱，展开剂为：硅胶板分离生物碱，展开剂为：环己烷环己烷:丙酮丙酮:乙二胺乙二胺:水水=10：5：2：51）环己烷：弱极性，减弱洗脱能力，增大）环己烷：弱极性，减弱洗脱能力，增大K，减小，减小Rf2）水：强极性，增强洗脱能力，减小）水：强极性，增强洗脱能力，减小K，增大，增大Rf3）丙酮：中等极性，增加极性与弱极性溶剂间的互

27、溶性）丙酮：中等极性，增加极性与弱极性溶剂间的互溶性4）乙二胺：调节）乙二胺：调节pH值，抑制组分离解，减少斑点拖尾。值，抑制组分离解，减少斑点拖尾。现在学习的是第32页，共48页（二）薄层色谱操作方法（二）薄层色谱操作方法1 1）薄层板的类型）薄层板的类型 （1 1）硬板：加粘合剂）硬板：加粘合剂湿法铺板湿法铺板 （2 2）软板：无粘合剂）软板：无粘合剂干法铺板干法铺板 1.1.薄层板的制备薄层板的制备2）粘合薄层板（硬板、湿板）的铺制）粘合薄层板（硬板、湿板）的铺制 粘合剂粘合剂 煅石膏：吸附剂的煅石膏：吸附剂的9-15%左右左右硅胶硅胶-G板板 羧甲基纤维素钠羧甲基纤维素钠CMC-Na：

28、0.5-1%水溶液水溶液硅胶硅胶-CMC板板现在学习的是第33页，共48页3）铺板方法）铺板方法 （1）倾注法铺板倾注法铺板 （2）平铺法铺板）平铺法铺板 （3）机械涂铺法铺板）机械涂铺法铺板4）活化）活化 凉干凉干-活化活化-放冷放冷-干燥器中干燥器中注意：活化温度及时间（注意：活化温度及时间（105，1h）活化的目的（除去水分）活化的目的（除去水分）现在学习的是第34页，共48页2.点样点样1）样品溶液）样品溶液 避免用水作溶剂，斑点易扩散，溶剂避免用水作溶剂，斑点易扩散，溶剂不易挥发不易挥发 一般用甲醇、乙醇、丙酮、氯仿等挥发一般用甲醇、乙醇、丙酮、氯仿等挥发性溶剂性溶剂 最好用与展开剂

29、极性相似的溶剂最好用与展开剂极性相似的溶剂2）点样量）点样量 几到几十微克，点样直径几到几十微克，点样直径 不超过不超过23mm间距间距1.52cm端距端距12cm直直径径:3mm。几几几几十十微克，少于微克，少于10 L起始线起始线现在学习的是第35页，共48页3.展开展开展开展开 (1)(1)展开方式展开方式展开方式展开方式:上行展开法、近水平展开上行展开法、近水平展开上行展开法、近水平展开上行展开法、近水平展开 双向展开、同向多次展开双向展开、同向多次展开双向展开、同向多次展开双向展开、同向多次展开 软板软板近水平展开近水平展开 硬板硬板上行法上行法 (2)(2)展开中注意之点展开中注意

30、之点展开中注意之点展开中注意之点 a)a)边缘效应：边缘效应：边缘效应：边缘效应：同一物质在同一薄板上展开时两同一物质在同一薄板上展开时两同一物质在同一薄板上展开时两同一物质在同一薄板上展开时两边的边的边的边的R Rf f值与中间部分的值与中间部分的值与中间部分的值与中间部分的R Rf f值不同值不同值不同值不同 b)b)消除边缘效应的措施：消除边缘效应的措施：消除边缘效应的措施：消除边缘效应的措施：展开前充分饱和展开前充分饱和展开前充分饱和展开前充分饱和1530min1530min 展开槽内壁贴上滤纸条浸湿展开槽内壁贴上滤纸条浸湿展开槽内壁贴上滤纸条浸湿展开槽内壁贴上滤纸条浸湿 选小体积展开

