氨基酸类药物的分析最终.ppt

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1、氨基酸类药物的分析最终现在学习的是第1页，共29页Contents.氨基酸的鉴别试验氨基酸的鉴别试验2氨基酸药物检查氨基酸药物检查3氨基酸含量测定氨基酸含量测定4氨基酸及在医药中的应用氨基酸及在医药中的应用1现在学习的是第2页，共29页氨基酸是构成蛋白质的基本氨基酸是构成蛋白质的基本单位，具有高度营养价值的单位，具有高度营养价值的蛋白质补充剂，有着广泛的蛋白质补充剂，有着广泛的生化作用和临床疗效，可治生化作用和临床疗效，可治疗蛋白质代谢紊乱、蛋白质疗蛋白质代谢紊乱、蛋白质缺损所引起的一系列疾病的缺损所引起的一系列疾病的重要生化药物。重要生化药物。现在学习的是第3页，共29页一：氨基酸 的结构与

2、物化性质1.结构 氨基酸（amino acid）：是含有一个碱性氨基和一个酸性羧基的有机化合物，氨基一般连在-碳上。是生物功能大分子蛋白质的基本组成单位。氨基酸（amino acid）蛋白质的基本结构单元现在学习的是第4页，共29页2.物理性质晶型 氨基酸为白色晶体，不同氨基酸其晶体形状不相同。熔点 氨基酸熔点一般在200300C,而且多在溶解时分解。溶解度 均溶于水，但水中溶解度差别大，能溶解于强酸强碱，不溶于非极性溶剂。旋光性旋光性 除Gly外，所有的天然氨基酸都有旋光性。构成蛋白质的20种氨基酸在可见光区都没有光吸收，在红外区和远紫外区（200nm）都有光吸收.现在学习的是第5页，共29

3、页3.化学性质 氨基氨基 参参加的反应加的反应 羟基羟基 参参加的反应加的反应 氨基氨基&羧基羧基 化学性质现在学习的是第6页，共29页（1）氨基参加的反应氨基参加的反应与亚硝酸反应与亚硝酸反应 Van SlykeVan Slyke（范斯来克（范斯来克 ）法测定氨基酸的）法测定氨基酸的基础。基础。与与酰酰化化试试剂剂反反应应 酰酰化化试试剂剂在在多多肽肽和和蛋蛋白白质质的的人人工工合合成成中中被被用用作作氨氨基基的的保保护试剂。护试剂。烃烃基基化化反反应应 氨氨基基酸酸氨氨基基中中的的第第一一个个H H原原子子可可被被-OH-OH取取代代，如如与与2 2，4 4二二硝基氟苯的反应。硝基氟苯的反

4、应。形形成成席席夫夫碱碱反反应应 氨氨基基酸酸的的-氨氨基基能能与与醛醛类类化化合合物物反反应应生生成成弱弱碱碱，即即席席夫夫碱。碱。脱氨基反应脱氨基反应 经氨基酸氧化酶催化即脱去经氨基酸氧化酶催化即脱去-氨基而转化为酮酸。氨基而转化为酮酸。现在学习的是第7页，共29页（2 2）羧基羧基 参加的反应参加的反应成盐和成酯反应成盐和成酯反应 在特定的化学反应中保护羧基，活化氨基。在特定的化学反应中保护羧基，活化氨基。氨基酸酯是制备氨基酸的酰胺或酰肼的中间物氨基酸酯是制备氨基酸的酰胺或酰肼的中间物成酰氯反应成酰氯反应 可使氨基酸的羧基活化，使它容易与另一氨基可使氨基酸的羧基活化，使它容易与另一氨基酸

5、的氨基结合，用于多肽人工合成。酸的氨基结合，用于多肽人工合成。脱羧基反应脱羧基反应 现在学习的是第8页，共29页（3）氨基氨基&羧基羧基 共同参加的反应茚三酮反应茚三酮反应 茚三酮在酸性溶液中与茚三酮在酸性溶液中与-氨基酸共热，引起氨基酸氧化脱氢、氨基酸共热，引起氨基酸氧化脱氢、脱羧反应，最后生成紫色物质。脱羧反应，最后生成紫色物质。成肽反应成肽反应 一个氨基酸的氨基和另一个氨基酸的羧基缩合成肽，形成肽键。一个氨基酸的氨基和另一个氨基酸的羧基缩合成肽，形成肽键。现在学习的是第9页，共29页鉴别试验旋光性薄层色谱法（TLC）红外吸收光谱法（IR）紫外分光光度法（UV）茚三酮反应.现在学习的是第1

6、0页，共29页旋光度不同氨基酸比旋度不同旋光仪现在学习的是第11页，共29页薄层层析色谱法现在学习的是第12页，共29页紫外分光光度法（紫外分光光度法（UVUV）在在2020种种天天然然氨氨基基酸酸中中，只只有有酪酪氨氨酸酸、色色氨氨酸酸和和苯苯丙丙氨氨酸酸在紫外区有最大吸收。在紫外区有最大吸收。酪酪 氨氨 酸酸 的的 max 275nm 275=1.4x103苯苯丙丙氨氨酸酸的的 max 257nm 257=2.0 x102色色 氨氨 酸酸 的的 max 280nm 280=5.6x103现在学习的是第13页，共29页1 1：酪氨酸：酪氨酸2 2：色氨酸：色氨酸3 3：苯丙氨酸。：苯丙氨酸。

