乳腺癌检测精选PPT.ppt

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1、关于乳腺癌检测第1页，讲稿共52张，创作于星期一HER2HER2，又名，又名HER2/neuHER2/neu，c-erbB-2c-erbB-2，表皮生长因子，表皮生长因子受体（受体（EGFREGFR）家族成员；）家族成员；原癌基因，位于原癌基因，位于17q2117q21，编码相对分子量，编码相对分子量185KD185KD的的跨膜糖蛋白（跨膜酪氨酸激酶受体，表皮生长跨膜糖蛋白（跨膜酪氨酸激酶受体，表皮生长因子样分子），在细胞表面表达；因子样分子），在细胞表面表达；通过参与信号传道通路的一系列活动影响细胞通过参与信号传道通路的一系列活动影响细胞的增殖与分化。的增殖与分化。HER2基因基因第2页，讲

2、稿共52张，创作于星期一信号传导信号传导至细胞核至细胞核细胞核细胞核接合部接合部酪氨酸激酶酪氨酸激酶活性部分活性部分细胞浆细胞浆细胞膜细胞膜生长因子（配体）生长因子（配体）癌基因活化癌基因活化细胞分裂细胞分裂 HER2 HER2 受体跨膜二聚体的信号传导途径受体跨膜二聚体的信号传导途径第3页，讲稿共52张，创作于星期一1=1=基因拷贝数基因拷贝数2=2=mRNA 转录转录3=3=细胞表面受体蛋白表达细胞表面受体蛋白表达4=4=细胞外受体功能域释放细胞外受体功能域释放A=HER2 DNAB=HER2 mRNAC=HER2 receptor protein正常正常扩增扩增/过度表达过度表达细胞核细

3、胞核细胞质细胞质细胞膜细胞膜1234CBAHER2HER2过度表达：正常状态的过度表达：正常状态的10-10010-100倍倍第4页，讲稿共52张，创作于星期一 HER2HER2癌基因的致瘤机制：癌基因的致瘤机制：抑制凋亡，促进增殖；增加肿瘤细胞的侵袭抑制凋亡，促进增殖；增加肿瘤细胞的侵袭 力；促进肿瘤血管新生和淋巴管新生。力；促进肿瘤血管新生和淋巴管新生。研究表明：研究表明：3030以上的人类肿瘤中存在以上的人类肿瘤中存在HER2HER2基因的扩增基因的扩增/过度表达（如乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜过度表达（如乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜 癌、输卵管癌、胃癌和前列腺癌等癌、输卵管癌、胃癌和前列腺癌等

4、;20203030的原发性浸润性乳腺癌有的原发性浸润性乳腺癌有HER2HER2基因的基因的扩增扩增/过度表达过度表达。第5页，讲稿共52张，创作于星期一HER2HER2阳性阳性患者患者的生存期比阴性者缩短一半以上的生存期比阴性者缩短一半以上转移性乳腺癌患者的中位生存期转移性乳腺癌患者的中位生存期HER2 HER2 阳性阳性8-108-10个月个月HER2 HER2 阴性阴性17-2217-22个月个月Slamon DJ et al.Science 1987;235:17782第6页，讲稿共52张，创作于星期一20042004年发现淋巴结阴性患者预后与年发现淋巴结阴性患者预后与HER2HER2状

5、态密切相关状态密切相关p=0.0001Cumulative disease recurrence curvesSun JM.Cancer 2004;101:2516220.30.20.10020406080100月月HER2阳性患者平均风险曲线阳性患者平均风险曲线HER2 阴性患者平均风险曲线阴性患者平均风险曲线基础风险曲线基础风险曲线第7页，讲稿共52张，创作于星期一HER2 HER2 表达在原发肿瘤和转移灶呈高度一致表达在原发肿瘤和转移灶呈高度一致*Mainly distant metastases.*Liver and lung metastases.Lymph node metasta

