微生物的生理精选PPT.ppt
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1、关于微生物的生理关于微生物的生理1第1页,讲稿共140张,创作于星期日2第一节第一节 微生物的酶微生物的酶第2页,讲稿共140张,创作于星期日4早在几千年前,人类已开始利用微生物酶来制造食品和饮料。早在几千年前,人类已开始利用微生物酶来制造食品和饮料。我国在我国在4000多年前,就已经在酿酒、制酱、制饴等的过程中,不多年前,就已经在酿酒、制酱、制饴等的过程中,不自觉地利用了酶的催化作用。自觉地利用了酶的催化作用。v1738年,有人提出食物的消化不是磨碎,而是胃液在起作用年,有人提出食物的消化不是磨碎,而是胃液在起作用的概念,对酶有了初步的认识。随后对酶的认识不断加深;的概念,对酶有了初步的认识
2、。随后对酶的认识不断加深;v1877年,年,Kuhne首次提出首次提出Enzyme一词。一词。v1897年年,Buchner兄兄弟弟用用不不含含细细胞胞的的酵酵母母提提取取液液,实实现了发酵。现了发酵。v1926年年Summer第一次分离脲酶并获得其结晶;第一次分离脲酶并获得其结晶;v1949年日本采用深层培养法生产细菌年日本采用深层培养法生产细菌淀粉酶,标志着现代淀粉酶,标志着现代酶的开始。酶的开始。第4页,讲稿共140张,创作于星期日5v1982年年,Cech首首次次发发现现RNA也也具具有有酶酶的的催催化化活活性性,提出提出核酶核酶(ribozyme)的概念。的概念。v1995年年,Ja
3、ck W.Szostak研研究究室室首首先先报报道道了了具具有有DNA连接酶活性连接酶活性DNA片段,称为片段,称为脱氧核酶脱氧核酶(deoxyribozyme)。目前已知的酶超过目前已知的酶超过4000种种.第5页,讲稿共140张,创作于星期日6酶的概念酶的概念:生物催化剂生物催化剂。细胞中自己制成,基本成。细胞中自己制成,基本成分是蛋白质。分是蛋白质。酶蛋白酶蛋白+辅助因子辅助因子全酶全酶激活剂、传递电子激活剂、传递电子 等等仅由酶蛋白组成仅由酶蛋白组成。决定酶反应的专一性决定酶反应的专一性,加速反应加速反应单纯酶单纯酶结合酶结合酶此时才能发挥催化作用此时才能发挥催化作用一、酶的分子组成一
4、、酶的分子组成金属离子金属离子小分子有机化合物小分子有机化合物第6页,讲稿共140张,创作于星期日7二、二、酶的结构与功能的关系酶的结构与功能的关系(一)酶蛋白的结构酶蛋白的结构一级结构:一级结构:组成酶蛋白的氨基酸按一组成酶蛋白的氨基酸按一定顺序由肽键连接成多肽链;定顺序由肽键连接成多肽链;二级结构:二级结构:多肽链回折或两条多肽链之多肽链回折或两条多肽链之间由氢键维持其稳定性;间由氢键维持其稳定性;三级结构:三级结构:多肽链进一步形成更复杂多肽链进一步形成更复杂的结构,由氢键及其它化学键维持其稳的结构,由氢键及其它化学键维持其稳定性。定性。四级结构:四级结构:多个具有三级结构的亚基再多个具
5、有三级结构的亚基再次通过化学键连接。次通过化学键连接。第7页,讲稿共140张,创作于星期日8 在一级结构上可能相距遥远,但在空间结构上彼在一级结构上可能相距遥远,但在空间结构上彼此靠近,组成具有此靠近,组成具有特定空间结构的区域特定空间结构的区域,与酶催化作与酶催化作用直接有关的部位称为酶的活性中心。用直接有关的部位称为酶的活性中心。(二二)酶的活性中心酶的活性中心活性部位包括:结合基团、催化基团活性部位包括:结合基团、催化基团第8页,讲稿共140张,创作于星期日9活性中心内的必需基团活性中心内的必需基团结合基团结合基团(binding group)与底物相结合与底物相结合催化基团催化基团(c
