抗生素类药物的分析 (9)课件.ppt

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1、关于抗生素类药物的分析关于抗生素类药物的分析(9)第1页，此课件共91页哦1 1、掌握抗生素类药物的类型、结构、质、掌握抗生素类药物的类型、结构、质量和稳定性特点以及分析方法。量和稳定性特点以及分析方法。2 2、熟悉各类抗生素药物的有关物质来、熟悉各类抗生素药物的有关物质来源、特点和检查方法。源、特点和检查方法。3 3、了解抗生素药物的体内样品分析方、了解抗生素药物的体内样品分析方法和临床监测应用。法和临床监测应用。学习要求学习要求第2页，此课件共91页哦第一节第一节 概述概述青霉素青霉素Penicillin Penicillin 第3页，此课件共91页哦抗生素（抗生素（antibiotics

2、antibiotics）抗生素是生物（包括微生物、植物、动物）抗生素是生物（包括微生物、植物、动物）在其生命活动中产生的（或并用化学、生在其生命活动中产生的（或并用化学、生物或生化方法衍生的），能在低微浓度下物或生化方法衍生的），能在低微浓度下有选择抑制或影响它种生物机能的化学物有选择抑制或影响它种生物机能的化学物质的总称。质的总称。第4页，此课件共91页哦抗生素的来源不仅限于细菌、放线菌和霉抗生素的来源不仅限于细菌、放线菌和霉菌等微生物，植物和动物也能产生抗生素。菌等微生物，植物和动物也能产生抗生素。抗生素的应用也远远超出了抗菌范围。抗生素的应用也远远超出了抗菌范围。抗生素主要由微生物发酵、

3、经化学纯化、抗生素主要由微生物发酵、经化学纯化、精制和化学修饰等过程，最后制成适当的精制和化学修饰等过程，最后制成适当的制剂。制剂。第5页，此课件共91页哦3 3、稳定性差、稳定性差2 2、活性组分易发生变异、活性组分易发生变异1 1、化学纯度较低、化学纯度较低特点：特点：三多：同系物多；异构体多；降解物多三多：同系物多；异构体多；降解物多第6页，此课件共91页哦n n根据产生抗生素的生物来源分类根据产生抗生素的生物来源分类n n根据抗生素的作用对象分类根据抗生素的作用对象分类n n根据抗生素的作用机制分类根据抗生素的作用机制分类n n根据抗生素的化学结构分类根据抗生素的化学结构分类抗生素的分

4、类抗生素的分类第7页，此课件共91页哦抗生素的分类抗生素的分类分类分类（按结构）：（按结构）：内酰胺类、内酰胺类、氨基糖苷类、氨基糖苷类、四环素类、四环素类、大环内酯类、大环内酯类、多烯大环类、多肽类、酰胺醇类、多烯大环类、多肽类、酰胺醇类、抗肿瘤类、其他抗生素类抗肿瘤类、其他抗生素类第8页，此课件共91页哦抗生素类药物的细菌耐药性抗生素类药物的细菌耐药性 细菌耐药性（细菌耐药性（bacterial resistancebacterial resistance）又称抗又称抗药性，指细菌产生的对抗菌药不敏感的现象，是药性，指细菌产生的对抗菌药不敏感的现象，是细菌自身生存过程中的一种特殊表现形式。

5、细菌自身生存过程中的一种特殊表现形式。第9页，此课件共91页哦1 1、耐药性的种类、耐药性的种类n n固有耐药性固有耐药性 （intrinsic resistanceintrinsic resistance）n n获得性耐药性获得性耐药性 （acquired resistanceacquired resistance）第10页，此课件共91页哦2 2、耐药的机制、耐药的机制n n（1 1）产生灭活酶，使抗菌药失活）产生灭活酶，使抗菌药失活n n（2 2）抗菌药物作用靶位改变）抗菌药物作用靶位改变n n（3 3）降低细菌外膜通透性）降低细菌外膜通透性n n（4 4）影响主动流出系统）影响主动流出

