饲料中脂肪酸含量的测定精选PPT讲稿.ppt

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1、关于饲料中脂肪酸含量的测定第一页，讲稿共六十二页哦2第五章第五章 饲料中脂肪酸含量饲料中脂肪酸含量的测定的测定第二页，讲稿共六十二页哦3脂脂 类类是一类不溶于水而易溶于乙醇、丙酮等有机溶剂的有机化合物以液态或固态形式普遍存在生物界正常情况下，人体中占1420%14%为消瘦20%则为肥胖，60%为极度肥胖第三页，讲稿共六十二页哦4脂类在近代被认识的发展过程脂类在近代被认识的发展过程年代人物观点1918Aron脂肪对动物的生长发育是必需的1927Evans/Burr脂肪缺乏会严重影响动物的生长和繁殖1929Burr脂肪缺乏会引起动物皮肤损害和死亡率1938-花生四烯酸是必需脂肪酸1958-发现人类

2、必需脂肪酸缺乏症(首例婴儿)1982Halman报道第一例亚麻酸缺乏病人1984Neuringes发现缺乏亚麻酸的恒河猴子代视力损害第四页，讲稿共六十二页哦5 脂类的形式脂类的形式第五页，讲稿共六十二页哦6脂类的分类及其主要功能脂类的分类及其主要功能脂类脂类脂肪脂肪类脂类脂(5%)(5%)磷脂磷脂胆固醇胆固醇甘油三酯甘油三酯储存和提供能量储存和提供能量(可变脂可变脂)提供必需脂肪酸提供必需脂肪酸构成生物膜构成生物膜合成脂蛋白合成脂蛋白合成激素等合成激素等同磷脂同磷脂第六页，讲稿共六十二页哦7脂类的分类及其主要功能脂类的分类及其主要功能 食物与人体内脂肪的最重要组成形式食物与人体内脂肪的最重要组

3、成形式 3 3 份脂肪酸与份脂肪酸与1 1个甘油分子以酯键连接个甘油分子以酯键连接 根据脂肪酸不同，分为根据脂肪酸不同，分为中链三酰甘油中链三酰甘油(MCT)MCT)长链三酰甘油长链三酰甘油(LCT)LCT)三酰甘油三酰甘油=甘油甘油+3 +3 份脂肪酸份脂肪酸第七页，讲稿共六十二页哦8脂类的分类及其主要功能脂类的分类及其主要功能LCT and MCT-a physical mixtureGlycerolLCT-Long-Chain Triglycerides(as in Intralipid)GlycerolMCT-Medium-Chain Triglycerides第八页，讲稿共六十二页哦

4、9脂类的分类及其主要功能脂类的分类及其主要功能Reesterification(再酯化)STGSTG-structured triglycerides in Structolipid第九页，讲稿共六十二页哦10脂类的分类及其主要功能脂类的分类及其主要功能供能:9(kcal/g)能量储存(脂肪组织内三酰甘油)转运形式(脂蛋白,游离脂肪酸)绝缘层：器官保护层膜的组成成分(脂、蛋白共同构成)细胞膜、神经髓鞘(绝缘体)、细胞表面(磷酸甘油酯)、抗原性(糖脂类)免疫调节类花生酸 如前列腺素(刺激平滑肌细胞收缩)前体 固醇类激素、胆盐、维生素D前体脂肪的功能第十页，讲稿共六十二页哦11脂类的分类及其主要功

5、能脂类的分类及其主要功能决定脂肪酸的熔点链长：C原子数-熔点饱和性/双键数：双键数-熔点脂肪酸 特征第十一页，讲稿共六十二页哦12脂类的分类及其主要功能脂类的分类及其主要功能（一）甘油三酯功能（一）甘油三酯功能 1)1)体内贮存和提供能量体内贮存和提供能量 2)2)维持体温正常维持体温正常 3)3)保护作用保护作用 4)4)内分泌作用内分泌作用 5)5)有效地利用碳水化合物和节约蛋白质作用有效地利用碳水化合物和节约蛋白质作用 6)6)机体重要的构成成分机体重要的构成成分 甘油三酯在营养学上的功能甘油三酯在营养学上的功能 1.1.1.1.增加饱腹感增加饱腹感 ；2.2.改善食物的感官性状改善食物