6、atalytic group)催化底物转变成产物催化底物转变成产物 位于活性中心以外,维持酶活性中心应有的空位于活性中心以外,维持酶活性中心应有的空间构象所必需。间构象所必需。活性中心外的必需基团活性中心外的必需基团第9页,讲稿共140张,创作于星期日10三、酶的分类三、酶的分类(一)按照酶所催化的的化学反应,分为六大类:(一)按照酶所催化的的化学反应,分为六大类:1水解酶:淀粉酶、蛋白酶、核酸酶及脂酶等淀粉酶、蛋白酶、核酸酶及脂酶等 催化底物催化底物加水分解反应加水分解反应 2氧化还原酶:主要包括脱氢酶和氧化酶主要包括脱氢酶和氧化酶催化底物氧化还原反应催化底物氧化还原反应+A2H+BAB2H
7、 3转移酶 催化分子间基团转移或交换催化分子间基团转移或交换第10页,讲稿共140张,创作于星期日11六大类酶六大类酶 4裂解酶 5异构酶 6合成酶 催化一个底物分解为两个化合物及其逆反应。催化一个底物分解为两个化合物及其逆反应。催化各种同分异构体之间相互转化催化各种同分异构体之间相互转化与与ATPATP偶联,催化两分子底物合成一分子化合物偶联,催化两分子底物合成一分子化合物第11页,讲稿共140张,创作于星期日12胞内酶胞内酶:在细胞内部起作用,催化细胞的合成在细胞内部起作用,催化细胞的合成和呼吸和呼吸 胞外酶胞外酶:能透过细胞,作用于细胞外的物质能透过细胞,作用于细胞外的物质(大分子)(大
8、分子)(二二)存存在在部部位位(三三)按作用底物不同分按作用底物不同分 细菌无摄食器官,遇到的是细菌无摄食器官,遇到的是简单简单的溶解物质,通过的溶解物质,通过胞内酶胞内酶的作用;若遇到的是的作用;若遇到的是复杂复杂的固体物质,利用的固体物质,利用胞外胞外酶酶将吸附在细胞周围的大分子物质水解为简单的小分子物质。将吸附在细胞周围的大分子物质水解为简单的小分子物质。第12页,讲稿共140张,创作于星期日13酶与一般催化剂的共同点酶与一般催化剂的共同点在反应前后没有质和量的变化;在反应前后没有质和量的变化;只能催化热力学允许的化学反应;只能催化热力学允许的化学反应;只能加速可逆反应的进程,而不改变只
9、能加速可逆反应的进程,而不改变反应的平衡点。反应的平衡点。四、酶的催化特性四、酶的催化特性第13页,讲稿共140张,创作于星期日14绝对专一性绝对专一性立体异构专一性立体异构专一性相对专一性相对专一性一种酶作用于一种底物。如淀粉酶只能作用于淀一种酶作用于一种底物。如淀粉酶只能作用于淀粉,而不作用于纤维素。粉,而不作用于纤维素。对底物的构象有特殊要求,往往只能催化底对底物的构象有特殊要求,往往只能催化底物的一种立体化学结构。物的一种立体化学结构。催化具有相同化学键或基团的底物进行某种类型的催化具有相同化学键或基团的底物进行某种类型的反应。如脂酶催化脂键,而对反应。如脂酶催化脂键,而对R基团没有严
10、格要求。基团没有严格要求。酶酶催催化化作作用用的的专专一一性性第14页,讲稿共140张,创作于星期日15锁锁-钥学说钥学说刚性模式刚性模式 酶的构型与底物刚好相吻合,底物分子刚好嵌入酶的构型与底物刚好相吻合,底物分子刚好嵌入酶的活性中心,与酶的构象互补,就和锁、钥一样。酶的活性中心,与酶的构象互补,就和锁、钥一样。酶、底物是刚性的,其形状不会改变,它不能解释一酶、底物是刚性的,其形状不会改变,它不能解释一种酶催化两个反应的现象。种酶催化两个反应的现象。酶的构型与底物并不吻合,当底物和酶接触时,诱导酶酶的构型与底物并不吻合,当底物和酶接触时,诱导酶分子的构象变化,使活性部位上的有关基团正确排列和
