血脂检测方法及临床意义 (2)讲稿.ppt
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1、关于血脂检测方法及临床意义(2)第一页,讲稿共五十页哦2022/9/292022/9/292 2血浆脂蛋白的分类n n超速离心法n n1、乳糜微粒(CM)n n2、极低密度脂蛋白(VLDL)n n3、中间密度脂蛋白(IDL)n n4、低密度脂蛋白(LDL)n n5、脂蛋白(a)LP(a)n n6、高密度脂蛋白(HDL)第二页,讲稿共五十页哦2022/9/292022/9/293 3血浆脂蛋白的分类n n电泳法分为乳糜微粒,前脂蛋白,脂蛋白和脂蛋白 四条脂蛋白区带第三页,讲稿共五十页哦2022/9/292022/9/294 4血浆脂蛋白的组成与结构第四页,讲稿共五十页哦2022/9/292022
2、/9/295 5血浆脂蛋白的组成与结构n n大致为球形颗粒,由两大部分组成,即疏水性的内核和亲水性的外壳。内核由不同量的CE和TG组成,表层由载脂蛋白、PL和FC组成,FC及PL的极性基团向外暴露在血浆中,载脂蛋白是兼性化合物,它的疏水部分掩蔽在脂蛋白中,而亲水部分突出于脂蛋白颗粒的表面。第五页,讲稿共五十页哦2022/9/292022/9/296 6载脂蛋白n n血血浆浆脂脂蛋蛋白白中中的的蛋蛋白白质质部部分分称称为为载载脂脂蛋蛋白白,主主要要分分A A、B B、C C、DD、E E五五类类,主主要要在在肝肝(部部分分在在小小肠肠)合合成成,载载脂脂蛋蛋白白是是构构成成血血浆浆脂脂蛋蛋白白的
3、的重重要要组组分分。基基本本功功能能是是运运载载脂脂类类物物质质及及稳稳定定脂脂蛋蛋白白的的结结构构,某某些些载载脂脂蛋蛋白白还还有有激激活活脂脂蛋蛋白白代代谢谢酶酶、识识别别受受体体等等功功能能。主主要要在在肝肝(部部分分在在小小肠肠)合合成成,按按A AB BC C系系统统命命名名,各各类类又又可可细细分分几几个个亚亚类类,以以罗罗马马数数字字表表示示。第六页,讲稿共五十页哦2022/9/292022/9/297 7高脂蛋白血症WHO分型第七页,讲稿共五十页哦2022/9/292022/9/298 8引起继发性高脂血症的病因n n1、糖尿病 常常表表现现为为I IV V型型高高脂脂蛋蛋白白
4、血血症症。(胰胰岛岛素素的的缺缺乏乏,不不仅仅促促使使肝肝脏脏生生成成V VL LDDL L增增加加,而而且且因因L LP PL L活活性性降降低低,导导致致V VL LDDL L清清除除减减少少,主主要要表表现现为为血血清清T TGG、V VL LDDL L水水平平升升高高,T TGG严严重重升升高高者者有有发发生生急急性性胰胰腺腺炎炎的的危危险险性性。)n n2、甲减 常表现为IIa或IIb型高脂蛋白血症患者血TC水平升高可同时血TG水平升高(L LP PL L活活力力降降低低,I IDDL L代代谢谢障障碍碍、L LDDL L受受体体功功能能下下降降、血血浆浆L LDDL L清清除除减减
5、慢慢等等)n n3、肾脏疾病 肾肾病病综综合合征征时时的的高高脂脂蛋蛋白白血血症症由由脂脂蛋蛋白白降降解解障障碍碍和和合合成成过过多多双双重重机机制制引引起起。第八页,讲稿共五十页哦2022/9/292022/9/299 9高脂蛋白血症的因素n n4、药物:降压药,利尿剂,受体阻滞剂可TG 和HDL 长期应用糖皮质激素治疗可使TG、TC升高n n5、其他:肝胆系统疾病、胰腺炎、长期过量饮酒第九页,讲稿共五十页哦2022/9/292022/9/291010低脂蛋白血症表现n n1、家族性低-脂蛋白血症 (肝肝脏脏L LD DL L受受体体上上调调,伴伴胆胆汁汁酸酸过过度度合合成成,使使血血浆浆中
6、中V VL LD DL L在在转转化化为为L LD DL L前前已已被被肝肝脏脏分分解解代代谢谢。)n n2、-脂蛋白缺乏血症 (ApoB合成分泌缺陷,使含ApoB的脂蛋白如CM、VLDL、LDL合成代谢障碍,伴随脂肪吸收和代谢紊乱,血浆TC也非常低)第十页,讲稿共五十页哦2022/9/292022/9/291111血脂检测方法及临床意义n n总胆固醇(TC)n n甘油三酯(TG)n n高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)n n低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)n n载脂蛋白A1(ApoA1)n n载脂蛋白B(ApoB)第十一页,讲稿共五十页哦 总胆固醇(TC)测定测定化学法酶法酶法第十二页,讲稿共
