动物细胞工程曲精.ppt

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1、动物细胞工程曲第1页，本讲稿共34页关于蛋白质工程的说法错误的是（）A.蛋白质工程能定向改造蛋白质的分子结构，使之更加符合人类的需要B.蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接进行操作，定向改变分子结构C.蛋白质工程能产生出自然界中不曾存在过的新型蛋白质分子D.蛋白质工程又称为第二代基因工程关于蛋白质工程的说法错误的是（）A.蛋白质工程能定向改造蛋白质的分子结构，使之更加符合人类的需要B.蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接进行操作，定向改变分子结构C.蛋白质工程能产生出自然界中不曾存在过的新型蛋白质分子D.蛋白质工程又称为第二代基因工程下列关于蛋白质工程的说法错误的是（）A蛋白质工程能定

2、向改造蛋白质分子的结构，使之更加符合人类的需要B蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接进行操作，定向改变分子的结构C蛋白质工程能产生出自然界中不曾存在过的新型蛋白质分子D蛋白质工程与基因工程密不可分，又被称为第二代基因工程下列关于蛋白质工程的说法错误的是（）A蛋白质工程能定向改造蛋白质分子的结构，使之更加符合人类的需要B蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接进行操作，定向改变分子的结构C蛋白质工程能产生出自然界中不曾存在过的新型蛋白质分子D蛋白质工程与基因工程密不可分，又被称为第二代基因工程2 2、下列关于蛋白质工程的说法错误的是（、下列关于蛋白质工程的说法错误的是（）A A蛋白质工程能定

3、向改造蛋白质分子的结构，使之更蛋白质工程能定向改造蛋白质分子的结构，使之更 加符合人类的需要加符合人类的需要B B蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接进行蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接进行 操作，定向改变分子的结构操作，定向改变分子的结构C C蛋白质工程能产生出自然界中不曾存在过的新型蛋蛋白质工程能产生出自然界中不曾存在过的新型蛋 白质分子白质分子D D蛋白质工程与基因工程密不可分，又被称为第二代蛋白质工程与基因工程密不可分，又被称为第二代 基因工程基因工程B B科学家利用生物技术将改造后的人干扰素基因导入小鼠受精卵科学家利用生物技术将改造后的人干扰素基因导入小鼠受精卵的细胞中，

4、经培育获得转基因小鼠，从转基因小鼠的乳汁中可的细胞中，经培育获得转基因小鼠，从转基因小鼠的乳汁中可以提取出人的干扰素。以提取出人的干扰素。分析：该项技术手段为基因工程还是蛋白质工程？分析：该项技术手段为基因工程还是蛋白质工程？如何判断？如何判断？第2页，本讲稿共34页科学家用植物细胞杂交方法，将番茄的原生质体和马铃薯科学家用植物细胞杂交方法，将番茄的原生质体和马铃薯的原生质体融合，成功地培育出了的原生质体融合，成功地培育出了“番茄番茄马铃薯马铃薯”杂种植杂种植株株 如图，其中如图，其中表示过程，英文字母表示细胞、组织或植表示过程，英文字母表示细胞、组织或植株。据图回答下列问题：株。据图回答下列

5、问题：（1 1）实现过程）实现过程是指是指_，在此之前使用，在此之前使用_处理细胞以除去细胞壁。处理细胞以除去细胞壁。与过程与过程密切相关的具有单层膜结构的细胞器为密切相关的具有单层膜结构的细胞器为_。诱导诱导的方法有的方法有_。原生质体融合原生质体融合纤维素酶、果胶酶纤维素酶、果胶酶物理方法：离心、振动、电激等物理方法：离心、振动、电激等化学方法：聚乙二醇（化学方法：聚乙二醇（PEG）高尔基高尔基体体第3页，本讲稿共34页（2 2）在利用杂种细胞培育成为杂种植株的过程中，依据的）在利用杂种细胞培育成为杂种植株的过程中，依据的原理是原理是_，其中过程，其中过程 相当于相当于_过程，涉及的分裂方

