食品中化学物质的反应效果gbux.docx

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1、第一章 食品中化化学物质质的生殖殖和发育育毒性生殖是使使种族延延续的各各种生理理过程的的总称。生生殖过程程一般是是指从配配子形成成直到胎胎儿娩出出的整个个过程，因因此具有有广泛的的含义，其其中包括括精子的的发生、卵卵的形成成、配子子的释放放、受精精、卵裂裂和胚泡泡发育、着着床、胚胚胎发生生、胎儿儿发育、分分娩。而而胎儿的的娩出也也并不意意味着胎胎儿发育育成熟的的终止，从从广义上上说还应应包括胎胎儿娩出出后的新新生儿期期、哺乳乳期、直直到性成成熟的整整个过程程。随着我国国人民生生活水平平提高，医医疗卫生生条件改改善，新新生儿死死亡率大大幅度降降低，死死因顺位位也发生生了明显显的变化化。19953

2、年年先天畸畸形和先先天心脏脏病死亡亡占总死死亡的99.777，到到19779年已已占377.500，其其死因顺顺位也由由第四位位上升为为第一位位。19988年年卫生部部公布了了自19986年年10月月至19987年年9月在在全国229个省省、市和和自治区区同步进进行的出出生缺陷陷的监测测资料，结结果显示示1 22432284例例围产儿儿中，先先天畸形形有1661722例，发发生率为为13.07，其中中神经管管畸形占占34004例。按按此结果果推算，我我国每年年有300400万严重重的先天天缺陷儿儿出生。 19773年WWilsson综综合了55次国际际会议的的资料，将将人类先先天缺陷陷的成因因

3、归为三三大类。即即遗传因因素(染染色体畸畸变和基基因突变变，占225)，环境境因素(物理因因素、宫宫内感染染、母体体疾病、药药物与环环境化学学物质，占占10)，和和原因不不明的出出生缺陷陷(可能能是由于于遗传因因素与环环境因素素相互作作用，占占65)。 人们对对先天缺缺陷和环环境关系系的认识识是经历历了一系系列重大大人间悲悲剧后才才得到的的。19940年年澳大利利亚发生生风疹大大流行，次次年婴儿儿中流行行先天性性白内障障、耳聋聋、智力力不全和和先天心心脏病。119455年美国国在日本本广岛和和长崎爆爆炸原子子弹，受受到核幅幅射的胎胎儿出生生后患小小头畸形形和智力力低下，婴婴儿一年年内死亡亡率达

4、225。119533年日本本水俣湾湾因氮肥肥厂排放放含汞工工业废水水污染了了水体，居居民因食食用污染染的鱼类类引起甲甲基汞中中毒，两两年后发发现先天天水俣病病。19960年年前后，英英、德、日日本等国国妇女以以反应停停(thhaliidommidee)作镇镇静剂减减轻早孕孕反应，出出生了近近万名短短肢畸形形儿(海海豹畸形形)，约约占早孕孕期服药药者新生生儿的113。119688年秋，日日本发生生了因多多氯联苯苯污染米米糠油引引起的中中毒事故故，中毒毒孕妇发发生死产产、早产产和产下下“油症儿儿”。19961-19770年间间，美国国在侵越越战争中中使用高高于本国国农用113倍浓浓度的落落叶剂22

5、、4、55-T含有杂杂质四氯氯二苯二二恶英TTCDDD(teetraa-chhlorrodiibennzo-p-ddioxxin)污染染了大面面积耕地地和森林林，造成成妇女流流产和产产下患有有小头症症和Doowns综合合征的畸畸形儿。另另有报道道工业发发达的国国家和地地区先天天缺陷的的发生有有增高的的趋势。 我国是是发展中中国家，优优生优育育，提高高人口素素质是我我国的基基本国策策，所以以应将发发达国家家已出现现的问题题引为前前车之鉴鉴。从770年代代起，我我国已开开始了对对药品、农农药、食食品添加加剂和环环境污染染物的致致畸研究究，并把把致畸试试验、生生殖毒性性试验列列为新药药、农药药、食品

6、品及首次次进口化化学品的的安全性性毒理学学评价的的重要组组成部分分。 化学品品对生殖殖发育的的损害不不仅与妊妊娠母体体有关，带带有致畸畸因子的的雄性也也会使胎胎仔发生生畸形。例例如给雄雄鼠经口口染毒反反应停，使使之与未未染毒的的雌鼠交交配，引引起严重重的胎仔仔畸形。接接触二硫硫化碳男男工的配配偶发生生流产，早早产或分分娩畸胎胎儿增多多。对生生殖发育育有害的的化学品品不仅能能作用于于妊娠器器官形成成期，造造成形态态畸形，对对妊娠前前期的影影响还可可发生不不育，对对胎期的的毒效应应，可在在出生后后观察到到发育、行行为、代代谢功能能的障碍碍或子代代肿瘤发发生率增增高。所所以综合合考虑有有害环境境因素

