64生物化学方法及其在中医研究中的应用-6ksx.docx

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1、第六章 第四节节 生物物化学方方法及其其在中医医研究中中的应用用一生物物化学的的主要实实验方法法有哪些些？答题要点点：（一）生生物大分分子物质质的分离离和提纯纯生物大分分子主要要指蛋白白质、核核酸、糖糖类和脂脂类等物物质。制制备高度度纯化的的生物大大分子是是研究大大分子结结构与功功能的前前提，整整个分离离提纯过过程可分分为以下下几个阶阶段： 1材料选选择。原原则是：选取所所需成分分含量较较高、来来源丰富富、工艺艺简单、成成本低廉廉的材料料。例如如，胰岛岛素的提提取可选选择猪胰胰。还要要注意取取材新鲜鲜，要进进行预处处理，对对于蛋白白质和核核酸的提提取要在在低温条条件下进进行，防防止生物物大分子

2、子的变性性、失活活。 2细胞破破碎。生生物大分分子绝大大部分存存在于细细胞内。根根据材料料来源及及实验要要求，可可选取匀匀浆器研研磨、高高速组织织捣碎器器、反复复冻融、超超声波破破碎、自自溶、酶酶消化、表表面活性性剂处理理法等。 3亚细胞胞器的分分离。各各类生物物大分子子在细胞胞内分布布往往是是区域化化的。例例，DNNA几乎乎全部在在细胞核核中，电电子传递递链和氧氧化磷酸酸化酶系系分布在在线粒体体，蛋白白质合成成酶系在在内质网网（微粒粒体）上上，Naa+-K+-ATPP酶分布布在细胞胞膜上等等，因此此细胞破破碎后，可可以先分分离亚细细胞器，这这有助于于制备纯纯度更高高的生物物大分子子。亚细细胞

3、器的的分离，一一般采用用不同密密度梯度度介质，经经差速离离心法制制备。 4提取。提提取过程程，首先先要使生生物大分分子与其其他物质质分离开开来，使使大分子子物质充充分释放放出来，在在此过程程中，特特别要考考虑溶剂剂性质、ppH值、离离子强度度、介电电常数、抽抽提温度度等多种种影响溶溶解度的的因素，然然后可结结合经验验并根据据具体实实验条件件灵活地地选取某某一试剂剂进行提提取。 5分离纯纯化。刚刚提取得得到的大大分子物物质，往往往是粗粗制品，含含有许多多杂质，必必须进一一步分离离纯化。分分离提纯纯各种生生物大分分子，主主要根据据各种物物质的分分子大小小、溶解解度、带带电性、亲亲和力大大小等差差异

4、，选选用有机机溶剂沉沉淀，等等电点沉沉淀，盐盐析，层层析，电电泳，超超离心，吸吸附，结结晶等方方法。 6浓缩、干干燥及保保存。经经过分离离、纯化化得到的的提取液液有时很很稀，体体积较大大，需要要采用蒸蒸馏法、冰冰冻法、吸吸收法、超超滤法等等，去除除水分而而浓缩。最最后低温温保存，有有时还需需加入防防腐剂或或稳定剂剂，防止止生物大大分子变变性失活活。（二）离离心技术术离心技术术是利用用物体高高速旋转转时产生生强大的的离心力力，使置置于旋转转体中的的悬浮颗颗粒发生生沉降或或漂浮，从从而使某某些颗粒粒达到浓浓缩或与与其他颗颗粒分离离之目的的。这里里的悬浮浮颗粒往往往是指指制成悬悬浮状态态的细胞胞、细

5、胞胞器、病病毒和生生物大分分子等。离离心机转转子高速速旋转时时，当悬悬浮颗粒粒密度大大于周围围介质密密度时，颗颗粒离开开轴心方方向移动动，发生生沉降；如果颗颗粒密度度低于周周围介质质的密度度时，则则颗粒朝朝向轴心心方向移移动而发发生漂浮浮。常用用的离心心机有多多种类型型，一般般低速离离心机的的最高转转速不超超过60000rrpm，高高速离心心机在2250000rppm以下下，超速速离心机机的最高高速度达达300000rrpm以以上。根据离心心原理，可可设计多多种离心心方法，常常见下列列三大类类型： 1差速离离心法。通通过逐步步增加相相对离心心力，使使一个非非均相混混合液内内形状不不同的大大小颗

