细胞生物学gxzz.docx

《细胞生物学gxzz.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《细胞生物学gxzz.docx（177页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、细胞生生物学复复习提纲纲1.细胞胞概述1. 细细胞(ccelll)细胞是由由膜包围围着含有有细胞核核(或拟拟核)的的原生质质所组成成, 是是生物体体的结构构和功能能的基本本单位，也是生生命活动动的基本本单位。细细胞能够够通过分分裂而增增殖，是是生物体体个体发发育和系系统发育育的基础础。细胞胞或是独独立的作作为生命命单位，或是多多个细胞胞组成细细胞群体体或组织织、或器器官和机机体；细细胞还能能够进行行分裂和和繁殖；细胞是是遗传的的基本单单位，并并具有遗遗传的全全能性。2. 细细胞质(celll pplassma)是细胞内内除核以以外的原原生质，即细胞胞中细胞胞核以外外和细胞胞膜以内内的原生生质部

2、分分，包括透透明的粘粘液状的的胞质溶溶胶及悬悬浮于其其中的细细胞器。3. 原原生质(prootopplassm)生活细胞胞中所有有的生活活物质，包括细细胞核和和细胞质质。4. 原原生质体体(pootopplasst)脱去细胞胞壁的细细胞叫原原生质体体，是一生生物工程程学的概概念。如如植物细细胞和细细菌(或或其它有有细胞壁壁的细胞胞)通过过酶解使使细胞壁壁溶解而而得到的的具有质质膜的原原生质球球状体。动动物细胞胞就相当当于原生生质体。5. 细细胞生物物学(ccelll biioloogy)细胞生物物学是以以细胞为为研究对对象，从细胞胞的整体体水平、亚亚显微水水平、分分子水平平等三个个层次，以以动

3、态的的观点，研究细细胞和细细胞器的的结构和和功能、细细胞的生生活史和和各种生生命活动动规律的的学科。细细胞生物物学是现现代生命命科学的的前沿分分支学科科之一，主主要是从从细胞的的不同结结构层次次来研究究细胞的的生命活活动的基基本规律律。从生生命结构构层次看看，细胞胞生物学学位于分分子生物物学与发发育生物物学之间间，同它它们相互互衔接，互互相渗透透。6. 细细胞学说说(ceell theeoryy)细胞学说说是1883818339年间间由德国国的植物物学家施施莱登和和动物学学家施旺旺所提出出，直到118588年才较较完善。它它是关于于生物有有机体组组成的学学说，主主要内容容有： 细胞胞是有机机体

4、， 一切动动植物都都是由单单细胞发发育而来来， 即即生物是是由细胞胞和细胞胞的产物物所组成成； 所有有细胞在在结构和和组成上上基本相相似； 新细细胞是由由已存在在的细胞胞分裂而而来； 生物物的疾病病是因为为其细胞胞机能失失常。7. 原原生质理理论（pprottopllasmm thheorry） 18611年由舒舒尔策(Maxx Scchulltzee)提出出，认为有有机体的的组织单单位是一一小团原原生质，这种物物质在一一般有机机体中是是相似的的，并把细细胞明确确地定义义为：“细胞胞是具有有细胞核核和细胞胞膜的活活物质”。118800年Haansttainn将细胞胞概念演演变成由由细胞膜膜包围

5、着着的原生生质，分化为为细胞核核和细胞胞质。8. 细细胞遗传传学(ccytoogennetiics)遗传学和和细胞学学结合建建立了细细胞遗传传学，主主要是从从细胞学学的角度度，特别是是从染色色体的结结构和功功能，以及染染色体和和其他细细胞器的的关系来来研究遗遗传现象象，阐明遗遗传和变变异的机机制。9. 细细胞生理理学(ccytoophyysioologgy)细胞学同同生理学学结合建建立了细细胞生理理学，主主要研究究内容包包括细胞胞从周围围环境中中摄取营营养的能能力、代代谢功能能、能量量的获取取、生长长、发育育与繁殖殖机理，以及细细胞受环环境的影影响而产产生适应应性和运运动性的的活动。细细胞的离

6、离体培养养技术对对细胞生生理学的的研究具具有巨大大贡献。10.细细胞化学学(cyytocchemmisttry)细胞学和和化学的的结合产产生了细细胞化学学，主要是是研究细细胞结构构的化学学组成及及化学分分子的定定位、分分布及其其生理功功能，包括定定性和定定量分析析。如119433年克劳劳德(CClauude)用高速速离心法法从细胞胞匀浆液液中分离离线粒体体，然后后研究它它的化学学组成和和生理功功能并得得出结论论：线粒体体是细胞胞氧化中中心。119244年Feeulggen发发明的DDNA的的特殊染染色方法法euulgeen反应应开创了了DNAA的定性性和定量量分析。11. 分子生生物学(mol