7、五十页哦 化学测定法化学测定法 化学测定法通常需化学测定法通常需抽提纯化抽提纯化。显色剂主要有两类:。显色剂主要有两类:醋酸醋酸-醋酐醋酐-硫酸硫酸高铁硫酸。高铁硫酸。这些显色反应须用强酸试剂,干扰因素多,准确这些显色反应须用强酸试剂,干扰因素多,准确测定有赖于从标本中抽提、皂化、纯化过程,因而操测定有赖于从标本中抽提、皂化、纯化过程,因而操作较繁,不适于分析大批量标本,且不适于自动分析。作较繁,不适于分析大批量标本,且不适于自动分析。n特点:特点:第十三页,讲稿共五十页哦 1 1Liberman-BurchardLiberman-Burchard反应反应 18851885年年Liberman
8、Liberman发现胆固醇在硫酸、醋酐溶液中显色,发现胆固醇在硫酸、醋酐溶液中显色,18901890年年BurchardBurchard用此反应测定胆固醇称为用此反应测定胆固醇称为L-BL-B反应。反应。1953 1953年年ZakZak提出用硫酸、醋酸和提出用硫酸、醋酸和Fe3+Fe3+等与胆固醇作用生成紫等与胆固醇作用生成紫红色化合物来测定胆固醇,称为红色化合物来测定胆固醇,称为ZakZak反应。反应。2 2ZakZak反应反应第十四页,讲稿共五十页哦 酶测定法酶测定法n特点:特点:常规测定中现已广泛应用酶法,酶法具有特异性好,精密度和灵敏常规测定中现已广泛应用酶法,酶法具有特异性好,精密
9、度和灵敏度都能很好地满足临床实验室的要求,既可以手工操作,也适合自动分度都能很好地满足临床实验室的要求,既可以手工操作,也适合自动分析,但酶法测定中出现了不同程度的析,但酶法测定中出现了不同程度的基质效应。基质效应。采用酶反应原理的干化学法颇为实用,其缺点是价格高,精密度差。采用酶反应原理的干化学法颇为实用,其缺点是价格高,精密度差。胆固醇的酶测定法始于胆固醇的酶测定法始于7070年代。由于操作简便,试剂无腐蚀性,特别适年代。由于操作简便,试剂无腐蚀性,特别适用于自动生化分析,用于自动生化分析,目前已成为测定胆固醇的主要方法。目前已成为测定胆固醇的主要方法。第十五页,讲稿共五十页哦CHE-CH
10、O-PAP法原理n n用胆固醇酯酶水解胆固醇酯生成脂肪酸和胆固醇,胆固醇被胆固醇氧化酶氧化生成4-胆淄烯酮和过氧化氢,然后在过氧化物酶催化下,H2O2与4-氨基安替比林及酚结合,生成红色醌亚胺。醌亚胺的最大吸收峰在500nm左右,吸光度与标本中的胆固醇含量成正比。反应方程式如下:n n胆固醇酯+H2O 胆固醇+游离脂肪酸n n胆固醇+O24-胆甾烯酮+H2O2n n2H2O2+4-氨基安替比林+酚醌亚胺CHECHOPOD第十六页,讲稿共五十页哦n评价:评价:主要缺点是:主要缺点是:优点优点:本法灵敏度高、准确度高、精密度好,线性范围宽。:本法灵敏度高、准确度高、精密度好,线性范围宽。某些胆固醇
11、酯酶对胆固醇酯的水解不完全,不能用纯胆固醇结晶以有机某些胆固醇酯酶对胆固醇酯的水解不完全,不能用纯胆固醇结晶以有机溶剂配制的溶液作为溶剂配制的溶液作为TCTC分析的校准液,而应以准确定值的血清作为标准,分析的校准液,而应以准确定值的血清作为标准,此校准液(品)相当于三级标准。此校准液(品)相当于三级标准。表面活性剂,如吐温表面活性剂,如吐温-40-40可以干扰胆固醇酯酶的作用,而聚乙烯醇可以干扰胆固醇酯酶的作用,而聚乙烯醇60006000可使结果提高可使结果提高1 12 2;本法具有氧化酶反应途径的共同缺陷,易受到一些还原性物质如尿酸、胆红素、维生素本法具有氧化酶反应途径的共同缺陷,易受到一些
12、还原性物质如尿酸、胆红素、维生素C C和和谷胱甘肽等的干扰。谷胱甘肽等的干扰。第十七页,讲稿共五十页哦【参考值】【参考值】血清总胆固醇合适范围:血清总胆固醇合适范围:5.22mmol/L(200mg/dl)5.22mmol/L(200mg/dl),边缘升高:边缘升高:5.235.235.69mmol/L(2015.69mmol/L(201219mg/dl)219mg/dl),升高:升高:5.72mmol/L(220mg/dl)5.72mmol/L(220mg/dl)。第十八页,讲稿共五十页哦u影响影响TC水平的因素水平的因素 年龄与性别;年龄与性别;长期的高胆固醇、高饱和脂肪酸和高热量饮食可使