6、ses were analysed in all cases,except in the studies by Vincent-Salomon et al(2002)and Gancberg et al(2002),where distant metastases were analysed.StudyStudyMasood&Bui(2000)Masood&Bui(2000)Shimizu et al(2000)Shimizu et al(2000)Simon et al(2001)Simon et al(2001)Tanner et al(2001)Tanner et al(2001)Gan

7、cberg et al(2002)Gancberg et al(2002)Vincent-Salomon et al(2002)Vincent-Salomon et al(2002)Tsutsui et al(2002)Tsutsui et al(2002)Carlsson et al(2004)Carlsson et al(2004)Primary tumoursPrimary tumours32%32%38%38%25%25%28%28%29%29%25%25%25%25%55%55%MetastasesMetastases32%32%38%38%22%22%28%28%27%*27%*2

8、0%*20%*25%25%55%55%Percentage IHC overexpression Percentage IHC overexpression 第8页，讲稿共52张，创作于星期一2005年年St.Gallen国际治疗指南国际治疗指南乳腺癌危险度分级乳腺癌危险度分级低度低度中度中度高度高度淋巴结淋巴结1+(13)2+(13)1+(3)2pTpT（cmcm）2伴伴21病理分级病理分级1或或 2 31瘤周脉管瘤周脉管或或+1HER2HER2或或+1 2+1年龄年龄35或或351第9页，讲稿共52张，创作于星期一2005 St Gallen 指南指南乳腺癌初诊时需明确乳腺癌初诊时需明确H

9、ER2HER2 HER2HER2阳性阳性即做为高风险因子加以考虑即做为高风险因子加以考虑Goldhirsch et al 2005CMF,cyclophosphamide,methotrexate,5-fluorouracil预后评估预后评估预后差预后差疗效预测疗效预测从赫赛汀从赫赛汀的治疗中最大获益的治疗中最大获益芳香化酶抑制剂的疗效优于三苯氧胺芳香化酶抑制剂的疗效优于三苯氧胺蒽环类和紫杉类的疗效优于蒽环类和紫杉类的疗效优于CMFCMF第10页，讲稿共52张，创作于星期一随着肿瘤的靶向性治疗的发展，以单抗为主的随着肿瘤的靶向性治疗的发展，以单抗为主的分子靶点药物的不断研制应用，已成为肿瘤靶分

10、子靶点药物的不断研制应用，已成为肿瘤靶向治疗的新武器向治疗的新武器 HerceptinHerceptin即为一种针对即为一种针对HER2HER2受体的高纯度重受体的高纯度重组组DNADNA衍生物的人源化单克隆抗体，是乳腺衍生物的人源化单克隆抗体，是乳腺癌治疗领域的第一个分子靶向性药物癌治疗领域的第一个分子靶向性药物第11页，讲稿共52张，创作于星期一刺激刺激刺激刺激刺激刺激刺激刺激HER2細胞細胞増殖増殖増殖増殖刺激刺激刺激刺激 刺激刺激刺激刺激HER2癌癌细细胞胞増殖抑制増殖抑制HeceptinHeceptin的作用的作用的作用的作用HeceptinHeceptin：一种针对一种针对Her-

11、2/neu受体的受体的高纯度重组高纯度重组DNA衍生物的人源化单克隆抗体，衍生物的人源化单克隆抗体，是乳腺癌治疗领域的第一个分子靶向性药物，是乳腺癌治疗领域的第一个分子靶向性药物，具有高效、低毒、选择性强的特点具有高效、低毒、选择性强的特点 癌癌细细胞表面存在着胞表面存在着CerbB-2蛋白，蛋白，受刺激后促受刺激后促进进癌癌细细胞的增殖胞的增殖 2030的癌细胞的癌细胞Her-2/neu基因的蛋白基因的蛋白CerbB-2 与与CerbB-2结结合阻断和抑制合阻断和抑制细细胞的增殖胞的增殖 转转移性乳腺癌病人的治移性乳腺癌病人的治疗疗效果效果 检测检测癌癌细细胞表面胞表面cerbB-2存在程度