6、式为过程，涉及的分裂方式为_。植物细胞的全能性植物细胞的全能性脱分化、再分化脱分化、再分化有丝分裂有丝分裂(3)e(3)e内的细胞表示内的细胞表示 ，特点是，特点是_,_,它与它与相比分化程度相比分化程度，全能性，全能性 。(4)(4)若想制作人工种子，应该选用若想制作人工种子，应该选用 ，再包裹上，再包裹上_而制成。而制成。细胞排列疏松，高度液细胞排列疏松，高度液泡化的薄壁细胞泡化的薄壁细胞愈伤组织愈伤组织未分化未分化高高胚状体胚状体人工胚乳、人工种皮人工胚乳、人工种皮（5 5）植物体细胞杂交的繁殖方式）植物体细胞杂交的繁殖方式_，具有，具有_个亲本的优个亲本的优良性状。与传统的有性生殖相比

7、具怎样的优点良性状。与传统的有性生殖相比具怎样的优点_。无性生殖无性生殖两两克服远缘杂交不亲和的障碍克服远缘杂交不亲和的障碍第4页，本讲稿共34页动物细胞工程常用的技术手段：动物细胞工程常用的技术手段：动物细胞培养、动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞核移植、动物细胞融合、动物细胞融合、生产单克隆抗体生产单克隆抗体动物细胞培养技术动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。是其他动物细胞工程技术的基础。知识回忆：知识回忆：植物细胞工程常用的技术手段有哪些？植物细胞工程常用的技术手段有哪些？植物细胞工程通常以获得什么为目的？植物细胞工程通常以获得什么为目的？植物组织培养植物组织培养,植物体细

8、胞杂交植物体细胞杂交完整植物体完整植物体第5页，本讲稿共34页一、动物细胞培养一、动物细胞培养1、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？3 3、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？4 4、如此时细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办？、如此时细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办？2、培养瓶中的细胞在生长过程中表现出怎样的生长特点？、培养瓶中的细胞在生长过程中表现出怎样的生长特点？5 5、如何理解原代培养和传代培养？、如何理解原代培养和传代培养？6 6、传代培养的细胞都能一直传代下去吗？、传代培养的细胞都

9、能一直传代下去吗？第6页，本讲稿共34页一、动物细胞培养一、动物细胞培养1、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？先用剪刀剪碎先用剪刀剪碎,后用蛋白酶处理后用蛋白酶处理3 3、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞分裂就会停当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞分裂就会停止分裂增殖，这种现象叫止分裂增殖，这种现象叫接触抑制。接触抑制。4 4、如此时细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办？、如此时细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办？将贴满细胞壁的细胞用胰蛋白酶处理

10、，然后分瓶继续培养，将贴满细胞壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖。让细胞继续增殖。这样的过程叫做这样的过程叫做传代培养传代培养2、培养瓶中的细胞在生长过程中表现出怎样的生长特点？、培养瓶中的细胞在生长过程中表现出怎样的生长特点？贴壁生长、接触抑制贴壁生长、接触抑制第7页，本讲稿共34页5 5、如何理解原代培养和传代培养？、如何理解原代培养和传代培养？培养过程中，在第一培养瓶中培养就是培养过程中，在第一培养瓶中培养就是原代培养原代培养，之，之后转移到其它培养瓶中培养就是后转移到其它培养瓶中培养就是传代培养传代培养6 6、传代培养的细胞都能一直传代下去吗？、传代培养的细胞都能

11、一直传代下去吗？不都能不都能有些遗传物质发生改变，能无限增殖。有些遗传物质发生改变，能无限增殖。第8页，本讲稿共34页能力提高：能力提高：1 1、用文字箭头的形式表示出动物细胞培养的过程、用文字箭头的形式表示出动物细胞培养的过程2 2、总结动物细胞培养的概念及依据的原理、总结动物细胞培养的概念及依据的原理第9页，本讲稿共34页动物动物胚胎胚胎或或幼龄幼龄动物的动物的组织块组织块胰蛋白酶或胰蛋白酶或胶原蛋白酶胶原蛋白酶先剪碎先剪碎单个细胞单个细胞加培养液加培养液稀释稀释制成制成细胞细胞悬液悬液原代培养原代培养传代培养传代培养细胞分裂旺盛细胞分裂旺盛易培养易培养去掉组织细胞去掉组织细胞间的蛋白质间

