猪链球菌病诊断精选PPT.ppt

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1、关于猪链球菌病诊断第1页，讲稿共35张，创作于星期二病原：病原：1 猪链球菌猪链球菌2型（型（Streptococcus suis 2）2 2 马链球菌兽疫亚种（马链球菌兽疫亚种（Streptococcus equi subsp zooepidemicus)，旧称兽疫链球菌旧称兽疫链球菌3 3 D D、E E、L L、S S群链球菌群链球菌(Lancefield)(Lancefield)兰氏血清学分群，链球菌分为兰氏血清学分群，链球菌分为2020个血清群（个血清群（A A、B B、C.V,IC.V,I、J J除外）除外）第2页，讲稿共35张，创作于星期二一、病原分离一、病原分离1 采样采样活猪

2、：采样用灭菌棉拭子擦拭扁桃体活猪：采样用灭菌棉拭子擦拭扁桃体病死猪：扁桃体、肺、肝、血液，有脑炎症病死猪：扁桃体、肺、肝、血液，有脑炎症状取脑组织，关节炎可取关节囊液状取脑组织，关节炎可取关节囊液第3页，讲稿共35张，创作于星期二2 分离培养分离培养（1）培养基：）培养基：THB培养基、绵羊血或马血平板培养基、绵羊血或马血平板（2）培养条件：需氧兼性厌氧、）培养条件：需氧兼性厌氧、37、pH7.2 猪链球菌猪链球菌2性营养要求比马链球菌兽疫亚种低，后者性营养要求比马链球菌兽疫亚种低，后者需加需加3-5%的犊牛血清的犊牛血清第4页，讲稿共35张，创作于星期二二、临床诊断二、临床诊断 主要表现为主

3、要表现为败血症、化脓性淋巴结炎、脑败血症、化脓性淋巴结炎、脑膜炎、心内膜炎、关节炎等。膜炎、心内膜炎、关节炎等。但不同链球菌病但不同链球菌病原引起的症状类似，故该诊断不能用于确诊。原引起的症状类似，故该诊断不能用于确诊。第5页，讲稿共35张，创作于星期二关节炎症状关节炎症状第6页，讲稿共35张，创作于星期二败血症败血症第7页，讲稿共35张，创作于星期二1 染色镜检染色镜检猪链球菌猪链球菌2型：型：革兰氏染色阳性、革兰氏染色阳性、菌体呈圆形或椭圆形，直菌体呈圆形或椭圆形，直径小于径小于2.0m，一般呈短链或成双排列，革兰氏染色，一般呈短链或成双排列，革兰氏染色阳性，阳性，菌体表面能形成荚膜。菌体

4、表面能形成荚膜。二、微生物学诊断二、微生物学诊断第8页，讲稿共35张，创作于星期二马链球菌兽疫亚种：马链球菌兽疫亚种：革兰氏阳性球菌，直径革兰氏阳性球菌，直径0.51um，液体培，液体培养基中呈长链，菌体表面能形成荚膜。营养养基中呈长链，菌体表面能形成荚膜。营养要求较高，在要求较高，在5%犊牛血清生长良好。根据类犊牛血清生长良好。根据类M蛋白抗原性的差异，该菌至少有蛋白抗原性的差异，该菌至少有15个血清型。个血清型。第9页，讲稿共35张，创作于星期二马链球菌兽疫亚种猪链球菌2型菌（溶血）第10页，讲稿共35张，创作于星期二图2 猪链球菌2型 (ZY05719)第11页，讲稿共35张，创作于星期

5、二ATCC 35246株株第12页，讲稿共35张，创作于星期二2 培养特性培养特性猪链球菌猪链球菌2型：型：菌落形态菌落形态 血平板上呈灰白色小菌落，血平板上呈灰白色小菌落，粘稠，粘稠，2型在绵型在绵 羊血平板上呈羊血平板上呈溶血，马血平板溶血，马血平板则呈则呈溶血。溶血。第13页，讲稿共35张，创作于星期二马链球菌兽疫亚种：马链球菌兽疫亚种：在血清肉汤培养基中培养该菌，开始时有轻度在血清肉汤培养基中培养该菌，开始时有轻度混浊，继而变清，于管底形成沉淀。混浊，继而变清，于管底形成沉淀。于于5绵羊血琼脂（绵羊血琼脂（THA）培养基上培养）培养基上培养24 h，大部分菌株形成大部分菌株形成34mm

6、的粘液样大菌落，产生明显的粘液样大菌落，产生明显的的溶血。小部分呈非粘液样菌落，大小约溶血。小部分呈非粘液样菌落，大小约1mm左左右。右。第14页，讲稿共35张，创作于星期二3 生化鉴定生化鉴定猪链球菌猪链球菌2型：型：发酵乳糖、海藻糖、水扬苷，部分菌株发酵发酵乳糖、海藻糖、水扬苷，部分菌株发酵 棉实糖、菊糖；不发酵甘露醇、山梨醇棉实糖、菊糖；不发酵甘露醇、山梨醇第15页，讲稿共35张，创作于星期二马链球菌兽疫亚种：马链球菌兽疫亚种：能水解精氨酸，发酵乳糖、水扬苷、山梨醇产能水解精氨酸，发酵乳糖、水扬苷、山梨醇产酸。不能发酵菊糖、甘露醇、棉子糖和海藻糖。酸。不能发酵菊糖、甘露醇、棉子糖和海藻糖

