血红蛋白的提取和分离上课课件.ppt

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1、关于血红蛋白的提取和分离上课现在学习的是第1页，共34页一、血红蛋白的提取和分离一、血红蛋白的提取和分离1 1、血液有哪些成分、血液有哪些成分血血液液血浆血浆水水 分分固体物质：固体物质：血浆蛋白、血浆蛋白、血浆蛋白、血浆蛋白、无机盐、磷脂、葡萄糖等无机盐、磷脂、葡萄糖等无机盐、磷脂、葡萄糖等无机盐、磷脂、葡萄糖等血细血细 胞胞白细胞白细胞血小板血小板红细胞红细胞（最多）（最多）（最多）（最多）血红蛋白血红蛋白（90909090）两个两个肽链肽链两个两个一肽链一肽链四个亚铁红素基团四个亚铁红素基团现在学习的是第2页，共34页血红蛋白血红蛋白两个两个肽链肽链两个两个一肽链一肽链四个亚铁四个亚铁血

2、血红素基团红素基团每个肽链环绕一个每个肽链环绕一个亚铁血红素基团，亚铁血红素基团，此基团可携带此基团可携带一分子氧或一分子二一分子氧或一分子二氧化碳，氧化碳，血红蛋白因含有血红蛋白因含有血红素血红素而而呈呈红色。红色。2 2、血红蛋白的特点：、血红蛋白的特点：现在学习的是第3页，共34页3 3、蛋白质分离和提取的原理：、蛋白质分离和提取的原理：根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等等，可以用吸附性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同种类的蛋白质

3、。来分离不同种类的蛋白质。4 4、蛋白质分离和提取的常用方法：、蛋白质分离和提取的常用方法：凝胶色谱法（分配色谱法）凝胶色谱法（分配色谱法）电泳电泳现在学习的是第4页，共34页（一）（一）凝胶色谱法（分配色谱法）凝胶色谱法（分配色谱法）1.概念：根据被分离物质的蛋白质根据被分离物质的蛋白质相对分子相对分子质量质量的大的大 小，利用具有小，利用具有网状结构网状结构的凝胶，的凝胶，来进行分离。来进行分离。2.凝胶：大多数凝胶是由多糖类化合物大多数凝胶是由多糖类化合物（如葡聚糖或琼脂糖）构成的多孔小球体，（如葡聚糖或琼脂糖）构成的多孔小球体，内部有许多贯穿的通道。内部有许多贯穿的通道。现在学习的是第

4、5页，共34页3.凝胶色谱法的原理 当相对分子量不同的蛋白质通过凝胶时，当相对分子量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的相对分子量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢通道，路程较长，移动速度较慢;而相对分子量较大的蛋白质无法进入凝而相对分子量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。相对分子质量不同的较短，移动速度较快。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。蛋白质分子因此得以分离。依据的特性是：蛋白质分子量的大小。依据的特性是：蛋白质分子量的大小。现在学习的是第6页

5、，共34页凝胶色谱法分离蛋白质过程的动画演示凝胶色谱法分离蛋白质过程的动画演示现在学习的是第7页，共34页（二）缓冲溶液（二）缓冲溶液 1.1.概念概念:2.2.作用作用:在一定的范围内，凡是能够抵制外在一定的范围内，凡是能够抵制外加少量强酸或强碱的影响使原来溶液加少量强酸或强碱的影响使原来溶液PHPH值值基本保持不变的混合溶液。基本保持不变的混合溶液。能够抵制外界的酸和碱对溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液PHPH值的影响，维持值的影响，维持PHPH基本不变。基本不变。现在学习的是第8页，共34页3.3.缓冲溶液的配制缓冲溶液的配制:通常由通常由1 12 2 种缓冲剂溶解于水中配制种缓冲剂溶解于

