细菌培养与革兰氏染色幻灯片.ppt

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1、细菌培养与革兰氏染色细菌培养与革兰氏染色第1页，共23页，编辑于2022年，星期一1.1.细菌革兰氏染色法细菌革兰氏染色法了解革兰氏染色原理了解革兰氏染色原理 掌握革兰染色的方法掌握革兰染色的方法 Click to add title in here 12一一.实验目的实验目的第2页，共23页，编辑于2022年，星期一二、实验材料菌种菌种：大肠杆菌、土壤提取菌：大肠杆菌、土壤提取菌染料染料：草酸铵结晶紫液、卢戈氏碘液：草酸铵结晶紫液、卢戈氏碘液 95乙醇、番红染液乙醇、番红染液其他其他：显微镜、载玻片、接种环、酒精：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、无菌生理盐水灯、无菌生理盐水 第3页，共23页

2、，编辑于2022年，星期一三、基本原理革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法。别染色法。1884年由丹麦医师年由丹麦医师Gram创立。创立。细菌先经碱性染料结晶紫染色，再经碘液媒细菌先经碱性染料结晶紫染色，再经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌紫色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细紫色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（），后者为革兰氏阴性菌（G-）。）。第4页，共23页，编辑于2022年，星期一为观察方便

3、，脱色后再用一种红色染料，如为观察方便，脱色后再用一种红色染料，如碱性番红等进行复染。阳性菌仍带紫色，阴碱性番红等进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。性菌则被染上红色。一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊的核蛋一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊的核蛋白质镁盐与多糖的复合物，它与碘和结晶紫白质镁盐与多糖的复合物，它与碘和结晶紫的复合物结合很牢，不易脱色，阴性菌复合的复合物结合很牢，不易脱色，阴性菌复合物结合程度低，吸附染料差，易脱色，这是物结合程度低，吸附染料差，易脱色，这是染色反应的主要依据。染色反应的主要依据。基本原理第5页，共23页，编辑于2022年，星期一四、方法与步骤操作过程如下：

4、操作过程如下：涂片涂片 干燥干燥 固定固定 草酸铵结晶紫草酸铵结晶紫染色染色（约（约1min）水洗水洗 卢戈氏碘液媒卢戈氏碘液媒染染（约（约1min）水洗水洗 95%乙醇脱色乙醇脱色（约（约30s）水洗水洗 番红复染番红复染（1min）水水洗洗 干燥干燥 镜检镜检第6页，共23页，编辑于2022年，星期一方法与步骤第7页，共23页，编辑于2022年，星期一关键点：关键点：严格掌握严格掌握乙醇脱色程度乙醇脱色程度，如脱色过度，如脱色过度，则阳性菌被误染为阴性菌；而脱色不够则阳性菌被误染为阴性菌；而脱色不够时，阴性菌被误染为阳性菌；时，阴性菌被误染为阳性菌；菌龄菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养也影

5、响染色结果，如阳性菌培养时间很长，或已死亡及部分自行溶解了，时间很长，或已死亡及部分自行溶解了，都常呈阴性反应。都常呈阴性反应。方法与步骤第8页，共23页，编辑于2022年，星期一五、实验内容1.对大肠杆菌、土壤提取菌分别进行革对大肠杆菌、土壤提取菌分别进行革兰氏染色。兰氏染色。2.对大肠杆菌、土壤提取菌混合涂片进行对大肠杆菌、土壤提取菌混合涂片进行革兰氏染色。革兰氏染色。第9页，共23页，编辑于2022年，星期一革兰氏阴性革兰氏阴性（G-）实验内容第10页，共23页，编辑于2022年，星期一枯草芽孢杆菌（G+）实验内容第11页，共23页，编辑于2022年，星期一阳性菌阳性菌第12页，共23页

6、，编辑于2022年，星期一实验内容第13页，共23页，编辑于2022年，星期一一种未知的霉菌一种未知的霉菌第14页，共23页，编辑于2022年，星期一二、细菌培养法二、细菌培养法实验目的1 1、学习和掌握细菌分离与培养的各种基本技术、学习和掌握细菌分离与培养的各种基本技术2 2、进一步熟悉和掌握微生物的无菌操作技术、进一步熟悉和掌握微生物的无菌操作技术第15页，共23页，编辑于2022年，星期一实验仪器和材料实验仪器和材料1 1、仪器：、仪器：接种环、酒精灯、记号笔、试管架等2 2、材料：、材料：普通琼脂平板培养基、斜面培养基液体培养基、大肠杆菌菌落、土壤提取菌落第16页，共23页，编辑于20

7、22年，星期一2.2.细菌培养法细菌培养法平板划线法平板划线法斜面培养法斜面培养法液体培养法液体培养法本实验的细菌培养法本实验的细菌培养法细菌培养细菌培养第17页，共23页，编辑于2022年，星期一平板划线接种法平板划线接种法步骤步骤：标记灭菌接种环取菌种分离划线接种细菌（分为四个区域）划线完毕，放入恒温箱培养第18页，共23页，编辑于2022年，星期一平板划线接种法平板划线接种法恒温箱培养第19页，共23页，编辑于2022年，星期一斜面培养基接种法斜面培养基接种法步骤：标记标记灭菌接种环灭菌接种环两斜面并持两斜面并持接种细菌接种细菌接种完毕，恒温培养接种完毕，恒温培养（注意无菌操作）（注意无菌操作）第20页，共23页，编辑于2022年，星期一斜面培养基接种法斜面培养基接种法第21页，共23页，编辑于2022年，星期一液体培养基接种法液体培养基接种法步骤：标记标记灭菌接种环灭菌接种环两液体管并持两液体管并持接种细菌接种细菌接种完毕，恒温培养接种完毕，恒温培养（注意无菌操作）（注意无菌操作）第22页，共23页，编辑于2022年，星期一液体培养基接种法液体培养基接种法第23页，共23页，编辑于2022年，星期一