12、的蛋白质过程：过程：用文字、箭头表示用文字、箭头表示细胞贴壁细胞贴壁接触抑制接触抑制转转入入培培养养瓶瓶中中胰蛋白酶胰蛋白酶处处理分瓶继续培理分瓶继续培养养10105050代：细胞增殖缓慢代：细胞增殖缓慢甚至停止，甚至停止，5050代以后：部分细胞的细胞核代以后：部分细胞的细胞核型发生变化，获得不死性，型发生变化，获得不死性，无无限增殖限增殖1010代以内：代以内：遗传物质不变遗传物质不变原理：原理：细胞的增殖细胞的增殖第10页，本讲稿共34页分析：分析：1、一组概念：贴壁生长、接触抑制，、一组概念：贴壁生长、接触抑制，原代培养、原代培养、传代培养，细胞株、细胞系传代培养，细胞株、细胞系2 2

13、、动物细胞培养的条件有哪些？、动物细胞培养的条件有哪些？3 3、动物细胞培养技术的应用？、动物细胞培养技术的应用？第11页，本讲稿共34页强调一：细胞贴壁强调一：细胞贴壁细胞贴壁：细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。瓶壁上，称为细胞贴壁。培养瓶或培养皿壁要求：培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易于表面光滑、无毒、易于贴贴附。附。第12页，本讲稿共34页当贴壁细胞分裂生长当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时到表面相互接触时,细细胞就会停止分裂增殖，胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接这种现象称为细胞的接触抑制。触抑制。强调

14、二：接触抑制强调二：接触抑制第13页，本讲稿共34页3 3、培养条件：、培养条件：（1 1）无菌、无毒的环境）无菌、无毒的环境（2 2）营养）营养（3 3）温度和）温度和PHPH （4 4）气体环境：）气体环境：保证细胞顺利保证细胞顺利的生长增殖的生长增殖措施：措施：对培养液和用具进行无菌处理对培养液和用具进行无菌处理添加一定量的抗添加一定量的抗生素生素定期更换培养液）定期更换培养液）合成培养基（已知成分），外加合成培养基（已知成分），外加动物血清、血浆动物血清、血浆等等36.5+（-）0.5,7.2-7.4O O2 2和和COCO2 2，二者的作用分别是什么？，二者的作用分别是什么？细胞培养

15、时常用的混合气体的组成：（细胞培养时常用的混合气体的组成：（95%95%空气空气和和5%5%COCO2 2）第14页，本讲稿共34页问题问题1 1：为什么用胰蛋白酶处理而不用胃蛋白酶？：为什么用胰蛋白酶处理而不用胃蛋白酶？动物细胞培养的最适动物细胞培养的最适PH值为值为7.2-7.4，胰蛋白酶作用的适宜，胰蛋白酶作用的适宜PH为为7.2-8.4，胃蛋白酶适宜胃蛋白酶适宜PH为为1.5。胃蛋白酶在。胃蛋白酶在PH为为7.2-7.4的动物细胞培养中无活的动物细胞培养中无活性。性。合作探究合作探究问题问题2 2、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组织培养动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组织

16、培养基有何独特之处？基有何独特之处？主要成分：（葡萄糖、氨基酸）、（水、无机盐）、维生素和动物血主要成分：（葡萄糖、氨基酸）、（水、无机盐）、维生素和动物血清等。独特之处有：清等。独特之处有：1 1、液体培养基、液体培养基 2 2、成分中有动物血清等、成分中有动物血清等问题问题3 3、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？新个体？目前还不能，高度分化的动物细胞全能性受到限制，失去了发育成目前还不能，高度分化的动物细胞全能性受到限制，失去了发育成完整个体的能力，动物细胞培养只能使细胞数目增多。完整个体的能力，动物细胞培养只能使细胞