7、lecuularr biioloogy)在分子水水平上研研究生命命现象的的科学。研研究生物物大分子子(核酸酸、蛋白白质)的的结 构构、功能能和生物物合成等等方面来来阐明各各种生命命现象的的本质。研研究内容容包括各各种生命命过程如如光合作作用、发发育的分分子机制制、神经经活动的的机理、癌癌的发生生等。12. 分子细细胞生物物学(mmoleecullar bioologgy oof tthe celll)以细胞为为对象，主要在在分子水水平上研研究细胞胞生命活活动的分分子机制制，即研究究细胞器器、生物物大分子子与生命命活动之之间的变变化发展展过程，研究它它们之间间的相互互关系，以及它它们与环环境之间

8、间的相互互关系。13. 支原体体(myycopplassma)又称霉形形体，是是最简单单的原核核细胞，支支原体的的大小介介于细菌菌与病毒毒之间，直径为为0.110.3m，约为细细菌的十十分之一一，能够通通过滤菌菌器。支支原体形形态多变变，有圆形形、丝状状或梨形形，光镜镜下难以以看清其其结构。支支原体具具有细胞胞膜，但但没有细细胞壁。它它有一环环状双螺螺旋DNNA，没没有类似似细菌的的核区(拟核)，能指导导合成7700多多种蛋白白质。支支原体细细胞中惟惟一可见见的细胞胞器是核核糖体，每每个细胞胞中约有有800015500个个。支原原体可以以在培养养基上培培养，也也能在寄寄主细胞胞中繁殖殖。支原体

9、没没有鞭毛毛，无活动动能力，可以通通过分裂裂法繁殖殖，也有有进行出出芽增殖殖的。14. 结构域域(doomaiin)生物大分分子中具具有特异异结构和和独立功功能的区区域，特别指指蛋白质质中这样样的区域域。在球球形蛋白白中，结结构域具具有自己己特定的的四级结结构，其功能能部依赖赖于蛋白白质分子子中的其其余部分分，但是同同一种蛋蛋白质中中不同结结构域间间常可通通过不具具二级结结构的短短序列连连接起来来。蛋白白质分子子中不同同的结构构域常由由基因的的不同外外显子所所编码。15. 模板组组装(ttempplatte aasseemblly)由模板指指导，在一系系列酶的的催化下下,合成成新的、与与模板完

10、完全相同同的分子子。这是是细胞内内一种极极其重要要的组装装方式，DNAA和RNNA的分分子组装装就属于于此类。16. 酶效应应组装(enzzymaaticc asssemmblyy)相同的单单体分子子在不同同的酶系系作用下下，生成不不同的产产物。如如以葡萄萄糖为原原料既可可合成纤纤维素，也可合合成淀粉粉，就看进进入那条条酶促反反应途径径。17. 自体组组装(sselff asssemmblyy)生物大分分子借助助本身的的力量自自行装配配成高级级结构，现现代的概概念应理理解为不不需要模模板和酶酶系的催催化，以别于于模板组组装和酶酶效应组组装。其其实，这这种组装装也需要要一种称称为分子子伴侣的的蛋

11、白介介导，如核小小体的组组装就需需要核质质素的介介导。18. 引发体体(prrimoosomme)蛋白复合合体，主要成成份是引引物酶和和DNAA解旋酶酶，是在合合成用于于DNAA复制的的RNAA引物时时装配的的。引发发体与DDNA结结合后随随即由引引物酶合合成RNNA引物物。19. 剪接体体(sppliccesoome) 进行hnnRNAA剪接时时形成的的多组分分复合物物，主要是是有小分分子的核核RNAA和蛋白白质组成成。20 原原核细胞胞(prrokaaryooticc ceell)组成原核核生物的的细胞。这这类细胞胞主要特特征是没没有明显显可见的的细胞核核，同时也也没有核核膜和核核仁, 只

12、有拟拟核，进进化地位位较低。21. 古细菌菌(arrchaaebaacteeriaa)一类特殊殊细菌，在在系统发发育上既既不属真真核生物物，也不不属原核核生物。它它们具有有原核生生物的某某些特征征(如无无细胞核核及细胞胞器)，也也有真核核生物的的特征(如以甲甲硫氨酸酸起始蛋蛋白质的的合成，核核糖体对对氯霉素素不敏感感)，还还具有它它们独有有的一些些特征(如细胞胞壁的组组成，膜膜脂质的的类型)。因之之有人认认为古细细菌代表表由一共共同祖先先传来的的第三界界生物(古细菌菌，原核核生物，真真核生物物)。它它们包括括酸性嗜嗜热菌，极极端嗜盐盐菌及甲甲烷微生生物。可可能代表表了活细细胞的某某些最早早期的