31、槽选小体积展开槽选小体积展开槽选小体积展开槽现在学习的是第36页，共48页图示现在学习的是第37页，共48页4.显色显色显色方法显色方法1、有色化合物、有色化合物直接定位直接定位2 2 2 2、无色、无色、无色、无色显色剂：通用有显色剂：通用有显色剂：通用有显色剂：通用有碘、碘化铋钾、溴甲酚绿、硫酸碘、碘化铋钾、溴甲酚绿、硫酸碘、碘化铋钾、溴甲酚绿、硫酸碘、碘化铋钾、溴甲酚绿、硫酸 例：分离酸性物质例：分离酸性物质例：分离酸性物质例：分离酸性物质 选酸性硅胶板，使用选酸性硅胶板，使用选酸性硅胶板，使用选酸性硅胶板，使用溴甲酚绿为显色剂溴甲酚绿为显色剂溴甲酚绿为显色剂溴甲酚绿为显色剂紫外吸收紫外

32、吸收紫外灯检出紫外灯检出斑点有荧光斑点有荧光荧光板上有暗斑荧光板上有暗斑显色剂定位显色剂定位喷雾显色喷雾显色蒸气显色：蒸气显色：碘碘-生物碱、氨基酸衍生物、生物碱、氨基酸衍生物、肽类、脂类及皂苷肽类、脂类及皂苷喷雾后加热显色喷雾后加热显色现在学习的是第38页，共48页1）R f 定性定性（三）定性与定量分析（三）定性与定量分析1.定性分析定性分析v 组分的结构和性质组分的结构和性质v 薄层板的性质薄层板的性质v 展开剂的性质展开剂的性质v 温度（对分配影响大，对吸附影响小）温度（对分配影响大，对吸附影响小）v 展开室内展开剂蒸气饱和程度展开室内展开剂蒸气饱和程度影响比移值的因素影响比移值的因素

33、2）相对比移值相对比移值Rst定性定性 与对照品与对照品Rst比较或与文献比较或与文献Rst比较。比较。现在学习的是第39页，共48页2.杂质检查杂质检查1）杂质对照品比较法：）杂质对照品比较法：同一色谱条件下比较试样与杂质对照品斑点的颜色深浅同一色谱条件下比较试样与杂质对照品斑点的颜色深浅2）主成分自身对照法）主成分自身对照法 供试品供试品 稀释稀释 对照液对照液对照斑点颜色对照斑点颜色 硫酸长春碱硫酸长春碱 稀释稀释 对照液对照液展开展开紫外检测紫外检测 10 mg/ml 0.20 mg/ml 254nm现在学习的是第40页，共48页3.定量分析定量分析1）洗脱法定量：）洗脱法定量：薄层分

34、离薄层分离取下斑点取下斑点洗脱洗脱离心离心 取上清液进行测定取上清液进行测定2）原位直接定量）原位直接定量薄层扫描法薄层扫描法 现在学习的是第41页，共48页1）薄层扫描法原理）薄层扫描法原理-样品经样品经TLC分离分离,按光学原理按光学原理(吸收光、反射光、荧光等吸收光、反射光、荧光等）进行定量分析）进行定量分析 检测原理检测原理荧光法荧光法透射法透射法反射法反射法 反射法测定：重现性好，基线稳定。反射法测定：重现性好，基线稳定。薄层扫描法薄层扫描法定义：用一定波长、强度的光束照射薄层上的斑点，测量照射前后光定义：用一定波长、强度的光束照射薄层上的斑点，测量照射前后光束强度的变化来测定物质含

35、量束强度的变化来测定物质含量现在学习的是第42页，共48页2 2）光谱扫描光谱扫描曲线曲线：A-或或 F-ex-em用途用途：对斑点成分作定性分析对斑点成分作定性分析 为定量分析找出为定量分析找出测量测量 s SA现在学习的是第43页，共48页3 3）色谱扫描曲线色谱扫描曲线在一定的波长下，可找出斑点的位置，即在一定的波长下，可找出斑点的位置，即 A-L(Rf)的关系的关系起始线起始线LA（1）单波长（单波长（s）扫描法扫描法（2）双波长（双波长（R，s）扫描法：得扫描法：得A，可消除本底干扰，基线稳定，可消除本底干扰，基线稳定4）扫描方式）扫描方式：直线式：直线式：快。用于规则的圆斑快。用于