12、决定使用存在程度决定使用第12页，讲稿共52张，创作于星期一意义意义 靶向药物靶向药物HeceptinHeceptin仅对仅对HER2HER2扩增的乳腺癌有效扩增的乳腺癌有效 准确的检测准确的检测HER2HER2有无扩增是临床应用有无扩增是临床应用HeceptinHeceptin的绝的绝 对对必要条件必要条件，也是成功进行靶向治疗的，也是成功进行靶向治疗的前题和关键前题和关键 HER-2 HER-2扩增的乳腺癌往往提示其扩增的乳腺癌往往提示其恶性程度高，恶性程度高，进展迅进展迅 速，化疗缓解期短，对速，化疗缓解期短，对CMFCMF方案化疗反应降低方案化疗反应降低 乳乳 腺癌化疗药物腺癌化疗药物

13、环磷酰胺、阿酶素、环磷酰胺、阿酶素、5 5氟尿嘧啶等氟尿嘧啶等 的主要参考指标的主要参考指标第13页，讲稿共52张，创作于星期一 HER-2HER-2扩增的乳腺癌对蒽环类药物和紫杉醇类药物化扩增的乳腺癌对蒽环类药物和紫杉醇类药物化 疗敏感性高疗敏感性高 HER2HER2和拓扑异构酶和拓扑异构酶II-aII-a基因同时扩基因同时扩 增的乳腺癌患者，可以从蒽环类药物为基础的方案增的乳腺癌患者，可以从蒽环类药物为基础的方案 中受益，故同时检测中受益，故同时检测HER2HER2和拓扑异构酶和拓扑异构酶II-aII-a可以筛可以筛 选出以蒽环类化疗药为基础的化疗方案候选患者选出以蒽环类化疗药为基础的化疗

14、方案候选患者 HER-2 HER-2扩增的乳腺癌对三苯氧胺易产生耐药性扩增的乳腺癌对三苯氧胺易产生耐药性 制制 定内分泌治疗方案的有力依据定内分泌治疗方案的有力依据 HER-2HER-2扩增的乳腺癌无病生存率和总生存率低，并且扩增的乳腺癌无病生存率和总生存率低，并且 与淋巴结阳性、癌的高级别、阴性受体状态及高增与淋巴结阳性、癌的高级别、阴性受体状态及高增 殖活性有关殖活性有关 预后判断的参考指标预后判断的参考指标意义意义第14页，讲稿共52张，创作于星期一ST.GALLEN 2007 HER2HER2：乳腺癌危险因素的新定义乳腺癌危险因素的新定义低低中中高高G1G1T2T2ER/PR+ER/P

15、R+年龄年龄352G2-3 T2淋巴结淋巴结 1-3 1-3 和和 HER2+,HER2+,ER/PR-ER/PR-或或淋巴结淋巴结 4 4淋巴结淋巴结-,-,HER2+,HER2+,ER/PR-ER/PR-或或 LVI LVI 侵润侵润 淋巴结淋巴结1-31-3且且 HER2 HER2 -,-,ER/PR+ER/PR+淋巴结淋巴结-HER2-HER2-LVILVI无无RISKRISK第15页，讲稿共52张，创作于星期一2007 NCCN 治疗指南治疗指南HER2检测的原则检测的原则第16页，讲稿共52张，创作于星期一ASCO/CAP:HER2检测指南检测指南HER2阳性阳性：IHC HER2

