细胞因子与粘附因子检测课件.ppt

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1、细胞因子与粘附因子检测第1页，此课件共43页哦复复 习习1.1.T T细胞增殖试验的原理、刺激物？细胞增殖试验的原理、刺激物？2.T2.T细胞增殖试验的主要细胞增殖试验的主要方法？方法？3.T3.T细胞介导的细胞毒试验主要方法？细胞介导的细胞毒试验主要方法？第2页，此课件共43页哦掌握：掌握：细胞因子、粘附分子概念；细胞因子、粘附分子概念；临床常用的测定方法临床常用的测定方法熟悉：熟悉：细胞因子的特性与功能；细胞因子的特性与功能；了解：了解：其他其他第3页，此课件共43页哦第一节第一节 概述概述第二节第二节 临床常用的测定方法临床常用的测定方法第三节第三节 细胞因子与黏附分子测定的临床应细胞因

2、子与黏附分子测定的临床应用用第4页，此课件共43页哦第一节 概 述 细胞因子细胞因子(cytokine)(cytokine)是由免疫细胞及组织细胞表达并分泌，是由免疫细胞及组织细胞表达并分泌，通过结合细胞表面的相应受体，在细胞间发通过结合细胞表面的相应受体，在细胞间发挥相互调控作用的一类小分子蛋白质或多肽。挥相互调控作用的一类小分子蛋白质或多肽。掌握第5页，此课件共43页哦1.细胞因子的种类 白细胞介素（IL）干扰素（IFN）集落刺激因子（CSF）肿瘤坏死因子（TNF）生长因子（GF）趋化因子一、细胞因子及其受体的特性与功能一、细胞因子及其受体的特性与功能熟悉第6页，此课件共43页哦自分泌自分

3、泌内分泌内分泌血液循环血液循环远距离作用远距离作用旁分泌旁分泌作用于比邻细胞作用于比邻细胞细胞因子发挥作用的三种方式细胞因子发挥作用的三种方式作用于分泌细胞自身作用于分泌细胞自身2.细胞因子的共同特性与生物学功能细胞因子的共同特性与生物学功能熟悉第7页，此课件共43页哦高效性、多效性、重叠性、网络性、协高效性、多效性、重叠性、网络性、协同性、拮抗性同性、拮抗性迅速迅速高效性高效性非特异性非特异性 2.细胞因子的共同特性熟悉第8页，此课件共43页哦肥大细胞肥大细胞胸腺细胞胸腺细胞B BIL-4活化、增殖、分化活化、增殖、分化增殖增殖 增殖增殖 多效性多效性第9页，此课件共43页哦IL-2、IL-

4、4、IL-5IL-4+IL-5IL-4IFN-拮抗性拮抗性重叠性重叠性协同性协同性均有刺激均有刺激B B细胞增细胞增殖的功能殖的功能更有效地诱导更有效地诱导IgEIgE类别转换类别转换IL-4 IL-4 阻断阻断IFN-IFN-诱导类别转化的诱导类别转化的作用作用BBB第10页，此课件共43页哦2.2.细胞因子的生物学功能细胞因子的生物学功能l参与调控免疫细胞的发育、分化和功能l参与调控免疫应答l抗感染l抗肿瘤l诱导细胞凋亡了解第11页，此课件共43页哦 3、细胞因子受体的共同特性、细胞因子受体的共同特性l细胞因子发挥作用：细胞因子发挥作用：细胞因子细胞因子与与靶细胞表面特异性受体靶细胞表面特

5、异性受体结合结合l细胞因子受体结构：细胞因子受体结构：胞膜外区、跨膜区和胞质区组成胞膜外区、跨膜区和胞质区组成l细胞因子家族：细胞因子家族：型细胞因子受体家族、型细胞因子受体家族、型细胞因子受体家族、肿瘤坏死因型细胞因子受体家族、肿瘤坏死因子受体超家族、免疫球蛋白受体超家族、趋化因子受体家族。子受体超家族、免疫球蛋白受体超家族、趋化因子受体家族。了解第12页，此课件共43页哦第13页，此课件共43页哦二、黏附分子的特性与功能黏附分子（AM）是介导细胞间或细胞与细胞外基质间相互结合的分子。掌握第14页，此课件共43页哦1.黏附分子的特性黏附分子的特性 黏附分子均为跨膜糖蛋白，由胞膜外区、跨膜区和

