天然药物化学实验讲义gmpw.docx

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1、青岛科技技大学化化工学院院天然药物物化学实实验讲义义第二版药 剂 教 研研 室 编二六六 年目 录目录1天然药物物化学实实验须知知2天然药物物化学实实验技术术.44实验一大大黄中蒽蒽醌类成成分的提提取、分分离和制制剂鉴别别30实验二绞绞股蓝总总皂苷的的提取和和制剂鉴鉴别355实验三汉汉防己生生物碱的的提取、分离和和鉴别338实验四芸芸香苷的的提取、分分离和鉴鉴定4444实验五中中药制剂剂薄层色色谱鉴别别的应用用49附录555天然药物物化学实实验须知知（一）实实验要求求 1实验验前应认认真预习习，做好好预习笔笔记，明明确实验验目的，掌掌握实验验原理，了了解实验验步骤，安安排好当当天实验验计划。2

2、实验验时要遵遵守实验验室制度度，按照照操作要要求，认认真操作作，正确确使用各各种仪器器，努力力掌握基基本操作作技术。养养成及时时记录的的习惯，观观察到的的现象和和结果以以及有关关的重量量、体积积、温度度或其它它数据，应应立即如如实记录录。3实验验室内保保持安静静、整洁洁。不许许大声喧喧嚷，不不许吸烟烟，不迟迟到不随随便离开开。随时时注意反反应情况况和做好好下一步步的准备备工作。保保持桌面面、仪器器、水槽槽、地面面四洁。废废弃的固固体和滤滤纸等丢丢入废物物缸内，绝绝不能丢丢入水槽槽和丢到到窗外。 4实验验后要认认真分析析实验现现象，作作出合理理结论，写写出实验验报告，提提取纯化化产品包包好，贴贴

3、上标签签，交给给老师。必必要时还还需进一一步查阅阅某些尚尚未理解解的理论论和知识识。5每次次实验完完毕，值值日生负负责整理理公用仪仪器，将将实验台台及地面面打扫干干净，倒倒清废物物缸，检检查水电电开关，关关好门窗窗。（二）实实验室规规则1在实实验室中中要穿白白大衣，实实验中不不准做与与实验无无关的事事。2必须须遵守实实验室的的各项制制度，听听从教师师指导，尊尊重实验验室工作作人员。3实验验前应清清点并检检查仪器器是否完完整，装装置是否否正确，合合格后才才能开始始实验。4使用用仪器时时要轻拿拿、轻放放，贵重重仪器未未经教师师允许不不得擅自自动用。一一旦损坏坏仪器应应及时报报损、补补领，不不得乱拿

4、拿，乱用用别人的的仪器。5公用用仪器和和药品，用用完后立立即归还还原处，不不可调错错瓶塞，以以免污染染。仪器器使用完完毕应清清理干净净。节约约用水、用用电，节节约试剂剂，严格格掌握药药品用量量。（三）实实验室安安全注意意事项1实验验前应检检查仪器器是否完完整无损损，装置置是否正正确。回回流、蒸蒸馏时，冷冷凝水是是否通畅畅，干燥燥管是否否阻塞，在在常压下下进行蒸蒸馏或回回流，仪仪器装置置必须与与大气相相通，不不能密闭闭。2回流流或蒸馏馏易燃溶溶剂（特特别是低低沸点易易燃溶剂剂），不不能使用用明火加加热，要要根据溶溶剂的沸沸点选用用水浴、油油浴或电电热套。液液内要放放几颗沸沸石，防防止过热热冲瓶或

5、或暴沸。若若在加热热后发现现未放入入沸石，则则应待冷冷后放入入，加热热过程中中也不得得加入活活性炭脱脱色，否否则会发发生暴沸沸。3蒸馏馏、回流流易燃、易易挥发、有有毒液体体时，仪仪器装置置切勿漏漏气，冷冷凝管流流出液应应用弯接接管导至至接受瓶瓶中，余余气应用用橡皮管管通往室室外或水水槽里。4减压压系统应应装有安安全瓶。加加压柱色色谱时，层层析柱及及储液瓶瓶机械性性能要高高，连接接要牢，注注意控制制压力，以以防炸裂裂。5使用用易燃溶溶剂时，应应在远离离火源和和通风的的地方进进行，启启封易挥挥发溶剂剂瓶盖时时，脸要要避开瓶瓶口并慢慢慢启开开，以防防气体冲冲到脸上上。6有毒毒、有腐腐蚀性的的药品应应

6、妥善保保管，操操作后立立即洗手手，勿沾沾及五官官及创口口。7使用用电器设设备及各各种分析析仪器时时，要事事先了解解电路及及操作规规程。使使用时，注注意仪器器和电线线不要放放在潮湿湿处，手手湿不要要接触电电源。8欲将将玻璃管管插入塞塞中，可可在塞孔孔涂些水水或甘油油等润滑滑剂，用用布包住住玻璃管管使其旋旋转而入入，防止止折断。9.实验验室一旦旦发生火火灾事故故时，应应保持镇镇静，并并采取各各种相应应措施。首首先，要要立即断断绝火源源，切断断电源并并移开附附近的易易燃物质质。三角角瓶内溶溶剂着火火可用石石棉网或或湿布盖盖熄。小小火可用用湿布或或黄沙盖盖熄，火火较大时时应根据据具体情情况采用用相应的