7、对对母体和和父体的的影响，将将形态致致畸与行行为致畸畸结合起起来进行行观察，将将生殖毒毒性和发发育毒性性结合起起来进行行研究已已是发展展的趋势势。第一节 生殖殖毒性与与发育毒毒性 环境有有害因素素造成对对亲代的的生殖功功能及对对子代发发育过程程的有害害影响的的作用称称为生殖殖毒性和和发育毒毒性。两两者关系系密切，但但不同研研究者对对其研究究的侧重重面有所所不同，多多数主张张对生殖殖毒性和和发育毒毒性应有有所区分分。一、生殖殖毒性(repprodducttivee tooxiccityy) 生殖毒毒性指对对雄性和和雌性生生殖功能能或能力力的损害害和对后后代的有有害影响响。生殖殖毒性既既可发生生于

8、妊娠娠期，也也可发生生于妊前前期和哺哺乳期。表表现为外外源化学学物对生生殖过程程的影响响，例如如生殖器官及内内分泌系系统的变变化，对对性周期期和性行行为的影影响，以以及对生生育力和和妊娠结结局的影影响等。二、发育毒性(developmental toxicity) 发育毒毒性指在在到达成成体之前前诱发的的任何有有害影响响，包括括在胚期期(emmbryyoniic pperiiod)和胎期期(feetall peeriood)诱诱发或显显示的影影响，以以及在出出生后诱诱发和显显示的影影响。发发育毒性性的主要要表现为为： 1. 发育生生物体死死亡(ddeatth oof tthe devveloo

9、pinng oorgaanissm)：指受精精卵未发发育即死死亡，或或胚泡未未着床即即死亡，或或着床后后生长发发育到一一定阶段段死亡。早早期死亡亡被吸收收或自子子宫排出出(即自自然流产产)，晚晚期死亡亡成为死死胎。 2. 生长改改变(aalteeredd grrowtth)：即生长长迟缓(groowthh reetarrdattionn)。能能引起胚胚胎死亡亡和畸形形的毒物物多数能能引起生生长迟缓缓。一般般认为胎胎儿的生生长发育育指标比比正常对对照的均均值低22个标准准差时，即即可定为为生长迟迟缓。胎胎鼠胸骨骨及枕骨骨骨化迟迟缓及低低出生体体重等是是生长迟迟缓的较较敏感指指标。生生长迟缓缓造成

10、的的局部发发育不全全可视为为畸形，如如脑小畸畸形和眼眼小畸形形等。 3. 功能缺缺陷(ffuncctioonall deeficcienncy)：包括括器官系系统、生生化、免免疫等功功能的变变化。功功能缺陷陷往往要要在出生生后经过过相当时时间才能能诊断。如如听力或或视力异异常、行行为发育育迟缓等等。 4. 结构异异常(sstruuctuurall abbnorrmallityy)：指指胎儿形形态结构构异常，即即畸形。致致畸性(terratoogenniciity)是指化化学物在在胚胎发发育期间间引起永永久的结结构与功功能异常常的性质质。致畸畸物(tteraatoggen)是指出出生前接接触，诱

11、诱发永久久的结构构与功能能异常的的物质。三、生殖殖与发育育毒性的的特点及及靶器官官 生殖与与发育过过程包括括配子(精子与与卵子)的发育育与形成成、交配配、受精精、合子子形成与与植入、胚胚胎形成成与发育育、分娩娩等阶段段。生殖殖与发育育过程的的每个阶阶段所涉涉及的细细胞或器器官都可可能成为为外源化化学物毒毒作用的的靶。外外源化学学物对生生殖与发发育过程程的损害害主要有有以下几几个方面面： 1. 亲性腺腺作用(性腺毒毒性) 某些些化学物物可作用用于性腺腺，影响响生殖器器官的发发育与性性腺成熟熟，或造造成性腺腺组织病病理学改改变。例例如氯乙乙烯单体体可使睾睾丸曲细细精管萎萎缩，氯氯化镉可可引起小小鼠

12、卵巢巢出血，排排卵抑制制。某些些化学物物可影响响配子的的发生、增增殖和成成熟，使使生殖细细胞数量量减少，功功能减退退及突变变。例如如过量接接触二硫硫化碳的的男工多多见性机机能减退退，表现现为性欲欲下降、阳阳萎。铅铅作业工工人，特特别是铅铅中毒患患者易发发生生殖殖细胞受受损，导导致精子子数目减减少，精精子活动动力降低低，精子子畸变率率增加。生生殖细胞胞受损的的结果是是不育、流流产、死死胎、畸畸胎和其其他先天天缺陷。生生殖细胞胞突变造造成的畸畸胎与妊妊娠期内内接触毒毒物的致致畸作用用不同，前前者突变变发生于于父体或或母体的的性细胞胞中，突突变诱发发的畸形形可传给给后代。后后者突变变发生在在胚胎的的