16、 3+(完整的，强的膜阳性完整的，强的膜阳性 30%)或或 FISH HER2 基因扩增基因扩增(HER2/CEP17 2.2 2.2 或或 HER2 基因拷贝数基因拷贝数 6 6 信号信号/核，无内对照的探针核，无内对照的探针)HER2阴性：阴性：IHC HER2 0-1+或或 FISH HER2 基因扩基因扩增增(HER2/CEP17 1.8 或或 HER2基因拷贝数基因拷贝数 4 4 信号信号/核，无内对照的探针核，无内对照的探针)不能确定：不能确定：不能确定：不能确定：IHC HER2 2+或或 FISH HER2 基因扩增基因扩增(HER2/CEP17 1.8-2.2 或或 HER2

17、基因拷贝数基因拷贝数 4-6 4-6 信信号号/核，无内对照的探针核，无内对照的探针)第17页，讲稿共52张，创作于星期一HER2HER2测定流程图测定流程图第18页，讲稿共52张，创作于星期一HER2的检测方法的检测方法免疫组织化学（免疫组织化学（IHCIHC）：）：HER2HER2蛋白的表达蛋白的表达荧光原位杂交（荧光原位杂交（FISHFISH）：）：HER2HER2基因的扩增基因的扩增显色原位杂交（显色原位杂交（CISHCISH）：）：HER2HER2基因的扩增基因的扩增酶联免疫分析（酶联免疫分析（EIAEIA）酶联免疫吸附分析（酶联免疫吸附分析（ELISAELISA）聚合酶链反应（聚合

18、酶链反应（PCRPCR）第19页，讲稿共52张，创作于星期一HER2阳性定义阳性定义IHC 3+IHC 3+CISH+CISH+FISH+FISH+或或或或蛋白过度表达蛋白过度表达基因扩增基因扩增=第20页，讲稿共52张，创作于星期一一抗结合于一抗结合于Her-2Her-2受体受体二抗结合并激活底物反应显色二抗结合并激活底物反应显色免疫组织化学法原理免疫组织化学法原理Immunohistochemistry(IHC)第21页，讲稿共52张，创作于星期一IHC检测检测HER2HER2表达初筛最常使用的方法。表达初筛最常使用的方法。判断判断HER2HER2蛋白过表达蛋白过表达最重要的是染色方法最重

19、要的是染色方法的标准化和结果的判断。的标准化和结果的判断。建议使用美国食品和药品管理局建议使用美国食品和药品管理局(FDA)(FDA)批准批准的试剂盒。的试剂盒。应使用应使用EnVisionEnVision法和高质量的法和高质量的DABDAB显色液以显色液以避免内源性生物素的影响。避免内源性生物素的影响。应有严格的、包括内部和外部的应有严格的、包括内部和外部的质量控制，质量控制，须设阳性对照、阴性对照和空白对照。须设阳性对照、阴性对照和空白对照。第22页，讲稿共52张，创作于星期一IHC结果判断结果判断先在先在1010物镜下进行判读物镜下进行判读注意细胞膜完全着色的癌细胞比例及着色注意细胞膜完

20、全着色的癌细胞比例及着色强度强度胞质着色应忽略不计胞质着色应忽略不计导管内癌导管内癌(DCIS)(DCIS)的着色应忽略不计，的着色应忽略不计，只评只评定浸润癌的着色情况定浸润癌的着色情况正常乳腺上皮不应着色正常乳腺上皮不应着色应使用应使用美国美国FDAFDA批准的批准的HercepTestHercepTest评分系统评分系统第23页，讲稿共52张，创作于星期一第24页，讲稿共52张，创作于星期一第25页，讲稿共52张，创作于星期一ASCO/CAP：C-erbB2 IHC的评分的评分0(阴性阴性):无染色无染色,或或 10%的细胞膜微弱的的细胞膜微弱的 或不完或不完整的膜染色整的膜染色2+(弱