7、的灭火器器材。（四）实实验报告告格式天然药物物化学实实验报告告的格式式不是固固定不变变的，可可以按题题目的内内容及要要求作适适当调整整。一般般包括下下列内容容：实验报告告中除应应标明专专业、班班级、实实验组、姓姓名、实实验时间间外：1题目目2目的的要求3基本本原理 主主要的提提取分离离及鉴定定原理。4操作作 以流程程图表示示，简明明扼要，包包括现象象记录。5鉴定定 包括化化学反应应的试剂剂、现象象及结论论，色谱谱鉴定条条件、结结果及结结论。6产品品 产品颜颜色、晶晶形、重重量、熔熔点以及及得率。7讨论论 包括实实验过程程中主要要注意事事项、关关键步骤骤、实验验成败的的原因及及心得体体会。8思考

8、考题 可以以根据老老师的要要求，回回答各实实验中的的某些思思考题。9. 实实验报告告要求字字迹端正正，图表表清楚，叙叙述有条条理，尽尽量做到到既有所所观察的的实验现现象，又又有说明明和解释释；既有有实验数数据又有有分析和和结论；既有成成败的经经验教训训又有自自己的实实践体会会，甚至至有改进进的建议议。天然药物物化学实实验技术术提取、分分离、纯纯化、鉴鉴定是贯贯穿于天天然药物物化学实实验的全全过程的的基本操操作单元元。正确确掌握和和灵活处处理各个个环节的的操作技技能是训训练学生生严格认认真的科科学态度度与良好好工作习习惯，促促进理论论与实践践结合的的一个重重要环节节。天然药物物主要来来源于植植物

9、、动动物、矿矿物、海海洋生物物等，大大部分是是植物。其其特点是是所含成成分复杂杂，常见见结构相相似的产产物共存存一体，甚甚至同时时含有多多种活性性成分，有有着多方方面的临临床用途途。天然然药物品品种繁多多，因地地区用药药习惯、文文献的记记载混乱乱等诸多多原因，常常致品名名混乱。即即使同一一品种其其所含成成分、含含量也因因产地、取取材部位位、采集集时间、贮贮存条件件及存放放时间等等的不同同而变化化。因此此，在实实验之前前，必须须对材料料进行品品种鉴定定。确定定学名、记记录采集集地和时时间、药药用部位位，并留留样备查查。研究天然然药物时时，应查查阅有关关文献资资料、了了解前人人对该植植物或同同属植

10、物物中化学学成分的的分离、药药理及临临床研究究情况，特特别应搜搜集该成成分的各各种提取取分离方方法、工工业生产产方法，再再根据具具体条件件进行设设计，确确定提取取分离路路线。（一）天天然产物物提取技技术提取是研研究天然然产物的的一个重重要步骤骤，是采采用适宜宜的溶剂剂和适当当的方法法，将所所要的成成分尽可可能完全全地从天天然药物物中提取取出来，同同时注意意避免或或减少其其它杂质质的提出出。常用用的提取取方法有有溶剂提提取法和和水蒸气气蒸馏法法。提取取方法设设计是否否合理和和操作是是否正确确将直接接影响下下一步分分离、纯纯化。提取前，通通常对实实验材料料进行预预处理。将将其粉碎碎成粗粉粉，增加加

11、药材的的表面积积，以提提高提取取率。但但粉碎过过细，表表面积太太大，表表面吸附附作用也也随着增增加，反反而影响响溶剂扩扩散速度度，同时时，杂质质的提出出率也随随之增高高。因此此，一般般以能通通过二号号筛的粒粒度为宜宜。种子子类药材材常含有有大量油油脂，可可以先用用压榨法法将大部部分油脂脂除去后后，再粉粉碎。富富含纤维维素、淀淀粉的根根茎类药药材，若若用水作作溶剂提提取时。因因多糖类类高分子子亲水性性成分遇遇水易膨膨胀发粘粘稠产生生冻胶状状物，使使提取、过过滤困难难，则以以打成粗粗粒、切切成小段段或薄片片为宜。植植物体内内所含的的苷类往往往与某某种特殊殊的酶共共存于同同一组织织的不同同细胞中中，

12、当细细胞破裂裂，在适适宜的温温度和湿湿度下，酶酶与苷接接触，产产生酶解解作用。提提取苷类类成分时时，将药药材粗粉粉用乙醇醇或沸水水提取，杀杀灭酶的的活力，在在提取腈腈苷和蒽蒽醌苷时时，尤需需注意处处理。但但在提取取次生苷苷或苷元元时，却却要利用用酶解作作用，如如从毛花花洋地黄黄叶中提提取狄戈戈辛，从从穿山龙龙中提取取薯蓣皂皂苷元。1溶剂剂提取法法溶剂的提提取过程程是溶剂剂对药材材组织细细胞不断断作往返返的扩散散、渗透透、溶解解的过程程，直至至药材组组织细胞胞内外溶溶液中，被被溶解的的化学成成分的浓浓度达平平衡为止止。影响响提取的的因素除除了前述述的药材材粉碎度度之外，还还有溶剂剂的选择择、提取