13、体细胞胞中，引引起的畸畸形不具具有遗传传性。已已知的亲亲性腺毒毒物有多多种，包包括固醇醇类药物物，化疗疗药物，有有机磷和和有机氯氯农药，镉镉、铅、汞汞和二硫硫化碳等等。 2. 亲胚体体作用(胚体毒毒性emmbryyotooxiccityy) 某些化化学物可可作用于于妊娠早早期(即即从受孕孕到胚体体形成阶阶段)，对对胚体发发育产生生损害作作用。某某些化学学物可以以降低胚胚体对必必需营养养素的利利用度，如如EDTTA降低低胚体对对微量元元素的利利用度，氨氨基蝶呤呤降低胚胚体对叶叶酸的利利用度。当当给予母母体这些些化学物物时，可可导致与与缺乏这这些必需需营养素素相似的的胚体毒毒性。胚胚体毒性性、胎体

14、体毒性(fettotooxiccityy)和胚胚胎毒性性(emmbryyo-ffetaal ttoxiicitty)是是指由出出生前接接触引起起对孕体体的任何何有害影影响，包包括结构构和功能能异常，或或这种影影响在出出生后的的表现。这这些术语语与有害害作用诱诱发的瞬瞬间时时期有关关，而不不考虑检检测的时时间。 3. 亲胎盘盘作用(胎盘毒毒性pllaceentaal ttoxiicitty) 某些些化学物物可对胎胎盘造成成损伤，改改变胎盘盘血流量量，降低低胎盘对对营养物物质的转转运，特特异地干干扰胎盘盘功能(如内分分泌和代代谢功能能)。例例如5-羟色胺胺使小鼠鼠动、静静脉狭窄窄，胎盘盘血流量量减

15、少，胎胎盘转运运功能障障碍，引引起死胎胎和先天天畸形；甲基汞汞改变人人胎盘滋滋养层微微绒毛对对不能代代谢的氨氨基酸的的摄取，而而致功能能致畸，即即先天水水俣病。患患儿严重重神经迟迟钝，共共济失调调，步行行困难，语语言、咀咀嚼，下下咽困难难和大发发作性癫癫痫。 除上述述外，化化学物还还可引起起胎期毒毒性，哺哺乳期毒毒性(通通过乳汁汁致婴儿儿中毒，如如铅中毒毒)，和和通过对对中枢神神经系统统及全身身机能状状态的毒毒作用来来影响生生殖过程程。某些些化学物物还能经经胎盘致致癌(ttrannspllaceentaal ccarccinoogennesiis)即即致癌物物由母血血经胎盘盘进入胚胚胎，造造成

16、胚胎胎期接触触，引发发后代肿肿瘤。己己烯雌酚酚(diiethhylsstibbesttml)是第一一个被证证明的人人类经胎胎盘致癌癌物(ttrannspllaceentaal ccarccinoogenn)。孕孕妇孕早早期作为为保胎药药服用时时，女性性后代可可发现阴阴道透明明细胞腺腺癌(ccleaar ccelll addenoocaccinooma)、阴道道腺癌(adeenossis)及阴道道和子宫宫颈隆起起；男性性后代可可发生附附睾囊肿肿、睾丸丸营养性性衰竭、睾睾丸囊性性硬结、小小阴茎畸畸形及精精子异常常。经胎胎盘致癌癌的发育育致癌物物(deevellopmmenttal carrcinn

17、ogeen)通通过动物物实验已已发现了了40多多种。 化学物物的生殖殖发育毒毒性有两两个显著著的特点点：一是是生殖过过程较机机体的其其他系统统或功能能对某些些化学物物的毒作作用更为为敏感，在在成体系系统毒性性的未观观察到有有害作用用的水平平(noo obbserrveddad-verrse efffectt leevell，NOOAELL)胎儿儿即可受受到影响响。例如如妊娠期期接触过过不足以以引起肿肿瘤的低低剂量二二乙基亚亚硝胺(dieethyyllnnitrrosaaminne)，仔仔鼠成年年后再次次接触，则则肿瘤发发生率增增加。二二是损害害作用不不仅表现现在接触触化学物物质的机机体本身身，