6、系统第11页，此课件共91页哦4 4、生物学法、生物学法3 3、色谱法、色谱法2 2、光谱法、光谱法1 1、官能团的显色反应、官能团的显色反应（一）鉴别试验（一）鉴别试验抗生素药物的质量分析抗生素药物的质量分析-内酰胺环的羟肟酸铁反应；内酰胺环的羟肟酸铁反应；链霉素的麦芽酚反应、坂口反应链霉素的麦芽酚反应、坂口反应是检查抗生素灭活前后的抑菌能力，并是检查抗生素灭活前后的抑菌能力，并与已知含量的对照品对照后进行鉴别。与已知含量的对照品对照后进行鉴别。第12页，此课件共91页哦4 4、其他指标、其他指标3 3、与临床安全性密切相关的指标、与临床安全性密切相关的指标2 2、控制有机和无机杂质的指标、

7、控制有机和无机杂质的指标1 1、影响产品稳定性的指标、影响产品稳定性的指标（二）检查（二）检查结晶性、酸碱度、水分或干燥失重等结晶性、酸碱度、水分或干燥失重等溶液的澄清度与颜色、有关物质、残留溶剂、炽灼溶液的澄清度与颜色、有关物质、残留溶剂、炽灼残渣、重金属等。残渣、重金属等。异常毒性、热原或细菌内毒素、降压物质、无菌等异常毒性、热原或细菌内毒素、降压物质、无菌等第13页，此课件共91页哦1 1、微生物检定法、微生物检定法（三）含量测定或效价测定（三）含量测定或效价测定是以抗生素对微生物的杀伤或抑制程度为指标来衡量是以抗生素对微生物的杀伤或抑制程度为指标来衡量抗生素效价（抗生素效价（poten

8、cypotency）的一种方法。）的一种方法。测定方法可分为稀释法、比浊法和管碟琼脂扩散法测定方法可分为稀释法、比浊法和管碟琼脂扩散法优点优点1 1、灵敏度高、灵敏度高2 2、与临床效果一致、与临床效果一致3 3、适用范围广、适用范围广4 4、可测定总效价、可测定总效价缺点缺点1 1、操作繁琐、操作繁琐2 2、培养时间长、培养时间长3 3、测定误差大、测定误差大第14页，此课件共91页哦2 2、理化方法、理化方法优点优点1.1.准确度高准确度高2.2.简单、快速简单、快速缺点缺点1.1.不一定代表生物效价不一定代表生物效价2.2.易受杂质干扰易受杂质干扰第15页，此课件共91页哦3 3、抗生素

9、活性表示方法、抗生素活性表示方法以效价单位表示，指每毫升或每毫克以效价单位表示，指每毫升或每毫克中含有某种抗生素的有效成分的多少中含有某种抗生素的有效成分的多少用单位（用单位（u u）或微克（）或微克（gg）表示）表示第16页，此课件共91页哦第二节第二节 -内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素一、化学结构与性质一、化学结构与性质青霉素（青霉素（penicillins）第17页，此课件共91页哦头孢菌素类头孢菌素类（cephalosporins）第18页，此课件共91页哦青霉素青霉素第19页，此课件共91页哦 氨苄西林氨苄西林（氨苄青霉素）（氨苄青霉素）第20页，此课件共91页哦阿莫西林阿莫西林第21

10、页，此课件共91页哦头孢氨苄头孢氨苄第22页，此课件共91页哦性质性质（1）酸性与溶解度）酸性与溶解度游离羧基游离羧基 酸性酸性碱金属盐易溶与水，有机碱盐难溶于水碱金属盐易溶与水，有机碱盐难溶于水第23页，此课件共91页哦（2）旋光性）旋光性*青霉素类青霉素类：C3 C5 C6 头孢菌素类头孢菌素类 ：C6 C7第24页，此课件共91页哦（3）紫外吸收特征）紫外吸收特征青霉素类青霉素类 母核无明显母核无明显UV 多数有苯环取代基多数有苯环取代基 头孢菌素类头孢菌素类 母核有共轭体系母核有共轭体系第25页，此课件共91页哦（4）-内酰胺环的不稳定性内酰胺环的不稳定性不稳定性不稳定性因素因素四元环

11、张力大四元环张力大 酰胺键易水解酰胺键易水解 干燥纯净干燥纯净 稳定稳定 水溶液水溶液 不稳定不稳定 第26页，此课件共91页哦（某些金属离子）（某些金属离子）（温度）（温度）某些氧化剂某些氧化剂失效失效降解降解青霉素类青霉素类酸、碱、青霉素酶酸、碱、青霉素酶第27页，此课件共91页哦二、鉴别试验二、鉴别试验（一）色谱法（一）色谱法HPLC：tRTLC：Rf第28页，此课件共91页哦（二）光谱法（二）光谱法1、红外吸收光谱、红外吸收光谱2、紫外吸收光谱、紫外吸收光谱特征峰特征峰最大吸收波长鉴定法最大吸收波长鉴定法第29页，此课件共91页哦1、羟肟酸铁反应、羟肟酸铁反应（三）呈色反应（三）呈色反