6、粒粒分步沉沉淀。 2密度梯梯度离心心法。离离心前，离离心管内内先装入入分离介介质（如如蔗糖、甘甘油等），使使形成连连续的或或不连续续的密度度梯度介介质，然然后加入入样品进进行离心心，具体体又可分分为： 1）速速度区带带离心法法。离心心前，离离心管内内先装入入蔗糖、甘甘油、CCsCll、Perrcolll等密密度梯度度介质，待待分离样样品铺在在梯度液液的顶部部，离心心管底部部或梯度度层中间间，同梯梯度液一一起离心心，利用用各颗粒粒在梯度度液中沉沉降速度度或漂浮浮速度的的不同，使使具有不不同沉降降速度的的颗粒处处于不同同密度的的梯度层层内，达达到彼此此分离的的目的。本本法可分分离各种种细胞、病病毒

7、、染染色体、脂脂蛋白、DDNA和和RNAA等生物物样品。 2）预预制梯度度等密度度离心法法。要求求在离心心前预先先配制管管底浓而而管顶稀稀的密度度梯度介介质，常常用介质质有蔗糖糖、CssCl、Cs2SO4等，待待分离样样品一般般铺在梯梯度液顶顶上，如如需挟在在梯度液液中间或或管底部部，则需需调节样样品液密密度。离离心后，不不同密度度的样品品颗粒到到达与自自身密度度相等的的梯度层层，即达达到等密密度的位位置而获获得分离离。 3）自自成梯度度等密度度离心法法。某些些密度介介质经过过离心后后会自成成梯度，例例Perrcolll，可可迅速形形成梯度度，CssCl、Cs2SO4和三碘碘甲酰葡葡萄糖胺胺经

8、长时时间离心心后也可可产生稳稳定的梯梯度。需需要离心心分离的的样品可可和梯度度介质先先均匀混混合，离离心开始始后，梯梯度介质质由于离离心力的的作用逐逐渐形成成管底浓浓而管顶顶稀的密密度梯度度，与此此同时，可可以带动动原来混混合的样样品颗粒粒也发生生重新分分布，到到达与其其自身密密度相等等的梯度度层里，即即达到等等密度的的位置而而获得分分离。 3沉降平平衡离心心法。根根据被分分离物质质的浮力力密度差差别进行行分离，所所用的介介质起始始密度约约等于被被分离物物质的密密度，介介质在离离心过程程中形成成密度梯梯度，被被分离物物质沉降降或上浮浮到达与与之密度度相等的的介质区区域中停停留并形形成区带带。（

9、三）层层析技术术层析法又又称色谱谱法，是是目前广广泛应用用的一类类分离分分析技术术。它是是利用混混合物各各组分理理化性质质上的差差异，例例如吸附附力、溶溶解度、分分配系数数、带电电性、分分子大小小、亲和和力等，使使各组分分以不同同程度分分布在二二个相中中，其中中一个为为固定相相，另一一个为流流动相，当当混合物物随流动动相通过过固定相相时，由由于各组组分受固固定相的的阻力和和流动相相的推力力不同，而而使各组组分移动动速度各各异，以以达到分分离的目目的。主主要有： 1根据分分离的原原理可划划分为： 1）吸吸附层析析。是利利用混合合物随流流动相通通过由吸吸附剂组组成的固固定相时时，因吸吸附剂对对各组

10、分分的吸附附能力的的不同，而而使各组组分流动动速度不不同，将将各组分分分离。吸吸附层析析根据支支持物装装填方式式的不同同有柱层层析和薄薄层层析析类，前前者常用用于分离离非极性性或极性性较小的的有机物物，后者者用于分分离氨基基酸、类类固醇激激素等。 2）分分配层析析。利用用混合物物随流动动相（非非极性溶溶剂）通通过含极极性溶剂剂的载体体组成的的固定相相时，由由于各组组分在二二相中的的分配系系数的不不同，而而使混合合物各组组分在两两相间发发生不同同的分配配现象而而逐渐分分开。分分配层析析应用最最广泛的的是纸层层析。 3）离离子交换换层析。离离子交换换层析是是利用离离子交换换剂作为为固定相相，离子子