18、还可可影响其其后代。例例如母鼠鼠接触高高浓度二二硫化碳碳引起致致畸作用用，其子子一代既既使不再再接触二二硫化碳碳，交配配后所生生的子二二代仔鼠鼠也出现现与子一一代仔鼠鼠几乎完完全相同同的畸变变类型。第二节 生生殖与发发育毒性性试验的的目的和和实验设设计的要要点 评价化化学物对对生殖和和发育的的毒性需需要三方方面的资资料，即即环境流流行病学学，动物物生殖与与发育毒毒性试验验和控制制的临床床研究。另另外体外外筛选试试验还可可为发育育毒性提提供初筛筛和补充充。但是是在一些些新化学学品和药药品开发发初期，显显然不可可能得到到流行病病学方面面的资料料，也不不能直接接对人体体做临床床研究，首首先要靠靠动物

19、试试验来预预测它们们对人生生殖与发发育的危危险。 生殖与与发育毒毒性研究究的目的的是揭示示化学品品药品品对哺乳乳动物生生殖发育育的任何何有害影影响，并并将研究究的结果果与所有有可以得得到的其其他药理理学和毒毒理学资资料联系系起来，以以推测对对人可能能造成的的生殖危危险。研研究应包包括成年年动物和和从受孕孕到子代代性成熟熟的各个个发育阶阶段接触触受试物物。为检检测接触触所致的的即发和和迟发效效应，应应连续通通过一个个完整的的生命周周期，即即从亲代代受孕到到子一代代受孕。为为清楚地地阐述各各试验方方案的组组合，现现将完整整的生殖殖发育过过程细分分为如下下阶段。A阶段 交配配前到受受孕：检检查成年年

20、雄性和和雌性生生殖功能能，配子子的发育育与成熟熟，交配配行为，受精精。B阶段 受孕孕到着床床：检查查成年雌雌性生殖殖功能，胚胚胎着床床前发育育、着床床。C阶段 着床床到硬腭腭闭合：检查成成年雌性性生殖功功能，胎胎体发育育，主要要器官形形成。D阶段 硬腭腭闭合到到妊娠结结束：检检查成年年雌性生生殖功能能、胎体体的发育育与生长长，器官官的发育育与生长长。 E阶段段 出出生到断断乳：检检查成年年雌性生生殖功能能，新生生仔对宫宫外生活活的适应应，断乳乳前的发发育与生长长。 F阶段段 断断乳到性性成熟：检查断断乳后的的发育与与生长，对对独立生生活的适适应，达达到完全全的性功能。 以上不不同阶段段的组合合

21、可以构构成许多多可能的的测试方方案，各各个国家家和国际际机构均均发布了了不同的试验准准则和研研究设计计细则。本本章介绍绍ICHH准则和和我国新新药评价价、农药药及健康康相关产产品安全全性评价价中推荐荐的三段段生殖毒毒性试验验，一代代和二代代(多代代)生殖殖毒性试试验。 本章将将用如下下术语来来描述整整个生殖殖与发育育过程：孕体conncepptuss，包括括胚体(embbryoo)和胎胎体(ffetuus)、幼体体(仔体体pupp)、成成体(aadullt)、母母体(mmateerall)、父父体(ppateernaal)、亲亲代(ppareentaal ggeneetattionn)和子子代

22、(ooffsspriing)。实验设计计的一般般考虑如如下：一、动物物选择 必须以以哺乳动动物为实实验对象象。一般般要求使使用与其其他毒理理学研究究中相同同的物种种与品系系，以免免必须进进行另外外的预试试验。原原则上实实验动物物对受试试物的动动力学、毒毒效学及及其他有有关参数数应与人人最接近近，如代代谢过程程与生物物转化应应与人相相近、胎胎盘结构构与人相相似、健健康、生生育力强强、多产产、孕期期短、自自发畸形形率低、价价廉、易易得和操操作方便便。实际际上没有有一个固固定物种种可通用用于精确确模拟人人类生殖殖毒性研研究。在在毒理学学评价程程序中，如如果借助助毒物动动力学，药药理学和和毒理学学的资

23、料料，能显显示所选选物种是是人的生生殖毒性性实验的的恰当模模型，则则用一种种动物就就够了。首首选啮齿齿类中的的大鼠，因因用大鼠鼠获得的的其他实实验结果果有可比比性并积积累了大大量的背背景资料料。在胚胚体胎体毒毒性研究究中，传传统上要要求用第第二种哺哺乳动物物进行试试验。家家兔因其其也有较较广泛的的背景资资料和比比大鼠更更接近人人的代谢谢类型而而作为“非啮齿齿类”优选使使用。在在测试多多巴胺类类兴奋剂剂或降低低催乳激激素水平平的化合合物时，大大鼠不是是一个好好的动物物模型，因因为大鼠鼠需要催催乳素来来维持早早孕，在在这种情情况时使使用家兔兔可能更更好。但但家兔孕孕期长短短不定(3236天天)，有