13、取的方式式、时间间、温度度等。（1）溶溶剂的选选择选择适当当的溶剂剂是提取取步骤的的关键。溶溶剂的极极性大体体可根据据介电常常数的大小小来判断断。常用用溶剂的的极性排排列顺序序为：石油醚 苯苯 无水乙乙醚 氯仿仿 乙酸乙乙酯 丙酮酮 乙醇 甲甲醇 水它们的介介电常数数分别为为1.88、2.33、4.33、5.22、6.11、211.5、26.0、31.2、81.0天然产物物的极性性大体可可分为33类：即即极性（亲亲水性）、非非极性（亲亲脂性）、中中等极性性（即亲亲水又亲亲脂）。依依据相似似相溶的的规律，极极性成分分易溶于于极性溶溶剂，亲亲脂性成成分易溶溶于非极极性溶剂剂，通过过对欲提提取成分分

14、及与其其共存成成分的极极性差异异来选择择溶剂，如如提取苷苷元、游游离生物物碱常用用亲脂性性溶剂氯氯仿、乙乙醚；苷苷类成分分由于结结构中含含糖分子子，羟基基数目增增多，表表现出比比其苷元元有较强强的亲水水性，则则可选择择极性较较大的溶溶剂如乙乙酸乙酯酯，正丁丁醇等。尚需说明明的是，文文献提供供的化合合物的溶溶解度是是指纯品品在溶剂剂中的溶溶解度。在在粗提时时，药材材处于复复杂的混混合物状状态，各各成分的的溶解度度相互影影响，可可能由于于成分间间的助溶溶或发生生化学作作用，使使溶解度度有较大大的改变变。如用用水提取取时，水水不溶的的成分有有时会被被带出；从酒精精提取物物中分出出的各种种纯化合合物，

15、有有时难溶溶于乙醇醇中；因因油脂类类杂质的的存在，使使香豆素素可溶解解于石油油醚中。这这也是常常以水或或不同浓浓度乙醇醇作为粗粗提的溶溶剂的原原由。 总的来来说，选选择溶剂剂除了考考虑溶解解度外，尚尚需顾及及溶剂的的价格，使使用是否否完全，处处理是否否方便及及是否与与天然产产物起化化学变化化等其它它条件。 在实际工作中，依据工作的目的，可分定向提取法和系统溶剂提取法两类。从天然药物中提取某一已知成分或某类成分，可根据它们的性质，选择适当溶剂进行定向提取，如用石油醚直接提取细辛醚；提取有机酸时，可将药材用适量酸水浸润，使其游离，然后用脂溶性溶剂提取，系统溶剂提取法是研究天然药物成分的常用的初步提

16、取分离方法。根据天然药物中各类化学成分的极性不同，药材粉末用极性由低到高的溶剂依次提取。一般顺序是石油醚、乙醚（或氯仿）、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇（或丙酮）、水，分别得到极性不同的组分。更换溶剂前，必须将前一种溶剂挥尽。也可以先用水或醇提取，浓缩成浸膏，加入惰性填料，如硅藻土，拌匀、低温烘干，研成粗粉，再用上述溶剂系统依次提取。本法的缺点是由于各成分间的助溶作用，同一类成分往往也会分散在邻近的几个部位中，这一现象较为普遍发生。虽如此，但系统溶剂提取法仍是研究成分不明的天然药物最常使用的方法。（2）提提取的方方法提取方法法的选择择，主要要从溶剂剂性质及及被提取取成分遇遇热稳定定性来考考虑。浸渍法法

17、 将将药材粗粗粉置于于适当容容器中，加加入适量量溶剂如如稀醇、酸酸性醇、水水、酸水水或碱水水等，密密闭，时时常振摇摇或搅拌拌，室温温下浸提提1天2天后后，过滤滤。一般般可重复复提取22次33次，第第2、33次浸渍渍的时间间可缩短短。合并并浸渍液液，浓缩缩后得提提取物。本本法适用用于提取取遇热易易破坏的的成分或或含大量量淀粉、粘粘液质、果果胶、树树胶等多多糖的药药材。因因提取在在室温及及静态下下进行，提提取效率率低，耗耗时长，特特别是用用水作溶溶剂，提提取液易易发霉变变质，必必要时可可加入适适量防腐腐剂。图1 渗漉装置渗漉法法 是是将药材材粗粉置置渗漉筒筒内，使使溶剂自自上而下下匀速流流动，达达

18、到渗漉漉提取天天然产物物的一种种浸出法法。因溶溶剂一直直处于动动态，造造成了浓浓度差，使使扩散能能较好的的进行，故故本法浸浸出效率率较浸渍渍法高。因因在常温温下渗漉漉，适用用于遇热热易破坏坏的成分分的提取取。常用用溶剂有有不同浓浓度的乙乙醇、酸酸性乙醇醇、碱性性乙醇、酸酸水、碱碱水和水水等。连连续渗漉漉装置见见图1。操操作步骤骤为浸润润、装筒筒、排气气、浸渍渍和渗漉漉。装筒筒均匀、松松紧合适适，充分分浸渍和和控制流流速为关关键。一一般流速速以每分分钟2mml5mll为宜。通通常收集集渗漉液液约为药药材重量量的8倍倍100倍，或或以成分分鉴别试试验决定定渗漉终终点。生生产上，则则可将后后期的稀稀

