抗生素类药物的分析 (8)课件.ppt

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1、关于抗生素类药物的分析(8)第1页，此课件共63页哦主要内容氨基糖苷类抗生素四环素类抗生素概述-内酯胺类抗生素第2页，此课件共63页哦 1928年 弗莱明发現青霉菌抑制金黃葡萄球菌 1939年 佛罗瑞和芡恩从青霉菌分离青霉素 1945年 佛來明、佛罗瑞、芡恩获得诺贝尔医学奖一、概述一、概述第3页，此课件共63页哦 如今：抗生素7000种 用于医疗300种 我国100种一、概述一、概述第4页，此课件共63页哦 抗生素（antibiotics):指在低微浓度下即可对 某些生物的生命活动有 特异抑制作用的化学物质的总称一、概述一、概述第5页，此课件共63页哦 抗生素类药物的特点:化学纯度较低：同系物

2、、异构体、降解物 活性组分易变异：菌株、发酵条件变化 稳定性差：活性基团往往是活性中心一、概述一、概述第6页，此课件共63页哦 抗生素的测定：1、微生物检定法 抗生素对微生物的效应衡量效价 优点：1)与临床应用一致，医疗价值 2)灵敏度高、检品用量少 3)纯的、纯度差的 4)已知的、新发现的 5)测定总效价一、概述一、概述第7页，此课件共63页哦 缺点：1）操作步骤繁多 2）测定时间长（1624h）3）误差大（10%）一、概述一、概述第8页，此课件共63页哦 2、理化方法 特有的物理化学性质及其反应进行 优点：1）操作简单 2）省时 3）方法准确 4）一定的专属性一、概述一、概述第9页，此课件

3、共63页哦 缺点：1）提纯的、化学结构明确的 2）测定结果是含量一、概述一、概述第10页，此课件共63页哦二、二、-内酯胺类抗生素内酯胺类抗生素 6-6-氨基青霉烷酸氨基青霉烷酸 7-7-氨基头孢菌烷酸氨基头孢菌烷酸6-Aminopenicillanic Acid 7-Aminocephalosporanie acid6-Aminopenicillanic Acid 7-Aminocephalosporanie acid6-APA 7-ACA6-APA 7-ACA甲环：甲环：-内酰胺环内酰胺环乙环：饱和的噻唑环乙环：饱和的噻唑环 氢化噻嗪环氢化噻嗪环第11页，此课件共63页哦（一）性质（一）性

4、质 1 1、旋光性、旋光性 2 2、溶解度、溶解度 碱金属盐易溶水碱金属盐易溶水 有机碱盐难溶于水，易溶于有机溶剂有机碱盐难溶于水，易溶于有机溶剂二、二、-内酯胺类抗生素内酯胺类抗生素第12页，此课件共63页哦 3 3、吸收光谱特性、吸收光谱特性 青霉素：母核无紫外吸收，侧链有青霉素：母核无紫外吸收，侧链有 头孢菌素：母核头孢菌素：母核260nm260nm、侧链有、侧链有 4 4、-内酰胺环不稳定性内酰胺环不稳定性 干燥纯净的青霉素稳定，对热也稳定干燥纯净的青霉素稳定，对热也稳定 水溶液不稳定，最不稳定水溶液不稳定，最不稳定-内酰胺环内酰胺环二、二、-内酯胺类抗生素内酯胺类抗生素第13页，此课

5、件共63页哦（1 1）酸性或碱性水解：）酸性或碱性水解：pH5pH58 8水溶液稳定，在酸性水溶液稳定，在酸性或碱性下，产生一系列降解产物。或碱性下，产生一系列降解产物。二、二、-内酯胺类抗生素内酯胺类抗生素第14页，此课件共63页哦（2 2）与羟胺作用：生成羟肟酸衍生物，与）与羟胺作用：生成羟肟酸衍生物，与FeFe3+3+生成红生成红色络合物。色络合物。二、二、-内酯胺类抗生素内酯胺类抗生素第15页，此课件共63页哦（二)鉴别 1、-内酰胺胺 （1）羟肟酸铁反应 （2）多伦或斐林试剂反应 （3）双缩脲和茚三酮反应 具有-CONH-结构和-氨基酸结构二、二、-内酯胺类抗生素内酯胺类抗生素第16