24、有时缺乏乏毒性资资料，对对某些抗抗生素和和消化道道紊乱有有易感性性，在其其他生殖殖毒性研研究中较较少用。二、接触触选择1. 剂剂量 剂量选选择应依依据从所所有已进进行的药药理学、急急性和慢慢性毒性性、以及及动力学学研究中中得到的的资料。高高剂量应应该在母母体中产产生轻度度的毒性性，如体体重增长长减少，体体重增长长速度改改变(与与扰乱了了内环境境稳定的的机理有有关)、特特异的靶靶器官毒毒性、药药理学反反应增强强(如镇镇静、惊惊厥)、阴阴道出血血、流产产等。在在研究中中，要对对所观察察到的效效应进行行剂量反应关关系分析析时，推推荐至少少用三个个剂量水水平和适适当的对对照组。低低剂量不不应有任任何可

25、归归因于受受试物的的有害作作用。中中剂量组组应在高高、低剂剂量之间间按等比比级差定定位，应应引起最最小的毒毒作用。如如果对结结果有怀怀疑，应应增加第第四个剂剂量组，以以免剂量量间隔过过大。实实验结果果应提供供最高未未观察到到有害作作用水平平的剂量量，否则则应对该该受试物物进行进进一步深深入的研研究。 在大多多数情况况下，最最高限量量剂量为为1g(kgd)假假如仍未未引起血血浆和组组织浓度度增加时时，可略略微增加加染毒剂剂量。在在测试低低毒物质质时，假假如剂量量达到11g(kkgd)仍仍不产生生胚胎毒毒性或致致畸，则则没有必必要进行行其他剂剂量水平平的研究究。假如如在高剂剂量进行行的初步步研究中

26、中，有明明显的母母体毒性性的证据据而未显显示对胚胚胎的有有害作用用，也没没有必要要进行其其他剂量量水平的的研究。2. 接接触途径径与频率率 应应与人的的接触途途径相同同，如果果采用其其他接触触途径，必必须依据据动力学学的资料料。接触触频率一一般是一一日一次次，每日日在相同同时间染染毒，并并按体重重调整染染毒剂量量。 3. 对对照组 用与与试验组组相同的的最大容容量的赋赋形剂。当当赋形剂剂可能有有不良影影响(如如减少食食物的摄摄取和利利用)或或影响受受试物的的作用时时，应再再设未处处理对照照组。第三节 三段段生殖毒毒性试验验 用一组组试验研研究全部部生殖毒毒性的终终点是不不可能的的，所以以在决定

27、定适当的的策略和和选择研研究设计计时，应应考虑该该受试物物和其类类似物质质所有可可能得到到的药理理学、动动力学和和毒理学学资料。对对大多数数医药产产品来说说，三段段生殖毒毒性试验验设计通通常是适适当的。关关键因素素是各个个生殖阶阶段之间间不得有有间隔，即即在三个个有关联联的阶段段接触受受试物的的时期至至少有一一天的重重迭，并并能直接接或间接接地评价价生殖过过程的所所有阶段段。三段段生殖毒毒性试验验由生育育力和早早期胚胎胎发育毒毒性试验验，胚体体胎体体毒性试试验(致致畸试验验)和出出生前后后发育毒毒性试验验(围产产期毒性性试验)三部分分组成(图8-1)。三三段的划划分是按按有害作作用诱发发的时期

28、期，而不不考虑检检测的时时间。图8-11 三三段生殖殖试验图图解生育力力和早期期胚胎发发育毒性性试验 胚体一一胎体毒毒性试验验(致畸畸试验) 出生前前后发育育毒性试试验一、生育育力和早早期胚胎胎发育毒毒性试验验 1. 研究目目的 评价化化学物对对配子成成熟、交交配行为为、生育育力、胚胚胎着床床前和着着床的影影响(包包括前述述生殖发发育过程程A和BB阶段的的评价)。雌性性包括对对动情期期、输卵卵管运输输、着床床和胚胎胎着床前前阶段发发育的影影响。雄雄性包括括检测对对功能的的影响(例如性性欲、附附睾的精精子成熟熟等)。 2. 动物 至少少一种，首首选大鼠鼠。每性性别、每每组的动动物数应应足以对对数

29、据进进行有意意义的解解释。建建议每性性别、每每组166200窝。 3. 给药期期 应应说明交交配前染染毒时间间的长度度并提供供依据。一一般采取取雄性交交配前四四周开始始重复染染毒，直直至交配配成功。若若要保证证雌性受受孕成功功，雄性性也可继继续染毒毒，仍同同笼至处处死。雌雌性交配配前两周周开始染染毒(可可覆盖至至少两个个完整的的动情期期)直至至着床。 交配前前雄性染染毒期限限较以往往的规范范变动较较大，119811年OEECD规规定大鼠鼠至少110周，小小鼠8周周。然而而与雌鼠鼠交配不不是检测测对精子子发生影影响的敏敏感的方方法。实实际上没没有一个个实例表表明受试试物对雄雄性生殖殖毒性的的结论

