基因工程及其应用修改讲稿.ppt
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1、基因工程及其应用修改第一页,讲稿共三十七页哦问题探讨问题探讨讨论:讨论:讨论:讨论:1 1 1 1、把人胰岛素基因、把人胰岛素基因、把人胰岛素基因、把人胰岛素基因“嫁接嫁接嫁接嫁接”到大肠杆菌到大肠杆菌到大肠杆菌到大肠杆菌中去后与普通细菌有什么不同?中去后与普通细菌有什么不同?中去后与普通细菌有什么不同?中去后与普通细菌有什么不同?2 2 2 2、为什么能把人的基因、为什么能把人的基因、为什么能把人的基因、为什么能把人的基因“嫁接嫁接嫁接嫁接”到细菌上?到细菌上?到细菌上?到细菌上?大多数生物的遗传物质都是大多数生物的遗传物质都是DNA,且不同生物的,且不同生物的DNA分子基分子基本结构是相同
2、的,都遵循碱基互补配对原则本结构是相同的,都遵循碱基互补配对原则。所以不同的生物。所以不同的生物DNA可以嫁接。可以嫁接。地球上的所有生物共用一套遗传密码,所以一种生物的基因可以在地球上的所有生物共用一套遗传密码,所以一种生物的基因可以在另外一种生物体内得以表达。另外一种生物体内得以表达。3 3 3 3、怎样把人胰岛素基因、怎样把人胰岛素基因、怎样把人胰岛素基因、怎样把人胰岛素基因“嫁接嫁接嫁接嫁接”到大肠杆菌中去?到大肠杆菌中去?到大肠杆菌中去?到大肠杆菌中去?第二页,讲稿共三十七页哦原理:原理:操作水平操作水平:结果结果:基因重组基因重组DNA分子水平分子水平定向定向地改造生物的遗传性状,
3、获得人地改造生物的遗传性状,获得人类所需要的品种。类所需要的品种。基因工程:又叫做基因工程:又叫做基因拼接技术基因拼接技术或或DNA重组技术重组技术。通俗的说,就是按照人们的意愿,。通俗的说,就是按照人们的意愿,把一种生物的某种基因提取出来,加以修饰把一种生物的某种基因提取出来,加以修饰改造,然后放到另一种生物的细胞里,改造,然后放到另一种生物的细胞里,定向定向地改造生物的地改造生物的遗传性状遗传性状。第三页,讲稿共三十七页哦DNA重组技术的基本工具重组技术的基本工具准确切割准确切割DNA的工具(基因的工具(基因“剪刀剪刀”)限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶DNA片段的连接工具(基因片段的连接
4、工具(基因“针线针线”)DNA连接酶连接酶基因转移工具(基因基因转移工具(基因“运载体运载体”)质粒、噬菌体、动植物病毒质粒、噬菌体、动植物病毒基因的大小以纳米计算,要对它进行剪切、基因的大小以纳米计算,要对它进行剪切、拼接等操作,最少需要以下三种专门工具:拼接等操作,最少需要以下三种专门工具:第四页,讲稿共三十七页哦一、基因工程的原理一、基因工程的原理1、“基因剪刀基因剪刀”限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶(简称限制酶简称限制酶)C T T A AG A A T T C G一种一种限制酶只能识别限制酶只能识别一种一种特定的核苷酸序列,特定的核苷酸序列,并在并在特定特定的切点上切割的切点上切割
5、DNADNA分子。分子。例如例如:EcoRI:EcoRI限制酶,限制酶,专一专一识别识别GAATTCGAATTC序列,并在序列,并在G G和和A A之间将序列切开。之间将序列切开。第五页,讲稿共三十七页哦限制性内切酶(限制性内切酶(EcoREcoR)作用过程)作用过程点击播放点击播放第六页,讲稿共三十七页哦被同一种限制酶切断的几个被同一种限制酶切断的几个DNADNA是否具有相同的是否具有相同的黏性末端?黏性末端?要想获得某个目的基因必须要用限制酶需要切几刀要想获得某个目的基因必须要用限制酶需要切几刀?可产生几个黏性末端?一个目的基因有几个黏性?可产生几个黏性末端?一个目的基因有几个黏性末端?末
6、端?要切两刀,产生四个黏性末端,两个。要切两刀,产生四个黏性末端,两个。是,会产生相同的黏性末端。是,会产生相同的黏性末端。被限制酶切开的被限制酶切开的被限制酶切开的被限制酶切开的DNADNA两条两条两条两条单链的切口单链的切口单链的切口单链的切口,带有几个,带有几个,带有几个,带有几个伸出伸出伸出伸出的核苷酸的核苷酸的核苷酸的核苷酸,他们之间正好,他们之间正好,他们之间正好,他们之间正好互补配对互补配对互补配对互补配对,这样的切口叫,这样的切口叫,这样的切口叫,这样的切口叫黏性末黏性末黏性末黏性末端端端端。第七页,讲稿共三十七页哦尝试写出下列序列受尝试写出下列序列受EcoRIEcoRI限制酶