6、页，此课件共63页哦 2 2、各种盐的鉴别、各种盐的鉴别 （1 1）钾、钠盐：火焰反应）钾、钠盐：火焰反应 （2 2）普鲁卡因青霉素：重氮化）普鲁卡因青霉素：重氮化-偶合反应偶合反应二、二、-内酯胺类抗生素内酯胺类抗生素第17页，此课件共63页哦（三）含量测定 碘量法 酸碱滴定法 汞量法 吸收光谱法 HPLC法：除磺苄西林钠微生物法 其余均为本法二、二、-内酯胺类抗生素内酯胺类抗生素第18页，此课件共63页哦 HPLC法 .头孢克洛 ODS柱 磷酸二氢钾溶液-乙腈（92:8）检测波长:254nm 按头孢克洛峰计理论塔板数1500 头孢克洛与头孢克洛-3异构体峰 分离度符合要求 外标法定量二、二

7、、-内酯胺类抗生素内酯胺类抗生素第19页，此课件共63页哦 2.阿莫西林克拉维酸钾片 ODS柱 磷酸盐缓冲液-甲醇（95:5）检测波长:220nm 阿莫西林与克拉维酸钾分离度3.5 外标法定量二、二、-内酯胺类抗生素内酯胺类抗生素第20页，此课件共63页哦（一）结构与性质：（一）结构与性质：1 1、结构：链霉素（链霉素、结构：链霉素（链霉素A)A)链霉胍链霉胍 链霉糖链霉糖 N-N-甲基甲基-L-L-葡萄糖胺葡萄糖胺三、氨基糖苷类抗生素三、氨基糖苷类抗生素第21页，此课件共63页哦巴龙霉素巴龙霉素:三、氨基糖苷类抗生素三、氨基糖苷类抗生素立体异构体：巴龙霉素立体异构体：巴龙霉素I I（R R1

8、 1=CH=CH2 2NHNH2 2,R,R2 2=H=H）II(RII(R1 1=H,R=H,R2 2=CH=CH2 2NHNH2 2)药用为混合物，以药用为混合物，以I I为主为主第22页，此课件共63页哦庆大霉素三、氨基糖苷类抗生素三、氨基糖苷类抗生素绛红塘胺绛红塘胺 2-2-脱氧链霉胺脱氧链霉胺 加洛糖胺加洛糖胺 第23页，此课件共63页哦三、氨基糖苷类抗生素三、氨基糖苷类抗生素组分R1R2R3分子式C1CH3CH3HC21H43N5O7C2CH3HHC20H41N5O7C1aHHHC19H39N5O7C2aHHCH3C20H41N5O7第24页，此课件共63页哦奈替米星：（庆大霉素C

9、1a,绛红糖胺4，5位双键）三、氨基糖苷类抗生素三、氨基糖苷类抗生素第25页，此课件共63页哦 2 2、性质、性质 （1 1）碱性）碱性 链霉素：胍基（链霉素：胍基（pka11.5pka11.5）甲氨基（甲氨基（pka7.7pka7.7）巴龙霉素：巴龙霉素：4 4个碱性中心个碱性中心 庆大霉素、奈替米星：庆大霉素、奈替米星：5 5个碱性中心个碱性中心 （2 2）水溶性）水溶性 矿酸或有机酸盐矿酸或有机酸盐三、氨基糖苷类抗生素三、氨基糖苷类抗生素第26页，此课件共63页哦（3 3）稳定性）稳定性 链霉素：最稳定链霉素：最稳定pH5pH57.57.5 pH3 pH8pH8易水解易水解 巴龙霉素：水

10、解生成巴龙（霉）胺巴龙霉素：水解生成巴龙（霉）胺 （新霉素（新霉素D)D)、巴龙二糖胺、巴龙二糖胺 庆大霉素、奈替米星：稳定庆大霉素、奈替米星：稳定 pH2pH21212煮沸煮沸30min30min不分解不分解 庆大霉素：庆大霉素：2mol/L NaOH2mol/L NaOH回流回流2h2h 效价不变效价不变三、氨基糖苷类抗生素三、氨基糖苷类抗生素第27页，此课件共63页哦 （4 4）紫外吸收）紫外吸收 链霉素：链霉素：230nm230nm 无紫外吸收：无紫外吸收：巴龙霉素巴龙霉素 庆大霉素庆大霉素 奈替米星奈替米星三、氨基糖苷类抗生素三、氨基糖苷类抗生素第28页，此课件共63页哦 （5）旋光