6、的感官性状 3.3.提供脂溶性维生素提供脂溶性维生素 第十二页，讲稿共六十二页哦13（二）磷脂（二）磷脂 1.1.磷脂：指甘油三酯中一个或两个脂肪磷脂：指甘油三酯中一个或两个脂肪酸被含磷酸的其它基团所取代的一类脂类酸被含磷酸的其它基团所取代的一类脂类物质。物质。其中最重要的磷脂是卵磷脂其中最重要的磷脂是卵磷脂(1ecithin)(1ecithin)，它是由一个含磷酸胆碱基团取代甘油三酯中，它是由一个含磷酸胆碱基团取代甘油三酯中一个脂肪酸而形成的。一个脂肪酸而形成的。脂类的分类及其主要功能脂类的分类及其主要功能第十三页，讲稿共六十二页哦142.2.磷脂功能：磷脂功能：1 1）提供能量）提供能量

7、2 2）细胞膜的构成成分，促进细胞内外的）细胞膜的构成成分，促进细胞内外的物质交流作为乳化剂有利于脂肪的吸收、转物质交流作为乳化剂有利于脂肪的吸收、转运和代谢。运和代谢。脂类的分类及其主要功能脂类的分类及其主要功能第十四页，讲稿共六十二页哦153.3.磷脂的缺乏：磷脂的缺乏：造成细胞膜结构受损，毛细血管的造成细胞膜结构受损，毛细血管的脆性和通透性增加，引起水代谢紊乱，脆性和通透性增加，引起水代谢紊乱，产生皮疹。产生皮疹。脂类的分类及其主要功能脂类的分类及其主要功能第十五页，讲稿共六十二页哦16一、按其碳链长短分类一、按其碳链长短分类 长链脂肪酸长链脂肪酸(14(14碳以上碳以上)中链脂肪酸中链

8、脂肪酸(含含8 81212碳碳)短链脂肪酸短链脂肪酸(6(6碳以下碳以下)脂肪酸脂肪酸(fatty acid)(fatty acid)的分类的分类第十六页，讲稿共六十二页哦17二、按其饱和程度分类二、按其饱和程度分类 饱和脂肪酸饱和脂肪酸 单不饱和脂肪酸单不饱和脂肪酸 多不饱和脂肪酸多不饱和脂肪酸脂肪酸脂肪酸(fatty acid)(fatty acid)的分类的分类第十七页，讲稿共六十二页哦18脂肪酸脂肪酸(fatty acid)(fatty acid)的分类的分类 饱和、单不饱和、多不饱和脂肪酸的结构饱和、单不饱和、多不饱和脂肪酸的结构第十八页，讲稿共六十二页哦19脂肪酸脂肪酸(fatty

9、 acid)(fatty acid)的分类的分类不饱和脂肪酸的类别 注：每类包含一系列脂肪酸，各脂肪酸能从母体脂肪酸合成 如花生四稀酸（C20:4,n-6）由亚油酸（C18:2,n-6）合成 母体脂肪酸类别棕榈油酸n-7（-7）油酸n-9（-9）亚油酸n-6（-6）亚麻酸n-3（-3）第十九页，讲稿共六十二页哦20体内多不饱和脂肪酸(n-3，n-6类)合成途径摘自Modern Nutrition in Health and Disease,第9版，第82页，1999年。脂肪酸脂肪酸(fatty acid)(fatty acid)的分类的分类第二十页，讲稿共六十二页哦21脂肪酸脂肪酸(fatty

10、 acid)(fatty acid)的分类的分类第二十一页，讲稿共六十二页哦22三、按其空间结构不同分类三、按其空间结构不同分类 顺式脂肪酸顺式脂肪酸(cis-fatty acid)(cis-fatty acid)反式脂肪酸反式脂肪酸(trans-fatty acid)(trans-fatty acid)脂肪酸脂肪酸(fatty acid)(fatty acid)的分类的分类第二十二页，讲稿共六十二页哦23四、营养学上最具价值的脂肪酸有两类四、营养学上最具价值的脂肪酸有两类 n-3(n-3(或或-3)-3)系列不饱和脂肪酸系列不饱和脂肪酸,即从甲基端即从甲基端数，第一个不饱和键在第三和第四碳原