6、胞质区三部分组成，根据其结构特点可分为免疫球蛋白超家族、整合素家族、选择素家族和钙黏蛋白家族。了解第15页，此课件共43页哦2.黏附分子的主要生物学功能黏附分子的主要生物学功能l参与细胞的信号转导与活化、细胞分化及参与细胞的信号转导与活化、细胞分化及发育发育 l参与免疫应答和炎症反应、淋巴细胞归巢、参与免疫应答和炎症反应、淋巴细胞归巢、伤口愈合与血栓形成、调节细胞凋亡等功伤口愈合与血栓形成、调节细胞凋亡等功能能了解第16页，此课件共43页哦B细胞与Th细胞间信号转导的细胞粘附分子第17页，此课件共43页哦第二节第二节 临床常用的测定方法临床常用的测定方法一、酶联免疫吸附试验方法二、化学发光酶免

7、疫试验三、流式细胞分析法四、酶联免疫斑点试验五、免疫学测定方法学评价第18页，此课件共43页哦l 基因水平：基因水平：PCRPCR技术。技术。l检测水平检测水平 生物活性测定生物活性测定 l 蛋白水平蛋白水平l 免疫学测定免疫学测定 第二节第二节 临床常用的测定方法临床常用的测定方法掌握第19页，此课件共43页哦 生物活性测定：生物活性测定：测测活性活性。灵敏。灵敏 性高性高,特异性低特异性低蛋白水平蛋白水平 ELISA ELISA 免疫学测定免疫学测定 化学发光酶免疫试验化学发光酶免疫试验 （含量含量）流式细胞术流式细胞术 酶联免疫斑点试验酶联免疫斑点试验 第二节第二节 临床常用的测定方法临

8、床常用的测定方法掌握第20页，此课件共43页哦一、酶联免疫吸附试验一、酶联免疫吸附试验（一）基本方法（一）基本方法1.1.直接法直接法-双抗体夹心法双抗体夹心法 （测（测CKCK最常用方法）最常用方法）2.2.间接法间接法3.3.抗原竞争法抗原竞争法熟悉第21页，此课件共43页哦敏感性偏低不能区分细胞因子的生物学活性（二）方法学评价（二）方法学评价特异、简便成本低、易于推广和标准化等优点可同时检测大量标本且试验废弃物便于处理细胞因子测定的首选方法缺点缺点优点优点了解第22页，此课件共43页哦二、化学发光酶免疫试验二、化学发光酶免疫试验l是以发光剂作为酶免疫测定的底物，通过发光反应增强测定的灵敏

9、度。（一）基本方法l双抗体夹心法（二）方法学评价特异性好、灵敏度高、线性范围宽、试剂稳定、可自动化检测了解第23页，此课件共43页哦三、流式细胞术三、流式细胞术（flow cytometry,FCM)分离和分离和培养培养待检细胞待检细胞 细胞破膜与固定细胞破膜与固定 封闭非特异性结合位点封闭非特异性结合位点 染色与分析染色与分析 基本方法基本方法了解第24页，此课件共43页哦方法学评价方法学评价l优点：特异、高效、灵敏.l应用:对单个细胞水平CK或AM检测；检测细胞内CK；膜上AM、CK受体同一细胞内两种以上细胞因子表达 熟悉第25页，此课件共43页哦四、酶联免疫斑点试验四、酶联免疫斑点试验(