6、水中配制而成。调节缓冲剂的使用比例就可以制而成。调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同得在不同PHPH范围内使用的缓冲液。范围内使用的缓冲液。4.4.提问：在本课题中使用的缓冲液是提问：在本课题中使用的缓冲液是:_ _ ,其目的是其目的是:利用缓冲液模拟细胞内的利用缓冲液模拟细胞内的PHPH环境，保证血环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察红蛋白的正常结构和功能，便于观察(红色红色)和科学和科学研究研究(活性活性)。磷酸缓冲液磷酸缓冲液现在学习的是第9页，共34页样品处理样品处理粗分离粗分离纯化纯化纯度鉴定纯度鉴定1.1.样品处理：样品处理：（一）蛋白质提取和分离步骤（一）蛋白质提取和分离

7、步骤（二）操作过程（二）操作过程 本课题可选用猪、牛、羊或其他哺乳本课题可选用猪、牛、羊或其他哺乳动物的血液来分离血红蛋白。动物的血液来分离血红蛋白。二、实验操作二、实验操作现在学习的是第10页，共34页(1)(1)红细胞的洗涤红细胞的洗涤:去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化，洗涤次数不可过少。分离纯化，洗涤次数不可过少。1 1、采集血样。、采集血样。2 2、低速短时间离心（速度越高和时间越长，会使白细、低速短时间离心（速度越高和时间越长，会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀，达不到分离的效果）胞和淋巴细胞等一同沉淀，达不到分离的效果）3 3、吸取血浆：上层透明

8、的黄色血浆。、吸取血浆：上层透明的黄色血浆。4 4、盐水洗涤：用五倍体积的质量分数为、盐水洗涤：用五倍体积的质量分数为0.90.9的氯化钠溶液的氯化钠溶液洗涤。洗涤。5 5、低速离心（低速短时间）、低速离心（低速短时间）6 6、重复、重复4 4、5 5步骤三次，直至上清液中已没有黄色，表步骤三次，直至上清液中已没有黄色，表明洗涤干净。明洗涤干净。洗涤目的洗涤目的:洗涤操作：洗涤操作：现在学习的是第11页，共34页(2)(2)血红蛋白的释放：血红蛋白的释放：血红蛋白的释放：血红蛋白的释放：加蒸馏水到原血液体积，再加加蒸馏水到原血液体积，再加4040体积体积的甲苯的甲苯 ，置于磁力搅拌器上充分搅拌

9、，置于磁力搅拌器上充分搅拌1010分钟（加速细胞破分钟（加速细胞破裂）裂）,细胞破裂释放出血红蛋白。细胞破裂释放出血红蛋白。(3)(3)(3)(3)分离血红蛋白溶液：分离血红蛋白溶液：分离血红蛋白溶液：分离血红蛋白溶液：过程：过程：将搅拌好混合液转移到离心管内，将搅拌好混合液转移到离心管内，2000r/min2000r/min的速度的速度离心离心10 min10 min。试管中溶液层次：试管中溶液层次：第第1 1层（最上层）：甲苯层（无色透明）层（最上层）：甲苯层（无色透明）；第；第2 2层（中上层）：脂溶性物质沉淀层（白色薄层固体）；第层（中上层）：脂溶性物质沉淀层（白色薄层固体）；第3 3

10、层（中下层）：血红蛋白的水溶液层（红色透明液体）；层（中下层）：血红蛋白的水溶液层（红色透明液体）；第第4 4层（最下层）：杂质沉淀层（暗红色）。层（最下层）：杂质沉淀层（暗红色）。分离：分离：用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。现在学习的是第12页，共34页甲苯层甲苯层甲苯层甲苯层（无色透明无色透明无色透明无色透明）白色薄层固体白色薄层固体红色透明液体红色透明液体红色透明液体红色透明液体杂质沉淀层杂质沉淀层杂质沉淀层杂质沉淀层（暗红色暗红色暗红色暗红色）试管中溶液层次试管中