11、交换剂剂是一类类具有酸酸性或碱碱性基团团，能与与溶液中中的阳离离子或阴阴离子发发生交换换的不溶溶性物质质，流动动相通常常是具有有一定ppH值和和一定离离子强度度的电解解质溶液液。将混混合溶液液加入离离子交换换柱，由由于离子子交换剂剂对混合合液中各各种离子子具有不不同的亲亲和力而而产生不不同的吸吸附作用用，当流流动相流流经离子子交换柱柱时，可可以降低低离子交交换剂对对吸附离离子的亲亲和力而而被交换换洗脱下下来，从从而达到到分离的的目的。 4）凝凝胶层析析。以多多孔性网网状结构构的凝胶胶（葡聚聚糖凝胶胶、聚丙丙烯酰胺胺凝胶或或琼脂糖糖凝胶等等）为固固定相装装柱，将将分子量量大小不不同的混混合组分分

12、加入柱柱，用一一种洗脱脱液作为为流动相相进行洗洗脱。小小分子物物质易进进入凝胶胶颗粒内内部使流流程延长长，大分分子物质质不能进进入凝胶胶颗粒内内而被排排阻在外外，流程程较短，经经过一定定洗脱时时间后，可可将混合合物按分分子大小小不同分分离开来来。 5）亲亲和层析析。亲和和层析是是根据生生物大分分子与其其配基之之间具有有高度专专一性的的亲和力力而设计计的一种种层析技技术。具具有专一一亲和力力的生物物分子对对主要有有：酶与与底物（包包括辅酶酶与辅基基）、激激素与受受体、抗抗原与抗抗体、DDNA与与RNAA、凝集集素与糖糖蛋白等等，由于于结合双双方是互互配的，因因此分子子对任何何一方均均可作为为配基

13、，通通过化学学法连接接到载体体上作为为固定相相装柱，将将欲分离离的混合合物（分分子对另另一方）加加入柱，由由于分子子对双方方有高度度亲和力力而被吸吸附结合合在柱上上，其它它杂质首首先随流流动相被被洗脱下下来，然然后改变变流动相相成分，将将吸附结结合在柱柱上的亲亲合分子子洗脱下下来。 2根据两两相物理理状态可可划分为为： 1）液液相层析析。流动动相为液液体的层层析，如如上述各各种层析析。 2）气气相层析析。流动相为为气体的的层析。固固定相有有固体或或液体，故故又分作作气固层层析或气气液层析析。 3根据支支持物的的装填方方式可划划分为：柱层析（将将支持物物装在管管子中成成柱形，在在柱中进进行层析析

14、），薄薄层层析析（支持持物铺在在玻璃板板上成一一薄层，在在薄层上上进行层层析），纸纸层析（用用纸做支支持物的的层析）。（四）电电泳技术术带电颗粒粒在电场场作用下下，向着着其电性性相反方方向移动动的现象象称为电电泳。由由于被分分离物质质各自的的带电性性、带电电量、分分子颗粒粒大小和和形状等等的不同同，在同同一电埸埸下它们们的移动动速度各各异，经经过一定定时间电电泳后可可被分离离开来。在电泳过过程中，带带电颗粒粒的迁移移率在一一定条件件下与其其所带电电量、颗颗粒半径径和溶液液的粘度度相关。此此外还有有以下因因素可以以影响物物质的电电泳迁移移率：电电场强度度、溶液液的pHH值、溶溶液的离离子强度度、

