血红蛋白的提取和分离 (5)讲稿.ppt

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1、关于血红蛋白的提取和分离(5)第一页，讲稿共三十九页哦一、血红蛋白的提取和分离一、血红蛋白的提取和分离1 1、血液有哪些成分、血液有哪些成分血血液液血浆血浆水水 分分固体物质：固体物质：血浆蛋白、血浆蛋白、血浆蛋白、血浆蛋白、无机盐、磷脂、葡萄糖等无机盐、磷脂、葡萄糖等无机盐、磷脂、葡萄糖等无机盐、磷脂、葡萄糖等血细血细 胞胞白细胞白细胞血小板血小板红细胞红细胞（最多最多最多最多）血红蛋白血红蛋白（90909090）第二页，讲稿共三十九页哦血红蛋白血红蛋白两个两个肽链肽链两个两个一肽链一肽链四个亚铁血红素基团四个亚铁血红素基团每个肽链环绕一个每个肽链环绕一个亚铁血红素基亚铁血红素基团，团，此基

2、团可携带此基团可携带一分子氧或一一分子氧或一分子二氧化碳，分子二氧化碳，血红蛋白因含有血红蛋白因含有血红素血红素而呈而呈红色红色。2 2、血红蛋白的特点：、血红蛋白的特点：第三页，讲稿共三十九页哦 用鸡的红细胞提取用鸡的红细胞提取DNADNA，用猪、牛、羊的红细胞，用猪、牛、羊的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？提取血红蛋白的原因是什么？鸡的红细胞具有细胞核，含有鸡的红细胞具有细胞核，含有DNADNA，便于，便于进行进行DNADNA的提取；猪的红细胞无细胞核，结构简的提取；猪的红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋白含量丰富，便于提取血红蛋白。单，血红蛋白含量丰富，便于提取血红蛋白。第四页，讲稿共三十

3、九页哦3 3、蛋白质分离和提取的原理：、蛋白质分离和提取的原理：P64P64 根据蛋白质各种特性的差异，如分子的根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等等，度、吸附性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同种类的蛋白质。可以用来分离不同种类的蛋白质。4 4、蛋白质分离和提取的常用方法：、蛋白质分离和提取的常用方法：凝胶色谱法（分配色谱法）凝胶色谱法（分配色谱法）电泳电泳第五页，讲稿共三十九页哦（一）（一）凝胶色谱法（分配色谱法）凝胶色谱法（分配色谱法）1.概念：根据被分离物质的蛋白质根据

4、被分离物质的蛋白质相对分相对分子质量子质量的大的大 小，利用具有小，利用具有网状结构网状结构的凝胶，的凝胶，来进行分离。来进行分离。2.凝胶：大多数凝胶是由多糖类化合物大多数凝胶是由多糖类化合物（如葡聚糖或琼脂糖）构成的多孔小球（如葡聚糖或琼脂糖）构成的多孔小球体，内部有许多贯穿的通道。体，内部有许多贯穿的通道。第六页，讲稿共三十九页哦3.凝胶色谱法的原理 当相对分子量不同的蛋白质通过凝胶当相对分子量不同的蛋白质通过凝胶时，时，相对分子量较小相对分子量较小的蛋白质容易进入凝胶内的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程部的通道，路程较长较长，移动速度，移动速度较慢较慢;而而相对分子量较大相对分子量较

5、大的蛋白质无法进入凝的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较较短短，移动速度，移动速度较快较快。相对分子质量不同的蛋。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。白质分子因此得以分离。依据的特性是：蛋白质分子量的大小。依据的特性是：蛋白质分子量的大小。第七页，讲稿共三十九页哦凝胶色谱法分离蛋白质过程的动画演示凝胶色谱法分离蛋白质过程的动画演示第八页，讲稿共三十九页哦相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可表示为图中哪一个（过程可表示为图中哪一个（）B B第九页，讲稿共三十九页哦（二）缓冲溶液（二）缓