11、溶液层次现在学习的是第13页，共34页(4)(4)透透 析：析：过程：过程：取取1ml1ml的血红蛋白溶液装入透析袋中，的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有将透析袋放入盛有300ml300ml的物质的量浓度为的物质的量浓度为20mmol/l20mmol/l的磷酸缓冲液中（的磷酸缓冲液中（pHpH为为7.07.0），透析），透析1212小时。小时。透析目的：透析目的：除去样品中分子量较小的杂质。除去样品中分子量较小的杂质。现在学习的是第14页，共34页透析过程动画演示透析过程动画演示现在学习的是第15页，共34页2.2.凝胶色谱操作凝胶色谱操作:取长取长4040厘米，内径厘米，内径1.6

12、1.6厘米的厘米的玻璃管，两端需用砂纸磨平。玻璃管，两端需用砂纸磨平。底塞的制作：打孔底塞的制作：打孔挖出凹穴挖出凹穴安装移液管头部安装移液管头部覆盖尼龙网，覆盖尼龙网，再用再用100100目尼龙纱包好，插到玻璃管目尼龙纱包好，插到玻璃管的的一一端。端。现在学习的是第16页，共34页顶塞的制作：打孔顶塞的制作：打孔安装玻璃管。安装玻璃管。组装：将上述三者按相应位置组装成组装：将上述三者按相应位置组装成一个整体。一个整体。安装其他附属结构安装其他附属结构现在学习的是第17页，共34页（2 2）凝胶色谱柱的装填）凝胶色谱柱的装填凝胶的选择：凝胶的选择：A A、材料：交联葡聚糖凝胶（、材料：交联葡聚

13、糖凝胶（G-75G-75）。）。B B、代表意义：、代表意义：“G”G”表示凝胶的交联程度，表示凝胶的交联程度，膨胀程度及分离范围。膨胀程度及分离范围。7575表示凝胶的得水表示凝胶的得水值，即每克凝胶膨胀时吸水值，即每克凝胶膨胀时吸水7.57.5克。克。凝胶的前处理：凝胶的前处理：配置凝胶悬浮液：计算并称取一定量的凝胶浸配置凝胶悬浮液：计算并称取一定量的凝胶浸泡于蒸馏水或洗脱液中充分溶胀后，配成凝胶泡于蒸馏水或洗脱液中充分溶胀后，配成凝胶悬浮液。悬浮液。现在学习的是第18页，共34页 凝胶色谱柱的装填方法：凝胶色谱柱的装填方法：A A、固定：将色谱柱装置固定在支架上。、固定：将色谱柱装置固定

14、在支架上。B B、装填：将凝胶悬浮液一次性缓慢倒入色谱、装填：将凝胶悬浮液一次性缓慢倒入色谱柱内，装填时轻轻敲动色谱柱，使凝胶填装柱内，装填时轻轻敲动色谱柱，使凝胶填装均匀。均匀。注意：注意：1 1、凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶颗粒之、凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。间的空隙。2 2、装填凝胶柱时不得有气泡存在：因为气泡会、装填凝胶柱时不得有气泡存在：因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。现在学习的是第19页，共34页 洗涤平衡：洗涤平衡：装填完毕装填完毕后，立即用缓冲液洗脱瓶，后，立即用缓冲液洗脱瓶，在在50cm50c

15、m高的操作压下，用高的操作压下，用300ml300ml的的20mmol/l20mmol/l的磷酸缓的磷酸缓冲液（冲液（pHpH为为7.07.0）充分洗涤）充分洗涤平衡平衡1212小时。小时。注意：注意：1 1、液、液面不要低于凝胶表面，否则面不要低于凝胶表面，否则可能有气泡混入，影响液体可能有气泡混入，影响液体在柱内的流动与最终生物大在柱内的流动与最终生物大分子物质的分离效果。分子物质的分离效果。2 2、不能发生洗脱液流干，露出不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象凝胶颗粒的现象。50cm50cm高高高高现在学习的是第20页，共34页（3 3）样品加入与洗脱）样品加入与洗脱 调节缓冲液面：调节