36、规则的圆斑锯齿式：慢。用于不规则的或规则的锯齿式：慢。用于不规则的或规则的斑点斑点定量定量定性分析及荧光定量分析一律用直线式定性分析及荧光定量分析一律用直线式 测定波长测定波长s及参比波长及参比波长R的选择的选择s：被测组分的最大吸收波长：被测组分的最大吸收波长R：不：不被被测组分所吸收的波长被被测组分所吸收的波长薄层板的空薄层板的空白吸收白吸收现在学习的是第44页，共48页练习练习练习练习例例1.硅胶柱分离羧酸，哪种溶剂硅胶柱分离羧酸，哪种溶剂tR最小最小 （）A.苯苯 B.乙酸乙酯乙酸乙酯 C.乙醇乙醇 D.丙酮丙酮 E.丙醇丙醇例例2.硅胶板以丙酮为展开剂，下列化合物中哪种硅胶板以丙酮为

37、展开剂，下列化合物中哪种 Rf最大最大（）；）；哪种哪种Rf最小（最小（）A.芳烃芳烃 B.羧酸羧酸 C.酯酯 D.胺胺 E.酮酮答案：答案：CAB现在学习的是第45页，共48页例例3.正相正相液液色谱柱上分离一液液色谱柱上分离一极性极性化合物，哪种溶剂使化合物，哪种溶剂使其其tR最小最小 （）A.苯苯 B.石油醚石油醚 C.乙醇乙醇 D.甲醇甲醇 E.丙醇丙醇例例6.反相反相液液色谱柱上分离一液液色谱柱上分离一非极性非极性化合物，哪种溶剂使化合物，哪种溶剂使其其tR最小最小 （）A.苯苯 B.石油醚石油醚 C.乙醇乙醇 D.甲醇甲醇 E.丙醇丙醇答案：答案：D答案：答案：B例例5.正相正相液

38、液薄层色谱板上分离一液液薄层色谱板上分离一极性极性化合物，哪种化合物，哪种溶剂使其溶剂使其Rf最小最小 （）A.苯苯 B.石油醚石油醚 C.乙醇乙醇 D.甲醇甲醇 E.丙醇丙醇答案：答案：B现在学习的是第46页，共48页例：已知例：已知A和和B物质的相对比移值物质的相对比移值Rr为为1.5。当。当B在在某薄层板上展开后，色斑距离原点某薄层板上展开后，色斑距离原点9cm，溶剂前沿到原点，溶剂前沿到原点的距离为的距离为18cm，若，若A在此板上同时展开，则在此板上同时展开，则A物质的展距物质的展距为多少？为多少？A物质的物质的Rf值为多少值为多少？（？（13.5cm，0.75）解：解：现在学习的是

39、第47页，共48页三、三、纸色谱法纸色谱法1.正相纸色谱正相纸色谱 分离极性较强的物质：如有机弱酸、碱分离极性较强的物质：如有机弱酸、碱固定相：纸纤维吸附的水固定相：纸纤维吸附的水（极性大）（极性大）流动相：与水不互溶的有机溶剂（饱和正丁醇）流动相：与水不互溶的有机溶剂（饱和正丁醇）分离机制：同分离机制：同液液-液液分配色谱（正相分配色谱（正相LLC）定性参数：定性参数：讨论：讨论：讨论：讨论：R R R Rf f f f与组分性质、流动相及色谱条件有关与组分性质、流动相及色谱条件有关与组分性质、流动相及色谱条件有关与组分性质、流动相及色谱条件有关极性组分极性组分极性组分极性组分易保留，易保留，易保留，易保留，R R R Rf f f f 小小小小（流动相极性（流动相极性（流动相极性（流动相极性，R R R Rf f f f ）非极性组分非极性组分非极性组分非极性组分易流出，易流出，易流出，易流出，R R R Rf f f f大大大大（流动相极性（流动相极性（流动相极性（流动相极性，R R R Rf f f f ）现在学习的是第48页，共48页