10、ELISPOT)(ELISPOT)包被有待测细胞因子抗体的微孔板 分泌相应细胞因子的待测细胞 有或无刺激物培养细胞因子被板上的特异性抗体捕获后续的反应如同ELISA 一个斑点一个斑点代表一个细胞因子代表一个细胞因子分泌细胞分泌细胞，斑点的颜色深，斑点的颜色深浅程度与细胞分泌的细胞因子量相关浅程度与细胞分泌的细胞因子量相关 基本原理+了解第26页，此课件共43页哦第27页，此课件共43页哦方法学评价方法学评价比常规比常规ELISAELISA法的灵敏度提法的灵敏度提高高200200倍倍应用应用：检测分泌特定细胞因子的：检测分泌特定细胞因子的细胞细胞熟悉第28页，此课件共43页哦五、免疫学测定方法学

11、评价五、免疫学测定方法学评价优点：优点：特异性高 操作简便、快速，无需依赖细胞株 影响因素较少且易控制，重复性好，方法容易标准化。缺点：缺点：所测定含量，与其生物活性不一定呈正比 结果与所用的抗体来源及亲和力有很大的关系 敏感性相对较低标本中可溶性受体，会影响特异性抗体对细胞因子结合熟悉第29页，此课件共43页哦第三节 细胞因子与黏附分子测定的临床应用1.1.特定疾病的辅助诊断特定疾病的辅助诊断2.2.机体免疫状态的评估机体免疫状态的评估3.3.临床疾病治疗效果的监测和指导用药临床疾病治疗效果的监测和指导用药4.4.疾病预防的应用疾病预防的应用熟悉第30页，此课件共43页哦一、临床应用原则一、

12、临床应用原则 方法选择和结果判断作出综合考虑:异质性 功能交叉性和多样性 来源的复杂性 组织细胞的非特异性细胞因子和粘附分子细胞因子和粘附分子 第31页，此课件共43页哦 全身免疫或炎症状态血浆、血清炎症局部细胞因子的水平局部分泌液细胞分泌细胞因子的特性外周单个核细胞细胞表面细胞因子受体或黏附分子定位检测疾病疗效观察和预后判断1.标本的适当选取第32页，此课件共43页哦敏感性高-特异性低，废弃物难处理活性测定-不能精确蛋白定量基因分析-操作繁琐，有助于疾病分析多种方法综合分析正确评价 2.方法的联合应用第33页，此课件共43页哦意义：细胞因子具有网络状调节的特点 级联效应或相互抑制作用的网络系

13、统 有助于提供有效的疾病诊断和机体免疫状态信息举例：免疫细胞分泌：IL-1、IL-2、IFN-和GM-CSFTh1/Th2细胞平衡状态：IL-2、IL-4、IL-10和IFN-3.细胞因子的联合检测第34页，此课件共43页哦二、特定疾病的辅助诊断（一）细胞因子与疾病1.细胞因子风暴IL-1、IL-2、IL-6、IFN-等 引发全身炎症反应综合征2.变态反应性疾病哮喘IL-4促进IgE合成3.自身免疫病类风湿性关节炎（TNF-、IL-1、IL-6、IL-8、MCP-1）第35页，此课件共43页哦（一）细胞因子与疾病4.免疫缺陷病IL-2R基因缺陷（重症联合免疫缺陷病）；IL-6（浆细胞瘤、膀胱癌

14、）5.器官移植排斥反应TNF-、IL-1、IL-2、IL-6、IFN-水平升高6.恶性肿瘤检测IL-2、IL-6、IFN-水平用于疗效的评估第36页，此课件共43页哦（二）黏附分子与疾病1.动脉粥样硬化ICAM、P-选择素 2.肾脏疾病ICAM3.肝脏疾病-VCAM-1、ICAM-1、IL-14.自身免疫病-SLE（E-选择素、ICAM-1）类风湿关节炎（E-选择素）第37页，此课件共43页哦三、评估机体的免疫状态三、评估机体的免疫状态机体免疫应答的强弱作为观察治疗效果和判断预后的重要指标对保证治疗效果具有指导意义第38页，此课件共43页哦四、疾病疗效检测及指导用药根据患者相关细胞因子水平或免