16、缓冲液面：调节缓冲液面：调节缓冲液面：打开下端出口，使柱内缓冲液缓慢下降到与凝胶面打开下端出口，使柱内缓冲液缓慢下降到与凝胶面平齐，关闭出口。平齐，关闭出口。滴加透析样品：滴加透析样品：滴加透析样品：滴加透析样品：吸管吸吸管吸1ml1ml样品加到色谱柱的顶端，滴加样品时，样品加到色谱柱的顶端，滴加样品时，吸管管口贴着管壁环绕移动加样，同时注意不要破坏凝胶面。吸管管口贴着管壁环绕移动加样，同时注意不要破坏凝胶面。样品渗入凝胶床：样品渗入凝胶床：样品渗入凝胶床：样品渗入凝胶床：加样后打开下端出口，使样品渗入凝胶床加样后打开下端出口，使样品渗入凝胶床内，等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口。内，等样

17、品完全进入凝胶层后，关闭下端出口。洗脱：洗脱：洗脱：洗脱：小心加入小心加入pH=7.0 pH=7.0 的的20mmol/l20mmol/l的磷酸缓冲液到适当高度，的磷酸缓冲液到适当高度，连接缓冲液洗脱瓶，打开下端出口进行洗脱。连接缓冲液洗脱瓶，打开下端出口进行洗脱。收集：收集：收集：收集：待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每5ml5ml收集一试管，连续收集。（在分离过程中，如果红色区带均匀一致收集一试管，连续收集。（在分离过程中，如果红色区带均匀一致的移动，说明色谱柱制作成功）的移动，说明色谱柱制作成功）注意：注意：注意：注意

18、：正确的加样操作：正确的加样操作：1 1、不要触及并破坏凝胶面。、不要触及并破坏凝胶面。2 2、贴壁、贴壁加样。加样。3 3、使吸管管口沿管壁环绕移动。、使吸管管口沿管壁环绕移动。现在学习的是第21页，共34页（3 3）样品加入与洗脱）样品加入与洗脱注意：注意：注意：注意：正确的加样操作是：正确的加样操作是：1 1、不要触及并破坏凝胶面。、不要触及并破坏凝胶面。2 2、贴壁加样。贴壁加样。3 3、使吸管管口沿管壁环绕移动。、使吸管管口沿管壁环绕移动。现在学习的是第22页，共34页思考下面的问题：思考下面的问题：让血红蛋白处在稳定的让血红蛋白处在稳定的pHpH范围内，维持结构和功能正范围内，维持

19、结构和功能正常。常。1 1 1 1、在血红蛋白纯化的整个过程中不断用磷酸缓冲液、在血红蛋白纯化的整个过程中不断用磷酸缓冲液处理的目的是什么？处理的目的是什么？2 2、与其他蛋白质相比，血红蛋白有什么特点？这一特点、与其他蛋白质相比，血红蛋白有什么特点？这一特点、与其他蛋白质相比，血红蛋白有什么特点？这一特点、与其他蛋白质相比，血红蛋白有什么特点？这一特点对你进行血红蛋白的分离有什么启示？对你进行血红蛋白的分离有什么启示？对你进行血红蛋白的分离有什么启示？对你进行血红蛋白的分离有什么启示？血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱分离时可以通血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱分离时可以通过观察颜色来判断

20、什么时候应该收集洗脱液。这使血红蛋过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液。这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作。白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作。现在学习的是第23页，共34页 血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，包括：血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，包括：样品处样品处样品处样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定理、粗分离、纯化和纯度鉴定理、粗分离、纯化和纯度鉴定理、粗分离、纯化和纯度鉴定。首先通过洗涤红细胞、血红蛋。首先通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离心等操作收集到血红蛋白溶液，即白的释放、离心等操作收集到血红蛋白溶液，即:样品的处理；样品的处理；再经过透析去除分子