21、阳性弱阳性):10%细胞弱到中等膜染色细胞弱到中等膜染色3+(强阳性强阳性):10%中等到强的完整的膜中等到强的完整的膜染色染色 30%第26页，讲稿共52张，创作于星期一01+第27页，讲稿共52张，创作于星期一2+3+第28页，讲稿共52张，创作于星期一C-erbB2第29页，讲稿共52张，创作于星期一2008/12/12第30页，讲稿共52张，创作于星期一HER-2 检测检测:IHC抗原修复抗原修复抗原修复抗原修复有有有有 /无无无无组织固定组织固定方法方法抗体选择抗体选择抗体选择抗体选择评分标准评分标准评分标准评分标准变异性变异性变异性变异性第31页，讲稿共52张，创作于星期一福尔马林

22、固定福尔马林固定/石蜡包埋组织石蜡包埋组织 HER 基因扩增基因扩增25倍倍（Southern Hybridization）Slamon et al,Science 244:712,1989HER2“阴性阴性”是由于组织固定后抗原被遮蔽是由于组织固定后抗原被遮蔽需要行抗原修复来纠正需要行抗原修复来纠正Courtesy Michael Press第32页，讲稿共52张，创作于星期一第33页，讲稿共52张，创作于星期一FISH是一种分子细胞遗传学技术，通过荧光标是一种分子细胞遗传学技术，通过荧光标记的记的DNADNA探针与细胞核内的探针与细胞核内的DNADNA靶序列杂交。靶序列杂交。在荧光显微镜下

23、，于细胞和在荧光显微镜下，于细胞和(或或)组织组织原位原位观察并分析细胞核内杂交于观察并分析细胞核内杂交于DNADNA靶序列的多靶序列的多种彩色探针信号，以获得细胞内多条染色种彩色探针信号，以获得细胞内多条染色体体(或染色体片段或染色体片段)或多种基因状态的信息。或多种基因状态的信息。“金标准金标准”第34页，讲稿共52张，创作于星期一HER2 geneHER2 geneHER2 gene双链靶基因双链靶基因变性的单链变性的单链DNADNA与荧光标记探针复与荧光标记探针复性性 产生荧光信号产生荧光信号荧光原位杂交法原理荧光原位杂交法原理 Fluorescence in situ Hybridi

24、sation(FISH)第35页，讲稿共52张，创作于星期一HER2探针探针绝大部分是同时含有绝大部分是同时含有HER2HER2基因基因(标记为橘红标记为橘红色荧光色荧光)和该基因所在的和该基因所在的1717号染色体着丝粒号染色体着丝粒(标记为绿色荧光标记为绿色荧光)序列的混合探针序列的混合探针经美国经美国FDAFDA批准的进口探针批准的进口探针 VS VS 国产探针国产探针第36页，讲稿共52张，创作于星期一第37页，讲稿共52张，创作于星期一评价评价1717号染色体数目和意义号染色体数目和意义HER2HER2基因位于基因位于1717号染色体上，大约有号染色体上，大约有47%47%的乳腺癌存

25、在的乳腺癌存在1717号染号染色体非整体性色体非整体性，即即1717号染色体不是正常的二体，而是单体或号染色体不是正常的二体，而是单体或多体。多体。绿色探针可以将绿色探针可以将1717号染色体的非整体性和单纯的号染色体的非整体性和单纯的HER2HER2基因扩增，基因扩增，尤其是低水平的扩增区分开。尤其是低水平的扩增区分开。当当HER2HER2基因与基因与1717号染色体数目比值大于号染色体数目比值大于2 2时，即为时，即为HER2HER2基因扩基因扩增。增。加入了这个内对照，就排除了单色探针加入了这个内对照，就排除了单色探针(探针中仅有探针中仅有HER2HER2基因基因)可能造成的假阴性可能造

26、成的假阴性(17(17号染色体单体号染色体单体)或假阳性或假阳性(17(17号染色体多号染色体多体体)。临床研究显示，临床研究显示，具有这类遗传学特征的患者对治疗的反具有这类遗传学特征的患者对治疗的反应和预后与单纯的基因扩增明显不同。应和预后与单纯的基因扩增明显不同。第38页，讲稿共52张，创作于星期一质量控制质量控制内对照：杂交的组织、细胞中有内对照：杂交的组织、细胞中有75%75%的细胞的细胞核显示出双色信号核显示出双色信号时，视为实验成功，并时，视为实验成功，并且红、绿信号互为对照，癌与非癌细胞互且红、绿信号互为对照，癌与非癌细胞互为对照。为对照。外对照：应选择外对照：应选择FISHFI