11、定向,分子的构象变化,使活性部位上的有关基团正确排列和定向,进而使酶和底物契合而结合成中间产物,引起底物发生反应。进而使酶和底物契合而结合成中间产物,引起底物发生反应。诱导契合学说诱导契合学说柔性学说柔性学说刚刚性性结结合合 柔柔性性结结合合 酶活性专一性的假说酶活性专一性的假说第15页,讲稿共140张,创作于星期日16高效性高效性 催化效率比普通催化剂高出催化效率比普通催化剂高出1071013倍,如倍,如 1克克结晶的结晶的淀粉酶,在淀粉酶,在65时,时,15分钟可使分钟可使2吨淀粉吨淀粉水解为糊精。水解为糊精。酶酶和和一一般般催催化化剂剂加加速速反反应应的的机机理理都都是是降降低低反反应应
12、的的活活化化能能(activation energy)。酶酶比比一一般般催催化化剂剂更更有有效效地地降低反应的活化能。降低反应的活化能。第16页,讲稿共140张,创作于星期日17反应总能量改变反应总能量改变 非催化反应活化能非催化反应活化能 酶促反应酶促反应 活化能活化能 一般催化剂催一般催化剂催化反应的活化能化反应的活化能 能能量量反反 应应 过过 程程 底物底物 产物产物 酶促反应活化能的改变酶促反应活化能的改变 活化能:底物分子从初态转变到活化态所需的能量。活化能:底物分子从初态转变到活化态所需的能量。第17页,讲稿共140张,创作于星期日18对环境敏感对环境敏感反应条件温和反应条件温和
13、催化活性受调节控制催化活性受调节控制 在常温、常压、接近中性的在常温、常压、接近中性的pH条件下发挥作用。条件下发挥作用。酶的活力在体内受到多方面因素的调控。酶的活力在体内受到多方面因素的调控。机机体通过调节酶的活性和酶量,控制代谢速度,体通过调节酶的活性和酶量,控制代谢速度,以满足生命的各种需要和适应环境的变化。以满足生命的各种需要和适应环境的变化。容易发生变性、失活容易发生变性、失活 。第18页,讲稿共140张,创作于星期日19六、酶促反应动力学六、酶促反应动力学 Kinetics of Enzyme-Catalyzed Reaction 概念概念研究各种因素对研究各种因素对酶促反应速度酶
14、促反应速度的影响,并的影响,并加以定量的阐述。加以定量的阐述。影响因素包括有影响因素包括有酶浓度、底物浓度、酶浓度、底物浓度、pHpH、温度、温度、抑制剂、激活剂等。抑制剂、激活剂等。研究一种因素的影响时,其余各因素均恒定。研究一种因素的影响时,其余各因素均恒定。第19页,讲稿共140张,创作于星期日201 1、酶促反应模式酶促反应模式-中间产物学说中间产物学说:19131913年前后年前后MichaelisMichaelis和和MentenMenten提出酶促反应动力学的基本原提出酶促反应动力学的基本原理理 酶的作用在于降低化学反应所需的活化能,而酶的作用在于降低化学反应所需的活化能,而 中
15、间中间产物产物ESES的形成,使底物的活化能大大降低,从而使反应加的形成,使底物的活化能大大降低,从而使反应加速。速。酶酶底物底物终产物终产物中间产物中间产物 不稳定极易分解第20页,讲稿共140张,创作于星期日21V=VmaxS/(S+Km)并归纳为一个数学式:这一公式表示了底物浓度与反应速度的关系,称为这一公式表示了底物浓度与反应速度的关系,称为米米氏方程,氏方程,当底物浓度增加时,酶促反应速度当底物浓度增加时,酶促反应速度V趋近趋近Vmax。Km被称为米氏常数米氏常数,当V=1/2Vmax时,Km=S,因而因而Km是酶促反应速度为最大速度一半时的底物浓度是酶促反应速度为最大速度一半时的底