6、冲溶液 1.1.概念概念:2.2.作用作用:在一定的范围内，凡是能够抵制外在一定的范围内，凡是能够抵制外加少量强酸或强碱的影响使原来溶液加少量强酸或强碱的影响使原来溶液PHPH值值基本保持不变的混合溶液。基本保持不变的混合溶液。在一定范围内在一定范围内，能够抵制外界的，能够抵制外界的酸和碱对溶液酸和碱对溶液PHPH值的影响，维持值的影响，维持PHPH基基本不变。本不变。第十页，讲稿共三十九页哦3.3.缓冲溶液的配制缓冲溶液的配制:通常由通常由1 12 2 种缓冲剂溶解于水中配制而种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不成。调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同同PHPH范围

7、内使用的缓冲液。范围内使用的缓冲液。4.4.提问提问：在本课题中使用的缓冲液是：在本课题中使用的缓冲液是:_ _ ,其目的是其目的是:利用缓冲液模拟细胞内的利用缓冲液模拟细胞内的PHPH环境，保证环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察血红蛋白的正常结构和功能，便于观察(红色红色)和科学研究和科学研究(活性活性)。磷酸缓冲液磷酸缓冲液第十一页，讲稿共三十九页哦样品处理样品处理粗分离粗分离纯化纯化纯度鉴定纯度鉴定（一）（一）蛋白质提取和分离步骤蛋白质提取和分离步骤二、实验操作二、实验操作柠檬酸钠柠檬酸钠第十二页，讲稿共三十九页哦(1)(1)红细胞的洗涤红细胞的洗涤:洗涤目的洗涤目的洗涤目的洗

8、涤目的:去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化。分离纯化。洗涤操作：洗涤操作：洗涤操作：洗涤操作：1 1、采集血样。、采集血样。2 2、低速短时间离心。低速短时间离心。3 3、吸取血浆：上层透明的黄色血浆。、吸取血浆：上层透明的黄色血浆。4 4、盐水洗涤：用五倍体积的质量分数为、盐水洗涤：用五倍体积的质量分数为0.90.9的氯化钠的氯化钠溶液洗涤。溶液洗涤。5 5、低速短时间离心。低速短时间离心。6 6、重复重复4 4、5 5步骤三次步骤三次，直至上清液中已没有黄色，表明洗，直至上清液中已没有黄色，表明洗涤干净。涤干净。1.1.样品处理样品处理（二）操作过程（

9、二）操作过程 洗涤次数过少洗涤次数过少，无法除去血浆蛋白；，无法除去血浆蛋白；离心速度过高、时间过长离心速度过高、时间过长会使白细胞等细胞一同会使白细胞等细胞一同沉淀，达不到分离的效果。沉淀，达不到分离的效果。注意：注意：注意：注意：第十三页，讲稿共三十九页哦(2)(2)血红蛋白的释放血红蛋白的释放：加蒸馏水到原血液体积，再加：加蒸馏水到原血液体积，再加4040体积的甲苯体积的甲苯 ，置于磁力搅拌器上充分搅拌，置于磁力搅拌器上充分搅拌1010分钟（加分钟（加速细胞破裂）速细胞破裂）,细胞破裂释放出血红蛋白。细胞破裂释放出血红蛋白。(3)(3)分离血红蛋白溶液分离血红蛋白溶液分离血红蛋白溶液分离

10、血红蛋白溶液：离心：离心：将搅拌好混合液转移到离心管内，以将搅拌好混合液转移到离心管内，以2000r/min2000r/min的速度离心的速度离心10 min10 min。试管中溶液层次：试管中溶液层次：试管中溶液层次：试管中溶液层次：第第1 1层（最上层）：甲苯层（无色透明）；层（最上层）：甲苯层（无色透明）；第第2 2层（中上层）：脂溶性物质沉淀层（白色）；层（中上层）：脂溶性物质沉淀层（白色）；第第3 3层（中下层）：血红蛋白的水溶液层（红色层（中下层）：血红蛋白的水溶液层（红色)；第第4 4层（最下层）：杂质沉淀层（暗红色）。层（最下层）：杂质沉淀层（暗红色）。分离：分离：分离：分离：