12、应-内酰胺类内酰胺类内酰胺类内酰胺类H2NOH HClNaOH，C2H5OH羟肟酸衍生物羟肟酸衍生物H+Fe3+呈色呈色第30页，此课件共91页哦3、其他呈色反应、其他呈色反应2、类似肽键的反应、类似肽键的反应双缩脲和茚三酮反应双缩脲和茚三酮反应第31页，此课件共91页哦2、重氮化、重氮化-偶合反应偶合反应1、钾、钠离子的火焰反应、钾、钠离子的火焰反应（四）各种盐的反应（四）各种盐的反应焰色反应焰色反应K+紫色紫色Na+鲜黄色鲜黄色普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素红色的偶氮染料沉淀红色的偶氮染料沉淀第32页，此课件共91页哦3、青霉素盐的沉淀反应、青霉素盐的沉淀反应青霉素钾青霉素钾青霉素钠青霉素钠

13、H2OHCl白色沉淀白色沉淀第33页，此课件共91页哦三、特殊杂质的检查三、特殊杂质的检查特殊特殊杂质杂质高分子聚合物高分子聚合物有关物质有关物质异构体异构体HPLC杂质吸光度杂质吸光度限量限量第34页，此课件共91页哦四、含量测定四、含量测定（一）高效液相色谱法（一）高效液相色谱法适用于本类药物的原料药、各种制剂及适用于本类药物的原料药、各种制剂及生物样本的分析测定生物样本的分析测定第35页，此课件共91页哦第三节第三节 氨基糖苷类抗生素氨基糖苷类抗生素链霉素链霉素 庆大霉素庆大霉素 卡那霉素卡那霉素新霉素新霉素 巴龙霉素巴龙霉素 硫酸奈替米星硫酸奈替米星硫酸西索米星硫酸西索米星 硫酸依替米

14、星硫酸依替米星碱性碱性环己环己多元多元醇醇第36页，此课件共91页哦一、化学结构与性质一、化学结构与性质1、化学结构、化学结构链霉胍链霉胍+链霉糖链霉糖+N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺 链霉素链霉素链霉双糖胺链霉双糖胺苷元苷元糖糖第37页，此课件共91页哦链霉胍链霉胍链霉糖链霉糖N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺第38页，此课件共91页哦链霉胍链霉胍链霉糖链霉糖N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺第39页，此课件共91页哦巴龙霉素巴龙霉素D-D-葡萄糖胺葡萄糖胺+脱氧链霉素脱氧链霉素+D-D-核糖核糖+巴龙霉糖巴龙霉糖巴龙胺巴龙胺巴龙二糖胺巴龙二糖胺第40页，此课件共91页哦庆大霉素庆大霉素

15、 糖糖 苷元苷元 绛红糖胺绛红糖胺 +脱氧链霉胺脱氧链霉胺 +加洛糖胺加洛糖胺 糖糖 第41页，此课件共91页哦绛红糖胺绛红糖胺紫素胺紫素胺2-脱氧链霉胺脱氧链霉胺加洛糖胺加洛糖胺N-甲基甲基-3-去氧去氧-4-甲甲基戊糖胺基戊糖胺第42页，此课件共91页哦绛红糖胺绛红糖胺紫素胺紫素胺2-脱氧链霉胺脱氧链霉胺加洛糖胺加洛糖胺N-甲基甲基-3-去氧去氧-4-甲甲基戊糖胺基戊糖胺第43页，此课件共91页哦庆大霉素庆大霉素C复合物复合物 庆大霉素庆大霉素C1 R=H R1、R2=CH3 庆大霉素庆大霉素C2 R=R2=H R1=CH3 庆大霉素庆大霉素C1a R、R1、R2=H 庆大霉素庆大霉素C2