19、渗漉液液套用来来提高溶溶剂的浸浸出效率率。溶剂剂消耗量量大和提提取时间间长是本本法的不不足之点点。 煎煮法法 将药材材粗粒或或薄片置置适当容容器（避避免用铁铁器）中中，加水水加热煮煮沸。一一般煎煮煮2次3次，第第1次11h，第22、3次次可酌减减煎煮时时间。含含挥发性性成分及及遇热易易破坏成成分的天天然药物物不宜用用本法。含含多糖类类量大的的药材因因煎煮后后，淀粉粉等多糖糖呈糊状状，使提提取液粘粘稠，过过滤困难难，也不不适宜。回流提提取法 将将药材粗粗粉置于于圆底烧烧瓶中，添添加乙醇醇或其它它低沸点点有机溶溶剂至烧烧瓶容量量的1/222/3处处，接上上球形或或直形冷冷凝管，置置水浴上上加热回回

20、流适时时，趁热热滤取提提取液，药药渣再用用新溶剂剂回流22次33次，若若遇成分分在溶剂剂中不易易溶解或或药材质质地坚实实不易溶溶出时，需需适当延延长每次次提取时时间或增增加提取取次数，合合并滤液液，浓缩缩即得提提取物。本本法提取取效率较较高，但但溶剂用用量较大大，操作作也较麻麻烦，因因药材与与水浴接接触，受受热温度度较高、时时间较长长，不适适用于遇遇热不稳稳定成分分的提取取。连续回回流提取取法 索氏氏提取器器弥补了了分次加加热提取取法中需需要溶剂剂量大并并操作麻麻烦的不不足，但但提取时时间较长长，一般般约需44h110h才才能提取取完全，因因此，对对热不稳稳定的成成分慎用用。为防防止成分分破坏

21、，可可在提取取过程中中，提取取1h2h后后转移出出提取液液，另加加新溶剂剂再继续续提取。超声提提取法 超超声波是是一种弹弹性机械械振动波波，是OO以外的的声振动动。本法法利用其其高频率率的振动动，产生生并传递递强大的的能量给给药材和和溶剂，使使它们作作高速度度的运动动，产生生的穿透透效应比比电磁波波深。由由于大能能量的超超声波作作用在液液体里，当当振动处处于稀疏疏状态时时，液体体被撕裂裂成许多多小空穴穴，待其其在瞬间间闭合时时，产生生高达数数百毫帕帕的瞬时时压力，这这一现象象称作空空化现象象，这种种空化现现象可击击碎药材材，加速速药材中中的成分分溶入溶溶剂，使使其进一一步提取取，从而而增加了了

22、提出效效率，因因此，超超声提取取法的提提取效率率优于前前述各提提取法。本本法操作作简便，适适用于各各种溶剂剂的提取取；提取取时间短短，一般般只需数数十分钟钟即可完完成；不不需加温温即可达达到提取取目的，故故也适用用于对热热不稳定定成分的的提取。2水蒸蒸气蒸馏馏法水蒸气蒸蒸馏法只只适用于于具挥发发性，能能随水蒸蒸气馏出出而不被被破坏，与与水不发发生反应应而又难难溶于水水的天然然产物的的提取。如如挥发油油、小分分子挥发发性成分分麻黄碱碱、丹皮皮酚、蓝蓝雪醌的的提取。实实验室用用的水蒸蒸气蒸馏馏装置见见图2。将将药材粗粗粉置蒸蒸馏瓶中中，加适适量水充充分润湿湿，体积积为蒸馏馏瓶容量量的1/3为宜宜。

23、加热热水蒸气气发生器器产生水水蒸气，通通入蒸馏馏瓶中，将将药材中中挥发性性成分共共同蒸馏馏出来，经经冷凝管管，收集集于接受受瓶中。为为避免部部分水蒸蒸气冷凝凝增加蒸蒸馏瓶内内体积，必必须使蒸蒸馏瓶保保温或用用小火加加热。蒸蒸馏中断断或完成成时，必必须先打打开三通通管的螺螺旋夹，使使与大气气压相通通后，才才能停止止加热水水蒸气发发生器，以以免蒸馏馏瓶中液液体倒吸吸入水蒸蒸气发生生器内。分分离一些些在水中中溶解度度较大的的挥发性性成分常常采用盐盐析法，在在蒸馏液液中加入入达饱和和量的氯氯化钠。硫硫酸铵等等，促使使挥发性性成分自自水中析析出，或或采用低低沸点脂脂溶性溶溶剂萃取取。图2实验验室水蒸蒸气

24、蒸馏馏装置水蒸气蒸蒸馏法的的原理是是基于两两种互不不相溶的的液体共共存时，两两组分的的蒸气压压和它们们各自在在纯状态态时的蒸蒸气压相相等，混混合体系系的总蒸蒸气压为为两组分分蒸气压压之和，也也就是说说，总蒸蒸气压恒恒定高于于任一组组分的蒸蒸气压，而而沸点则则恒定低低于任一一纯组分分的沸点点，也就就是这里里所提取取的挥发发性成分分，其沸沸点一般般高于1100。因此此，当研研究的天天然产物物的沸点点很高，不不易直接接进行蒸蒸馏，或或者在达达到纯组组分的沸沸点以前前其已开开始分解解，不能能用常压压蒸馏的的方法提提取时，可可采用本本法来进进行纯化化。超临界流流体是物物质处于于临界温温度和临临界压力力以