21、量较小的杂质，即样品的粗分离；然再经过透析去除分子量较小的杂质，即样品的粗分离；然后后通过凝胶色谱法通过凝胶色谱法通过凝胶色谱法通过凝胶色谱法将相对分子质量较大的杂质蛋白除去，将相对分子质量较大的杂质蛋白除去，即即:样品的纯化；最后经样品的纯化；最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。进行纯度鉴定。3 3、你能描述血红蛋白分离的完整过程吗？、你能描述血红蛋白分离的完整过程吗？现在学习的是第24页，共34页血红蛋白的提取和分离的过程：血红蛋白的提取和分离的过程：样品处理样品处理粗分离粗分离纯化纯化纯度鉴定纯度鉴定红红细细胞胞的的洗洗涤涤血血红红

22、蛋蛋白白的的释释放放分分离离血血红红蛋蛋白白溶溶液液分分离离血血红红蛋蛋白白溶溶液液透透析析凝凝胶胶色色谱谱柱柱的的制制作作凝凝胶胶色色谱谱柱柱的的填填装装样样品品的的加加入入与与洗洗脱脱聚聚聚聚丙丙丙丙烯烯烯烯酰酰酰酰胺胺胺胺凝凝凝凝胶胶胶胶电电电电泳泳泳泳现在学习的是第25页，共34页（三）（三）电泳：电泳：1.1.概念：概念：带电粒子在电场作用下发生迁移的程。带电粒子在电场作用下发生迁移的程。许多重要的生物大分子，如多肽、许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的核酸等都具有可解离的基团，在一定的PHPH下，这些下，这些基团会带上正电或负电。基团会带上正电或负电。在

23、电场的作用下，这些在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小，形状的不同，使带电分子产以及分子本身的大小，形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。离。2.2.原理：原理：3.3.类型类型:琼脂糖琼脂糖凝胶电泳、凝胶电泳、聚丙稀酰胺聚丙稀酰胺凝胶电泳。凝胶电泳。现在学习的是第26页，共34页 在在在在电场电场电场电场的作用下，的作用下，的作用下，的作用下，

24、这这这这些些些些带电带电带电带电分子分子分子分子会会会会向着向着向着向着与与与与其所其所其所其所带电带电带电带电荷相反的荷相反的荷相反的荷相反的电电电电极极极极移移移移动动动动琼脂糖凝胶电泳示意图琼脂糖凝胶电泳示意图琼脂糖凝胶电泳示意图琼脂糖凝胶电泳示意图现在学习的是第27页，共34页 聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳 1 1、在测定蛋白质分子量时常用、在测定蛋白质分子量时常用十二烷基硫酸钠十二烷基硫酸钠（SDSSDS）聚丙烯酰胺凝胶电泳。聚丙烯酰胺凝胶电泳。聚丙烯酰胺凝胶是由聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺和交联剂单体丙烯酰胺和交联剂N,N-N,N-亚甲基双丙烯酰胺在亚甲基双丙烯酰胺在引引

25、发剂发剂和和催化剂催化剂的作用下聚合交联成的具有三维网状结构的作用下聚合交联成的具有三维网状结构的凝胶。的凝胶。N,N-亚甲基双丙烯酰胺（形成交联）亚甲基双丙烯酰胺（形成交联）丙烯酰胺和交联剂丙烯酰胺和交联剂N,N-亚甲基双丙烯酰胺的交联共聚反应亚甲基双丙烯酰胺的交联共聚反应现在学习的是第28页，共34页 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少以及分子的大小等因素。（它所带净电荷的多少以及分子的大小等因素。（SDSSDS的作用）的作用）为了消除净电荷对迁移率的影响，可以在为了消除净电荷对迁移率的影响，可以在凝胶中加入凝胶中加入SDSSDS

26、。2.2.原理：原理：SDSSDSSDSSDS能使蛋白质发生完全变性能使蛋白质发生完全变性能使蛋白质发生完全变性能使蛋白质发生完全变性。由几条肽链组成的蛋。由几条肽链组成的蛋白质复合体在白质复合体在SDSSDS的作用下会的作用下会解聚成单条肽链解聚成单条肽链解聚成单条肽链解聚成单条肽链，因此测，因此测定的结果只是定的结果只是单条肽链的分子量单条肽链的分子量单条肽链的分子量单条肽链的分子量。SDSSDS能与各种蛋白质形能与各种蛋白质形成成蛋白质蛋白质蛋白质蛋白质SDSSDSSDSSDS复合物复合物，SDSSDS所带负电荷的量大大超过了蛋所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子白质分子原有的电荷量原有的