13、形形式。22. 真细菌菌(Baacteeriaa, eeubaacteeriaa)除古细菌菌以外的的所有细细菌均称称为真细细菌。最最初用于于表示“真真”细菌菌的名词词主要是是为了与与其他细细菌相区区别。23. 中膜体体(meesossomee)中膜体又又称间体体或质膜膜体，是细菌菌细胞质质膜向细细胞质内内陷折皱皱形成的的。每个个细胞有有一个或或数个中中膜体，其其中含有有细胞色色素和琥琥珀酸脱脱氢酶，为细胞胞提供呼呼吸酶，具有类类似线粒粒体的作作用，故又称称为拟线线粒体。24. 真核细细胞(eeucaaryooticc ceell) 构成真核核生物的的细胞称称为真核核细胞，具具有典型型的细胞胞结

14、构, 有明明显的细细胞核、核核膜、核核仁和核核基质；遗传信信息量大大，并且且有特化化的膜相相结构。真真核细胞胞的种类类繁多，既包括括大量的的单细胞胞生物和和原生生生物(如如原生动动物和一一些藻类类细胞)，又包括括全部的的多细胞胞生物(一切动动植物)的细胞胞。25. 生物膜膜结构体体系(bbiommembbranne ssysttem)细胞内具具有膜包包被结构构的总称称，包括细细胞质膜膜、核膜膜、内质质网、高高尔基体体、溶酶酶体、线线粒体和和叶绿体体等。膜结构体体系的基基本作用用是为细细胞提供供保护。质质膜将整整个细胞胞的生命命活动保保护起来来，并进进行选择择性的物物质交换换；核膜膜将遗传传物质

15、保保护起来来，使细细胞核的的活动更更加有效效；线粒粒体和叶叶绿体的的膜将细细胞的能能量发生生同其它它的生化化反应隔隔离开来来，更好好地进行行能量转转换。膜结构体体系为细细胞提供供较多的的质膜表表面，使使细胞内内部结构构区室化化。由于于大多数数酶定位位在膜上上，大多多数生化化反应也也是在膜膜表面进进行的，膜膜表面积积的扩大大和区室室化使这这些反应应有了相相应的隔隔离，效效率更高高。另外，膜膜结构体体系为细细胞内的的物质运运输提供供了特殊殊的运输输通道，保保证了各各种功能能蛋白及及时准确确地到位位而又互互不干扰扰。例如如溶酶体体的酶合合成之后后不仅立立即被保保护起来来，而且且一直处处于监护护之下被

16、被运送到到溶酶体体小泡。 26. 遗传信信息表达达结构系系统(ggeneeticc exxpreessiion sysstemm)该系统又又称为颗颗粒纤维维结构系系统，包包括细胞胞核和核核糖体。细细胞核中中的染色色质是纤纤维结构构，由DDNA和和组蛋白白构成。染染色体的的一级结结构是由由核小体体组成的的串珠结结构，其其直径为为10nnm，又称为为10纳纳米纤维维。核糖糖体是由由RNAA和蛋白白质构成成的颗粒粒结构，直直径为115225nmm，由大大小两个个亚基组组成，它它是细胞胞内合成成蛋白质质的场所所。27. 细胞骨骨架系统统(cyytosskelletoonicc syysteem)细胞骨

17、架架是由蛋蛋白质与与蛋白质质搭建起起的骨架架网络结结构，包包括细胞胞质骨架架和细胞胞核骨架架。细胞胞骨架系系统的主主要作用用是维持持细胞的的一定形形态，使使细胞得得以安居居乐业。细细胞骨架架对于细细胞内物物质运输输和细胞胞器的移移动来说说又起交交通动脉脉的作用用; 细细胞骨架架还将细细胞内基基质区域域化；此此外，细细胞骨架架还具有有帮助细细胞移动动行走的的功能。细细胞骨架架的主要要成分是是微管、微微丝和中中间纤维维。28. 细胞社社会学(celll ssociioloogy)细胞社会会学是从从系统论论的观点点出发，研研究细胞胞整体和和细胞群群体中细细胞间的的社会行行为(包包括细胞胞间识别别、通

18、讯讯、集合合和相互互作用等等)，以以及整体体和细胞胞群对细细胞的生生长、分分化和死死亡等活活动的调调节控制制。细胞胞社会学学主要是是在体外外研究细细胞的社社会行为为，用人人工的细细胞组合合研究不不同发育育时期的的相同细细胞或不不同细胞胞的行为为; 研研究细胞胞之间的的识别、粘粘连、通通讯以及及由此产产生的相相互作用用、作用用本质、以以及对形形态发生生的影响响等。2.细胞胞生物学学研究方方法1. 分分辨率(ressoluutioon)分辨率是是指能分分辨出的的相邻两两个物点点间最小小距离的的能力， 这种距距离称为为分辨距距离。分分辨距离离越小，分分辨率越越高。一一般规定定：显微镜镜或人眼眼在25