25、上时时，所形形成的一一种特殊殊的相态态，其物物理性质质介于液液体和气气体之间间，具有有密度接接近液体体、粘度度近于气气体，扩扩散系数数为液体体的百倍倍，介电电常数也也随着压压力增大大而增加加等特性性，从而而呈现出出较液体体溶剂易易于穿透透到样品品介质中中的优点点。超临临界流体体萃取法法是利用用超临界界流体作作为萃取取剂从液液体或固固体样品品中萃取取成分的的方法。应应用本法法提取天天然产物物，常用用的萃取取剂是超超临界二二氧化碳碳。其具具有操作作范围广广（常用用压力88MPaa300MPaa，温度度35800），便便于调节节，尤适适合于对对光、热热不稳定定成分的的萃取；可通过过控制压压力和温温度

26、达到到选择性性地提取取各类成成分的目目的，通通过降低低流体的的压力使使被萃取取的成分分凝析而而分离，使使萃取到到分离一一步完成成；二氧氧化碳具具有无毒毒、无味味、不燃燃烧、不不残留、价价廉易得得、可循循环使用用等优点点。超临临界二氧氧化碳对对亲脂性性成分溶溶解性能能与二氯氯甲烷相相当。对对极性大大、分子子量大的的成分萃萃取需加加入夹带带剂如水水、甲醇醇、乙醇醇、戊醇醇等改变变选择性性、提高高溶解度度。超临临界二氧氧化碳萃萃取技术术虽已显显示诸多多的优点点，但由由于工艺艺技术要要求高，属属高压设设备，投投资较大大，目前前尚处于于发展阶阶段。（二）天天然产物物分离、纯纯化技术术用各种提提取方法法得

27、到的的提取液液，一般般体积较较大，所所含成分分的浓度度较低，需需进行浓浓缩以提提高浓度度。若溶溶剂选择择合适，提提取液略略作浓缩缩，即有有结晶析析出，如如用乙醇醇提取桔桔皮中的的橙皮苷苷，用氯氯仿提取取白花丹丹中的蓝蓝雪醌。但但这种情情况是极极个别的的，通常常所得的的提取液液是诸多多成分的的混合物物，往往往需经反反复多次次的分离离纯化处处理才能能获得单单体。分分离和纯纯化是两两个不可可绝然分分割的步步骤，它它们经常常是同时时进行互互相包含含的过程程。在分分离过程程中包含含着纯化化的作用用，而在在纯化过过程中也也包含着着分离微微量成分分或杂质质的过程程。1蒸馏馏与浓缩缩蒸馏是浓浓缩、分分离和纯纯

28、化液态态物质的的最重要要最常用用的手段段。所采采用的方方法视溶溶剂和有有效成分分的性质质而定。常常压蒸馏馏法适用用于有效效成分受受热不易易分解，低低沸点有有机溶剂剂特别是是氯仿、乙乙醚、石石油醚等等的提取取液的浓浓缩。处处理乙醚醚提取液液时，禁禁止用明明火或电电炉加热热，需用用电热板板或没有有明火的的其它装装置加热热水浴。减减压蒸馏馏法适用用于溶剂剂沸点高高，有效效成分受受热易分分解的提提取液的的浓缩。在在实际工工作中，对对溶剂沸沸点超过过70的，在在可能条条件下应应采用减减压浓缩缩。常用抽气气减压装装置有水水泵和油油泵。为为防止水水压变动动引起倒倒吸，在在水泵和和蒸馏装装置间需需装安全全瓶；

29、为为防止挥挥发性物物质及腐腐蚀性气气体侵入入油泵，需需装置安安全瓶和和干燥、吸吸收装置置。蒸馏馏结束后后应按顺顺序先撤撤热源，关关闭压力力计活塞塞，慢慢慢打开安安全瓶活活塞，使使整个系系统与大大气相通通后，才才能关上上水泵或或油泵。减减压蒸馏馏如苷、多多糖等产产生大量量泡沫的的水提液液时，需需在蒸馏馏瓶与冷冷凝器之之间装一一防泡球球，以用用来消泡泡。薄膜蒸发发装置该装置使使溶液以以液膜状状态迅速速通过加加热管，受受热表面面积大，从从而提高高了浓缩缩效率，并并缩短了了受热时时间是一一类较实实用的浓浓缩方法法，特别别适用于于浓缩以以水或稀稀醇作溶溶剂的提提取液。有有时提取取液浓缩缩到小体体积放置置

30、后，有有固体或或结晶析析出，可可将析出出物滤出出，供进进一步分分离。滤滤液再浓浓缩，放放置，再再观察和和处理，直直到母液液蒸干为为止。如如含叶药药材用770乙乙醇提取取时，在在回收乙乙醇至含含醇量近近15200时，放放置冰箱箱，绝大大部分叶叶绿素可可沉淀出出来。可可滤除后后，再进进一步浓浓缩至近近稠膏状状时，乘乘热转移移至容量量较小的的圆底烧烧瓶内，置置热水浴浴上，直直接减压压抽气，使使提取物物发泡成成干燥疏疏松状，方方便进一一步处理理。2萃取取萃取是天天然药物物化学实实验中用用于分离离、纯化化有效成成分的常常用操作作之一。其其原理是是利用混混合物中中各成分分在两种种互不相相溶（或或微溶）溶溶