11、用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。第十四页，讲稿共三十九页哦甲苯层甲苯层（无色透明无色透明无色透明无色透明）白色薄层固体白色薄层固体白色薄层固体白色薄层固体红色透明液体红色透明液体杂质沉淀层杂质沉淀层（暗红色暗红色）试管中溶液层次试管中溶液层次第十五页，讲稿共三十九页哦(4)(4)透透 析：析：过程：过程：过程：过程：取取1ml1ml的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有袋放入盛有300ml300ml的物质的量浓度为的物质的量浓度为2

12、0mmol/l20mmol/l的的磷酸缓冲磷酸缓冲液液中（中（pHpH为为7.07.0），透析），透析1212小时。小时。透析目的：透析目的：透析目的：透析目的：除去样品中分子量较小的杂质。除去样品中分子量较小的杂质。2.2.粗分离粗分离第十六页，讲稿共三十九页哦透析过程动画演示透析过程动画演示第十七页，讲稿共三十九页哦2.2.凝胶色谱操作凝胶色谱操作:取长取长4040厘米，内径厘米，内径1.61.6厘米的厘米的玻璃管，两端需用砂纸磨平。玻璃管，两端需用砂纸磨平。底塞的制作：打孔底塞的制作：打孔挖出凹穴挖出凹穴安装移液管头部安装移液管头部覆盖尼龙网，覆盖尼龙网，再用再用100100目尼龙纱包好

13、，插到玻璃管目尼龙纱包好，插到玻璃管的的一一端。端。（1 1）凝胶色谱柱的制作）凝胶色谱柱的制作第十八页，讲稿共三十九页哦顶塞的制作：打孔顶塞的制作：打孔安装玻璃管。安装玻璃管。组装：将上述三者按相应位置组装成组装：将上述三者按相应位置组装成一个整体。一个整体。安装其他附属结构安装其他附属结构第十九页，讲稿共三十九页哦凝胶的选择凝胶的选择：A A、材料：交联葡聚糖凝胶（、材料：交联葡聚糖凝胶（G-75G-75）。）。B B、代表意义：、代表意义：“G G”表示凝胶的交联程度，膨胀程表示凝胶的交联程度，膨胀程度及分离范围度及分离范围。7575表示凝胶的得水值，即每克凝胶膨表示凝胶的得水值，即每克

14、凝胶膨胀时吸水胀时吸水7.57.5克。克。凝胶的前处理凝胶的前处理：配置凝胶悬浮液：计算并称取一配置凝胶悬浮液：计算并称取一定量的凝胶浸泡于蒸馏水或洗脱液中充分溶胀后，配定量的凝胶浸泡于蒸馏水或洗脱液中充分溶胀后，配成凝胶悬浮液。成凝胶悬浮液。（2 2）凝胶色谱柱的装填）凝胶色谱柱的装填第二十页，讲稿共三十九页哦凝胶色谱柱的装填凝胶色谱柱的装填：A、固定：将色谱柱装置固定在支架上。、固定：将色谱柱装置固定在支架上。B、装填：将凝胶悬浮液一次性缓慢倒入色谱柱内，、装填：将凝胶悬浮液一次性缓慢倒入色谱柱内，装填时轻轻敲动色谱柱，使凝胶填装均匀。装填时轻轻敲动色谱柱，使凝胶填装均匀。注意：注意：1、

15、凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间、凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。的空隙。2、装填凝胶柱时不得有气泡存在：因为气泡会、装填凝胶柱时不得有气泡存在：因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。效果。（2 2）凝胶色谱柱的装填）凝胶色谱柱的装填第二十一页，讲稿共三十九页哦 洗涤平衡洗涤平衡：装填完毕后，立装填完毕后，立即用缓冲液洗脱瓶，在即用缓冲液洗脱瓶，在50cm50cm高高的操作压下，用的操作压下，用300ml300ml的的20mmol/l20mmol/l的磷酸缓冲液（的磷酸缓冲液（pHpH为为7.07.0）充分洗涤平衡）充分

