呼吸道标本的处理讲稿.ppt
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1、关于呼吸道标本的处理关于呼吸道标本的处理第一页,讲稿共九十页哦内容简介内容简介n n上呼吸道标本标准操作程序(SOP)n n下呼吸道标本标准操作程序(SOP)n n痰标本的规范化操作(草案)第二页,讲稿共九十页哦上呼吸道标本处理程序上呼吸道标本处理程序n n大部分步骤需要在生物安全柜内接种大部分步骤需要在生物安全柜内接种n n细菌性咽炎的实验室诊断细菌性咽炎的实验室诊断n n原理原理n n大多数上呼吸道感染是由病毒引起的。细菌性咽炎经常是由大多数上呼吸道感染是由病毒引起的。细菌性咽炎经常是由化脓性链球菌引起。但重度的会厌炎和喉气管炎则是例外,化脓性链球菌引起。但重度的会厌炎和喉气管炎则是例外,
2、其一般是由于其一般是由于b b型流感嗜血杆菌引起。型流感嗜血杆菌引起。n n标本标本n n从扁桃体和后咽部采集标本的咽拭子从扁桃体和后咽部采集标本的咽拭子n n选择性培养基(如表选择性培养基(如表1 1)n n5%5%羊血琼脂羊血琼脂n n含抗生素的含抗生素的Thayer Martin Thayer Martin 琼脂(琼脂(GC+GC+)和无抗生素的)和无抗生素的(仅用于淋病奈瑟菌病例仅用于淋病奈瑟菌病例)n n巧克力琼脂(仅用于会厌炎和喉气管炎病例)巧克力琼脂(仅用于会厌炎和喉气管炎病例)n n质量控制质量控制n n培养基使用之前,培养基使用之前,QCQC由培养基组负责。由培养基组负责。n
3、 n第三页,讲稿共九十页哦上呼吸道标本处理程序上呼吸道标本处理程序n n培养程序n n在在1/61/6琼脂表面用力滚动拭子,并划线分离。琼脂表面用力滚动拭子,并划线分离。n n在一区用接种针穿刺血平板几次。(图在一区用接种针穿刺血平板几次。(图1 1)n n把平板放置在把平板放置在5%CO25%CO2培养。培养。第四页,讲稿共九十页哦下呼吸道标本的处理 n n大多数标本需要在安全柜内操作n n常规细菌培养n n原理原理n n下呼吸道感染包括支气管炎,细支气管炎和肺下呼吸道感染包括支气管炎,细支气管炎和肺炎。以上炎症,特别是肺炎,可以引起严重甚炎。以上炎症,特别是肺炎,可以引起严重甚至是致命的疾
4、病。虽然病毒,支原体,立克次至是致命的疾病。虽然病毒,支原体,立克次(氏氏)体和真菌都可以引起下呼吸道感染,但细菌是体和真菌都可以引起下呼吸道感染,但细菌是主要的病原体,其所占的比例要比上呼吸道感染主要的病原体,其所占的比例要比上呼吸道感染要高很多。要高很多。第五页,讲稿共九十页哦下呼吸道标本的处理 n n下呼吸道标本培养的常见病原菌下呼吸道标本培养的常见病原菌n n 革兰阳性菌 革兰阴性菌 金黄色葡萄球菌 脑膜炎奈瑟氏菌 化脓性链球菌 流感嗜血杆菌 肺炎链球菌 肠杆菌科细菌 结核分支杆菌 非发酵菌 白喉棒状杆菌 嗜肺军团菌 假丝酵母菌第六页,讲稿共九十页哦下呼吸道标本的处理 n n标本标本n
5、 n痰痰n n气管或经气管壁抽吸物气管或经气管壁抽吸物n n支气管标本支气管标本n n支气管灌洗液,毛刷,活检标本支气管灌洗液,毛刷,活检标本第七页,讲稿共九十页哦下呼吸道标本的处理 n n材料材料n n培养基培养基n n5%5%羊血平板羊血平板n n巧克力平板巧克力平板n n中国兰中国兰n n念珠菌显色培养基念珠菌显色培养基n n试剂试剂试剂试剂n nSputasolSputasol(OXOIDOXOID)第八页,讲稿共九十页哦下呼吸道标本的处理n n质量控制质量控制培养基使用之前,培养基使用之前,QCQC由培养基组负责。由培养基组负责。n n操作程序操作程序n n肉眼观察肉眼观察n n记录
6、痰标本的外观并记录在申请单背面。记录痰标本的外观并记录在申请单背面。n n外观描述及简写如下:外观描述及简写如下:n n唾液(唾液(S S)带血带血 (BSBS)粘液状(粘液状(MM)水样水样(WW)n n粘液脓性的(粘液脓性的(MPMP)脓痰(脓痰(P P)脓性粘液痰()脓性粘液痰(PMPM)n n拒收拒收“唾液唾液”标本并报告标本并报告“标本不适合用于进一步处理标本不适合用于进一步处理”“”“请重留请重留”第九页,讲稿共九十页哦下呼吸道标本的处理n n显微镜检显微镜检n n用拭子取所有类型标本的脓液部分涂片,用拭子取所有类型标本的脓液部分涂片,(最好在(最好在6060度热固定涂片度热固定涂