17、数目增多。第15页，本讲稿共34页细胞的全能性细胞的全能性细胞细胞植物体或组织植物体或组织培养结果培养结果获得细胞获得细胞或细胞产或细胞产物物快速繁殖、培育无快速繁殖、培育无病毒植株等病毒植株等培养目的培养目的葡萄糖、氨基酸、促生长因葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、水、维生素、子、无机盐、水、维生素、动物血清等动物血清等蔗糖、氨基酸、植物激蔗糖、氨基酸、植物激素、水、矿物质、琼脂素、水、矿物质、琼脂等等培养基成分培养基成分液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基培养基性质培养基性质细胞增殖（分细胞增殖（分裂）裂）原理原理动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养比较项目比较项目植物组

18、织培养和动物细胞培养的比较植物组织培养和动物细胞培养的比较第16页，本讲稿共34页1 1、下图表示从苏云金芽孢杆菌分离出来的杀虫晶体蛋白质、下图表示从苏云金芽孢杆菌分离出来的杀虫晶体蛋白质基因（简称基因（简称BtBt基因）及形成转基因抗虫棉的图解。基因）及形成转基因抗虫棉的图解。（1 1）图中）图中a a过程要用到的酶是过程要用到的酶是_。（2 2）在进行图中）在进行图中b b过程时由我国科学家独创的十分简便经济过程时由我国科学家独创的十分简便经济的方法是的方法是_，此外，也经常采用，此外，也经常采用_法。若要培育法。若要培育转基因绵羊，则此过程要用转基因绵羊，则此过程要用_ _ 的方法。的方

19、法。（3 3）为确定抗虫棉是否培育成功，既要用放射性同位索标）为确定抗虫棉是否培育成功，既要用放射性同位索标记的记的_作探针进行分子杂交测试，又要在个体水作探针进行分子杂交测试，又要在个体水平上鉴定，后者具体过程是平上鉴定，后者具体过程是_。限制酶限制酶花粉管通道法花粉管通道法农杆菌转化法农杆菌转化法显微注射法显微注射法Bt基因基因把害虫放在抗虫棉植株上，把害虫放在抗虫棉植株上，看其是否存活看其是否存活第17页，本讲稿共34页2、草莓生产上传统的繁殖方式易将所感染的病毒传播给后、草莓生产上传统的繁殖方式易将所感染的病毒传播给后代，导致产量降低、品质变差。运用微型繁殖技术可以培育代，导致产量降低

20、、品质变差。运用微型繁殖技术可以培育出无病毒幼苗。草莓微型繁殖的基本过程如下：出无病毒幼苗。草莓微型繁殖的基本过程如下：脱分化脱分化再分化再分化(1)(1)微型繁殖培育无病毒草莓苗时，一般选取微型繁殖培育无病毒草莓苗时，一般选取_作为外植作为外植体，其依据是体，其依据是_。(2)(2)若若是花药，则是花药，则是是 ，继续对其使用，继续对其使用_处处理可获得理可获得正常植株，该过程称为正常植株，该过程称为 。（3 3）若利用此项技术培育相关组织制造治疗烫伤、割伤的药物）若利用此项技术培育相关组织制造治疗烫伤、割伤的药物紫草素，培养将进行到（填序号）紫草素，培养将进行到（填序号）；若想制作人工种；

21、若想制作人工种子，应该选用（填序号）子，应该选用（填序号）。人工种子是否都具有可。人工种子是否都具有可育能力？理由：育能力？理由：芽尖、茎尖芽尖、茎尖茎尖茎尖(或根尖或根尖)病毒极少病毒极少单倍体单倍体纯合子纯合子单倍体育种单倍体育种秋水仙素秋水仙素第18页，本讲稿共34页3 3、下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答：、下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答：（1 1）容器）容器A A中放置的是动物器官或组织。它一般取自中放置的是动物器官或组织。它一般取自_。（2 2）容器）容器A A中的动物器官或组织首先要进行的处理是中的动物器官或组织首先要进行的处理是_,_,然后用然后用