16、洗涤平衡1212小时。小时。注意：注意：50cm50cm高高高高（2 2）凝胶色谱柱的装填）凝胶色谱柱的装填1 1、液面不要低于凝胶表面，否、液面不要低于凝胶表面，否则可能有气泡混入，影响液体在则可能有气泡混入，影响液体在柱内的流动与最终生物大分子物柱内的流动与最终生物大分子物质的分离效果。质的分离效果。2 2、不能发生洗脱液流干，露出凝、不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象胶颗粒的现象。第二十二页，讲稿共三十九页哦（3 3）样品加入与洗脱）样品加入与洗脱 调节缓冲液面：调节缓冲液面：打开下端出口，打开下端出口，使柱内缓冲液缓慢下降到与凝胶面平齐，使柱内缓冲液缓慢下降到与凝胶面平齐，关闭出口

17、。关闭出口。滴加透析样品：滴加透析样品：吸管吸吸管吸1ml1ml样品样品加到色谱柱的顶端，滴加样品时，吸加到色谱柱的顶端，滴加样品时，吸管管口贴着管壁环绕移动加样，同时管管口贴着管壁环绕移动加样，同时注意不要破坏凝胶面。注意不要破坏凝胶面。第二十三页，讲稿共三十九页哦样品渗入凝胶床：样品渗入凝胶床：加样后打开下加样后打开下端出口，使样品渗入凝胶床内，端出口，使样品渗入凝胶床内，等样品完全进入凝胶层后，关闭等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口下端出口洗脱：洗脱：小心加入小心加入pH=7.0 的的20mmol/l的磷酸缓冲液到适当高度，的磷酸缓冲液到适当高度，连接缓冲液洗脱瓶，打开下端出口连接缓冲

18、液洗脱瓶，打开下端出口进行洗脱。进行洗脱。收集：收集：待红色的蛋白质接近色待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，谱柱底端时，用试管收集流出液，每每5ml收集一试管，连续收集。收集一试管，连续收集。第二十四页，讲稿共三十九页哦注意：注意：正确的加样操作是：正确的加样操作是：1 1、不要触及并破坏凝胶面。、不要触及并破坏凝胶面。2 2、贴壁加样。贴壁加样。3 3、使吸管管口沿管壁环绕移动。、使吸管管口沿管壁环绕移动。（3 3）样品加入与洗脱）样品加入与洗脱第二十五页，讲稿共三十九页哦在分离过程中，如果在分离过程中，如果红色区红色区带均匀一致带均匀一致的移动，说明色的移动，说明色谱柱制作

19、成功谱柱制作成功注意：注意：第二十六页，讲稿共三十九页哦思考下面的问题：思考下面的问题：让血红蛋白处在稳定的让血红蛋白处在稳定的pHpH范围内，维持结构和功能正范围内，维持结构和功能正常。常。1 1 1 1、在血红蛋白纯化的整个过程中不断用磷酸缓冲液处理、在血红蛋白纯化的整个过程中不断用磷酸缓冲液处理、在血红蛋白纯化的整个过程中不断用磷酸缓冲液处理、在血红蛋白纯化的整个过程中不断用磷酸缓冲液处理的目的是什么？的目的是什么？的目的是什么？的目的是什么？2 2 2 2、与其他蛋白质相比，血红蛋白有什么特点？这一特点、与其他蛋白质相比，血红蛋白有什么特点？这一特点、与其他蛋白质相比，血红蛋白有什么特

20、点？这一特点、与其他蛋白质相比，血红蛋白有什么特点？这一特点对你进行血红蛋白的分离有什么启示？对你进行血红蛋白的分离有什么启示？对你进行血红蛋白的分离有什么启示？对你进行血红蛋白的分离有什么启示？血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱分离时可血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱分离时可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液。这以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液。这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作。作。第二十七页，讲稿共三十九页哦1.1.样品的处理样品的处理通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离心等操

21、作收集到血红蛋白溶液离心等操作收集到血红蛋白溶液2.2.样品的粗分离样品的粗分离经过经过透析透析去除分子量较小的杂质去除分子量较小的杂质3.3.样品的纯化样品的纯化通过通过通过通过凝胶色谱法凝胶色谱法将相对分子质量较大的杂将相对分子质量较大的杂质蛋白除去质蛋白除去4.4.纯度鉴定纯度鉴定SDS-SDS-SDS-SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳。3 3、你能描述血红蛋白分离的完整过程吗？你能描述血红蛋白分离的完整过程吗？样品处理样品处理粗分离粗分离纯化纯化纯度鉴定纯度鉴定第二十八页，讲稿共三十九页哦（三）（三）电泳：电泳：1.1.概念：概念：带电粒