11、子之间的数，第一个不饱和键在第三和第四碳原子之间的各种不饱和脂肪酸；各种不饱和脂肪酸；n-6(n-6(或或-6)-6)系列不饱和脂肪酸，从甲基端数，系列不饱和脂肪酸，从甲基端数，第一个双键在第六和第七碳之间。第一个双键在第六和第七碳之间。CHCH3 3(CH(CH2 2)n)nCHCH2 2COOHCOOH甲基端甲基端 羧基端羧基端 脂肪酸脂肪酸(fatty acid)(fatty acid)的分类的分类第二十三页，讲稿共六十二页哦24 名名 称称 代代 号号丁酸丁酸(butyric acid)(butyric acid)己酸己酸(caproic acid)(caproic acid)辛酸辛酸

12、(caprylic acid)(caprylic acid)癸酸癸酸(capric acid)(capric acid)月桂酸月桂酸(1auric acid)(1auric acid)肉豆蔻酸肉豆蔻酸(myristic acid)(myristic acid)棕榈酸棕榈酸(palmitic acid)(palmitic acid)棕榈油酸棕榈油酸(palmitoleic acid)(palmitoleic acid)硬脂酸硬脂酸(stearic acid)(stearic acid)油酸油酸(oleic acid)(oleic acid)反油酸反油酸(elaidic acid)(elaidic

13、 acid)C 4C 4：0 0C 6C 6：0 0C 8C 8：0 0C10C10：0 0C12C12：0 0C14C14：0 0C16C16：0 0C16C16：1 1，n-7 cisn-7 cisC18C18：0 0C18C18：1 1，n-9 cisn-9 cisC18C18：1 1，n-9 transn-9 trans摘自摘自Modern Nutrition in Health and DiseaseModern Nutrition in Health and Disease，第，第9 9版版,第第6868页，页，19991999年。年。常见的脂肪酸常见的脂肪酸第二十四页，讲稿共六十

14、二页哦25名名 称称代代 号号亚油酸亚油酸(1inoleic acid)(1inoleic acid)-亚麻酸亚麻酸(-1inolenic acid)(-1inolenic acid)-亚麻酸亚麻酸(-1inolenic acid)(-1inolenic acid)花生酸花生酸(arachidic acid)(arachidic acid)花生四烯酸花生四烯酸(arachidonic acid)(arachidonic acid)二二十十碳碳五五烯烯酸酸(timnodonic(timnodonic acidacid，EPA)EPA)芥子酸芥子酸(erucic acid)(erucic acid

15、)二二 十十 二二 碳碳 五五 烯烯 酸酸(鰶鰶 鱼鱼 酸酸)(clupanodonic acid)(clupanodonic acid)二二十十二二碳碳六六烯烯酸酸(docosahexenoic(docosahexenoic acidacid，DHA)DHA)二二十十四四碳碳单单烯烯酸酸(神神经经酸酸)(nervonic)(nervonic acid)acid)C18C18：2 2，n-6,9,all cisn-6,9,all cisC18C18：3 3，n-3n-3，6 6，9 9，all cisall cisC18C18：3 3，n-6n-6，9 9，12 all cis12 all c

16、isC20C20：0 0 C20C20：4 4，n-6,9,12,15 all cisn-6,9,12,15 all cisC20C20：5 5，n-3n-3，6 6，9,129,12，15 all cis15 all cisC22C22：1 1，n-9 cisn-9 cisC22C22：5 5，n-3n-3，6 6，9 9，1212，15 15 all all ciscisC22C22：6 6，n-3n-3，6 6，9 9，1212，1515，18 18 all cisall cisC24C24：1 1，n-9 cisn-9 cis常见的脂肪酸常见的脂肪酸第二十五页，讲稿共六十二页哦26必需

17、脂肪酸必需脂肪酸(essential fatty acid(essential fatty acid，EFA)EFA)：是指人体不可缺少而自身又不能合成，是指人体不可缺少而自身又不能合成，必须通过食物供给的脂肪酸。必须通过食物供给的脂肪酸。n-6n-6系列中的亚油酸和系列中的亚油酸和n-3n-3系列中的系列中的-亚亚麻酸是人体必需的两种脂肪酸。麻酸是人体必需的两种脂肪酸。必需脂肪酸及其功能必需脂肪酸及其功能第二十六页，讲稿共六十二页哦27必需脂肪酸功能必需脂肪酸功能 1）是磷脂的重要组成成分是磷脂的重要组成成分 2）与精子形成有关与精子形成有关 3）是合成前列腺素的前体是合成前列腺素的前体 4