13、长期的高胆固醇、高饱和脂肪酸和高热量饮食可使TCTC增高;增高;遗传因素;遗传因素;其它:如缺少运动、脑力劳动、精神紧张等可能使其它:如缺少运动、脑力劳动、精神紧张等可能使TCTC升高。升高。TC TC除了作为高胆固醇血症的诊断指标之外,不能作为其它任何疾病的诊断指标,对于动脉除了作为高胆固醇血症的诊断指标之外,不能作为其它任何疾病的诊断指标,对于动脉粥样硬化和冠心病而言,粥样硬化和冠心病而言,TCTC是一个明确的危险因子,与冠心病的发病率呈正相关。是一个明确的危险因子,与冠心病的发病率呈正相关。【临床意义】【临床意义】u高高TCTC血症:血症:原发和继发原发和继发 u低低TCTC血症:血症:
14、原发和继发原发和继发 第十九页,讲稿共五十页哦2022/9/292022/9/292020相关疾病n n高TC血症有原发和继发两类,原发的如家族性高胆固醇血症,家族性apoB缺陷症,多源性高TC,混合性高脂蛋白血症等,继发的见于肾病综合征,甲减,糖尿病,妊娠等。n n低TC血症原发和继发,原发如家族性无或低脂蛋白血症,继发如甲亢,营养不良,慢性消耗性疾病等。第二十页,讲稿共五十页哦 血清(浆)甘油三酯测定血清(浆)甘油三酯测定化学法化学法酶法酶法第二十一页,讲稿共五十页哦n基本操作:基本操作:化学测定法化学测定法1 1、抽提抽提:关键是选用合适的抽提剂,既要使甘油三酯提取完全,又要消除磷关键是
15、选用合适的抽提剂,既要使甘油三酯提取完全,又要消除磷脂、游离甘油和葡萄糖等干扰物质的影响。脂、游离甘油和葡萄糖等干扰物质的影响。2 2、皂化皂化:甘油三酯水解生成甘油,这一步大都采用甘油三酯水解生成甘油,这一步大都采用KOHKOH作皂化剂作皂化剂 3 3、氧化氧化:过碘酸在酸性溶液中将甘油氧化成甲醛和甲酸过碘酸在酸性溶液中将甘油氧化成甲醛和甲酸 4 4、显色显色:甲醛的定量主要有两种方法:甲醛的定量主要有两种方法:甲醛与变色酸甲醛与变色酸(4,5-二羟二羟-2,7-萘二磺酸萘二磺酸)在硫酸溶液中加热生成紫色化合物在硫酸溶液中加热生成紫色化合物 甲醛与乙酰丙酮在铵离子甲醛与乙酰丙酮在铵离子(NH
16、4+)存在下生成黄色的二乙酰二氢二甲基吡啶存在下生成黄色的二乙酰二氢二甲基吡啶 第二十二页,讲稿共五十页哦2022/9/292022/9/292323磷酸甘油氧化酶法原理n n用脂蛋白酯酶(用脂蛋白酯酶(LPLLPL)使血清中)使血清中TGTG水解成脂肪酸和甘水解成脂肪酸和甘油,甘油激酶(油,甘油激酶(GKGK)及三磷酸腺苷()及三磷酸腺苷(ATPATP)将甘油磷)将甘油磷酸化,以磷酸甘油氧化酶(酸化,以磷酸甘油氧化酶(GPOGPO)氧化)氧化3-3-磷酸甘油磷酸甘油(G-3-PG-3-P)产生)产生H H2 2OO2 2,最后以,最后以TrinderTrinder反应显色,反应显色,A500
17、nmA500nm的值与的值与TGTG浓度成正比浓度成正比。n nTG+H2O甘油+脂肪酸n n甘油+ATPG-3-P+ADPn nG-3-P+O2磷酸二羟丙酮+H2O2n nH H2 20 02 2+4-AAP+4-+4-AAP+4-氯酚氯酚苯醌亚胺非那腙苯醌亚胺非那腙+H+H2 2OO2 2第二十三页,讲稿共五十页哦n去除去除FGFG干扰可用下列方法:干扰可用下列方法:1 1、外空白法:同时用不含、外空白法:同时用不含LPLLPL的酶试剂测定的酶试剂测定FG FG 作空白。作空白。2 2、内空白法:又称两步法或双试剂法、内空白法:又称两步法或双试剂法将将LPLLPL和和4-AAP4-AAP组
18、成试剂组成试剂2 2,其余部分为试剂,其余部分为试剂1 1。第二十四页,讲稿共五十页哦 乳酸脱氢酶法乳酸脱氢酶法 原理:原理:TG+3H2O LPL Glycerol+3RCOOH Glycerol+ATP GK+Mg2+G-3-P+ADP ADP+磷酸烯醇式丙酮酸磷酸烯醇式丙酮酸 丙酮酸激酶丙酮酸激酶 丙酮酸丙酮酸 +ATP丙酮酸丙酮酸+NADH LDH NAD+乳酸乳酸 由于反应消耗由于反应消耗NADHNADH,故可利用,故可利用NADHNADH在在340nm340nm吸光度降低来吸光度降低来测定甘油三脂的浓度测定甘油三脂的浓度。第二十五页,讲稿共五十页哦n评价:评价:本法结果准确,但灵敏
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