11、性 硫酸链霉素：+83.20 硫酸巴龙霉素：+50+550 硫酸奈替米星：+88+960 硫酸庆大霉素：+107+1210三、氨基糖苷类抗生素三、氨基糖苷类抗生素第29页，此课件共63页哦（二）鉴别 1、麦芽酚反应（Maltol Reaction）链霉素/OH-，H2O链霉糖 经分子重排成麦芽酚三、氨基糖苷类抗生素三、氨基糖苷类抗生素max 550nm max 550nm 第30页，此课件共63页哦 2、坂口反应（Sakaguchi）三、氨基糖苷类抗生素三、氨基糖苷类抗生素加入尿素，稳定，加入尿素，稳定，max520nmmax520nm第31页，此课件共63页哦 3 3、茚三酮反应、茚三酮反应

12、三、氨基糖苷类抗生素三、氨基糖苷类抗生素第32页，此课件共63页哦4、N-甲基葡萄糖胺反应（Elson-Morgan反应）三、氨基糖苷类抗生素三、氨基糖苷类抗生素第33页，此课件共63页哦 5 5、MolischMolisch试验试验 水解、脱水水解、脱水糠醛糠醛 -萘酚或蒽酮呈色萘酚或蒽酮呈色 与与-萘酚：萘酚：三、氨基糖苷类抗生素三、氨基糖苷类抗生素第34页，此课件共63页哦与蒽酮：三、氨基糖苷类抗生素三、氨基糖苷类抗生素第35页，此课件共63页哦 5 5、硫酸盐的鉴别、硫酸盐的鉴别 6 6、TLCTLC 中国药典、中国药典、BPBP硫酸庆大霉素采用硫酸庆大霉素采用三、氨基糖苷类抗生素三、

13、氨基糖苷类抗生素第36页，此课件共63页哦（三）检查 庆大霉素：C1、C2、C1a的混合物 毒性：C2C1C1a 有效血浓：410g/ml 12g/ml耳中毒，肾损害三、氨基糖苷类抗生素三、氨基糖苷类抗生素第37页，此课件共63页哦Ch.P2005Ch.P2005采用采用HPLCHPLC法法 (1).(1).色谱条件及系统适用性试验色谱条件及系统适用性试验 柱填料：柱填料：ODSODS 流动相：流动相：0.2mol/L 0.2mol/L 三氟醋酸三氟醋酸-甲醇（甲醇（92:892:8）流速：流速：0.6ml/min0.6ml/min三、氨基糖苷类抗生素三、氨基糖苷类抗生素第38页，此课件共63

14、页哦 出峰顺序：C1a、C2、小诺霉素、C2a、C1 分离度：小诺霉素和C2a峰分离度符合要求 小诺霉素连续进样RSD%0.99 本品用流动相配成2.5mg/ml，进样 用回归方程计算各组分含量三、氨基糖苷类抗生素三、氨基糖苷类抗生素第40页，此课件共63页哦 Cx为各组分的含量 C1 2550%；C1a 1540%；C2+C2a 2050%检测器：蒸发光散射检测器三、氨基糖苷类抗生素三、氨基糖苷类抗生素第41页，此课件共63页哦(一）化学结构与性质 四、四环素类抗生素四、四环素类抗生素第42页，此课件共63页哦四、四环素类抗生素四、四环素类抗生素名称RRRR盐酸四环素HOHCH3H盐酸金霉素

15、ClOHCH3H盐酸土霉素HOHCH3OH盐酸多西环素HHCH3OH盐酸美他环素H=CH2OH盐酸米诺环素(Ch.P新增)N(CH3)2HHH盐酸地美环素(BP)ClOHHH磺基水杨酸甲氯环素(USP)Cl=CH2OH第43页，此课件共63页哦1、母核上的官能团：（1）A环C4：二甲胺基（-N（CH3）2）（2）A环C2：酰氨基（-CONH2）（3）D环：酚羟基（C10）（4）两个酮基和烯醇基的共轭双键系统四、四环素类抗生素四、四环素类抗生素第44页，此课件共63页哦 2、两性化合物 酸性：酚羟基、烯醇型羟基 碱性：二甲胺基 酸或碱性下均能成盐 采用盐酸盐四、四环素类抗生素四、四环素类抗生素第

16、45页，此课件共63页哦 3、结晶水 四环素：6个结晶水 土霉素：2个结晶水 加热时，可失去，失去后有吸湿性四、四环素类抗生素四、四环素类抗生素第46页，此课件共63页哦 4 4、溶解度、溶解度 pH4.5pH4.57.27.2：难溶于水：难溶于水 pH4pH8pH8：易溶于水：易溶于水四、四环素类抗生素四、四环素类抗生素第47页，此课件共63页哦 5 5、不稳定性、不稳定性 对各种氧化剂都不稳定对各种氧化剂都不稳定 碱性性更易氧化碱性性更易氧化 干燥品较稳定，遇光可使颜色变深干燥品较稳定，遇光可使颜色变深四、四环素类抗生素四、四环素类抗生素第48页，此课件共63页哦 6、旋光性、旋光性 盐酸