18、）有利于组织修复）有利于组织修复 5）与胆固醇的代谢有关与胆固醇的代谢有关 必需脂肪酸及其功能必需脂肪酸及其功能第二十七页，讲稿共六十二页哦28脂肪酸脂肪酸(fatty acid)(fatty acid)的分类和命名的分类和命名按碳链长度按碳链长度长链脂肪酸（1426C）中链脂肪酸（812C）短链脂肪酸（26C）从结构从结构饱和脂肪酸（不含双键）不饱和脂肪酸（含有一个或多个双键）单不饱和脂肪酸多不饱和脂肪酸 按营养角度按营养角度必需脂肪酸:不饱和/高度不饱和脂肪酸亚油酸、亚麻酸和花生四烯酸非必需脂肪酸：饱和/低度不饱和脂肪酸按其空间结构不同分类按其空间结构不同分类顺式脂肪酸(cis-fatty

19、acid)反式脂肪酸(trans-fattyacid)第二十八页，讲稿共六十二页哦29粗脂肪分析方法粗脂肪分析方法 Soxhlet(索氏)萃取法:最一般的脂类定量方法 Weibull-Stoldt 法(酸分解法):碳水化合物和蛋白质的影响下脂类提取困难时-其他:Rose Gottlieb法(氨基酸分解法),Gerber法,NIR,超声波法 常规脂肪提取方法常规脂肪提取方法第二十九页，讲稿共六十二页哦30常规脂肪提取方法常规脂肪提取方法1.Soxhlet(索氏)萃取法-从1879年介绍以至今广范围使用的方法-最广范围使用的脂肪分析法 用Petroleum ether,diethyl ether等

20、低沸点溶液提取样品中的脂肪 提取 干燥 重量差值 确定脂肪含量-分析步骤 样品前处理:干燥,粉碎,Na2SO4脱水,Cu(OH)2 沉淀 提取 溶液挥发 干燥到适当 确定粗脂肪含量 干燥后重(g)100/样品重(g)第三十页，讲稿共六十二页哦31常规脂肪提取方法常规脂肪提取方法1.Soxhlet(索氏索氏)萃取法的优缺点萃取法的优缺点-优缺点 不需要加水分解节省时间 仪器价格低廉 广范围的应用 蛋白质、碳水化合物含量高时不适用 随溶剂的种类、提取时间的变化结果不同 其他亲水性物质也一块提取 磷脂只能部分提取需要大量的溶剂，制动化不易-应用分支 一般食品行业 为其他分析而除去脂肪第三十一页，讲稿

21、共六十二页哦322.酸水解(acid hydrolysis)酸水解的必要性 直接用Soxhlet(索氏)提取法不能把所有的脂肪提取出来碳水化合物、蛋白质等把脂肪包裹的情况 植物细胞或starch-membrane(淀粉膜)中掺杂的情况 非溶性胶质把脂肪包裹的情况(牛奶、乳酪、奶油)乳制品、谷类、面包、蛋类、鱼类、肉类、豆腐原理试样经酸水解后用乙醚提取，除去溶剂即得总脂肪含量。酸水解法测得的为游离及结合脂肪的总量-酸分解过程 加入4M HCl时样品的matrix 成分分解 过滤后脂肪分离 用热水洗涤 干燥之后提取,干燥后测量重量变化计算脂肪含量 常规脂肪提取方法常规脂肪提取方法第三十二页，讲稿共

22、六十二页哦333.其他其他 fat 分析方法分析方法 Phospho-,di-,monoglyceride(磷脂、甘油二酯、甘油单酯)比起一般只有三个脂肪酸的甘油三酯具有低的热量 各脂肪含有磷脂(Phosphatide)的混合物时磷脂可以分离为脂肪但是在提取过程中会有部分的损失因此完美的提取很困难原理试样经酸水解后用乙醚提取，除去溶剂即得总脂肪含量。酸水解法测得的为游离及结合脂肪的总量用高沸点的溶剂提取用高沸点的溶剂提取 KOH 加入酸溶液加入酸溶液转换为脂肪酸转换为脂肪酸决定决定脂肪脂肪含量含量常规脂肪提取方法常规脂肪提取方法第三十三页，讲稿共六十二页哦34原理 为了脂肪样品的气象色谱分析，