7、片2 2小时),并准备小时),并准备革兰染色革兰染色n n低倍镜下检查涂片(低倍镜下检查涂片(1010倍目镜);定量计数倍目镜);定量计数1010个视野下鳞状上皮细胞和白细胞平均数。个视野下鳞状上皮细胞和白细胞平均数。按照表按照表1 1分级标准记录在工作表上。分级标准记录在工作表上。第十页,讲稿共九十页哦低倍镜下细胞计数(10个视野平均数)倍数倍数倍数倍数0 0偶见偶见偶见偶见1+1+2+2+3+3+上皮细胞上皮细胞上皮细胞上皮细胞100100无无无无102 52 5WBC 100WBC 100无无无无2580(80(或四分之一视野或四分之一视野或四分之一视野或四分之一视野 20)20)第十一
8、页,讲稿共九十页哦n n如果标本要求革兰染色,在如果标本要求革兰染色,在100倍目镜下检倍目镜下检查病原体并记录在工作表上查病原体并记录在工作表上n n对涂片显示上皮细胞占优势,(对涂片显示上皮细胞占优势,(3+)丢掉)丢掉标本并报告标本并报告“涂片显示口腔正常菌群污染涂片显示口腔正常菌群污染”“标本不适合用于进一步处理标本不适合用于进一步处理”“请重留请重留”第十二页,讲稿共九十页哦培养程序1.1.水样痰标本水样痰标本水样痰标本水样痰标本直接接种到培养基,并划线分离直接接种到培养基,并划线分离2.2.脓性标本(特别是痰)脓性标本(特别是痰)脓性标本(特别是痰)脓性标本(特别是痰)-匀浆化匀浆
9、化3.3.SputasolSputasol(OXIDEOXIDE)的配制)的配制4.4.无菌操作下,取瓶中的液体无菌操作下,取瓶中的液体1.5ml1.5ml,加入到,加入到18.5 ml18.5 ml无菌水中。无菌水中。无菌条件下无菌条件下2-82-8至少稳定至少稳定4848小时小时痰液化的常规操作程序。痰液化的常规操作程序。痰液化的常规操作程序。痰液化的常规操作程序。痰液中加入等体积的稀释后痰液中加入等体积的稀释后SPUTASOLSPUTASOL 旋涡振荡标本旋涡振荡标本20-30 s20-30 s,并置室温并置室温1515分钟分钟 再次旋涡振荡是标本达到进一步液化。准备立即接种标本。再次旋
10、涡振荡是标本达到进一步液化。准备立即接种标本。用拭子取混悬液到培养基,并划线。用拭子取混悬液到培养基,并划线。5.5.支气管灌洗液(支气管灌洗液(支气管灌洗液(支气管灌洗液(BALBAL)的定量培养)的定量培养)的定量培养)的定量培养6.6.旋涡振荡旋涡振荡BALBAL并用并用0.01 ml0.01 ml定量接种环接种到平板上定量接种环接种到平板上。n n放置在放置在放置在放置在5%CO25%CO2培养箱内培养箱内培养箱内培养箱内第十三页,讲稿共九十页哦第十四页,讲稿共九十页哦您可能每天面临以下问题的挑战您可能每天面临以下问题的挑战n痰标本分离出4种细菌做哪一种细菌的药敏试验?n数量很多的凝固
11、酶阴性葡萄球菌在痰里分离出来是否要做药敏?第十五页,讲稿共九十页哦临床微生物实验室规范操作草案第十六页,讲稿共九十页哦草案分七部分草案分七部分n n标本采集和运送的规范条例n n培养前标本质量检测规范n n标本接种规范条例n n细菌鉴定基本流程规范条例n n细菌药物敏感试验规范条例n n实验室质量控制n n细菌报告规范条例等第十七页,讲稿共九十页哦第一部分标本采集和运送n n标本采集和运送是细菌培养成功的最重要的关标本采集和运送是细菌培养成功的最重要的关键键!n n但由于标本的采集和运送常有护士或医生或病人自己但由于标本的采集和运送常有护士或医生或病人自己完成,所以也是最不容易做好的事情,而且