16、物浓度。2.2.酶促反应动力学酶促反应动力学第21页,讲稿共140张,创作于星期日22 2)Km可表示酶与底物的亲和力。Km越小,酶与底物的亲和力越大。同一种酶有几种底物就有几个Km,其中Km最小的底物一般称为该酶的天然底物或最适底物。如:己糖激酶对葡萄糖的如:己糖激酶对葡萄糖的Km 1.5mmol/L 对果糖的对果糖的Km 28mmol/L 所以葡萄糖为最适底物所以葡萄糖为最适底物 1)Km为酶的特征常数。只与酶的性质有关只与酶的性质有关,而与酶的浓度无关。第22页,讲稿共140张,创作于星期日233.影响酶促反应(酶活力)的因素有:影响酶促反应(酶活力)的因素有:1)酶的总浓度)酶的总浓度
17、E2)基质浓度)基质浓度3)温度温度4)pH值值5)激活剂)激活剂6)毒物或抑制剂)毒物或抑制剂第23页,讲稿共140张,创作于星期日241)1)酶的总浓度酶的总浓度E E=K3ESKm+S 在水处理中为了加快反应速度,往往需要培养在水处理中为了加快反应速度,往往需要培养尽可能多的细菌用以提高酶的总浓度。从而增加反尽可能多的细菌用以提高酶的总浓度。从而增加反应器的处理能力和速率。应器的处理能力和速率。当当SSEE,酶酶可可被被底底物物饱饱和和的的情情况况下下,反反应应速速度度与与酶浓度酶浓度成正比成正比。关系式为:关系式为:V=KV=K3 3 E E第24页,讲稿共140张,创作于星期日25v
18、 在其他因素不变的情况下,底物浓度对反应速在其他因素不变的情况下,底物浓度对反应速度的影响呈度的影响呈矩形双曲线关系矩形双曲线关系。2)底物浓度对酶反应速度的影响)底物浓度对酶反应速度的影响第25页,讲稿共140张,创作于星期日26当底物浓度较低时当底物浓度较低时反应速度与底物浓度成正比;反反应速度与底物浓度成正比;反应为一级反应。应为一级反应。SVVmax第26页,讲稿共140张,创作于星期日27随着底物浓度的增高随着底物浓度的增高反应速度不再成正比例加速;反应为反应速度不再成正比例加速;反应为混合级反应。混合级反应。SVVmax第27页,讲稿共140张,创作于星期日28当底物浓度高达一定程
19、度当底物浓度高达一定程度反应速度不再增加反应速度不再增加,达最大速度达最大速度;反应为零级反应反应为零级反应SVVmax酶酶 被被 底底 物物 饱饱 和和第28页,讲稿共140张,创作于星期日293 3)温度温度最适反应温度最适反应温度:能形成能形成最最大反应速度大反应速度的温度的温度.酶酶活活性性温度温度最适温度双重影响双重影响温温度度升升高高,酶酶促促反反应应速速度度升升高高;温温度度升升高高1010o oC,C,反反应应速速度度增加一倍增加一倍由由于于酶酶的的本本质质是是蛋蛋白白质质,温温度度升升高高,可可引引起起酶酶的的变变性性,从从而反应速度而反应速度降低降低 。低温的作用低温的作用
20、低温的作用低温的作用 :贮存生物制品、菌种等贮存生物制品、菌种等 低温时由于活化分子数目减少,反应速度降低,但温度低温时由于活化分子数目减少,反应速度降低,但温度升高后,升高后,酶活性又可恢复酶活性又可恢复。第29页,讲稿共140张,创作于星期日304 4)pHpH对酶反应速度的影响对酶反应速度的影响pH最适pH随酶的纯度、种类、底物的种类、性质而改变。pH可影响必需基团和催化基团的解离程度,也可影响底物和辅酶的解离程度,从而影响酶与底物的结合。第30页,讲稿共140张,创作于星期日31胃蛋白酶胃蛋白酶淀粉酶淀粉酶胆碱酯酶胆碱酯酶不同酶的最适不同酶的最适pH不同不同pH酶的活性0246810第