31、剂中分分配系数数的不同同而达到到分离的的目的。依依据分配配定律，化化合物在在一定的的温度和和压力下下，溶解解在两个个同时存存在的互互不相溶溶的溶剂剂里，达达到平衡衡后，该该化合物物在两相相中浓度度的比是是一常数数，称为为分配系系数（KK）。各各成分在在两相溶溶剂中分分配系数数相差越越大，则则分离效效率就越越高。我我们可用用分离因因子值来表表示分离离的难易易；A、BB两种成成分在同同一溶剂剂系统中中进行萃萃取，则则其分离离因子：设KA10， KBB=01，则则KAKB10/0.111000第2次用用Smll有机相相萃取，剩剩在水相相中的溶溶质为WW2，同同样， 若若每次用用Smll有机相相作n次

32、萃取取，最后后剩余在在水相VVml中中的溶质质Wn为为： 若若n次SmmI有机机相作总总量1次次萃取，剩剩余在水水相VMM中的溶溶质W1为：说明总量量相同的的溶剂，分分次萃取取的效率率要比11次萃取取的效率率高。例例如，在在1000ml水水含有44g正丁丁酸的溶溶液，在在15tt时用1100mml苯萃萃取，设设在该温温度时正正丁酸在在苯和水水中的分分配系数数KD3。用用苯1000m111次荤荤取后在在水中剩剩余量为为1.00克；用用1000ml苯苯分3次次等量萃萃取，则则在水中中剩余量量为0.5g。实际操作作中，溶溶剂在第第1次提提取时，一一般为水水提液的的1/33，以后后的用量量可酌减减，约

33、为为1/441/6。液一液萃萃取中常常遇到乳乳化现象象，特别别是自碱碱性水提提液中以以氯仿进进行萃取取时，这这种现象象更为严严重。这这是因为为天然药药物中含含有皂苷苷、蛋白白质、多多种植物物胶质、鞣鞣质等表表面活性性物质，加加上两相相互不相相溶的溶溶剂和振振摇等因因素促成成了乳状状液的形形成。有有时由于于存在少少量轻质质的沉淀淀、溶剂剂互溶、两两液相的的密度相相差较小小等原因因也会使使两液相相不能清清晰地分分开。用用来破坏坏乳化的的方法有有：较长时时间静置置。将乳状状液分出出（有时时乳化层层就是所所需要的的成分），再再换新溶溶剂萃取取。将乳状状液加温温或冷冻冻。将乳状状液抽滤滤。若因两两种溶剂

34、剂能部分分互溶而而乳化，可可加入少少量电解解质（如如氯化钠钠），利利用盐析析作用破破乳。在在两相密密度相差差较小时时，也可可加入氯氯化钠，以以增加水水相的密密度。加入低低级醇如如乙醇、戊戊醇，其其表面活活性更强强，把原原来的界界面活性性剂顶替替，达破破乳目的的。pH梯度度萃取法法是分离离酸性、碱碱性、两两性成分分常用的的手段。其其原理是是由于溶溶剂系统统 pHH变化改改变了它它们的存存在状态态（游离离型或解解离型），从从而改变变了它们们在溶剂剂系统中中的分配配系数。如如混合黄黄酮苷元元，由于于结构中中酚羟基基的数目目和位置置不同，各各自所呈呈酸性强强弱不同同，可使使溶于有有机相（如如乙醚），依

35、依次用55碳酸酸氢钠，55碳酸酸钠、002氢氧化化钠、44氢氧氧化钠的的水溶液液萃取而而达分离离的目的的。分离离碱性强强弱不同同的游离离生物碱碱，可用用pH由由高至低低的酸性性缓冲溶溶液顺次次萃取，使使碱性由由强到弱弱的生物物碱分别别萃取出出来。（2）逆逆流连续续萃取法法是根据两两种互不不相溶的的溶剂的的相对密密度不同同而自然然分层，分分散相液液滴逆流流穿过连连续相而而进行连连续萃取取的方法法。其操操作简便便，萃取取比较完完全并可可避免乳乳化，适适合各种种密度的的溶剂萃萃取。装装置见图图5。萃萃取管内内填充小小瓷圈或或不锈钢钢丝。萃萃取管可可用一根根，数根根或更多多，以分分配效率率的需要要而定

36、。密密度小者者置高位位贮存器器中，大大者置低低位贮存存器中。如如用氯仿仿从川楝楝皮水浸浸液中提提川楝素素，则氯氯仿置低低位贮存存器中，水水提取的的浓缩液液贮于高高位容器器内。萃萃取是否否完全，可可用薄层层色谱，纸纸色谱及及显色反反应或沉沉淀反应应进行检检查。（3）逆逆流分溶溶法与液液滴逆流流分配法法逆流分溶溶法是一一种多次次，连续续的液一一液萃取取分离方方法，经经仪器操操作，作作数百次次甚至千千余次的的两相溶溶剂的振振摇、静静止、分分离、转转移程序序，将两两个分配配系数很很接近的的化合物物分离。操操作条件件温和，样样品容易易回收，特特别适合合于分离离因子较较小、中中等极性性、不稳稳定物质质的分