7、作用后的黏性限制酶作用后的黏性末端末端DNADNA被限制酶切断后有两个反向互补的被限制酶切断后有两个反向互补的“黏性黏性末端末端”。被同一种限制酶切断的几个。被同一种限制酶切断的几个DNADNA具有具有相同相同的黏性末端,碱基能够通过互补进行配对。的黏性末端,碱基能够通过互补进行配对。CTTCATGGAAGTACTTAAGGGATT AATTCCCTAA ACGTGCTTAAAATTCCCATT GGGTAA GGCATCTTAAAATTCCGTAG GGCATCTTAAAATTCCGTAG 目的基因目的基因第八页,讲稿共三十七页哦DNA连接酶的作用过程连接酶的作用过程点击播放点击播放第九页,
8、讲稿共三十七页哦一、基因工程的原理一、基因工程的原理2、“基因针线基因针线”DNA连接酶连接酶连接酶的作用:将脱氧核糖和磷酸交替连接的连接酶的作用:将脱氧核糖和磷酸交替连接的DNADNA骨架的缺口骨架的缺口“缝合缝合”。CTTCATGGAAGTACTTAAGGGATT AATTCCCTAA GGCATCTTAAAATTCCGTAG 连连接接酶酶连接的部位:连接的部位:生成磷酸二酯键生成磷酸二酯键第十页,讲稿共三十七页哦AATTGCCTTAAG连接磷酸二酯键连接磷酸二酯键第十一页,讲稿共三十七页哦不同点:不同点:DNADNA连接酶连接酶:将:将DNA片段间片段间互补配对的互补配对的两个黏性末两个
9、黏性末端端连接起来,使之成为一个完整的连接起来,使之成为一个完整的DNADNA分子。分子。DNA聚合酶和聚合酶和DNA连接酶有何异同点?连接酶有何异同点?DNADNA聚合酶聚合酶:以一条以一条DNADNA为模板,将一个一个为模板,将一个一个核苷酸核苷酸连接起来连接起来相同点:相同点:都是通过形成都是通过形成磷酸二酯键磷酸二酯键连接起来连接起来思考:如何将重组思考:如何将重组DNADNA分子送入受体细胞呢?分子送入受体细胞呢?第十二页,讲稿共三十七页哦一、基因工程的原理一、基因工程的原理3、基因的运载体基因的运载体科学家发现科学家发现大肠杆菌大肠杆菌、枯草杆菌枯草杆菌、酵母菌酵母菌等的等的质粒质
10、粒能同能同时满足以上三个要求。时满足以上三个要求。运载体必须同时满足三个要求:运载体必须同时满足三个要求:能在宿主细胞内能在宿主细胞内复制复制并稳定的并稳定的保存保存。具有多个具有多个限制酶切点限制酶切点。具有某些具有某些标记基因标记基因,便于筛选。,便于筛选。如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。种类:质粒、噬菌体、动植物病毒种类:质粒、噬菌体、动植物病毒第十三页,讲稿共三十七页哦基因的运输工具基因的运输工具质粒质粒能复制并带着插入能复制并带着插入
11、的目的基因一起复的目的基因一起复制制有限制酶切割位有限制酶切割位点点有标记基因有标记基因的存在的存在第十四页,讲稿共三十七页哦最常用的运载体最常用的运载体质粒质粒分布:存在于许多分布:存在于许多分布:存在于许多分布:存在于许多细菌细菌细菌细菌以及以及以及以及酵母菌酵母菌酵母菌酵母菌等生物中。等生物中。等生物中。等生物中。最常用的质粒是最常用的质粒是最常用的质粒是最常用的质粒是大肠杆菌的质粒大肠杆菌的质粒大肠杆菌的质粒大肠杆菌的质粒。本质:细胞染色体本质:细胞染色体本质:细胞染色体本质:细胞染色体(或拟核或拟核或拟核或拟核)外外外外能自主复制能自主复制能自主复制能自主复制的小型的小型的小型的小型
12、环状环状环状环状DNADNADNADNA分子。分子。分子。分子。质粒的存在与否对宿主质粒的存在与否对宿主细胞生存细胞生存没有决定性作用没有决定性作用,但复制只能在宿主细胞但复制只能在宿主细胞内完成。内完成。第十五页,讲稿共三十七页哦5 5、基因工程的操作步骤:、基因工程的操作步骤:从细菌中取出从细菌中取出质粒质粒从细胞中取出从细胞中取出DNADNA用用同种限制酶同种限制酶切断两个切断两个DNADNA具有相同的黏性末端具有相同的黏性末端提取目的基因(如人提取目的基因(如人的胰岛素基因)的胰岛素基因)用用连接酶连接酶将目的基因与质粒连接将目的基因与质粒连接 (形成重组(形成重组DNADNA分子)分
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- 基因工程 及其 应用 修改 讲稿
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