22、子在电场作用下发生迁移的程。带电粒子在电场作用下发生迁移的程。许多重要的生物大分子，如多肽、许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的核酸等都具有可解离的基团，在一定的PHPH下，这下，这些基团会带上正电或负电。些基团会带上正电或负电。在电场的作用下，这在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小，形状的不同，使带电分子异以及分子本身的大小，形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的产

23、生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。分离。2.2.原理：原理：3.3.类型类型:琼脂糖琼脂糖凝胶电泳、凝胶电泳、聚丙稀酰胺聚丙稀酰胺凝胶电泳。凝胶电泳。第二十九页，讲稿共三十九页哦 在在在在电场电场电场电场的作用下，的作用下，的作用下，的作用下，这这这这些些些些带电带电带电带电分子分子分子分子会会会会向着向着向着向着与与与与其所其所其所其所带电带电带电带电荷相反的荷相反的荷相反的荷相反的电电电电极极极极移移移移动动动动琼脂糖凝胶电泳示意图琼脂糖凝胶电泳示意图琼脂糖凝胶电泳示意图琼脂糖凝胶电泳示意图第三十页，讲稿共三十九页哦 聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳 1 1、在测定蛋白质

24、分子量时常用、在测定蛋白质分子量时常用十二烷基硫酸钠十二烷基硫酸钠（SDSSDS）聚丙烯酰胺凝胶电泳。聚丙烯酰胺凝胶电泳。聚丙烯酰胺凝胶是聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺和交联剂由单体丙烯酰胺和交联剂N,NN,N-亚甲基双丙烯酰胺在亚甲基双丙烯酰胺在引发剂引发剂和和催化剂催化剂的作用下聚合交联成的具有三维网的作用下聚合交联成的具有三维网状结构的凝胶。状结构的凝胶。N,N-亚甲基双丙烯酰胺（形成交联）亚甲基双丙烯酰胺（形成交联）丙烯酰胺和交联剂丙烯酰胺和交联剂N,N-亚甲基双丙烯酰胺的交联共聚反应亚甲基双丙烯酰胺的交联共聚反应第三十一页，讲稿共三十九页哦 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于蛋白

25、质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少以及分子的大小等因素。（它所带净电荷的多少以及分子的大小等因素。（SDSSDS的作用）的作用）为了消除净电荷对迁移率的影响，可以在为了消除净电荷对迁移率的影响，可以在凝胶中加入凝胶中加入SDSSDS。2.2.原理：原理：SDSSDS能使蛋白质发生能使蛋白质发生完全变性完全变性。由几条肽链组成的。由几条肽链组成的蛋白质复合体在蛋白质复合体在SDSSDS的作用下会的作用下会解聚成单条肽链解聚成单条肽链，因此，因此测定的结果只是测定的结果只是单条肽链的分子量单条肽链的分子量单条肽链的分子量单条肽链的分子量。SDSSDS能与各种蛋白能与各种蛋白质形成

26、质形成蛋白质蛋白质蛋白质蛋白质SDSSDS复合物复合物，SDSSDS所带负电荷的量大大超所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子过了蛋白质分子原有的电荷量原有的电荷量原有的电荷量原有的电荷量。因而掩盖了。因而掩盖了不同种蛋白质不同种蛋白质间的电荷差别间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于使电泳迁移率完全取决于分子的大小分子的大小。3.SDS3.SDS作用机理作用机理:第三十二页，讲稿共三十九页哦第三十三页，讲稿共三十九页哦（三）（三）SDSSDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（选做）聚丙烯酰胺凝胶电泳（选做）鉴定血红蛋白纯度。鉴定血红蛋白纯度。目的：目的：第三十四页，讲稿共三十九页哦 观察你处理的血液样品离心后观