23、首先要分离为单一的脂肪酸状态脂肪(或者脂类、不溶于水但是溶于有机溶剂的特性的物质)大概分为单纯脂肪(Triglycerides,diglycerides,monoglycerides,free fatty acids cholesterol esters,cholesterol and waxes esters)和极性或者复合脂肪(磷脂及糖脂)脂肪可以通过多种有机溶剂从组织中提取但是对于组织的酶类和非活性化的脂肪要完全提取出需要注意脂肪酸提取方法脂肪酸提取方法第三十四页，讲稿共六十二页哦35具有细胞壁的复合脂肪具有hydrogen bond或 hydrophobic forces 及ionic

24、 bond的蛋白质及碳水化合物的细胞内的其他化合物连接，因此不容易提取从组织中提取脂肪需要用像chloroform(氯仿)一样可以溶解脂肪还可以与 methanol一起把脂肪和组织之间的matrix之间的相互作用给分解的溶剂糖(sugars)、氨基酸及盐(salts)等non-lipid contaminants需要通过washing procedure从提取物中剔除掉，这样的方法可以参考Folch,Lees 及 Stanley(1957)的建议脂肪酸提取方法脂肪酸提取方法第三十五页，讲稿共六十二页哦36用chloroform-methanol(2:1,v/v)把提取物进行摇荡后加入占体积的s

25、aline solution(0.88%in water)进行平衡这时混合物分成2个层,下层为氯仿层包含所有脂肪，上层为methanol-water phase包含non-lipid contaminants方法:2.脂肪提取样品:flax seed(亚麻籽),margarine(人造黄油),ground beef,Blank(不含所测物质)试剂:1)Folch solution:chloroform:methanol(2:1,V/V)2)0.88%NaCl提取步骤:1)准确称取1.0g ground beef,0.2g的flax seed 或 0.1g的 margarine 放入50ml T

26、eflon lined screw cap tube后加入 20ml的 Folch solution。脂肪酸提取方法脂肪酸提取方法第三十六页，讲稿共六十二页哦372)Homogenizing3)拧紧盖子并在在室温12h摇晃(必要时加入 N2)4)加入 4ml的0.88%NaCl，并充分混合5)1500rpm，4，10mincentrifuge.6)分2层.记下Chlorform层的体积，并把上层(methane+water)吸取掉，下层则包含所要提取的脂肪7)这样分离的脂肪用于分析如下:8)Totalcrudelipidanalysis9)Fattyacidanalysis10)Lipidcl

27、assseparationbyTLCandtheirfattyacidcompostion11)Lipidclassquantitationby Iatroscan脂肪酸提取方法脂肪酸提取方法第三十七页，讲稿共六十二页哦38A.Total Crude Lipid analysisa.把下层即chloroform层用吸管移入到 glass vialb.在加入N2 gas的情况下挥发溶剂(chloroform)。要充分挥发后承重。c.计算:%lipid=(lipid,wt blank)X total chloform voloumAliquant of chloform X wt.sampleX

28、100B.脂肪酸(fatty acid)分析 通过气象色谱仪识别波峰并且利用面积(%)计算样品中脂肪酸的成分理论利用GC分析脂肪的脂肪酸成分需要把脂肪酸进行甲酯化(methyl ester)，转换成低分子亮的非极性(non-polar)诱导体。为了把样品变成挥发性变成诱导体可以增加安全性，减少活性，变化成可分理性改善测定效率。根据这个原理可以改善波峰的色谱性脂肪酸提取方法脂肪酸提取方法第三十八页，讲稿共六十二页哦39Methyl ester(甲酯化)方法:EsterificationFree fatty acidMethanolAcid HCl or BF3Methyl ester+H2OMe

29、thanolTransesterificationGlyceride mixtureMethyl ester+-C-OH-C-OH-C-OHGlycerol脂肪酸提取方法脂肪酸提取方法BF3+methanol mixture(35%BF3/methanol(14%)+45%methanol+20%hexane)2ml 第三十九页，讲稿共六十二页哦401)加入N2 gas，把Chloroform 层挥发(5060)2)加入 BF3+methanol mixture(35%BF3/methanol(14%)+45%methanol+20%hexane)2ml 并加入N2 gas后拧紧盖子.vort