27、SH阳性和阴性的标本片。阳性和阴性的标本片。第39页，讲稿共52张，创作于星期一结果判读结果判读杂交信号计数杂交信号计数应选择细胞核大小一致、核的边界完整、二脒基苯基吲哚应选择细胞核大小一致、核的边界完整、二脒基苯基吲哚(DAPI)(DAPI)染色均一、细染色均一、细胞核孤立无重叠、绿色着丝粒信号清晰的细胞。胞核孤立无重叠、绿色着丝粒信号清晰的细胞。随机计数随机计数20203030个癌细胞核中的双色信号。个癌细胞核中的双色信号。判读标准判读标准红色信号的总数与绿色信号的总数比值红色信号的总数与绿色信号的总数比值2.22.2时，即为时，即为HER2HER2基因扩增基因扩增若红、绿两信号的若红、绿

28、两信号的比值比值2020或众多信号连接成簇时可不计算，即视为基或众多信号连接成簇时可不计算，即视为基因扩增；因扩增；若比值介于若比值介于1.81.82.22.2之间，则需要再计数之间，则需要再计数2020个细胞核中的信号个细胞核中的信号或由另外一或由另外一个分析者重新计数。如仍为临界值，则应在个分析者重新计数。如仍为临界值，则应在FISHFISH检测报告中注明。检测报告中注明。若若HER2HER2基因扩增在不同癌细胞中基因扩增在不同癌细胞中存在异质性时，应在另一癌区域再计算存在异质性时，应在另一癌区域再计算20203030个癌细胞核中的红、绿信号值，报告其最大值，并加以注释。个癌细胞核中的红、

29、绿信号值，报告其最大值，并加以注释。注意避免注意避免G2G2期细胞内的基因拷贝数目特征期细胞内的基因拷贝数目特征(4(4个拷贝个拷贝)可能导致的计数误差。可能导致的计数误差。第40页，讲稿共52张，创作于星期一第41页，讲稿共52张，创作于星期一HER2 probeCEP 17 probeHER2/CEP17 ratio=1HER2/CEP17 ratio=1HER2/CEP17 ratio=7No amplificationNo amplification;tetraploidyHER2 gene amplification(ratio 2.2)第42页，讲稿共52张，创作于星期一HER2

30、FISH PatternsFISHAmplifiedFISHNot amplifiedAneusomyNot amplifiedCourtesy Ken Bloom第43页，讲稿共52张，创作于星期一FISH:PathVysionTM无扩增无扩增扩增扩增比值比值 2.2 2.22.2提示提示Her-2Her-2有扩增有扩增第44页，讲稿共52张，创作于星期一比值比值 2.2提示提示Her-2有扩增有扩增第46页，讲稿共52张，创作于星期一比值介于比值介于1.81.82.22.2临界值临界值第47页，讲稿共52张，创作于星期一Aneusomy,Not amplified第48页，讲稿共52张，创

31、作于星期一第49页，讲稿共52张，创作于星期一IHC vs FISH C-erbB2 scoreGene amplification by FISH04%17%210-35%390%第50页，讲稿共52张，创作于星期一转移性乳腺癌中：转移性乳腺癌中：HER2 HER2 检测检测 IHC 3+orIHC 3+or FISH+FISH+赫赛汀赫赛汀的治疗效果相当的治疗效果相当Vogel C,et al.J Clin Oncol 2002;20:71926263534384848Response rateClinical benefit rate第51页，讲稿共52张，创作于星期一感谢大家观看第52页，讲稿共52张，创作于星期一