15、电渗渗作用等等。 目前前采用的的电泳大大致有三三大类：显微电电泳、自自由界面面电泳和和区带电电泳。其其中区带带电泳应应用较为为广泛。所所谓区带带电泳是是指在电电埸作用用下，被被分离的的各组分分在支持持物上相相互分离离为不同同的区带带。分类类如下： 1）按按支持物物的物理理性状不不同可分分为：（11）滤纸纸及其他他纤维纸纸电泳，（22）粉末末电泳，（33）凝胶胶电泳、（44）缘线线电泳。 2）按按支持物物的装置置形式不不同可分分为：（11）平板板式电泳泳，（22）垂直直板式电电泳，（33）垂直直柱式电电泳，（44）连续续液动电电泳。 3）按按pH的的连续性性不同可可分为：（1）连连续pHH电泳，

16、（22）非连连续pHH电泳。（五）光光谱技术术 光谱谱技术是是利用各各种化学学物质所所具有的的发射、吸吸收或散散射辅射射能的特特性，对对物质进进行定性性或定量量的一类类分析技技术。它它具有灵灵敏度高高，测定定简便、快快速，试试样不被被破坏等等优点，是是一类最最常用的的生化测测定技术术。 1比色分分析法 比色色法是利利用有色色物质对对一定波波长的光光的吸收收特性来来进行定定量的一一种分析析方法。在在一定浓浓度范围围内，溶溶液中有有色物质质的浓度度与溶液液颜色的的深度成成正比，用用可见光光（4000-7760nnm）作作光源，比比较溶液液的颜色色深浅度度以测定定所含有有色物质质浓度的的方法，叫叫做

17、比色色法。常常用的有有： 1）标标准对照照法。将将样品和和标准样样品溶液液在相同同条件下下分别测测定它们们的吸光光度，计计算出试试样溶液液的浓度度。 2）标标准曲线线法。配配制一系系列浓度度不同的的标准品品溶液，按按一定操操作方法法显色，在在选定波波长条件件下分别别测定它它们的吸吸光度，以以吸光度度为纵坐坐标，标标准溶液液的浓度度为横坐坐标，作作一条标标准曲线线或工作作曲线。以以后只需需在相同同条件下下实验，测测定未知知样品溶溶液的吸吸光度，从从标准曲曲线上求求得相对对应的浓浓度值，即即为未知知样品液液的浓度度，一条条标准曲曲线，如如测定条条件不变变，可供供多次使使用，否否则应重重新绘制制。

18、2分光光光度法 分光光光度是是根据被被测物质质对各种种波长光光的吸收收能力（吸吸光度或或光密度度），绘绘制吸收收光谱曲曲线，不不同的物物质，分分子结构构不同，其其吸收曲曲线各有有特殊形形式，根根据曲线线的特征征，用于于物质的的定性定定量。分分光光度度法波长长范围较较大(2200-10000nmm)，因因此，既既可用于于可见光光，也可可用于紫紫外光和和红外光光的分光光测定，故故测定物物质既可可是有色色物，也也可是无无色物，扩扩大了应应用范围围。由于于分光光光法采用用单色光光器（棱棱镜），得得到单色色光，其其波长范范围比滤滤光片波波长更狭狭窄，提提高了分分析的灵灵敏度、准准确度和和选择性性。所用用

19、的仪器器7211分光光光度计、7752紫紫外分光光光度计计等。 3荧光光光度 某些些物质经经紫外光光照射能能发出比比原激发发光的频频率低，波波长长的的可见光光，这种种光称为为荧光。各各种物质质经紫外外光激发发后能发发出的荧荧光特性性与物质质的化学学性有关关。在激激发光强强度和所所通过的的溶液厚厚度不变变时，在在一定浓浓度范围围内该物物质所产产生的荧荧光强度度与其浓浓度成正正比。因因此，可可以用已已知浓度度的标准准与待测测样品同同样操作作，通过过测定荧荧光强度度（F），按按前述的的标准曲曲线法和和标准对对照法，求求得待测测物质的的浓度。所所用的仪仪器如国国产9330型、9910型型等荧光光光度计

20、计。 4比浊法法 比浊法法是利用用混悬溶溶液中颗颗粒对光光线产生生散射特特性进行行测定。其其测定的的理论、方方法和计计算等类类似于比比色分析析法，因因此基本本上任何何一种光光电比色色计或分分光光度度计都能能用于比比浊测定定。（六）分分子杂交交技术（详详见第八八节）二心气气虚证血血清SOOD活性性、血清清LPOO含量和和血浆内内核酸含含量的变变化怎样样？其意意义如何何？答题要点点：1心气气虚证患患者红细细胞SOOD活性性明显下下降，而而血清LLPO含含量则显显著升高高，推测测由于红红细胞SSOD活活性下降降不能保保护心肌肌免受超超氧自由由基的攻攻击，以以致产生生心气虚虚的临床床症状。2心气气虚患