16、a R=CH3 R1=R2=H 庆大霉素庆大霉素C2b R=R1=H R2=CH3第44页，此课件共91页哦2、性质、性质（1）溶解度与碱性）溶解度与碱性（2）旋光性）旋光性（3）苷的水解与稳定性）苷的水解与稳定性（4）紫外吸收光谱）紫外吸收光谱含多羟基：含多羟基：碱性基团：碱性基团：3.4.5氨基糖氨基糖链霉素：链霉素：pH57.5最稳定最稳定链霉素：链霉素：230nm第45页，此课件共91页哦（一）茚三酮反应（一）茚三酮反应二、鉴别试验二、鉴别试验羟基胺类羟基胺类-氨基酸类氨基酸类茚三酮茚三酮蓝紫色蓝紫色化合物化合物Ch.P：硫酸小诺米星：硫酸小诺米星第46页，此课件共91页哦（二）（二）

17、Molisch试验试验 羟甲基糠醛羟甲基糠醛（含六碳糖结构氨（含六碳糖结构氨基糖苷类酸性水解基糖苷类酸性水解产物）产物）-萘酚萘酚蒽酮蒽酮红紫色红紫色蓝紫色蓝紫色第47页，此课件共91页哦N-甲基葡萄糖胺反应甲基葡萄糖胺反应（三）（三）乙酰丙酮乙酰丙酮OH-吡咯衍生物吡咯衍生物对二甲氨基苯甲醛对二甲氨基苯甲醛H+红色红色（Elson-Morgan反应）反应）巴龙霉素巴龙霉素第48页，此课件共91页哦(缩合缩合)第49页，此课件共91页哦红色红色对二甲氨基苯甲醛对二甲氨基苯甲醛H+第50页，此课件共91页哦 麦芽酚反应麦芽酚反应（四）（四）链霉糖特有反应链霉糖特有反应H+分子重排分子重排第51页

18、，此课件共91页哦紫红紫红麦芽酚麦芽酚第52页，此课件共91页哦链霉胍特有反应链霉胍特有反应（或或-萘酚萘酚）8-8-羟基喹啉羟基喹啉坂口反应坂口反应（五）（五）-萘酚萘酚第53页，此课件共91页哦（六）硫酸盐反应（六）硫酸盐反应鉴别一鉴别一：+氯化钡，氯化钡，白色沉淀；白色沉淀；沉淀在盐酸或硝酸中不溶解沉淀在盐酸或硝酸中不溶解鉴别二：鉴别二：+醋酸铅醋酸铅白色沉淀；白色沉淀；沉淀在醋酸铵或氢氧化钠中溶解。沉淀在醋酸铵或氢氧化钠中溶解。第54页，此课件共91页哦（七）色谱法（七）色谱法2、高效液相色谱法、高效液相色谱法1、薄层色谱法、薄层色谱法薄层板：硅胶薄层板：硅胶展开剂：氯仿展开剂：氯仿-

19、甲醇甲醇-浓氨水浓氨水显色剂：茚三酮或碘蒸汽显色剂：茚三酮或碘蒸汽比较供试品和对照品溶液的色谱图比较供试品和对照品溶液的色谱图第55页，此课件共91页哦1、红外吸收光谱、红外吸收光谱2、紫外吸收光谱、紫外吸收光谱（八）光谱法（八）光谱法硫酸阿米卡星、妥布霉素、硫酸庆大霉素硫酸阿米卡星、妥布霉素、硫酸庆大霉素硫酸庆大霉素硫酸庆大霉素 无共轭双键系统，在紫无共轭双键系统，在紫外区无吸收。外区无吸收。第56页，此课件共91页哦（一）链霉素中链霉素（一）链霉素中链霉素B的检查的检查三、有关物质及组分分析三、有关物质及组分分析链霉素链霉素B（甘露糖链霉素）（甘露糖链霉素）1.来源来源 反应中间体反应中间

20、体 2.方法方法 TLC中的对照品法中的对照品法 （BP）第57页，此课件共91页哦薄层板薄层板展开剂展开剂溶液配制溶液配制点样量点样量显色剂显色剂判定法判定法第58页，此课件共91页哦对微生物的活性无明显差异对微生物的活性无明显差异毒副作用和耐药性不同毒副作用和耐药性不同发酵菌种不同发酵菌种不同工艺差别工艺差别C组分比例组分比例不一致不一致规定控制各组分的相对百分含量规定控制各组分的相对百分含量ChPUSPBPJP庆大霉素庆大霉素C组分的测定组分的测定（二）（二）第59页，此课件共91页哦max=330nm衍生化原理衍生化原理 1.1.第60页，此课件共91页哦1-烷基烷基-2-烷基硫代烷基

