消毒产品中丙酸氯倍他索和盐酸左氧氟沙星测定液相色谱21284.docx

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1、消毒产品中丙酸氯倍他索和盐酸左氧氟沙星测定液相色谱-串联质谱法Determination of clobetasol propionate and levofloxacin hydrochloride in disinfection product - LC-MS-MS method1 范围围本方法规定定了膏霜霜类消毒毒产品中中丙酸氯氯倍他索索和盐酸酸左氧氟氟沙星残残留量液液相色谱谱-串联联质谱测测定方法法。本方法适用用于膏霜霜类消毒毒产品中中丙酸氯氯倍他索索和盐酸酸左氧氟氟沙星残残留量的的测定。 取样量为00.1gg时，本本方法对对丙酸氯氯倍他索索和盐酸酸左氧氟氟沙星的的检出限限见表11。表

2、1 丙丙酸氯倍倍他索和和盐酸左左氧氟沙沙星的检检出限、保保留时间间和特征征离子中文名称英文名称检出限（g/gg）保留时间（min）特征离子(m/zz)丙酸氯倍他他索Clobeetassol proopioonatte0.00997.83467.00/3555.22/3773.44盐酸左氧氟氟沙星Levoffloxxaciin hhydrrochhlorridee0.061.11362.00/2660.99/3118.222 规范范性引用用文件3 原理理试样中丙酸酸氯倍他他索和盐盐酸左氧氧氟沙星星用甲醇醇提取，提提取液经经0.445mm滤膜过过滤，用用C188柱分离离后，用用液相色色谱-串串联质

3、谱谱仪测定定，正离离子扫描描，离子子对定性性，峰面面积定量量。4 试剂剂和材料料除另有说明明外，所所用试剂剂均为分分析纯，水水为不含含有机物物的纯水水，纯水水中干扰扰物的浓浓度需低低于方法法中待测测物的检检出限。4.1甲醇醇：农药药残留级级。4.2乙腈腈：农药药残留级级。4.3甲酸酸：分析析纯。4.4标准准品：丙丙酸氯倍倍他索和和盐酸左左氧氟沙沙星均购购自中国国药品生生物制品品检定所所，纯度度999.8%。4.5标准准溶液：准确称称取丙酸酸氯倍他他索适量量，用乙乙腈水水（1：1）配配制成1100g/mmL的标标准贮备备液。准准确称取取盐酸左左氧氟沙沙星适量量，用纯纯水配制制成1000gg/mL

4、L的标准准贮备液液。准确确量取上上述标准准贮备溶溶液适量量，用乙乙腈稀释释配制成成浓度为为10.0gg/mLL的混合合标准中中间溶液液，将标标准中间间溶液转转移到安安瓿瓶中中于4CC保存。临临用前，再再根据需需要用甲甲醇配制制成不同同浓度的的标准使使用溶液液。4.6甲酸酸溶液(0.22%，vv/v)：量取取2mLL甲酸，用用纯水定定容至110000mL。4.7 00.455m滤滤膜。5 仪器器5.1 液液相色谱谱-串联质质谱联用用仪：HHP11100高高效液相相色谱仪仪(Aggileent) - APII 40000质质谱仪(Appplieed BBiossysttemss) ，电电喷雾离离子

5、化源源(ESSIMSS，NII/PII模式)。5.2 分分析天平平：感量量0.11mg和和0.0001gg。5.3实验验室纯水水机：BBarnnsteead纯纯水机。5.4涡旋旋振荡器器：Sccienntiffic Inddusttriees 涡涡旋振荡器器。5.5 具具塞试管管：100mL。6 试样样的制备备与保存存6.1 试试样的制制备取有代表性性样品55g，搅搅拌均匀匀，制成成实验室室样品。6.2 试试样保存存制备好的试试样置于于室温保保存。7 测定定步骤7.1样品品前处理理称取0.11g0.2g样样品 (精确到到0.0001 g) ，置于于10mmL试管管中，加加入3.00mmL甲醇醇

6、溶液，涡涡旋振摇摇使样品品分散后后，超声声振荡110miin。静静置，吸吸取上清清液经滤滤膜（44.7）过滤滤后，供供液相色色谱-串联质质谱测定定。7.2 测测定7.2.11液相色色谱条件件a）色谱柱柱：Waaterrs AAtlaantiisdC18，3m，2.111500mm；b）柱温：25CC；c）流动相相：甲酸酸溶液（44.6）、水水和乙腈腈，洗脱脱梯度见见表2；d）流速：2500L /miin；e）进样量量：100L。表2 分离离丙酸氯氯倍他索索和盐酸酸左氧氟氟沙星的的洗脱梯梯度时间(miin)0.2%甲甲酸溶液液(%)纯水(%)乙腈(%)0545501545503509555095