37、离离。样品品极性过过大或过过小，或或分配系系数受浓浓度或温温度影响响过大时时则不易易用本法法分离。易易于乳化化的溶剂剂系统也也不宜采采用。液滴逆流流分配法法又称液液滴逆流流色谱法法。原理理类似逆逆流分溶溶，使移移动相在在固定相相的液柱柱中呈液液滴形式式垂直上上升或下下降达到到逆流色色谱分离离的方法法。溶剂剂系统的的选择基基本同逆逆流分溶溶法，但但要求能能在短时时间分离离成两相相，并能能生成有有效的液液滴。因因不需振振荡，故故不易乳乳化或产产生泡沫沫）特别别适用于于皂苷类类的分离离。用氮氮气驱动动移动相相，适用用于易被被氧化物物质的分分离。目目前已广广泛用于于皂苷、生生物碱、酸酸性成分分、蛋白白

38、质、糖糖类等天天然产物物的分离离与精制制，并取取得良好好的效果果。3结晶晶与重结结晶大多数的的天然产产物在常常温下是是固体物物质，具具有结晶晶的通性性，有一一定的熔熔点和结结晶学的的特征，有有利于化化合物的的鉴定。结结晶法是是利用混混合物中中各成分分在某种种溶剂中中溶解度度不同的的特性，滤滤去某些些固体成成分中伴伴随的杂杂质，而而使它们们通过析析晶过程程达到互互相分离离、精制制的目的的。结晶晶的形成成是同类类分子的的自相排排列的产产物，如如试样中中杂质太太多，阻阻碍分子子的排列列，就很很难析晶晶，也就就是说，试试样必须须达到一一定的纯纯度。通通常，能能结晶的的大部分分是比较较纯的化化合物，但不

39、不一定是是单体化化合物，有有时它仍仍是个混混合物，需需进一步步分离纯纯化。因因此，结结晶法是是天然药药物化学学实验中中获得单单体的一一个重要要环节。形成结晶晶的条件件是有效效成分在在欲结晶晶的混合合物中的的含量、适适宜的溶溶剂系统统、合适适的温度度和时间间、正确确的操作作等。其其中最主主要的是是选择合合适的溶溶剂。（1）溶溶剂的选选择理想的溶溶剂必须须具备以以下条件件：不与结结晶物质质起化学学反应；杂质与与结晶物物质在溶溶剂中的的溶解度度相差很很大。例例如，结结晶成分分热时溶溶解度大大，冷时时溶解度度小，而而对杂质质则冷热热都不溶溶或冷热热全能溶溶解；溶剂的的沸点不不宜大高高或太低低。沸点点太

40、低则则溶剂易易挥发逸逸失，过过高则不不易将结结晶表面面的溶剂剂除去。常常用的溶溶剂为甲甲醇、乙乙醇、丙丙酮、氯氯仿、乙乙酸乙酯酯等；能给出出较好的的晶形；无剧毒毒。事实实上很少少能找到到如上所所要求的的理想溶溶剂，需需要通过过小量摸摸索试验验而定，或或藉文献献资料，参参考同类类型化合合物的一一般溶解解性质和和结晶的的溶剂条条件，或或依据“相似相相溶”规律按按所推测测的结晶晶物质的的极性大大小来选选择溶剂剂。当不不了解结结晶物质质的溶解解性能时时，可取取少量样样品（数数毫克），用用不同溶溶剂（数数滴或数数毫升）在在小试管管中，用用滴管逐逐滴加入入溶剂试试验其溶溶解度，包包括冷时时或热时时的溶解解

41、度。一一般首选选乙醇，因因它为脂脂溶性和和水溶性性基团均均可用的的溶剂，且且经济安安全。有些成分分在一般般溶剂中中不易形形成结晶晶，可考考虑其它它不常用用的溶剂剂如二氧氧六环、二二甲基亚亚矾、乙乙睛、甲甲酞胺、二二甲基甲甲酞胺、冰冰醋酸等等。如葛葛根素在在冰醋酸酸中形成成结晶；大黄素素在吡啶啶中易于于结晶。也也有用水水或酸水水结晶，如如小檗碱碱可在水水中结晶晶；石蒜蒜碱可用用5盐盐酸溶液液生成盐盐酸盐结结晶。当难以选选择到合合适的单单一溶剂剂时，通通常使用用混合溶溶剂。先先将样品品用易溶溶的溶剂剂溶解，然然后在加加热的情情况下，分分次滴加加对样品品难溶而而与原来来溶剂能能相混溶溶的溶剂剂，直至

42、至初显混混浊，再再略加热热溶解或或稍滴加加易溶的的溶剂，使使溶液澄澄明后置置室温或或冰箱中中析晶。在在选择混混合溶剂剂时，最最好使需需结晶的的成分在在低沸点点溶剂中中较易溶溶解，而而在高沸沸点溶剂剂中较难难溶解，这这样可在在放置过过程中，先先挥发低低沸点溶溶剂，使使结晶慢慢慢析出出。常用用的混合合溶剂有有：水一一乙醇、乙乙醇一乙乙醚、石石油醚一一苯、水水一丙酮酮、乙醚醚一乙醇醇一乙酸酸乙酯、石石油醚一一乙醚等等。（2）结结晶溶液液的制备备结晶溶液液一般是是过饱和和溶液。通通常将需需结晶物物质置于于锥形瓶瓶中，加加入较需需要量略略少的溶溶剂，于于水浴上上加热至至微沸，为为了避免免溶剂挥挥发及安安