21、硫代异吲哚衍生物异吲哚衍生物第61页，此课件共91页哦RPHPLC方法方法 2.规定规定 C1 2550%C1a 1540%C2a+C2 2050%计算计算 3.峰面积归一化法峰面积归一化法第62页，此课件共91页哦讨论讨论（1）柱效）柱效（2）流动相）流动相（3）衍生化试剂与衍生物的稳定性）衍生化试剂与衍生物的稳定性（4）离子对试剂浓度影响）离子对试剂浓度影响第63页，此课件共91页哦（四）硫酸盐测定（四）硫酸盐测定络合滴定法络合滴定法HPLC法法第64页，此课件共91页哦三、三、含量测定含量测定微生物检定法微生物检定法HPLCHPLC法法第65页，此课件共91页哦HPLC法法离子交换、离子

22、对、反相离子交换、离子对、反相HPLC法法需进行衍生化或采用电化学检测器、需进行衍生化或采用电化学检测器、蒸发光检测器蒸发光检测器第66页，此课件共91页哦第四节第四节 四环素类抗生素四环素类抗生素一、化学结构与性质一、化学结构与性质1、化学结构、化学结构tetracyclinesABCD第67页，此课件共91页哦123456789101112第68页，此课件共91页哦第69页，此课件共91页哦四环素（四环素（TC）tetracycline第70页，此课件共91页哦金霉素金霉素(CTC)chlortetracycline氯四环素氯四环素第71页，此课件共91页哦土霉素土霉素(OTC)oxyte

23、tracycline氧四环素氧四环素第72页，此课件共91页哦多西环素多西环素(DOTC)doxycycline脱氧土霉素脱氧土霉素第73页，此课件共91页哦美他环素（美他环素（METC）metacycline第74页，此课件共91页哦第75页，此课件共91页哦2、性质性质（1）酸碱性与溶解度）酸碱性与溶解度1.与酸、碱均能成盐与酸、碱均能成盐2.强酸或强碱中溶解度强酸或强碱中溶解度 酚羟基、烯醇型羟基酚羟基、烯醇型羟基 弱酸性弱酸性二甲胺基二甲胺基 弱碱性弱碱性第76页，此课件共91页哦（2）旋光性）旋光性有不对称有不对称C原子，有旋光性原子，有旋光性 第77页，此课件共91页哦（3）紫外吸

24、收和荧光性质）紫外吸收和荧光性质UV：土霉素酸性溶液土霉素酸性溶液353nm 270290 多西环素酸性甲醇液多西环素酸性甲醇液349nm 325363荧光：荧光：土霉素土霉素 酸性降解酸性降解绿色绿色蓝色蓝色绿色绿色黄色黄色金霉素金霉素土霉素土霉素四环素四环素碱性降解碱性降解加热加热蓝色蓝色第78页，此课件共91页哦（4）不稳定性）不稳定性1.）差向异构化差向异构化淡黄淡黄黑黑蓝色荧光蓝色荧光ETC第79页，此课件共91页哦差向四环素差向四环素第80页，此课件共91页哦（土霉素、多西环素不易差向异构化）（土霉素、多西环素不易差向异构化）第81页，此课件共91页哦2.）降解反应降解反应（1）酸

25、性下降解）酸性下降解max=445nmmax=435nm橙黄色橙黄色第82页，此课件共91页哦脱水四环素脱水四环素第83页，此课件共91页哦TCETCATCEATC第84页，此课件共91页哦（2）碱性下降解）碱性下降解（荧光）（荧光）第85页，此课件共91页哦二、二、鉴别试验鉴别试验H2SO4反应反应 1、第86页，此课件共91页哦FeCl3反应反应 2、第87页，此课件共91页哦3、薄层色谱法、薄层色谱法应用示例应用示例 盐酸土霉素的鉴别盐酸土霉素的鉴别薄层板的制备薄层板的制备检查法检查法讨论：讨论：第88页，此课件共91页哦4、高效液相色谱法、高效液相色谱法第89页，此课件共91页哦2、杂质的吸收度、杂质的吸收度1、有关物质、有关物质三、特殊杂质的检查三、特殊杂质的检查ETC、ATC、EATCHPLC法法3、残留有机溶剂、残留有机溶剂第90页，此课件共91页哦感谢大家观看第91页，此课件共91页哦