19、5cm明明视距离离处，能清楚楚地分辨辨被检物物体细微微结构最最小间隔隔的能力力，称为分分辨率。人人眼的分分辨率是是 1000mm；光学显显微镜的的最大分分辨率是是0.22m。2. 荧荧光(ffluooresscennce)分子由激激发态回回到基态态时，由由于电子子跃迁而而由被激激发分子子发射的的光。物物质经过过紫外线线照射后后发出荧荧光的现现象可分分为两种种情况，第第一种是是自发荧荧光，如如叶绿素素、血红红素等经经紫外线线照射后后，能发发出红色色的荧光光，称为为自发荧荧光;第第二种是是诱发荧荧光，即即物体经经荧光染染料染色色后再通通过紫外外线照射射发出荧荧光，称为诱诱发荧光光。3. 荧荧光显微

20、微镜(FFluooresscennce miccrosscoppe)以紫外线线为光源源，用以以照射被被检物体体，使之之发出荧荧光，然然后在显显微镜下下观察物物体的形形状及其其所在位位置。荧荧光显微微镜用于于研究细细胞内物物质的吸吸收、运运输、化化学物质质的分布布及定位位等。4. 相相差显微微镜(PPhasse cconttrasst mmicrrosccopee)相差显微微镜是荷荷兰科学学家Zeermiike于于19335年发发明的，用用于观察察未染色色标本的的显微镜镜。活细细胞和未未染色的的生物标标本，因因细胞各各部细微微结构的的折射率率和厚度度的不同同，光波波通过时时，波长长和振幅幅并不发

21、发生变化化，仅相相位发生生变化(振幅差差)，这这种振幅幅差人眼眼无法观观察。而而相差显显微镜通通过改变变这种相相位差，并并利用光光的衍射射和干涉涉现象，把把相差变变为振幅幅差来观观察活细细胞和未未染色的的标本。相相差显微微镜和普普通显微微镜的区区别是:用环状状光阑代代替可变变光阑，用用带相板板的物镜镜代替普普通物镜镜，并带带有一个个合轴用用的望远远镜。相差显微微镜具有有两个其其他显微微镜所不不具有的的功能：将直射射的光(视野中中背景光光)与经经物体衍衍射的光光分开；将大约约一半的的波长从从相位中中除去，使使之不能能发生相相互作用用，从而而引起强强度的变变化。5. 放放射自显显影(aautoor

22、addioggrapphy)放射自显显影的原原理是利利用放射射性同位位素所发发射出来来的带电电离子(或粒子)作用于于感光材材料的卤卤化银晶晶体，从从而产生生潜影，这这种潜影影可用显显影液显显示，成成为可见见的像像，因因此，它它是利用用卤化银银乳胶显显像检查查和测量量放射性性的一种种方法。放射性核核素的原原子不断断衰变，当当衰变掉掉一半时时所需要要的时间间称为半半衰期。各各种放射射性核素素的半衰衰期长短短不同(表)，在在自显影影实验中中多选用用半衰期期较长者者。对于于半衰期期较短的的核素，应应选用较较快的样样品制备备方法，所所用剂量量也应加加大。表 自显显影实验验中常用用核素的的半衰期期与能量量

23、名称 半寿期期粒子类类型 能量(MeVV) 名称 半寿期期 粒子类类型 能量(MeVV) 3H 12.3 yyr 0.0018 45Caa 1522 d 0.22611C20 minn 0.9981 59Fee 45 d 0.44614C557000 yrr0.1155 1.33032P 14.3 dd 1.771 60Coo 5.33 yrr 0.330835S 87.2 dd 00.1667 64Cuu 12.8 hhr 0.6657131II 8.00 d 0.225 1.3356. 扫扫描电子子显微镜镜(sccannningg ellecttronn miicrooscoopy，SSE

24、M)扫描电子子显微镜镜是19965年年发明的的较现代代的细胞胞生物学学研究工工具，主主要是利利用二次次电子信信号成像像来观察察样品的的表面形形态，即即用极狭狭窄的电电子束去去扫描样样品，通通过电子子束与样样品的相相互作用用产生各各种效应应，其中中主要是是样品的的二次电电子发射射。二次次电子能能够产生生样品表表面放大大的形貌貌像，这这个像是是在样品品被扫描描时按时时序建立立起来的的，即使使用逐点点成像的的方法获获得放大大像。7. 扫扫描透射射电子显显微镜(scaanniing traansmmisssionn ellecttronn miicrooscoopy，SSTEMM)既有透射射电子显显微