27、电荷量。因而掩盖了。因而掩盖了不同种蛋白质间的不同种蛋白质间的电荷差别电荷差别，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。3.SDS3.SDS作用机理作用机理:现在学习的是第29页，共34页 观察你处理的血液样品离心后观察你处理的血液样品离心后是否分层是否分层（见教科书图（见教科书图5-185-18），），如如果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。此外，此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，

28、影响后续血红蛋白的提取纯度。到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。三、实验结果分析与评价三、实验结果分析与评价 1 1、你是否完成了对血液样品的处理？你能描述处理后、你是否完成了对血液样品的处理？你能描述处理后的样品发生了哪些变化吗？的样品发生了哪些变化吗？2 2、你装填的凝胶色谱柱是否有气泡产生？你的色谱柱装、你装填的凝胶色谱柱是否有气泡产生？你的色谱柱装填得成功吗？你是如何判断的？填得成功吗？你是如何判断的？由于凝胶是一种半透明的介质，因此可以在凝胶柱旁放一支与凝胶由于凝胶是一种半透明的介质，因此可以在凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯，检查凝胶是否装填得均匀。此外，还可以加入大分子

29、柱垂直的日光灯，检查凝胶是否装填得均匀。此外，还可以加入大分子的有色物质，的有色物质，例如蓝色葡聚糖例如蓝色葡聚糖20002000或红色葡聚糖，或红色葡聚糖，观察色带移动的情观察色带移动的情况。如果色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱柱的性能良好。况。如果色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱柱的性能良好。如果色如果色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体以消除气泡，消除不了时要重新谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体以消除气泡，消除不了时要重新装柱。装柱。现在学习的是第30页，共34页 如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红

30、蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；如如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。谱柱的装填有关。3 3、你能观察到蛋白质的分离过程中红色区带的移动、你能观察到蛋白质的分离过程中红色区带的移动吗？请描述红色区带的移动情况，并据此判断分离效果？吗？请描述红色区带的移动情况，并据此判断分离效果？现在学习的是第31页，共34页（三）（三）SDSSDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（选做）聚丙烯酰胺凝胶电泳（选做）2.2.2.2.试剂的配制：试剂的

31、配制：试剂的配制：试剂的配制：鉴定血红蛋白纯度。鉴定血红蛋白纯度。1.1.1.1.目的：目的：目的：目的：3.方法步骤：（略）方法步骤：（略）现在学习的是第32页，共34页教学反馈教学反馈 1凝胶色谱法是根据（凝胶色谱法是根据（）分离蛋白质的有效方法。）分离蛋白质的有效方法。A分子的大小分子的大小 B相对分子质量的大小相对分子质量的大小 C带电荷的多少带电荷的多少 D溶解度溶解度2缓冲液的作用是：在一定范围内，抵制外界的影响来维持缓冲液的作用是：在一定范围内，抵制外界的影响来维持（）基本不变。）基本不变。A温度温度 B pH C渗透压渗透压 D氧气浓度氧气浓度3电泳是指带电粒子在电场的作用下向着与其所带电荷（电泳是指带电粒子在电场的作用下向着与其所带电荷（）的电极移动。的电极移动。A相同相同 B相反相反 C相对相对 D相向相向4.哺乳动物和人的成熟的红细胞中的（哺乳动物和人的成熟的红细胞中的（）与氧气的运输有）与氧气的运输有关。关。A血红蛋白血红蛋白 B肌红蛋白肌红蛋白 C肌动蛋白肌动蛋白 D肌球蛋白肌球蛋白BBBA现在学习的是第33页，共34页感感谢谢大大家家观观看看现在学习的是第34页，共34页