21、者者血浆核核酸总量量及DNNA、RRNA含含量均低低于正常常对照组组，提示示心气虚虚患者蛋蛋白质合合成功能能有一定定的障碍碍。三试述述脾虚证证主要的的物质代代谢异常常表现。答题要点点：1用柠柠檬酸刺刺激前后后唾液淀淀粉酶活活性和唾唾液流量量的变化化，结果果发现正正常人酸酸刺激前前后唾液液淀粉酶酶活性多多上升，而而脾虚病病人则酶酶活性下下降，提提示脾虚虚病人腮腮腺细胞胞对外源源性刺激激的反应应性降低低，这可可能是脾脾虚病人人的虚象象的表现现。2 血清胃泌泌素和胰胰淀粉酶酶活性低低下，胃胃肠蠕动动紊乱，小小肠吸收收功能低低下。说说明脾虚虚患者的的胃肠功功能确有有紊乱。3 脾虚患者者木糖排排泄率较较

22、正常人人显著降降低。脾脾虚证的的食少、腹腹胀满、大大便不调调、神疲疲气短四四大主症症的分级级量比值值与木糖糖排泄率率下降有有一致性性的规律律。4 血清淀粉粉酶及其其同功酶酶和胰脂脂肪酶均均显著下下降，且且脾气虚虚的三个个主症（食食欲减退退、食后后腹胀与与大便溏溏泄）与与胰淀粉粉酶活性性同功酶酶活性降降低呈正正相关，脾脾气虚的的胰淀粉粉酶活性性和胰脂脂肪酶活活性与对对照组之之间有显显著性差差异，表表明胰腺腺外分泌泌功能的的降低可可视为脾脾气虚证证的特异异性诊断断指标之之一，且且淀粉酶酶总活性性的降低低取决于于胰淀粉粉酶同功功酶的下下降，而而与唾液液淀粉酶酶无关，为为脾气虚虚证诊断断提供了了一个更

23、更准确有有效的实实验指标标。5血清清必需脂脂肪酸检检测：血血清花生生四烯酸酸减少，与与亚油酸酸比值也也下降，甘油三酯（TG）增高，总胆固醇（TC）增高，高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）比值下降。脾气虚证、脾阳虚证、脾阴虚证模型的血清脂质过氧化物（LPO）明显升高，抗氧化酶活性下降。血清丙二醛（MDA）含量升高，其中以脾肾两虚型的MDA含量最高。6血清清游离氨氨基酸（FFAA）、必必需氨基基酸、支支链氨基基酸明显显降低，缬缬、甘、苏苏、色、异异亮、丝丝、丙、组组氨酸等等8种氨氨基酸含含量也明明显降低低；FAAA含量量、必需需氨基酸酸、支链链氨基酸酸含量及及木糖吸吸收率之之间、FFAA总总量与血血

24、清总蛋蛋白、白白蛋白、淋淋转率、补补体C33之间和和支链氨氨基酸与与白蛋白白之间均均显著正正相关，提提示脾气气虚患者者血清FFAA含含量降低低与肠道道吸收不不良、血血清蛋白白浓度和和免疫功功能低下下有关。四试述述肾虚证证物质代代谢异常常的主要要表现。答题要点点：1 老年肾虚虚证患者者血清过过氧化脂脂质（LLPO）含含量明显显高于老老年健康康组。脂脂褐素（LLPF）含含量增高高，超氧氧化物歧歧化酶（SSOD）、过过氧化氢氢酶活性性以及铜铜蓝蛋白白含量降降低。2 血清铁、锌锌含量下下降。五试述述脾虚证证能量代代谢异常常的主要要表现。答题要点点：1肌酸酸磷酸激激酶（CCPK）、琥琥珀酸脱脱氢酶、辅辅