25、镜又又有扫描描电子显显微镜的的显微镜镜。象SSEM一一样，SSTEMM用电子子束在样样品的表表面扫描描，但又又象TEEM，通通过电子子穿透样样品成像像。STTEM能能够获得得TEMM所不能能获得的的一些关关于样品品的特殊殊信息。SSTEMM技术要要求较高高，要非非常高的的真空度度，并且且电子学学系统比比TEMM和SEEM都要要复杂。 8. 高高压电子子显微镜镜(hiigh-volltagge eelecctroon mmicrrosccopyy，HVVEM) 同透射电电子显微微镜基本本相同，只只是电压压特别高高。TEEM使用用的加速速电压是是501000kV，而而HVEEM使用用的电压压是20

26、00110000kV。由由于电压压高，就就会大大大减少造造成染色色体畸变变的可能能，因此此，可以以用较厚厚的细胞胞切片研研究细胞胞的结构构，切片片的厚度度最大可可达1m，相相当于普普通TEEM样品品厚度的的10倍倍。9. 负负染色(neggatiive staainnningg)用重金属属盐(如如磷钨酸酸钠、醋醋酸铀等等)对铺铺展在载载网上的的样品进进行染色色，使整整个载网网都铺上上一层重重金属盐盐，而有有凸出颗颗粒的地地方则没没有染料料沉积。由由于电子子密度高高的重金金属盐包包埋了样样品中低低电子密密度的背背景，增增强了背背景散射射电子的的能力以以提高反反差，这这样，在在图像中中背景是是黑暗

27、的的，而未未被包埋埋的样品品颗粒则则透明光光亮，这这种染色色称为负负染技术术。负染染色是只只染背景景而不染染样品，与与光学显显微镜样样品的染染色正好好相反。10. 铸型技技术(sshaddow casstinng) 铸型技术术是电子子显微镜镜中一种种重要的的增强背背景和待待观察样样品反差差的方法法。基本本过程包包括：将样品品置于云云母的表表面，然然后干燥燥；在真空空装置中中将样品品镀上一一层重金金属(金金或铂金金)，喷喷镀时的的加热丝丝具有一一定的角角度；将样品品镀上一一层碳原原子，以以增加铸铸型的强强度和稳稳定性；将铸型型置于酸酸池中，破破坏样品品，只留留下金属属铸型；将铸型型漂洗后后置于载

28、载网上进进行电子子显微镜镜观察。11. 冰冻断断裂复型型(frreezze-ffraccturre rrepllicaatioon)技技术先将生物物样品在在液氮中中(-1196)进行行快速冷冷冻，防防止形成成冰晶。然然后将冷冷冻的样样品迅速速转移到到冷冻装装置中，并并迅速抽抽成真空空。在真真空条件件下，用用冰刀横横切冰冻冻样品，使使样品内内层被分分开露出出两个表表面。如如用冰刀刀切开细细胞膜时时，分开开的两个个面分别别称为PP面(pprottopllasmmic facce)和和E面(exooplaasmiic ffacee)，PP面是靠靠近细胞胞质一面面的半层层膜，而而E面则则是靠近近细胞外

29、外基质面面的半层层膜，可可清楚地地观察到到镶嵌蛋蛋白。12. 冰冻蚀蚀刻(ffreeeze-etcchinng)技技术是在冰冻冻断裂技技术的基基础上发发展起来来的更复复杂的复复型技术术。如果果将冰冻冻断裂的的样品的的温度稍稍微升高高，让样样品中的的冰在真真空中升升华，而而在表面面上浮雕雕出细胞胞膜的超超微结构构。当大大量的冰冰升华之之后，对对浮雕表表面进行行铂-碳碳复型，并并在腐蚀蚀性溶液液中除去去生物材材料， 复型经经重蒸水水多次清清洗后，置置于载网网上作电电镜观察察。13. 扫描隧隧道显微微镜(sscannninng ttunnneliing miccrosscoppe，STMM)扫描隧道

30、道显微镜镜使用电电子学的的方法，用用一个金金属针尖尖在在样样品表面面扫描。当当针尖和和样品表表面距离离很近时时(1nnm以下下)， 针尖和和样品表表面之间间会产生生电压。当当针尖沿沿X和YY方向在在样品表表面扫描描时，就就会在针针尖和样样品表面面第一层层电子之之间产生生电子隧隧道。该该显微镜镜设计的的沿Z字字形扫描描， 可可保持电电流的恒恒定。因因此，针针尖的移移动是隧隧道电流流的作用用，并且且可以反反映在荧荧光幕上上。连续续的扫描描可以建建立起原原子级分分辨率的的表面像像。与电子显显微镜或或 X线线衍射技技术研究究生物结结构相比比，扫描描隧道显显微镜具具有以下下特点： 高分分辨率 扫描隧隧道