22、 _酶处理，这是为了使细胞分散开来，这样做的目的酶处理，这是为了使细胞分散开来，这样做的目的是是_。(3)(3)培养首先在培养首先在B B瓶中进行，瓶中的培养基成分瓶中进行，瓶中的培养基成分_等。等。动物胚胎或幼龄动物的组织块动物胚胎或幼龄动物的组织块剪碎剪碎胰蛋白酶或胶原蛋白胰蛋白酶或胶原蛋白避免接触抑制及细胞易与培养液进避免接触抑制及细胞易与培养液进行物质交换行物质交换（糖、氨基酸、维生素、促生长因子）（水、无机盐）（糖、氨基酸、维生素、促生长因子）（水、无机盐）动物血清、血浆动物血清、血浆第19页，本讲稿共34页(4)(4)在在B B瓶中培养一段时间后，有许多细胞衰老死亡，瓶中培养一段时

23、间后，有许多细胞衰老死亡，这是培养到第这是培养到第 代，到这时的培养称为代，到这时的培养称为_。（5 5）为了把）为了把B B瓶中的细胞分装到瓶中的细胞分装到C C瓶中，用瓶中，用_处处 理，然后配置成理，然后配置成 ，再分装。，再分装。（6 6）在）在C C瓶中正常培养了一段时间后，发现细胞全部死瓶中正常培养了一段时间后，发现细胞全部死 亡，原因是亡，原因是_。1010原代培养原代培养胰蛋白酶胰蛋白酶细胞悬液细胞悬液细胞没有癌变细胞没有癌变第20页，本讲稿共34页二、动物体细胞核移植技术与克隆动物二、动物体细胞核移植技术与克隆动物:1 1、克隆动物：、克隆动物：2 2、核移植概念：、核移植概

24、念：3 3、核移植的核移植的 种类种类胚胎胚胎细胞核移植细胞核移植体体细胞核移植细胞核移植（难难度高度高）将动物的将动物的一个细胞的细胞核一个细胞的细胞核，移入一个已经，移入一个已经去掉细胞核的去掉细胞核的卵母细胞卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。胚胎最终发育成动物个体。用用核移植核移植的方法得到的动物的方法得到的动物4 4、体细胞核移植的过程、体细胞核移植的过程为什么？为什么？第21页，本讲稿共34页从优良供体动从优良供体动物中取体细胞物中取体细胞采集卵母细胞，体外培养采集卵母细胞，体外培养到到减数第二次分裂的

25、中期减数第二次分裂的中期 对供体体细胞对供体体细胞进行细胞培养进行细胞培养通过通过显微操作去核显微操作去核，得到得到去核卵母细胞去核卵母细胞将供体细胞核注入去核卵母细胞将供体细胞核注入去核卵母细胞电激，构建重组胚胎电激，构建重组胚胎将将早期胚胎移植早期胚胎移植到代孕母牛体内到代孕母牛体内分娩出分娩出克隆牛克隆牛核移植核移植过程：过程：体细胞核移植体细胞核移植思考思考：该克隆牛的遗传物质与供体牛之间有何关系？该克隆牛的遗传物质与供体牛之间有何关系？性状主要与哪方动物相同？克隆动物的成功说明了什么？性状主要与哪方动物相同？克隆动物的成功说明了什么？第22页，本讲稿共34页5 5、体细胞核移植技术的