30、是是仅靠雄雄鼠连续续给药88100周后与与雌性交交配得出出的。精精子存活活率和形形态学检检查等进进一步研研究可为为在生殖殖毒性研研究观察察到的毒毒作用提提供更敏敏感的终终点。另另外，已已知影响响精子发发生的外外源化学学物几乎乎总是影影响减数数分裂后后阶段(精子成成熟前335周周)。对对雄性性性腺组织织和器官官进行仔仔细的组组织病理理学检查查(Boouinns液液固定，石石蜡包埋埋，睾丸丸作横切切片，附附睾作纵纵切片，PPAS和和苏木精精染色)可对雄雄性生育育力和精精子发生生影响提提供有价价值的补补充信息息。所以以ICHH准则将将雄性染染毒期缩缩短为44周，并并结合组组织病理理学检测测。 4.

31、交配及及受孕检检查 雄大鼠鼠给药44周，雌雌大鼠给给药2周周后开始始同笼。交交配期223周周，交配配比例111。实实验程序序应能识识别出各各窝的22个亲本本，以避避免不正正确结果果的分析析和解释释。 雌性受受孕检查查一般靠靠查阴道道涂片(大鼠)或阴栓栓(小鼠鼠)。阴阴道涂片片上有较较多白色色分泌物物，镜检检可见有有较多有有核上皮皮细胞，则则提示雌雌鼠处于于动情前前期。大大鼠性周周期一般般为45天，小小鼠性周周期为44天，动动情前期期向动情情期移行行多在夜夜间。人人和几种种常用实实验动物物早期发发育时间间表8-1。阴阴栓是雄雄鼠精囊囊与凝固固腺在雌雌鼠阴道道凝结而而成的白白色块状状物，形形似米粒

32、粒，大鼠鼠阴栓很很易脱落落。观察察到阴道道涂片上上的精子子或阴栓栓即提示示受孕，检检出日为为孕0天天，次日日为孕11天，以以此推算算孕龄。表8-11 某某些哺乳乳动物早早期发育育的时间间早期发育育的时间间(由排排卵起的的天数)物种 胚胞形形成 着床 器官官形成期期 妊娠长长度小鼠 34 455 66155 119大鼠 34 566 66155 222家兔 34 788 66188 33猴（恒河河猴） 557 911 2045 1644人 588 88133 211566 2667 5. 终末处处死 雌性一一般在孕孕中期第第13-15天天终止妊妊娠。雄雄性在证证实交配配并受孕孕成功后后处死检检查

33、。 6. 观察项项目 染毒期期间观察察雌、雄雄亲代(Po)体征征和死亡亡(至少少1次日)，体体重和体体重改变变(至少少2次周)，摄摄食量(1次周)，镜镜检雌性性阴道涂涂片(交交配期间间1次天)和和其他毒毒性研究究中见到到的靶效效应。 处死时时所有成成体均作作尸体解解剖和肉肉眼观察察，进行行所有动动物的睾睾丸、附附睾、卵卵巢和子子宫的组组织学检检查，附附睾或睾睾丸中的的精子计计数以及及精子存存活力测测定。检检查计数数雌性的的黄体数数，着床床数，吸吸收胎，死死胎和活活胎数。保保存肉眼眼发现改改变的脏脏器，以以便进行行可能的的组织学学评价，并并保存足足够的对对照组的的相应脏脏器，以以供比较较。对明明

34、显未孕孕的大鼠鼠或小鼠鼠(而不不是对家家兔)，可可用硫化化铵子宫宫染色鉴鉴别胚胎胎着床前前死亡。 7. 结果评评定 综合对对F0代观察察的各项项指标和和参数，用用合适的的统计方方法分析析和评价价。在分分析对胎胎体(子子一代，FF1)的影影响时，应应考虑下下述参数数：各组组受影响响的窝数数比；每每窝受影影响的胎胎体的组组平均百百分率；受影响响胎体总总数比。 在对生生殖与发发育毒性性的试验验结果进进行推理理统计(显著性性检验)时，应应以窝(littterr)在在两种性性别均被被处理时时，以交交配的双双方(mmatiing paiir)；在两两代生殖殖毒性试试验中，以以亲代交交配的双双方，而而不是以