30、exing.3)在100 加热3060min,隔15min进行shaking(vortexing).4)室温静置，加入12ml hexane(己烷)和1ml 0.88%NaCl 混合5)离心6)取上层液转入小玻璃瓶盖上盖子7)GC 分析 脂肪酸提取方法脂肪酸提取方法Methyl ester(甲酯化)步骤:第四十页，讲稿共六十二页哦41第四十一页，讲稿共六十二页哦42第四十二页，讲稿共六十二页哦43The Agilent 7890A Gas Chromatograph饲料中脂肪酸分析饲料中脂肪酸分析第四十三页，讲稿共六十二页哦44第四十四页，讲稿共六十二页哦45饲料中脂肪酸分析饲料中脂肪酸分析第

31、四十五页，讲稿共六十二页哦46Filters/TrapsAirHydrogenGas Carrier ColumnGas ChromatographygassysteminletcolumndetectordatasystemData systemSyringe/SamplerInletsDetectorsRegulatorsHRESET饲料中脂肪酸分析饲料中脂肪酸分析第四十六页，讲稿共六十二页哦47Gas Chromatography原理示意图饲料中脂肪酸分析饲料中脂肪酸分析第四十七页，讲稿共六十二页哦48饲料中脂肪酸分析饲料中脂肪酸分析第四十八页，讲稿共六十二页哦49第四十九页，讲稿共六十

32、二页哦50GC 探测器-燃烧性探测器(1)Flame Ionization Detectors(FID)(2)Nitrogen Phosphorous Detector(NPD)(3)FlamePhotometricDetector(FPD)-非燃烧性探测器(4)ThermalConductivityDetector(TCD)(5)ElectronCaptureDetector(ECD)(6)PhotoIonizationDetector(PID)注意事项燃烧性探测器(FID,NPD,FPD)使用3种气体(补充气体:make-upgas,氢气,空气)非燃烧性探测器(TCD,ECD,PID)只是

33、使用运送气体和补充气体饲料中脂肪酸分析饲料中脂肪酸分析第五十页，讲稿共六十二页哦51 Column effluent is passed through a H2-Air flame Produces ions and electrons Charged particles are accelerated by voltage applied between jet and collector results in current(pA)Number of ions depends on number of reduced (methylene)carbons in molecule one

34、molecule of ethane gives twice the signal of one molecule of methane less sensitive for non-hydrocarbon groups insensitive to H2O,CO2,SO2 and other noncombustibles(Nox)High sensitivity(10-13 g/s)good LDR(Wide dynamic range)(107),low noise,destructive techniqueFlame Ionization Detector(FID)第五十一页，讲稿共六

35、十二页哦52饲料中脂肪酸分析饲料中脂肪酸分析第五十二页，讲稿共六十二页哦53饲料中脂肪酸分析饲料中脂肪酸分析第五十三页，讲稿共六十二页哦54饲料中脂肪酸分析饲料中脂肪酸分析第五十四页，讲稿共六十二页哦55饲料中脂肪酸分析饲料中脂肪酸分析第五十五页，讲稿共六十二页哦56WCOT vs.SCOT vs.PLOT饲料中脂肪酸分析饲料中脂肪酸分析第五十六页，讲稿共六十二页哦57饲料中脂肪酸分析饲料中脂肪酸分析第五十七页，讲稿共六十二页哦58饲料中脂肪酸分析饲料中脂肪酸分析第五十八页，讲稿共六十二页哦59饲料中脂肪酸分析饲料中脂肪酸分析第五十九页，讲稿共六十二页哦601.2.3结果分解理想的气象图谱是波峰之间紧凑但是没有交叉波峰的大小根据样品混合物的量一致，当混合物浓度增加会得到大的波峰。-混合物通过column需要的时间来定性分析成分(停留的时间:retentiontime),即可以确定为何种物质。饲料中脂肪酸分析饲料中脂肪酸分析第六十页，讲稿共六十二页哦61DISADVANTAGES OF GAS CHROMATOGRAPHY Material has to be volatilized at 250 without decomposition.饲料中脂肪酸分析饲料中脂肪酸分析第六十一页，讲稿共六十二页哦2022/9/30感感谢谢大大家家观观看看第六十二页，讲稿共六十二页哦