15、疫状态的检测结果选择细胞因子的种类和剂量。细胞因子水平过表达/可溶性黏附分子增高使用相应的细胞因子拮抗剂或抗体第39页，此课件共43页哦1 1细胞因子和细胞粘附分子的概念？细胞因子可分为几细胞因子和细胞粘附分子的概念？细胞因子可分为几类？类？2 2临床检测中常用细胞因子与细胞黏附分子的免疫学检临床检测中常用细胞因子与细胞黏附分子的免疫学检测方法有哪些？测方法有哪些？3 3细胞因子及黏附分子检测的临床意义是什么？细胞因子及黏附分子检测的临床意义是什么？思考题思考题第40页，此课件共43页哦1.1.细胞外可溶性黏附分子主要测定法是细胞外可溶性黏附分子主要测定法是()()A.ELISA B.A.EL

16、ISA B.酶免疫组化法酶免疫组化法C.C.荧光免疫法荧光免疫法 D.D.流式细胞仪测定法流式细胞仪测定法E.E.时间分辨荧光免疫法时间分辨荧光免疫法2.2.下列对下列对FCMFCM检测细胞因子的描述中错误的是检测细胞因子的描述中错误的是()()A.A.灵敏度高灵敏度高 B.B.可测细胞内细胞因子可测细胞内细胞因子 C.C.特异性高特异性高 D.D.单细胞水平分析单细胞水平分析 E.mRNAE.mRNA表达水平表达水平3 3用用ELISAELISA方法测定细胞因子，错误的是方法测定细胞因子，错误的是()()A.A.特异性高特异性高 B B.可测活性可测活性 C.C.操作简便操作简便 D.D.可

17、定量分析可定量分析 E.E.时间短时间短4.4.在检测可溶性在检测可溶性黏附黏附分子中，分子中，ELISAELISA常用常用()()A.A.直接法直接法 B.B.间接法间接法 C.C.夹心法夹心法 D.D.竞争法竞争法 E.E.组化法组化法A AE EB BC C第41页，此课件共43页哦 5.5.不属于细胞因子特点的是不属于细胞因子特点的是()()A.A.分泌型蛋白质分泌型蛋白质 B.B.自分泌自分泌 C.C.低分子量低分子量 D.D.不受不受MHCMHC限制限制 E.E.半衰期长半衰期长6.6.黏附黏附分子作用是分子作用是()()A.A.细胞信号传导与活化细胞信号传导与活化 B.B.细胞的

18、伸展与转移细胞的伸展与转移C.C.细胞的生长与分化细胞的生长与分化 D.D.创伤的愈合创伤的愈合E.E.以上都是以上都是7.7.慢性肝炎的急性期和活动期水平显著升高慢性肝炎的急性期和活动期水平显著升高,而稳而稳定期和恢复期有明显下降的细胞因子定期和恢复期有明显下降的细胞因子()()A.TNF A.TNF和和IL-6 B.TNFIL-6 B.TNF和和IL-10 C.TNFIL-10 C.TNF和和EPO EPO D.GM-CSF D.GM-CSF和和EPO E.GM-CSFEPO E.GM-CSF和和IL-6 IL-6 E EE EA A第42页，此课件共43页哦8.8.细胞因子生物学测定法最

19、重要的优点是细胞因子生物学测定法最重要的优点是()()A.A.高特异性高特异性 B.B.操作简单操作简单 C.C.低灵敏性低灵敏性 D.D.活性测定活性测定 E.E.实验成本低实验成本低9.9.关于细胞因子免疫学测定关于细胞因子免疫学测定,错误者错误者()()A A.是目前是目前CKCK检测最常用方法检测最常用方法 B B.可对可对CKCK进行定量进行定量分析分析 C C.可测可测CKCK活性活性 D D.可测可溶性可测可溶性CKCK和细胞和细胞内内CK ECK E.包括包括ELISA/ELISPOTELISA/ELISPOT和流式和流式10.10.可测定单个细胞分泌细胞因子的方法可测定单个细胞分泌细胞因子的方法()()A.ELISA B.RIA C.A.ELISA B.RIA C.凝集反应凝集反应 D.ELISPOT E.D.ELISPOT E.免疫比浊免疫比浊C CD DD D第43页，此课件共43页哦