7、75455011545507.2.22 质谱谱条件a）离子化化方式：热喷雾雾电离(TSII)；b）扫描方方式：正正离子扫扫描；c）检测方方式：多多反应监监测（MMRM）；d）碰撞气气(CAAD)：7.00 pssi；e）气帘气气(CUUR)：15.0 ppsi；f）雾化气气(GSS1)：30.0 ppsi；g）加热气气(GSS2)：35.0 ppsi；h）喷雾电电压(IIS)：40000V；i）去溶剂剂温度(TEMM)：4450CC；j）碰撞室室射出电电压（CCXP）：16VV；k）定性离离子对、定定量离子子对、扫扫描时间间、碰撞撞气能量量和去簇簇电压，见见表3。表3 丙酸酸氯倍他他索和盐盐酸

8、左氧氧氟沙星星的定性性离子对对、定量量离子对对、扫描描时间、碰碰撞气能能量和去去簇电压压化合物定性离子对对（m/z）定量离子对对（m/z）扫描时间Dwelll tiime（mms）碰撞气能量量CE（eVV）去簇电压DDP（VV）丙酸氯倍他他索467.00/3555.22467.00/3773.44467.00/3555.221002555盐酸左氧氟氟沙星362.99/2660.99362.99/3118.22362.99/2660.9910035877.2.33 液相相色谱-串联质质谱测定定7.2.33.1 定性测测定用丙酸氯倍倍他索和和盐酸左左氧氟沙沙星的定定性离子子对（见见表3）进进行定性

9、性。7.2.33.2 定量测测定将混合标准准中间溶溶液用甲甲醇稀释释配制成成045000ngg/mLL的标准准使用溶溶液，分分别从标标准溶液液中取一一定量的的标准溶溶液加入入到空白白样品中中，配制制成05500nng/mmL的标标准系列列。经前前处理后后进样分分析，以以使用溶溶液浓度度为横坐坐标，峰峰面积为为纵坐标标，绘制制标准工工作曲线线。采用用外标法法进行定定量测定定。样品品溶液中中丙酸氯氯倍他索索和盐酸酸左氧氟氟沙星的的响应值值应在标标准工作作曲线线线性范围围内。在在上述色色谱条件件和质谱谱条件下下，丙酸酸氯倍他他索和盐盐酸左氧氧氟沙星星标准物物质液相相色谱-串联质质谱的多多反应监监测（

10、MMRM）色色谱图参参见图AA.1。7.3 平平行试验验按以上步骤骤，对同同一试样样进行平平行试验验测定，丙丙酸氯倍倍他索和和盐酸左左氧氟沙沙星的平平行测定定相对偏偏差应小小于200%。7.4 空空白试验验除不称取试试样外，均均按上述述步骤同同时完成成空白试试验。8 结果果计算样品中丙酸酸氯倍他他索和盐盐酸左氧氧氟沙星星的质量量分数可可按式（11-1）计计算： 式中，j - 消毒产产品中丙丙酸氯倍倍他索和和盐酸左左氧氟沙沙星的质质量分数数，g/gg；r1-从回归方方程中查查出测试试溶液中中丙酸氯氯倍他索索和盐酸酸左氧氟氟沙星的的质量浓浓度，nng/mmL；V1 -提取取溶液体体积，mmL； -

11、称样量，gg。9 精密度和准准确度同一实验室室对加标标样品重重复测定定，丙酸酸氯倍他他索和盐盐酸左氧氧氟沙星星的相对对标准偏偏差和平平均回收收率数据据参见附附录C。附录A (资料性附附录)丙酸氯倍他他索和盐盐酸左氧氧氟沙星星标准物物质多反反应监测测(MRRM)色色谱图丙酸氯倍他他索和盐盐酸左氧氧氟沙星星标准物物质多反反应监测测(MRRM)色色谱图，见见图A.1。图A.1 丙酸氯氯倍他索索和盐酸酸左氧氟氟沙星标标准物质质多反应应监测(MRMM)色谱谱图附录B (资料性附附录)标准曲线消毒产品中中丙酸氯氯倍他索索和盐酸酸左氧氟氟沙星的的线性回回归方程程，见表表B.11。表B.1 消毒产产品中两两种

12、抗生生素的线线性回归归方程化合物线性范围（nng/mmL）abr丙酸氯倍他他索050001.0911044.2811040.99991盐酸左氧氟氟沙星050001.821104-2.9221040.99995附录C (资料性附附录)回收率和重重复性消毒产品中中丙酸氯氯倍他索索和盐酸酸左氧氟氟沙星的的添加回回收率和和重复性性，见表表C.11。表C.1 消毒产产品中丙丙酸氯倍倍他索和和盐酸左左氧氟沙沙星的添添加回收收率(%)和重重复性(n=66)化合物添加水平（g/gg）平均回收率率(%)相对标准偏偏差(%)丙酸氯倍他他索0.67105.22 7.33.49114.444.7盐酸左氧氟氟沙星0.6781.76.03.4997.911.913