27、察你处理的血液样品离心后是否分层是否分层（见教科书图（见教科书图5-185-18），），如果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。如果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。此外，此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。三、实验结果分析与评价三、实验结果分析与评价 1 1、你是否完成了对血液样品的处理？你能描述处理、你是否完成了对血液样品的处理？你能描述处理后的样品发生了哪些变化吗？后的样品发

28、生了哪些变化吗？2 2、你装填的凝胶色谱柱是否有气泡产生？你的色谱柱、你装填的凝胶色谱柱是否有气泡产生？你的色谱柱装填得成功吗？你是如何判断的？装填得成功吗？你是如何判断的？由于凝胶是一种半透明的介质，因此可以在凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂由于凝胶是一种半透明的介质，因此可以在凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯，检查凝胶是否装填得均匀。此外，还可以加入大分子的有色物直的日光灯，检查凝胶是否装填得均匀。此外，还可以加入大分子的有色物质，质，例如蓝色葡聚糖例如蓝色葡聚糖20002000或红色葡聚糖或红色葡聚糖，观察色带移动的情况。如果色带观察色带移动的情况。如果色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱柱的性

29、能良好。均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱柱的性能良好。如果色谱柱出现纹路或是如果色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体以消除气泡，消除不了时要重新装柱。气泡，轻轻敲打柱体以消除气泡，消除不了时要重新装柱。第三十五页，讲稿共三十九页哦 如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。色谱

30、柱的装填有关。3 3 3 3、你能观察到蛋白质的分离过程中红色区带的移动吗、你能观察到蛋白质的分离过程中红色区带的移动吗？请描述红色区带的移动情况，并据此判断分离效果？请描述红色区带的移动情况，并据此判断分离效果？第三十六页，讲稿共三十九页哦教学反馈教学反馈 1凝胶色谱法是根据（凝胶色谱法是根据（）分离蛋白质的有效方法。）分离蛋白质的有效方法。A分子的大小分子的大小 B相对分子质量的大小相对分子质量的大小 C带电荷的多少带电荷的多少 D溶解度溶解度2缓冲液的作用是：在一定范围内，抵制外界的影响来维持（缓冲液的作用是：在一定范围内，抵制外界的影响来维持（）基本不变。）基本不变。A温度温度 B p

31、H C渗透压渗透压 D氧气浓度氧气浓度3电泳是指带电粒子在电场的作用下向着与其所带电荷（电泳是指带电粒子在电场的作用下向着与其所带电荷（）的电极移动。）的电极移动。A相同相同 B相反相反 C相对相对 D相向相向4.哺乳动物和人的成熟的红细胞中的（哺乳动物和人的成熟的红细胞中的（）与氧气的运输有）与氧气的运输有关。关。A血红蛋白血红蛋白 B肌红蛋白肌红蛋白 C肌动蛋白肌动蛋白 D肌球蛋白肌球蛋白BBBA第三十七页，讲稿共三十九页哦5血液由血浆和各种血细胞组成，其中（血液由血浆和各种血细胞组成，其中（）的含量最多。的含量最多。A白细胞白细胞 B血小板血小板 C红细胞红细胞 D淋巴细胞淋巴细胞6为防止血液凝固，在采血容器中要预先加入抗为防止血液凝固，在采血容器中要预先加入抗凝血剂（凝血剂（）。）。A.NaCl B.甲苯甲苯 C.蒸馏水蒸馏水 D.柠檬酸钠柠檬酸钠7将搅拌好的混合液转移到离心管中，离心后，将搅拌好的混合液转移到离心管中，离心后，可以明显看到试管中的溶液分为可以明显看到试管中的溶液分为4层，层，其其中第中第3层是（层是（）A无色透明的甲苯层无色透明的甲苯层 B脂溶性物质的沉淀层脂溶性物质的沉淀层 C血红蛋白的水溶液血红蛋白的水溶液 D其他杂质的暗红色沉淀物其他杂质的暗红色沉淀物CDC第三十八页，讲稿共三十九页哦感感谢谢大大家家观观看看第三十九页，讲稿共三十九页哦