26、应用前景（了解）、体细胞核移植技术的应用前景（了解）畜牧业方面：畜牧业方面：1 1、加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育、加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育2 2、保护濒危物种、保护濒危物种医药卫生方面：医药卫生方面：1 1、做生物反应器，生产医用蛋白、做生物反应器，生产医用蛋白2 2、转基因克隆动物可作为异种移植的供体、转基因克隆动物可作为异种移植的供体3 3、人的核移植胚胎干细胞可用于组织器官的移植、人的核移植胚胎干细胞可用于组织器官的移植4 4、深入了解胚胎发展和衰老过程、深入了解胚胎发展和衰老过程5 5、追踪研究疾病的发展过程和治疗疾病、追踪研究疾病的发展过程和治疗疾病6 6、该

27、技术存在的问题（了解）、该技术存在的问题（了解）成功率低、存在健康问题、克隆动物的食品安全性问题等成功率低、存在健康问题、克隆动物的食品安全性问题等第23页，本讲稿共34页卵细胞卵细胞母绵羊母绵羊母绵羊母绵羊乳腺细胞乳腺细胞细胞质细胞质细胞核细胞核细胞核移植细胞核移植早期胚胎早期胚胎卵裂卵裂C母绵羊子宫母绵羊子宫胚胎移植胚胎移植多莉羊多莉羊分娩分娩妊娠妊娠多多莉莉羊羊的的培培育育过过程程融合后的卵细胞融合后的卵细胞第24页，本讲稿共34页知识回忆：知识回忆：1 1、用箭头和文字的形式简述植物体细胞杂交的过程、用箭头和文字的形式简述植物体细胞杂交的过程分析：分析：去壁的方法、融合的方法？形成杂种

28、细胞的标志、去壁的方法、融合的方法？形成杂种细胞的标志、杂种植株形成的标志？杂种植株形成的标志？2 2、用文字箭头的形式表示出动物细胞培养的过程、用文字箭头的形式表示出动物细胞培养的过程 分析：分析：培养过程中主要有那两个阶段的培养，培养过程培养过程中主要有那两个阶段的培养，培养过程 中表现出来的特点中表现出来的特点 细胞株及细胞系，动物细胞的培养条件细胞株及细胞系，动物细胞的培养条件 培养应选用怎样的动物组织材料培养应选用怎样的动物组织材料 ，为什么？，为什么？将动物组织分散成单个细胞的方法？能否用胃蛋将动物组织分散成单个细胞的方法？能否用胃蛋 白酶？白酶？为什么要分散成单个细胞？为什么要分

29、散成单个细胞？第25页，本讲稿共34页3 3、用文字箭头的形式表示出细胞核移植的过程、用文字箭头的形式表示出细胞核移植的过程分析：分析：采用的卵母细胞是处于哪一时期的？采用的卵母细胞是处于哪一时期的？克隆的动物遗传性状克隆的动物遗传性状100%100%与提供核的动物与提供核的动物 相同吗？为什么？相同吗？为什么？动物细胞核移植的分类：动物细胞核移植的分类：第26页，本讲稿共34页三、动物细胞融合三、动物细胞融合1 1、概念：？又称？得到的细胞称为什么？、概念：？又称？得到的细胞称为什么？2 2、原理：？、原理：？3 3、诱导融合的方法：？与植物细胞融合方法的区别是？、诱导融合的方法：？与植物细

30、胞融合方法的区别是？4 4、常用在哪一领域？、常用在哪一领域？四、单克隆抗体四、单克隆抗体1 1、获得抗体的传统方法是？该方法有何缺陷？、获得抗体的传统方法是？该方法有何缺陷？2 2、动物体内的抗体由什么细胞产生？人的血清中含有抗体的、动物体内的抗体由什么细胞产生？人的血清中含有抗体的 种类？种类？4 4、一个、一个B B淋巴细胞能否在体外培养条件下，无限增殖？淋巴细胞能否在体外培养条件下，无限增殖？5 5、如何才能赋予、如何才能赋予B B淋巴细胞无限增殖的能力，从而产生大量的淋巴细胞无限增殖的能力，从而产生大量的 抗体呢？科学家有何抗体呢？科学家有何设想设想？这种设想的结果是什么？这种设想的