31、显微微镜具有有原子级级的空间间分辨率率，其横横向空间间分辨率率为 ll，纵纵向分辨辨率达00.1。 扫描描隧道显显微镜可可直接探探测样品品的表面面结构，可可绘出立立体三维维结构图图像。 扫描描隧道显显微镜可可在真空空、常压压、空气气、甚至至溶液中中探测物物质的结结构。由由于没有有高能电电子束， 对表面面没有破破坏作用用(如辐辐射， 热损伤伤等)所所以能对对生理状状态下生生物大分分子和活活细胞膜膜表面的的结构进进行研究究，样品品不会受受到损伤伤而保持持完好。 扫描描隧道显显微镜的的扫描速速度快，获获取数据据的时间间短，成成像也快快，有可可能开展展生命过过程的动动力学研研究。 不需需任何透透镜，

32、体积小小，有人人称之为为口袋袋显微镜镜(ppockket miccrosscoppe)。14. 酶细胞胞化学技技术(eenzyyme cyttochhemiistrry) 将细胞内内的酶与与底物相相互作用用， 再再将酶反反应的产产物作为为反应物物质，在在酶的作作用部位位进行捕捕捉，使使其在显显微镜下下具有可可见性。这这种在酶酶作用下下产生反反应产物物， 经经捕捉反反应来间间接证明明酶定位位的反应应称为酶酶的细胞胞化学反反应。酶的细胞胞化学反反应包括括两个反反应：第一反反应是酶酶作用于于底物的的反应， 称酶反反应，形形成的产产物称为为初级反反应产物物；第二反反应是捕捕捉剂与与初级反反应产物物的作

33、用用，称捕捕捉反应应，产生生最终反反应产物物。15. 免疫荧荧光技术术(immmunnoflluorresccencce)将免疫学学方法(抗原抗抗体特异异结合)与荧光光标记技技术结合合起来研研究特异异蛋白抗抗原在细细胞内分分布的方方法。由由于荧光光素所发发的荧光光可在荧荧光显微微镜下检检出，从从而可对对抗原进进行细胞胞定位。16. 免疫电电镜(iimmuunoeelecctroon mmicrrosccopyy)将抗体进进行特殊殊标记后后用电子子显微镜镜观察免免疫反应应的结果果。根据据标记方方法的不不同，分为免免疫铁蛋蛋白技术术、免疫疫酶标技技术和免免疫胶体体金技术术。如免免疫铁蛋蛋白技术术是

34、将含含铁蛋白白通过一一种低分分子量的的双功能能试剂与与抗体结结合，成成为一种种双分子子复合物物，它既既保留抗抗体的免免疫活性性，又具具有电镜镜下可见见的高电电子密度度铁离子子核心，因因此用铁铁蛋白标标记的抗抗体可通通过电镜镜免疫化化学的方方法在电电镜下定定位细胞胞中的抗抗原。由由于某些些固定技技术(如如锇酸固固定)对对抗体抗抗原的结结合有干干扰，因因此应采采取较为为温和的的样品制制备方法法。17. 染色体体分选(chrromoosomme ssorttingg)用流式细细胞计分分选特定定的染色色体，基基本过程程与细胞胞分选相相似。不不同的是是，要用用带有荧荧光标记记的DNNA探针针同特异异染色

35、体体结合，使使待分选选的染色色体带上上标记。在在染色体体分选中中，使用用的探针针是同所所感兴趣趣染色体体互补的的寡聚核核苷酸，这这种探针针也可同同荧光染染料偶联联。将结结合有荧荧光染料料的探针针同染色色体一起起温育，使使探针同同特异染染色体杂杂交，形形成稳定定的杂交交体，这这样染色色体就被被带上了了荧光标标记，稀稀释后送送入流式式细胞计计的流室室，然后后与细胞胞分选过过程一样样将特异异的染色色体分选选出来。18. 显微分分光光度度术(mmicrrosppecttropphottomeetryy)将显微镜镜技术与与分光光光度计结结合起来来的技术术。它以以物质分分子的光光吸收、荧荧光发射射和光反反

36、射特性性作为测测定基础础，可用来来分析生生物样品品细微结结构中的的化学成成分，同同时进行行定位、定定性和定定量。19. 显微荧荧光光度度术(mmicrroflluorromeetryy)利用显微微分光光光度计对对细胞内内原有能能发光的的物质或或对细胞胞内各种种化学成成分用不不同的荧荧光经荧荧光探针针标记后后进行定定位、定定性和定定量地测测定，称称为显微微荧光光光度术，也称细细胞荧光光光度术术(cyytoffluoorommetrry)。它它是一种种微观而而灵敏的的方法，对对于研究究细胞的的结构、功功能及其其变化具具有重要要意义。20 核核磁共振振技术(nuccleaar mmagnnetiic