7、。V-P试验阴性，不产生靛基质，不还原硝酸盐，不试验阴性，不产生靛基质，不还原硝酸盐，不液化明胶。液化明胶。第16页，讲稿共35张，创作于星期二三、免疫学诊断三、免疫学诊断1 玻板凝集实验玻板凝集实验 用于猪链球菌用于猪链球菌2型快速定型，但要求抗体效价高；型快速定型，但要求抗体效价高；马链球菌兽疫亚种只能用于定群马链球菌兽疫亚种只能用于定群 2 乳胶凝集实验乳胶凝集实验1.敏感性较高，结果容易判断，但有非特异性敏感性较高，结果容易判断，但有非特异性第17页，讲稿共35张，创作于星期二3 免疫荧光免疫荧光猪链球菌猪链球菌2型：型：用用MRP特异抗体可用于菌体表面其分布的观察，特异抗体可用于菌体

8、表面其分布的观察，但需用激光共聚焦显微镜。但需用激光共聚焦显微镜。马链球菌兽疫亚种：用类马链球菌兽疫亚种：用类M蛋白特异抗体可用于菌体表蛋白特异抗体可用于菌体表面其分布的观察面其分布的观察第18页，讲稿共35张，创作于星期二MRP单抗介导单抗介导FITC标记标记SS2表面表面MRP的激光共聚焦图像的激光共聚焦图像 MRP单抗介导单抗介导FITC标记标记SS2表面表面MRP的激光共聚焦图像的激光共聚焦图像第19页，讲稿共35张，创作于星期二SS2多抗介导多抗介导FITC标记的标记的SS2的激光共聚焦图像的激光共聚焦图像第20页，讲稿共35张，创作于星期二4 4ELISAELISA5 5 常用链球

9、菌多克隆抗体包被，以常用链球菌多克隆抗体包被，以MRPMRP或类或类M M蛋白的单克隆抗体夹心，敏感性高，特异性蛋白的单克隆抗体夹心，敏感性高，特异性较强。较强。第21页，讲稿共35张，创作于星期二四、分子诊断四、分子诊断1多酶电泳法：多酶电泳法：原理：不同型猪链球菌，胞内酶分子的氨基酸有差原理：不同型猪链球菌，胞内酶分子的氨基酸有差异，因而电荷有差异，在电场中，其迁移率有差异。异，因而电荷有差异，在电场中，其迁移率有差异。用于不同型链球菌的分析用于不同型链球菌的分析第22页，讲稿共35张，创作于星期二2 限制性酶切图谱分析限制性酶切图谱分析 原理：不同种或亚种链球菌基因不同，因而用限制原理：

10、不同种或亚种链球菌基因不同，因而用限制性内切酶酶切后，其电泳图谱不同。性内切酶酶切后，其电泳图谱不同。用于分离株变异分析，亦可用于不同种或型的鉴用于分离株变异分析，亦可用于不同种或型的鉴定定第23页，讲稿共35张，创作于星期二3 3随机扩增多态随机扩增多态DNA分析（分析（RAPD）4 用多对随机引物进行用多对随机引物进行PCR扩增，可得到不同扩增，可得到不同的产物，且产物具有多态性。的产物，且产物具有多态性。5 可用于种或型的鉴定或分离株变异分析可用于种或型的鉴定或分离株变异分析第24页，讲稿共35张，创作于星期二4PCR5猪链球菌猪链球菌2型：型：mrp、ef、cps2、orf2以及溶血素

11、基因均可作以及溶血素基因均可作为靶基因进行检测为靶基因进行检测 cps2具有型特异性具有型特异性第25页，讲稿共35张，创作于星期二bp970744622557 mrp,ef,sly,CPS 2 1 2 3 4 51:HA9801;2:ZY05719;3:Marker;4,5:阴性对照阴性对照第26页，讲稿共35张，创作于星期二250bp 500bp750bpM122000bp1000bpMaker 1.HA 9801(cps2)2.ZY05719(cps2)cps2第27页，讲稿共35张，创作于星期二250bp 500bp750bp2000bpM1234ef，mrp，gdh，orf2Make

12、r1.ef(626 bp)2.mrp(316 bp)3.gdh(688 bp)4.orf2(858 bp).第28页，讲稿共35张，创作于星期二250bp 500bp750bp1000bp2000bp250bp 500bp750bp1000bp2000bp1099bp1310bpM1M1 slyfbpsMaker 1.slyMaker1.fbps第29页，讲稿共35张，创作于星期二第30页，讲稿共35张，创作于星期二1040bp100bp250bp 500bp750bp1000bp2000bpM123M:DL-Marker 2000 1:ZY05719(gapdh)2:HA9801(gapdh

13、)3:空白对照空白对照gapdh第31页，讲稿共35张，创作于星期二图8orf 2PCR检测结果1marker;24,713PCRproductsofswineStreptococcus,2HA9801;56negativecontrol第32页，讲稿共35张，创作于星期二图11PCR检测猪链球菌2型cps21.H2O;2.SH0033;3.35246;4.ZY05722;5.ZG05464;6.GH05458;7.HA9802;.8.ZY05719;9.HA9801;10.YJ05465;11.JDZ05802-1;12.JR05730;13.ZY05721;14.11611;15.CHZ0

14、5806;16.260;M.MarkerDL2000.bp387M161514131211109876543211002502000750第33页，讲稿共35张，创作于星期二123456200010007505002501001DL2000market2、3PCRproductofATCC352464PCRproductofstreptococcus suistype2HA98015PCRproductofStaphylococcus aureus6PCRproductofAvain Escherichia coliO1ATCC35246株类株类M基因基因PCR结果结果第34页，讲稿共35张，创作于星期二感感谢谢大大家家观观看看第35页，讲稿共35张，创作于星期二