25、酶1-四氮唑唑还原酶酶（NAADH-TR）活活性、肌肌球蛋白白腺苷三三磷酸酶酶（M-ATPPasee）活性性降低，肌肌糖原含含量减少少，线粒粒体发生生改变，骨骨骼肌有有氧氧化化效率降降低，糖糖酵解供供能途径径障碍，能能量代谢谢受阻；CPKK和肌型型肌酸磷磷酸激酶酶（CPPK-MMM）活活性的降降低与脾脾气虚的的轻重程程度有量量的相关关性。2骨骼骼肌细胞胞ATPP含量和和能荷值值显著减减小，与与无氧酵酵解相关关的乳酸酸脱氢酶酶（LDDH）以以及有氧氧氧化相相关的琥琥珀酸脱脱氢酶（SSDH）活活性显著著升高，提提示能量量代谢异异常，与与之相关关的微量量元素锌锌和铁含含量也相相应升高高，而与与肌肉收

26、收缩有关关的元素素铜、砷砷、钠减减少而钙钙增多。红细胞膜Na+-K+-ATPase活性也显著低于正常组。六心气气（阴）虚虚证神经经内分泌泌异常表表现有哪哪些？答题要点点：1心气气虚、肺肺气虚和和心肺气气虚患者者血浆心心钠素含含量显著著降低，而而心阴虚虚、肺阴阴虚和肝肝肾阴虚虚患者血血浆心钠钠素含量量则升高高。2心阴阴虚证存存在左心心功能低低下和心心血管植植物神经经功能紊紊乱，多多与高血血压、心心功能不不全及交交感肾上上腺能神神经偏亢亢有关。心心功能不不全，激激活了肾肾素-血血管紧张张素-醛醛固酮系系统（RRAASS），从从而增加加了外周周阻力。心阴虚患者红细胞电泳时间明显缩短，血糖含量较正常组

27、高，糖耐量降低，并发现该证患者血浆雌二醇（E2）、睾酮（T）含量低于正常人。七脾虚虚证神经经内分泌泌异常表表现有哪哪些？答题要点点：1血清清乙酰胆胆碱水平平明显升升高，胆胆碱酯酶酶活性明明显下降降，说明明脾气虚虚证患者者副交感感神经系系统处于于兴奋状状态。2血、尿尿PGEE2 、PPGF22含量及及其与中中医证型型的关系系：脾气气虚组、肝肝胃不和和组和脾脾胃湿热热组PGGE2水平均均明显高高于对照照组，其其中以脾脾胃湿热热组升高高最明显显，而且且明显高高于脾气气虚证和和肝胃不不和组，PPGE22/PGGF2比值，脾脾胃湿热热组也明明显高于于对照组组、脾气气虚证和和肝胃不不和组，三三组证型型的尿

28、与与血中PPG水平平有类似似的变化化，可能能是与血血中PGG经代谢谢灭活后后从尿中中排泄有有关。上上述结果果初步说说明，PPG水平平变化对对脾气虚虚证并非非特异，但但提示了了脾气虚虚证形成成过程中中有PGGE2参与调调节。脾脾虚患者者胃粘膜膜PGEE2、PGGI2的代谢谢产物66-酮-前列腺腺素F11（6-Ketto-PPGF11）、血血栓素AA2（TXXA2）的代代谢产物物血栓素素B2（TXXB2）含量量之比值值及环核核苷酸（ccAMPP）含量量均明显显低于对对照组，且且胃粘膜膜PGEE2、6-Ketto-PPGF11与cAAMP呈呈正相关关。3血浆浆cAMMP含量量明显降降低，交交感神经经