37、 rresoonannce，NNMR)核磁共振振技术可可以直接接研究溶溶液和活活细胞中中相对分分子质量量较小(200000DDa以下下)的蛋蛋白质、核核酸以及及其它分分子的结结构，而不损损伤细胞胞。核磁共振振的基本本原理是是:原子子核有自自旋运动动，在恒定定的磁场场中，自旋的的原子核核将绕外外加磁场场作回旋旋转动，叫进动动(prreceessiion)。进动动有一定定的频率率，它与所所加磁场场的强度度成正比比。如在在此基础础上再加加一个固固定频率率的电磁磁波，并调节节外加磁磁场的强强度，使进动动频率与与电磁波波频率相相同。这时原原子核进进动与电电磁波产产生共振振，叫核磁磁共振。核核磁共振振时，

38、原子核核吸收电电磁波的的能量，记录下下的吸收收曲线就就是核磁磁共振谱谱(NMMR-sspecctruum)。由由于不同同分子中中原子核核的化学学环境不不同，将会有有不同的的共振频频率，产生不不同的共共振谱。记记录这种种波谱即即可判断断该原子子在分子子中所处处的位置置及相对对数目，用以进进行定量量分析及及分子量量的测定定，并对有有机化合合物进行行结构分分析。21. 细胞工工程技术术(ceell enggineeeriing)细胞工程程技术是是细胞生生物学与与遗传学学的交叉叉领域，主主要利用用细胞生生物学的的原理和和方法，结结合工程程学的技技术手段段，按照照人们预预先的设设计，有有计划地地改变或或

39、创造细细胞遗传传性的技技术。包包括体外外大量培培养和繁繁殖细胞胞，或获获得细胞胞产品、或或利用细细胞体本本身。主主要内容容包括：细胞融融合、细细胞生物物反应器器、染色色体转移移、细胞胞器移植植、基因因转移、细细胞及组组织培养养。22. 原代培培养(pprimmaryy cuultuure)原代培养养是指直直接从机机体取下下细胞、组组织和器器官后立立即进行行培养。因因此，较较为严格格地说是是指成功功传代之之前的培培养，此此时的细细胞保持持原有细细胞的基基本性质质，如果果是正常常细胞，仍仍然保留留二倍体体数。但但实际上上，通常常把第一一代至第第十代以以内的培培养细胞胞统称为为原代细细胞培养养。最常

40、常用的原原代培养养有组织织块培养养和分散散细胞培培养。组织块培培养是将将剪碎的的组织块块直接移移植在培培养瓶壁壁上，加加入培养养基后进进行培养养。分散培养养则是将将组织块块用机械械法或化化学法使使细胞分分散。如如欲从胎胎儿或新新生儿的的组织分分离到活活性最好好的游离离细胞，经经典的方方法是用用蛋白水水解酶（如如胰蛋白白酶和胶胶原酶）消消化细胞胞间的结结合物， 或用金金属离子子螯合剂剂（如EEDTAA）除去去细胞互互相粘着着所依赖赖的Caa2+，再再经机械械轻度振振荡， 使之成成为单细细胞。23. 愈伤组组织(ccalllus，ccullli)植物受创创伤后，在在伤面新新生的组组织称为为愈伤组组

41、织。其其原因是是由于受受创伤的的刺激后后，伤面面附近的的生活组组织恢复复了分裂裂机能，加加速增生生而将伤伤面愈合合。在植植物组织织培养中中的愈伤伤组织是是指植物物细胞在在组织培培养过程程中形成成的无一一定结构构的组织织团块，在在适宜的的条件下下，愈伤伤组织可可再分化化，形成成芽、根根，再生生成植株株。24. 细胞融融合(ccelll fuusioon)在自发或或人工诱诱导下，两两个不同同基因型型的细胞胞或原生生质体融融合形成成一个杂杂种细胞胞。基本本过程包包括细胞胞融合形形成异核核体(hheteerokkaryyon)、异核核体通过过细胞有有丝分裂裂进行核核融合、最最终形成成单核的的杂种细细胞

42、。有有性繁殖殖时发生生的精卵卵结合是是正常的的细胞融融合，即即由两个个配子融融合形成成一个新新的的二二倍体。自发的动动物细胞胞融合机机率很低低，19962年年Okaada和和Taddokooro发发现灭活活的仙台台病毒有有促进细细胞融合合的作用用。这是是由于病病毒的磷磷脂外衣衣与动物物细胞的的膜十分分相似的的缘故。病病毒外壳壳上的某某些糖蛋蛋白可能能还有促促进细胞胞融合的的功能。此此外，用用聚乙二二醇(ppolyyethhyleene glyycoll，PEEG)作作为细胞胞融合剂剂，它可可引起邻邻近的细细胞膜的的粘合，继继而使细细胞融合合成为一一个细胞胞。25. 单克隆隆抗体技技术(mmon