12、不知道问完成,所以也是最不容易做好的事情,而且不知道问题所在之处,由此引发的最主要后果是阳性率下降,题所在之处,由此引发的最主要后果是阳性率下降,这也是临床医生最不能接受的问题,为此建议来一次这也是临床医生最不能接受的问题,为此建议来一次革命,用输送培养基代替传统的标本的容器。革命,用输送培养基代替传统的标本的容器。第十八页,讲稿共九十页哦痰标本的采集和运送条例1.1.标本采集时间:用抗生素前;晨痰;2.2.采集方法:n n(1)自然咳痰:用清水漱口3次,应包括咽喉部,用力咳出痰,与灭菌容器中或输送培养基中。第十九页,讲稿共九十页哦痰标本的采集和运送条例n n(2 2)帮助咳痰:不易获得痰的患
13、者可雾化吸入加温)帮助咳痰:不易获得痰的患者可雾化吸入加温的氯化钠(的氯化钠(45104510氯化钠水溶液)氯化钠水溶液)n n(3 3)支气管镜或支气管毛刷:由医生采集,建议直)支气管镜或支气管毛刷:由医生采集,建议直接种入输送培养基。接种入输送培养基。n n(4 4)胃内采集痰标本:婴幼儿不会咳痰而且常把痰)胃内采集痰标本:婴幼儿不会咳痰而且常把痰误咽入胃中。可在清晨,用胃管插入胃内,用注射误咽入胃中。可在清晨,用胃管插入胃内,用注射器抽出胃液。器抽出胃液。n n(5 5)小儿采集痰标本:用压舌板刺激咳嗽使肺部和器官)小儿采集痰标本:用压舌板刺激咳嗽使肺部和器官的分泌物喷出,用拭子采取标本
14、送检,如不能立即送检应的分泌物喷出,用拭子采取标本送检,如不能立即送检应种入输送培养基。种入输送培养基。第二十页,讲稿共九十页哦厌氧培养标本采集规范条例1.1.痰标本的厌氧培养标本采集:必须用气管穿刺法获得痰液,从口腔吐出的痰标本不能用于厌氧培养。2.2.尿标本的厌氧培养标本采集:耻骨上膀胱穿刺获得尿标本可用于厌氧菌培养3.3.便标本厌氧培养标本采集;可用排出的便作厌氧培养但也应少与空气接触。第二十一页,讲稿共九十页哦第二部分标本培养前规范草案n n合格的标本是培养成功的最重要的因素,实验室有权利对不合格提出终止检查或要求重送标本的要求,因此实验室必须建立标本接种前的质量控制和标本合格的检测。
15、要求对除血液外的标本均作涂片革兰染色检查,用于评价标本的质量和区别分离细菌是定植菌或致病菌。第二十二页,讲稿共九十页哦痰培养标本培养前规范n n实验室在接种前必须作痰涂片革兰染色当在低倍镜下白细胞小于10个每视野、上皮细胞大于25个每视野时应作为不宜作培养的标本n n当白细胞小于10个每视野,上皮细胞小于25个每视野时再参照油镜观察标本中细菌分布作判断;第二十三页,讲稿共九十页哦痰培养标本培养前规范n n当标本中细菌种类超过3种以上,未见到纤毛柱状上皮细胞,作为不合格标本;n n如见到数量不等的白细胞或纤毛柱状上皮细胞或两者同在,含1-2种不同细菌,可考虑继续培养,结果可根据病情再作分析;n
16、n当涂片中见到1-3种细菌,少量的扁平上皮细胞,少量或较多纤毛柱状上皮细胞均可按合格标本继续培养。第二十四页,讲稿共九十页哦厌氧培养n n在正常上班时间。n n申请厌氧培养的可适应邀请实验室,由临床医生或护士采集,细菌室行床边接种。n n自然排出的便标本和尿标本、用棉拭子采集的分泌物、自然咳出的痰标本均为不合格的厌氧培养标本,应于退检。n n没有条件或不能及时送检的情况下均应用输送培养基放置标本。第二十五页,讲稿共九十页哦培养结果结合涂片判断定置菌或致病菌n n1、尿培养分离出3种以上的细菌,或分离出凝固酶阴性葡萄球菌、革兰阳性棒状杆菌等非定义为致病菌的细菌,涂片未见到,应在报告中提示可能是污
17、染细菌建议结合临床表现考虑结果的参考价值。n n2、眼结膜拭子分离出凝固酶阴性葡萄球菌,涂片未见到,可能是污染细菌,应建议重送标本。第二十六页,讲稿共九十页哦培养结果结合涂片判断定置菌或致病菌n n3、前列腺液标本分离出凝固酶阴性葡萄球菌或革兰阳性小杆菌,涂片未见到,可能是污染细菌,应建议重送标本。n n4、当涂片中见到的细菌,并由细菌吞嗜现象存在,在培养时分离出该细菌可推测为致病菌。(涂片应注明细菌是细胞内或细胞外)第二十七页,讲稿共九十页哦培养结果结合涂片判断定置菌或致病菌n n5、涂片报告的日期和培养报告日期要对应便于医生判别结果的参考价值。n n6、并每一视野可见到20个/油镜或该菌占
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