35、以胎体或或新生仔仔为比较较的试验验单位。二、胚体体胎体毒毒性试验验(致畸畸试验)1. 研研究目的的 评评价母体体自胚泡泡着床到到硬腭闭闭合期间间接触受受试物对对妊娠雌雌性和对对胚体胎体发发育的有有害影响响，即前前述生殖殖发育过过程中的的C和DD阶段，主主要包括括增强了了与非妊妊娠雌性性有关的的毒性，胚胚体胎体死死亡、生生长改变变与结构构异常。 2. 动物 通常常用两种种，一种种是啮齿齿类，首首选大鼠鼠，另一一种是非非啮齿类类，最好好是兔。若若仅用一一种动物物，需提提出正当当理由。每每组动物物数应足足以对数数据进行行有意义义的解释释。建议议每组116220窝。雌雌性宜用用性成熟熟的，未未交配过过

36、的动物物。 3. 给药期期 从从着床期期到硬腭腭闭合，即即器官形形成期，大大、小鼠鼠孕期的的第615天天，兔孕孕期的66188天。致致畸实验验日程见见表8-2。表8-22 致致畸试验验日程 大 鼠 小 鼠 兔交 配 9001220日龄龄 6090日日龄 成年年末交配配过的染毒时间间 孕孕第615日日 孕孕第615日日 孕孕期618日日龄处死取胎胎 孕第220日 孕孕第188日 孕第第29日日 致畸试试验除阴阴性对照照外、应应设阳性性对照组组。阳性性对照大大、小鼠鼠可用乙乙酰水杨杨酸或浓浓缩鱼肝肝油，家家兔可用用6-氨氨基烟酰酰胺。阴阴性与阳阳性对照照组的作作用分别别是为自自发畸形形的发生生和该

37、批批实验动动物在试试验条件件下的敏敏感性提提供资料料。已经经进行过过致畸试试验并确确知所用用试验动动物有阳阳性结果果的实验验室，可可略去阳阳性对照照。 4. 终末处处死与标标本制作作 在在分娩前前一天处处死怀孕孕母体，以以防止自自然分娩娩后，母母体吞食食畸形子子。剖腹腹检查亲亲代受孕孕情况和和胎体发发育。除除逐个检检查所有有胎体的的存活和和畸形外外，尚需需分别检检查软组组织和骨骨骼的异异常。将将每窝550胎胎仔经茜茜素红染染色后，作作骨骼检检查。另另外500胎仔仔经Boouinns固定定后，作作内脏检检查。当当使用新新鲜标本本的显微微解剖技技术(mmicrrodiisseec-ttionnte

38、cchniiquees)检检查软组组织改变变时(对对家兔胎胎体检查查的最好好方法)，1000的的家兔胎胎体均作作软组织织和骨骼骼检查。 5. 观察项项目 染毒期期观察妊妊娠动物物的体征征和死亡亡(1次次日)，体重重和体重重改变(2次周)，摄摄食量(1次周)和和在其他他毒性研研究中已已证实的的重要靶靶效应。有有流产和和早产征征兆者处处死并进进行肉眼眼检查。 处死时时对所有有妊娠动动物进行行尸体解解剖和肉肉眼检查查任何结结构异常常或病理理改变。保保存肉眼眼发现有有改变的的脏器，以以便进行行组织学学评价，亦亦保存足足够的对对照组的的相应脏脏器，以以供比较较。取出出子宫，称称带有胎胎体的子子宫重，以以

39、得出妊妊娠雌性性动物的的净增重重。计数数黄体数数，吸收收胎数，活活胎数与与死胎数数及着床床点，称称胎盘重重并作肉肉眼评价价，必要要时可作作组织学学检查。称称活胎体体重，检检查胎体性别别，以及及外观、内内脏和骨骨骼畸形形。 6. 结果评评定 致畸研研究的发发现应根根据观察察到的效效应和产产生效应应的剂量量水平进进行评价价。有必必要考虑虑所用试试验动物物的物种种品系系的历史史的致畸畸性资料料。致畸畸研究进进行适当当，应提提供一个个符合要要求的NNOAEEL(未未观察到到有害作作用水平平)的估估计。虽虽然将实实验结果果外推到到人的可可靠性有有限，然然而NOOAELL的建立立，使得得能以采采取适当当的

40、安全全系数。 对母体体的终点点评价指指标包括括：体重重、体重重变化、食食物消耗耗量和母母体毒性性体征及及母体畸畸胎出现现率等。对对胎体影影响的评评价应包包括：受受影响的的窝数比比、每窝窝受影响响胎体数数的组间间均数、受受影响的的胎体总总数比、畸畸胎率和和某单项项畸胎率率等。 7. 影响致致畸作用用的因素素 致致畸作用用受多种种因素影影响，主主要包括括敏感期期、遗传传类型、剂剂量和母母体毒性性等。 (1)致畸敏敏感期 实验验证明器器官形成成期(oorgaanoggeneesiss peeriood)是是发生形形态结构构畸形(mallforrmattionn)的关关键期(criiticcal pe