29、系统功功能低下下，副交交感神经经系统功功能相对对亢进，脾阴虚证，包括消化道疾病、甲亢、多种癌手术后和夏季热等，其血浆cAMP降低，cGMP升高，变化趋势与脾气虚相近。4脾虚虚证胃窦窦粘膜中中D细胞胞数明显显减少，DD细胞分分泌的生生长激素素有抑制制胃泌素素、胃酸酸和胃蛋蛋白酶原原分泌的的作用，推推测D细细胞减少少系脾虚虚证患者者的一个个重要病病理形态态学标志志。大鼠鼠脾虚证证的血浆浆、胃窦窦及空肠肠组织中中生长抑抑素（SSS）含含量均较较正常对对照组升升高。脾脾气虚证证患者血血清中胃胃泌素水水平降低低，胃排排空时间间延迟，健健脾益气气药能增增加胃泌泌素的分分泌。5急腹腹症与腹腹部手术术后脾虚虚

30、证患者者血清TT3水平显显著低下下，rTT3明显增增高，TT3/ rrT3比值减减小。八肾虚虚证神经经内分泌泌有何异异常表现现？（一）下下丘脑-垂体-性腺轴轴与肾虚虚1肾阳阳虚患者者性腺轴轴调节功功能呈现现一定程程度的紊紊乱。肾肾阴虚者者促卵泡泡素（FFSH）偏偏低较多多，肾阳阳虚者雌雌二醇升升高，睾睾酮偏低低较多，部部分患者者黄体生生成素亦亦有明显显变化，说说明肾阴阴虚与肾肾阳虚之之间的激激素水平平有明显显差别；肾阴、阳阳俱虚则则FSHH、LHH和T均均低下。2肾虚虚者的血血浆E22、T及及E2/T比比值，以以健康老老人作对对照，结结果肾虚虚组中男男性T低低于对照照组，而而E2则高于于对照组

31、组；肾虚虚组中女女性E22低于对对照组，而而T无显显著性差差异。3老年年女性冠冠心病肾肾虚患者者育健康康对照组组比较，EE2、E2/T肾肾阳虚患患者明显显降低，肾肾阴虚组组明显升升高，差差异显著著；而肾肾虚两组组之间比比较差异异更为显显著。4补肾肾方药能能明显提提高老年年大鼠（肾肾虚衰老老）下丘丘脑胞浆浆E2和核双双氢睾酮酮（DHHT）受受体数，使使之接近近于青年年组水平平，同时时使下丘丘脑DHHT受体体与激素素反应的的结合常常数Kdd较正常常组老年年大鼠显显著提高高，反映映受体与与激素结结合的亲亲和力提提高。（二）下下丘脑-垂体-肾上腺腺轴与肾肾虚1肾阳阳虚证患患者尿117羟均均值治疗疗后显

32、著著高于治治疗前，AACTHH滴注试试验呈延延迟反应应，治疗疗后复查查其值均均恢复至至正常；血浆AACTHH浓度治治疗后显显著高于于治疗前前；血皮皮质醇昼昼夜节律律呈异常常曲线者者，治疗疗后得以以恢复。2补肾肾益精方方药固真真方能明明显提高高老年大大鼠（肾肾虚衰老老）海马马细胞降降低的糖糖皮质激激素受体体（GCCR）数数，提高高下丘脑脑降低的的NE、DDA和55-HTT含量，降降低老年年大鼠异异常升高高的血浆浆皮质酮酮，使之之趋于正正常青年年对照组组。（三）下下丘脑-垂体-甲状腺腺轴与肾肾虚1肾阳阳虚者血血清总TT3含量，与与治疗前前相比较较显著增增高，TTRH兴兴奋试验验呈延迟迟反应，经经治疗后后得以恢恢复。2肾虚虚型恶性性肿瘤患患者的甲甲状腺功功能，其其肾阴虚虚、肾阳阳虚两组组的血清清T3、T4含量均均显著低低于健康康对照组组，肾虚虚两组间间T3相接近近，T44则以肾肾阳虚组组更低下下，肾阳阳虚组代代偿率仅仅9.00%，两两组有显显著差异异。因此此认为，3老年年大鼠（肾肾虚衰老老）血清清T3、T4、F T3、F T4和L-EK（亮亮氨酸脑脑啡肽）含量明显下降，rT3显著增加，血清TRH和TSH呈代偿性增高，揭示老年大鼠血清T3下降与T4转化为rT3反应增高及甲状腺对TSH的反应性降低有关；L-EK具有降低TSH水平的作用，推测血清TSH的增高可能也与L-EK下降有关。