7、紫外分光光度法（紫外分光光度法（UVUV）这这三三种种氨氨基基酸酸可可以以通通过过紫紫外外吸收光谱吸收光谱加以鉴别。加以鉴别。精精密密称称取取酪酪氨氨酸酸、色色氨氨酸酸、苯丙氢酸各适量。苯丙氢酸各适量。用用水水制制成成每每1mL1mL含含20g20g（色色氨氨酸酸）、40g40g（酪酪氨氨酸酸）、200g200g（苯丙氨酸）。（苯丙氨酸）。在在波波长长230230300nm300nm测测定定各各氨氨基酸的吸收光谱，如右图。基酸的吸收光谱，如右图。现在学习的是第14页，共29页红外吸收光谱法（红外吸收光谱法（IRIR）氨氨基基酸酸在在红红外外区区都都有有特特性性图图谱谱，可可以以通通过过与与标标

8、准准氨氨基基酸图谱比较作为氨基酸的鉴别依据。酸图谱比较作为氨基酸的鉴别依据。现在学习的是第15页，共29页红外吸收光谱法（IR）用红外分光光度法进行氨基酸鉴别时，除另有规定外，通常固体供试品均采用溴化钾片法，在400667cm-1范围内测定其吸收图谱。所得的吸收图谱各主要吸收峰波长和各吸收峰间的相互强度关系均应与对照的图谱一致。现在学习的是第16页，共29页茚三酮反应当茚三酮在酸性条件下和氨基酸反应时，氨基酸被氧化分解生成醛，放出氨和二氧化碳，水合茚三酮则成还原型水合茚三酮。然后还原型茚三酮与氨，另一分子茚三酮进一步缩合生成蓝紫色物，最大吸收值的波长为570nm。现在学习的是第17页，共29页

9、氨基酸检查：根据中国药典有关物质测定利用紫外可见光度法测定氨基酸纯度。现在学习的是第18页，共29页氨基酸含量测定方法含量测定含量测定含量测定含量测定 A AC CE EDDBB非水溶非水溶液滴定法液滴定法酸碱滴定法酸碱滴定法其他方法其他方法定氮法定氮法碘量法或溴量碘量法或溴量法法现在学习的是第19页，共29页酸碱滴定法谷氨酸、天冬氨酸等氨基酸，其分子结构中均有羧基，故对其原料药一般采用氢氧化钠滴定液滴定。赖氨酸分子结构有氨基，故可以用酸碱滴定。天冬氨酸天冬氨酸AspCOOHCOOHC CHHNHNH2 2 CHCH2 2C COOHOHOCOOHCOOHC CHHNHNH2 2 谷氨酸谷氨酸

10、GluCHCH2 2C COOHOHOCHCH2 2(CH(CH2 2)4 4 赖氨酸赖氨酸LysCOOHCOOHC CHHNHNH2 2HH2 2N N现在学习的是第20页，共29页非水溶液滴定法中国药典、美国药典和英国药典对所收载氨基酸类药物，除谷氨酸用氢氧化钠为标准溶液的酸碱滴定法，其余均根据其结构特性，采用了非水酸碱滴定法。用冰醋酸作溶剂，高氯酸作标准溶液滴定，电位法或指示剂法确定终点。适用于常量氨基酸的含量测定。现在学习的是第21页，共29页非水溶液滴定法【例】电位滴定法测定酪氨酸的含量 P148电位滴定法是在滴定过程中通过测量电位变化以确定滴定终点的方法。优点：1、不需要准确的测量

11、电极电位值 2、其准确度优于直接电位法电位滴定法是靠电极现在学习的是第22页，共29页非水溶液滴定法滴定方法：将盛有供试品溶液的烧杯置电磁搅拌器上，侵入电极，搅拌，并自滴定管中分次滴加滴定液。开始时可每次加入较多量，搅拌，记录电位；至将近终点前，则应每次加入少量，搅拌，记录电位；至突跃点已过，仍应继续滴加几次滴定液，并记录电位。然后用坐标纸以点位（E）为纵坐标，以滴定液体积（V）为横坐标，绘制E-V曲线，以此曲线的陡然上升或下降部分的中心为滴定终点现在学习的是第23页，共29页非水溶液滴定法计算式：P%=FT(V-V0)/S100%P%:酪氨酸的百分含量；F:高氯酸的滴定液的浓度正因子；T:高

12、氯酸滴定液（0.1mol/L）对酪氨酸的 滴定度，18.12；S:酪氨酸样品质量；V:供试品消耗的高氯酸滴定液的体积；V0：空白消耗的高氯酸滴定液体积；每1mL的高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当18.12mg的无水酪氨酸现在学习的是第24页，共29页定氮法基本原理1.有机物中的胺根在强热和CuSO4，浓H2SO4 作用下，硝化生成（NH4)2SO42NH2+H2SO4+2H=(NH4)2SO4（其中CuSO4做催化剂）2.在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3，收集于H3BO3 溶液中(NH4)2SO4+2NaOH=2NH3+2H2O+Na2SO42NH3+4H3BO3=(NH4)2

13、B4O7+5H2O现在学习的是第25页，共29页定氮法基本原理3.用已知浓度的H2SO4（或HCI）标准溶液滴定，根据HCI消耗的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算因子，既得蛋白质的含量(NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O=(NH4)2SO4+4H3BO3(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3现在学习的是第26页，共29页定氮法中国药典：每1mL硫酸滴定液（0.05mol/L）相当于6.606mg天冬氨酰现在学习的是第27页，共29页碘量法或溴量法盐酸半胱氨酸因其分子结构中含有SH，可用碘量法测定每1mL碘滴定液相当于15.76mg的C3H7NO2SHCL每1mL溴酸钾滴定液（0.01667mol/L）相当于2.403mg的C6H12N2O4S2L-胱氨酸因其分子结构中含有SS，可用溴量法测定现在学习的是第28页，共29页其他方法对于多种氨基酸制成的复方制剂中氨基酸的含量测定，可以采用HPLC或氨基酸自动分析仪进行测定现在学习的是第29页，共29页