21、31页,讲稿共140张,创作于星期日325 5)激活剂对反应速度的影响)激活剂对反应速度的影响 非必需激活剂非必需激活剂:有些激活剂不存在时,酶仍有一定的催化活性。凡是能提高酶活性的物质都称为酶的激活剂。其中大多为金属离子,如Mg2+、K+、Mn2+,少数为阴离子如Cl-,也有的为有机化合物,如维生素。必需激活剂必需激活剂:对酶促反应不可缺少,与酶、底物结合参加反应。第32页,讲稿共140张,创作于星期日336 6)抑制剂对酶反应速度的影响)抑制剂对酶反应速度的影响 凡能凡能使酶的催化活性下降甚至完全丧失,使酶的催化活性下降甚至完全丧失,但但不引起不引起酶蛋白变性酶蛋白变性的物质称为酶的抑制剂
22、。的物质称为酶的抑制剂。区别于酶的变性区别于酶的变性 抑制剂对酶有一定选择性抑制剂对酶有一定选择性 引起变性的因素对酶没有选择性引起变性的因素对酶没有选择性第33页,讲稿共140张,创作于星期日34 抑制作用的类型抑制作用的类型不可逆性抑制不可逆性抑制(irreversible inhibitionirreversible inhibition)可逆性抑制可逆性抑制 (reversible inhibitionreversible inhibition):v竞争性抑制竞争性抑制 (competitive inhibition)(competitive inhibition)v非竞争性抑制非竞争
23、性抑制 (non-competitive inhibition)(non-competitive inhibition)v反竞争性抑制反竞争性抑制 (uncompetitive inhibition)(uncompetitive inhibition)第34页,讲稿共140张,创作于星期日35(一一)不可逆性抑制作用不可逆性抑制作用*概念概念抑抑制制剂剂通通常常以以共共共共价价价价键键键键与与酶酶活活性性中中心心的的必必需需基基团团相结合,使酶失活。相结合,使酶失活。*举例举例有机磷化合物有机磷化合物 羟基酶羟基酶解毒解毒 -解磷定解磷定(PAM)(PAM)重金属离子及砷化合物重金属离子及砷化
24、合物 巯基酶巯基酶解毒解毒 -二巯基丙醇二巯基丙醇(BAL)(BAL)第35页,讲稿共140张,创作于星期日36(二)(二)可逆性抑制作用可逆性抑制作用*概念概念抑抑制制剂剂通通常常以以非非共共价价键键与与酶酶或或酶酶-底底物物复复合合物物可可逆逆性性结结合合,使使酶酶的的活活性性降降低低或或丧丧失失;抑抑制剂可用透析、超滤等方法除去。制剂可用透析、超滤等方法除去。竞争性抑制竞争性抑制非竞争性抑制非竞争性抑制反竞争性抑制反竞争性抑制 *类型类型类型类型第36页,讲稿共140张,创作于星期日37l竞争性抑制作用竞争性抑制作用反应模式反应模式 抑抑制制剂剂与与底底物物的的结结构构相相似似,能能与与
25、底底物物竞竞争争酶酶的的活活性性中中心心,从从而而阻阻碍碍酶酶底底物物复复合合物物的的形形成成,使使酶酶的的活活性性降降低低。这这种种抑抑制制作作用用称称为为竞竞争争性性抑抑制作用。制作用。磺胺类药物磺胺类药物的抑菌机制的抑菌机制与与对氨基苯甲酸对氨基苯甲酸竞争竞争二氢叶酸合成酶二氢叶酸合成酶第37页,讲稿共140张,创作于星期日38举例乙醇治疗甲醇中毒举例乙醇治疗甲醇中毒利用乙醇治疗甲醇中毒的原理,就是竞争性抑制作用。利用乙醇治疗甲醇中毒的原理,就是竞争性抑制作用。甲醇本身只有轻度毒性甲醇本身只有轻度毒性,但肝脏中的,但肝脏中的醇脱氢酶醇脱氢酶将它转变为将它转变为高毒性的甲醛高毒性的甲醛,只
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