41、rriodd)。迅迅速改变变细胞分分裂速度度对畸形形发生是是极为重重要的，因因为增加加复制速速度即增增强了突突变的可可能性。器器官形成成期正是是细胞分分裂极旺旺盛的时时期。例例如发育育中的大大鼠在妊妊娠第88100天之间间，有110次细细胞有丝丝分裂，产产生N210新细细胞(NN表示器器官形成成期开始始时的细细胞数)。人的的器官形形成期在在人妊娠娠的第338周周。600年代反反应停药药物致畸畸事件就就在人怀怀孕后的的2035天天内，在在无一般般毒性的的“安全剂剂量”1mmg(1gd)下发生生的，有有人甚至至在这阶阶段内只只服过一一次药。大大多数器器官又都都有其对对致畸作作用的特特殊敏感感期，即

42、即“靶窗(tarrgett wiindoows)”。形态态畸形和和功能缺缺陷的敏敏感期也也不同。致致畸实验验的染毒毒时间，必必须安排排在器官官形成期期，才有有可能观观察到形形态畸形形的致畸畸效应。由由于各物物种妊娠娠期长短短不同，敏敏感期的的长短也也不同，致致畸试验验的染毒毒时间需需随动物物种属而而易。图图8-22表示人人、大鼠鼠和家兔兔的致畸畸作用关关键期的的比较，并并图解狭狭窄的“靶窗”概念。(2) 遗传类类型 致畸作作用存在在明显的的物种差差异，这这种差异异是因代代谢变化化、胎盘盘种类、胚胚胎发育育的速度度和方式式引起的的。致畸畸物各有有其易感感物种和和品系，易易感性取取决于机机体的基基

43、因型。推推测化学学物生物物转化成成活性中中间产物物的速度度和途径径与遗传传因子有有关，而而畸形仅仅发生在在那些形形成恰当当代谢物物的物种种中。反反应停是是其中一一例。反反应停440000mgkg对对大鼠和和小鼠尚尚不致畸畸，而对对人0.511.0mmgkkg就有有极强的的致畸作作用，这这是由于于人、猴猴和兔能能将其代代谢产生生一个中中间产物物(可能能是一个个极性的的代谢物物，或一一个annenee氧化物物)，而而其他物物种不产产生。所所以一个个化学物物在某些些物种中中是致畸畸的，在在其他物物种中产产生很小小或不产产生影响响，或是是一个物物种产生生的畸形形，可完完全不同同于在另另一个物物种中诱诱

44、发的畸畸形。所所以在筛筛选致畸畸物时，强强调采用用包括非非啮齿类类在内的的两种动动物中进进行试验验，可以以减少因因动物不不敏感而而出现的的假阴性性。 (3) 化学学物的剂剂量 各种致致畸物都都有其引引发致畸畸作用的的阈剂量量。不同同致畸物物又有不不同类型型的剂量量效应关关系，反反映了不不同外源源化学物物胚胎毒毒性作用用的特点点。一般般地说，所所用的剂剂量高于于该化学学物致畸畸作用的的阈剂量量时，可可使致畸畸范围扩扩大、程程度加重重、靶窗窗延长，再再增大则则出现胚胚胎死亡亡。而由由于有缺缺陷的胚胚胎死亡亡，畸形形率反会会降低。剂剂量再进进一步增增大，则则可造成成母体的的死亡。典型的致致畸作用用的

45、剂量量-反应应曲线的的斜率很很大，从从最大未未观察到到有害作作用剂量量到胚胎胎1000死亡亡的剂量量只差224倍倍。如给给孕小鼠鼠腹腔注注射环磷磷酰胺55100mg，未未见畸形形发生，而而40mmgkkg即可可引起胚胚胎1000死死亡。从从最大未未观察到到有害作作用剂量量到胚胎胎死亡剂剂量间的的剂量带带，称为为致畸带带。致畸畸带越宽宽的致畸畸物，致致畸危险险性越大大。掌握握致畸作作用中剂剂量反应关关系的规规律，对对致畸实实验中适适当剂量量的确定定具有重重要意义义。剂量量过低，不不足以显显示确实实存在的的致畸作作用。剂剂量过高高，引起起大量胚胚胎死亡亡，畸胎胎数减少少，或对对母体毒毒作用过过强，不不能辨明明是致畸畸物的作作用，还还是母体体毒性的的继发作作用，均均影响结结果的正正确判断断。图8-22 人、大大鼠和家家兔的致致畸作用用关键期期的比较较，短线线表示“靶窗” (4)其他因因素 化学物物的理化化性质与与致畸作作用有关关。若外外来化学学物或其其代谢产产物的分分子量小小、极性性小、高高脂溶性性、未与与母体血血浆蛋白白结合，则则易穿透透胚盘屏屏障，到到达胚胎胎体内。染染毒途径径也影响响