43、oocloonall anntibbodyy teechnniquue)19755年英国国科学家家Millsteein和和Kohhlerr所发明明， 并并获得119844年诺贝贝尔医学学奖。它它是将产产生抗体体的单个个B淋巴巴细胞同同肿瘤细细胞杂交交， 获获得既能能产生抗抗体， 又能无无限增殖殖将杂种种细胞，并并以此生生产抗体体的技术术。其原原理是: B淋淋巴细胞胞能够产产生抗体体， 但但在体外外不能进进行无限限分裂; 而瘤瘤细胞虽虽然可以以在体外外进行无无限传代代， 但但不能产产生抗体体。将这这两种细细胞融合合后得到到的杂交交瘤细胞胞具有两两种亲本本细胞的的特性。26. 显微操操作术(mic

44、crommaniipullatiion)在显微镜镜下， 用显微微操作装装置对细细胞进行行解剖手手术和微微量注射射的技术术属显微微操作技技术。显显微操作作仪是在在显微镜镜下对细细胞进行行显微操操作的装装置，可可用于细细胞核移移植、基基因注入入、染色色体微切切和胚胎胎切割等等手术。 27. 差速离离心(ddifffereentiial cenntriifuggatiion)主要是采采取逐渐渐提高离离心速度度的方法法分离不不同大小小的细胞胞器。起起始的离离心速度度较低，让让较大的的颗粒沉沉降到管管底，小小的颗粒粒仍然悬悬浮在上上清液中中。收集集沉淀，改改用较高高的离心心速度离离心悬浮浮液，将将较小的

45、的颗粒沉沉降，以以此类推推，达到到分离不不同大小小颗粒的的目的。28. 移动区区带离心心(moovinng-zzonee ceentrrifuugattionn)这一方法法需要用用蔗糖或或甘油制制备轻微微的连续续密度，然然后将待待分离的的样品加加在离心心管的最最上层，形形成一狭狭窄的带带，再通通过较长长时间的的离心。在在离心过过程中，大大小、形形状、密密度不同同的颗粒粒就会分分开，最最后收集集各区带带得到要要分离的的物质。在在此方法法中，分分离介质质对被分分离的物物质必须须是中性性无害的的，并且且密度梯梯度较低低，底部部的密度度比管顶顶部的密密度大，建建立密度度梯度的的目的是是防止扩扩散。重重

46、要的是是，待分分离颗粒粒的密度度比离心心管中任任何部分分介质的的密度都都要大。常常用的是是蔗糖密密度梯度度离心(succrosse ddenssityy grradiientt ceentrrifuugattionn)。 29. 等密度度离心(isoodennsitty ccenttriffugaatioon)等密度离离心分离离样品主主要是根根据被分分离样品品的密度度。在这这种离心心分离方方法中，要要用介质质产生一一种密度度梯度， 这种密密度梯度度覆盖了了待分离离物质的的密度，这这样，通通过离心心使不同同密度的的颗粒悬悬浮到相相应的介介质密度度区。在在这种梯梯度离心心中，颗颗粒的密密度是影影响

47、最终终位置的的惟一因因素，因因此用这这种方法法分离颗颗粒，主主要是根根据被分分离颗粒粒的密度度差异。只只要被分分离颗粒粒间的密密度差异异大于11% 就就可用此此法分离离。蔗糖或者者甘油(它们的的最大密密度是11.3gg/cmm3)通常常可用于于分离膜膜结合的的细胞器器，如高高尔基体体、内质质网、溶溶酶体和和线粒体体。在等等密度梯梯度离心心中蔗糖糖或甘油油的梯度度的作用用与移动动区带离离心中梯梯度原理理是不同同的，在在移动区区带离心心中梯度度的惟一一目的是是减少样样品的扩扩散， 即使是是在离心心管的底底部，颗颗粒的密密度也比比介质大大。相反反，在等等密度梯梯度离心心中，使使用的密密度是足足以阻止止颗粒移移动的密密度，当当颗粒达达到与本本身密度度相同的的密度区区时就会会停留在在该区域域。离心分离离密度大大于1.3g/cm33的样品品，如DDNA、RRNA，需需要使用用密度比比蔗糖和和甘油大大的介质质。重金金属盐氯氯化铯(CsCCl)是目目前使用用的最好好的离心心介质，它它在离心心场中可可自行调调节形成成浓度梯梯度，并并能保持持稳定。在在氯化铯铯形成的的密度梯梯度中，离离心管顶顶部的密密度为:1.665g/cm33，底部部为:11.755g/ cm33。因为为DNAA的密度度是1.70