43、全操作作，应在在装置中中接上冷冷凝管，若若未完全全溶解，可可逐步添添加溶剂剂，直至至所需结结晶物质质刚好完完全溶解解（要注注意判断断是否有有不溶性性杂质，以以免误加加过多溶溶剂）。趁趁热过滤滤，放置置冷处析析晶。结结晶时一一般以低低温较好好，且温温度应逐逐渐降低低，使结结晶慢慢慢形成，这这样才能能使结晶晶含杂质质少，纯纯度高。溶溶剂的用用量是影影响结晶晶的纯度度和速率率关键。在在放置过过程中，先先塞紧瓶瓶塞，避避免液面面先出现现结晶，而而致结晶晶纯度较较低。如如不结晶晶，可打打开瓶塞塞，使溶溶剂逐步步自然挥挥发，慢慢慢析晶晶。也可可以用玻玻璃棒或或金属刮刮勺摩擦擦瓶壁或或加入微微量晶种种，诱导

44、导析晶。有有些化合合物即使使在含量量高而又又纯的情情况下也也不易结晶晶时，可可将其制制备成结结晶性衍衍生物，如如生物碱碱可制成成盐，有有 机酸酸制成钾钾、钠、钙钙、铵盐盐，羟基基化合物物制成乙乙酰化衍衍生物或或苯甲酞酞衍生物物，碳基基化合物物可以制制成脎或或腙类化化合物等等。分离离后，再再用化学学方法处处理使其其恢复到到原来化化合物。（3）重重结晶与与分步结结晶一般采用用减压抽抽滤把结结晶从母母液中分分离出来来。晶体体需用少少量溶剂剂洗涤，以以除去存存在于结结晶表面面的母液液。洗涤涤时，宜宜暂停抽抽气，用用刮刀小小心拨动动，使所所有晶体体润湿，略略静置后后再行抽抽气。母母液适当当浓缩放放置，又

45、又可得到到一部分分纯度较较低的晶晶体。上上述得到到的结晶晶仍为粗粗晶，有有时仍是是几个成成分的混混合体，可可以用分分步结晶晶使之分分开。由由于不同同成分的的含量不不同、形形成晶体体的条件件不同，析析晶也有有先后。因因此在制制备结晶晶时，最最好在形形成一批批结晶后后，立即即抽滤分分出结晶晶，母液液略作浓浓缩，放放置后得得第二批批结晶。抽抽滤后又又浓缩母母液得到数数批结晶晶。从上上述分步步结晶法法所得各各部分结结晶，其其纯度往往往有较较大的差差异，而而且常是是不同的的成分，在在未作检检查之前前不要贸贸然混合合。纯化化结晶常常用的方方法是数数次的重重结晶。重重结晶用用的溶剂剂可以用用原先制制备结晶晶

46、的溶剂剂，但也也经常改改变，因因为经精精制后的的结晶在在溶剂中中的溶解解度和混混晶的溶溶解度随随着纯度度的改变变而改变变。通常，可可依据结结晶外观观的色泽泽均匀，晶晶形一致致程度和和是否具具有一定定的熔点点和较小小的熔距距；结合合在薄层层色谱或或纸色谱谱上，经经数种不不同展开开系统展展层，均均显示出出的单一一近圆形形的斑点点来判断断结晶的的纯度。必必要时，可可制备衍衍生物，采采用高效效薄层色色谱、气气相色谱谱、高效效液相色色谱来进进一步确确定结晶晶是单一一化合物物。4干燥燥分离得到到的单体体需要干干燥，除除去附着着在结晶晶表面的的少量水水分或溶溶剂，尤尤其在进进行测定定熔点。波波谱分析析、定性

47、性和定量量分析时时必须使使其完全全干燥，以以免影响响检测的的准确性性。在两两相溶剂剂萃取后后，有机机相需干干燥除去去水分，精精制或再再生溶剂剂时也需需干燥脱脱水。所所以，干干燥是天天然药物物化学实实验中最最普通而而又很重重要的操操作。选选择适宜宜的干燥燥方法，选选择适当当的干燥燥剂是本本操作的的关键。（1）基基本原理理干燥的方方法大致致可分为为物理法法和化学学法两种种。吸附附、分馏馏以及利利用共沸沸蒸馏除除去水分分均为物物理法。用用吸附物物理法干干燥时，常常用分子子筛吸附附去水，分分子筛是是多水硅硅铝酸盐盐的晶体体，晶体体内部有有许多孔孔径大小小均一的的微孔，具具有很强强的吸咐咐能力，能能有效地地把小于于其孔径径的分子子吸进孔孔内，从从而达到到将不同同大小的的分子“筛分”的目的的。其无无毒、无无腐蚀性性，不溶溶于水和和有机溶溶剂，能能在pHH为512的的范围内内使用。常常用的为为3A钾A型和44A钠钠A型型，它们们的微孔孔的表观观直径分分别约为为322、42，能能吸附直直径4的分子子，商品品规格的的吸附水水量分别别为1700mgg、2400mgg（水水分子的的直径约约为3，最最小有机机分子甲甲烷的直直径为449）。新新的分子子筛用前前应于3350100，烘22h活化化脱水，待待