17、土霉素盐酸土霉素 -1880-2000 盐酸四环素盐酸四环素 -2400-2580 盐酸多西环素盐酸多西环素 -1050-1200四、四环素类抗生素四、四环素类抗生素第49页，此课件共63页哦（二）化学反应 1、差向异构化（差向四环素）pH2.06.0，A环C4构型改变四、四环素类抗生素四、四环素类抗生素第50页，此课件共63页哦 易差向化：四环素、金霉素 不易差向化：土霉素、多西霉素、美他环素 影响因素（1）pH2、pH9，不易差向 （2）高价酸根存在，易差向 （3）阴离子浓度增加，易差向四、四环素类抗生素四、四环素类抗生素第51页，此课件共63页哦 2、酸性下降解（脱水四环素类）pH2，C

18、环C6羟基与C5a上氢脱水四、四环素类抗生素四、四环素类抗生素 可脱水：四环素、金霉素、土霉素可脱水：四环素、金霉素、土霉素不可脱水：多西霉素、美他环素（不可脱水：多西霉素、美他环素（C C6 6无无OHOH）第52页，此课件共63页哦 3、碱性下降解（异四环素）碱性下，C环打开，生成内酯结构四、四环素类抗生素四、四环素类抗生素多西环素、美他环素：不反应，多西环素、美他环素：不反应，RR不是不是OHOH第53页，此课件共63页哦 4 4、与金属离子络合、与金属离子络合 锆、钍、铀、锌、铜、铝、镁、铈、钴锆、钍、铀、锌、铜、铝、镁、铈、钴 形成有色络合物形成有色络合物四、四环素类抗生素四、四环素

19、类抗生素第54页，此课件共63页哦（三）鉴别 1与浓H2SO4反应 四环素深紫色 金霉素兰色、变为橄榄绿，加水成金黄 土霉素朱红色 多西霉素黄色 美他环素橙红色四、四环素类抗生素四、四环素类抗生素第55页，此课件共63页哦 2FeCl3反应 四环素红棕色 金霉素深褐色 土霉素橙褐色 多西霉素褐色四、四环素类抗生素四、四环素类抗生素第56页，此课件共63页哦 3.TLC法 Ch.P(2005)、BP(2005)采用 4.HPLC法 Ch.P(2005)、USP(30)采用四、四环素类抗生素四、四环素类抗生素第57页，此课件共63页哦 (四四)杂质检查杂质检查 1 1、有关物质、有关物质 异构杂质

20、、降解杂质异构杂质、降解杂质 引起恶心、呕吐、糖尿引起恶心、呕吐、糖尿 蛋白尿及酸中毒蛋白尿及酸中毒 Ch.PCh.P、USPUSP、BPBP均采用均采用HPLCHPLC法检查法检查四、四环素类抗生素四、四环素类抗生素第58页，此课件共63页哦 2、杂质吸收度 脱水物、差向脱水物含量越高 吸收度越大 盐酸四环素：10mg/ml（0.8%NaOH溶液）530nm于4cm比色池 自加0.8%NaOH起5min不得过0.12四、四环素类抗生素四、四环素类抗生素第59页，此课件共63页哦 (五）含量测定 盐酸四环素 1、色谱条件 ODS柱 流动相：0.1mol/L草酸铵溶液-二甲基甲酰胺-0.2mol

21、/L磷酸氢二铵溶液（68：27：5）用氨试液调pH8.3四、四环素类抗生素四、四环素类抗生素第60页，此课件共63页哦 柱温：35 检测波长：280nm 2、系统适应性 分离度：4-差向四环素 差向脱水四环素、盐酸四环素 盐酸金霉素及脱水四环素 分离度符合要求四、四环素类抗生素四、四环素类抗生素第61页，此课件共63页哦 3、样品溶液 对照溶液：盐酸四环素、4-差向四环素 差向脱水四环素、盐酸金霉素 及脱水四环素 0.01mol/L HCl溶解配成 样品溶液：盐酸四环素样品 0.01mol/L HCl溶解配成四、四环素类抗生素四、四环素类抗生素第62页，此课件共63页哦感谢大家观看第63页，此课件共63页哦