31、结果是什么？第27页，本讲稿共34页设计设计方案：方案：一个一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖杂种细胞杂种细胞能力提高：能力提高：用文字箭头的形式表示出单克隆抗体的用文字箭头的形式表示出单克隆抗体的制备过程制备过程第28页，本讲稿共34页抗原抗原小鼠小鼠B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞细胞融合，筛细胞融合，筛选选细胞培养细胞培养筛选，继续培养筛选，继续培养体外培养体外培养体内培养体内培养单克隆抗体单克隆抗体第29页，本讲稿共34页1、对小鼠注射抗原的目的是什么？、对小鼠注射抗原的目的是什么

32、？2、诱导融合的方法有哪些？及融合细胞类型？、诱导融合的方法有哪些？及融合细胞类型？3、怎样筛选出杂交瘤细胞？该细胞有何特点？、怎样筛选出杂交瘤细胞？该细胞有何特点？4、为什么要进行专一抗体检测和克隆化培养？、为什么要进行专一抗体检测和克隆化培养？5、大量增殖杂交瘤细胞获得单抗的方法？、大量增殖杂交瘤细胞获得单抗的方法？B-BB-B细胞细胞B-B-瘤细胞（杂交瘤细胞）瘤细胞（杂交瘤细胞）瘤瘤-瘤细胞瘤细胞使其发生免疫反应，产生抗体，获得与抗原对应的使其发生免疫反应，产生抗体，获得与抗原对应的效应效应B B细胞细胞物理（如：电激），化学（如：聚乙二醇），物理（如：电激），化学（如：聚乙二醇），灭

33、活的病毒灭活的病毒用用选择培养基选择培养基筛选筛选既能无限增殖，又能产生专一性抗体既能无限增殖，又能产生专一性抗体将不同种杂交瘤细胞分开，筛选出将不同种杂交瘤细胞分开，筛选出能产生所需特异性抗体的杂交瘤细胞能产生所需特异性抗体的杂交瘤细胞 体外培养体外培养杂交瘤细胞，从杂交瘤细胞，从培养液培养液中提取中提取 将杂交瘤细胞将杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔中，从中，从腹水腹水中提取中提取第30页，本讲稿共34页整个制备过程为何要经过两次筛选及其采用的方法整个制备过程为何要经过两次筛选及其采用的方法第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），第二次需先在多孔培养板上，

34、在每孔只有一个杂交瘤细胞的第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞能产生特异性抗体的细胞群。群。由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的抗体。这里的单克隆单克隆确有确有单个细胞单个细胞克隆的含义，只不过克隆的含义，只不过克隆的不是克隆的不是B B淋巴细胞，而是淋巴细胞，而是杂交瘤细胞杂交瘤细胞。能力提高：能力提高：第31页，本讲稿共34页单克隆抗体的应

35、用单克隆抗体的应用1 1、单克隆抗体的主要优点是：？、单克隆抗体的主要优点是：？2 2、用途：、用途：（1 1）作为诊断试剂：）作为诊断试剂：为什么能诊断？为什么能诊断？在这一应用方面，单克隆抗体有何优点？在这一应用方面，单克隆抗体有何优点？（2 2）用于治疗疾病和运载药物：）用于治疗疾病和运载药物：什么是生物导弹？作用？什么是生物导弹？作用？利用了什么原理？有什么优点？利用了什么原理？有什么优点？第32页，本讲稿共34页主要用于制备主要用于制备单克隆抗体单克隆抗体获得杂种植株获得杂种植株用途用途物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒物理（离心、振物理（离心、振动、电

36、刺激）动、电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）诱导方法诱导方法使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱导原生质体融合导原生质体融合细胞融合的方法细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、植物细胞全能性植物细胞全能性原理原理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目植物、动物细胞融合的植物、动物细胞融合的比较比较第33页，本讲稿共34页为了加快优良种牛的繁殖速度，科学家采用了以下两种方法。为了加快优良种牛的繁殖速度，科学家采用了以下两种方法。据图分析回答：据图分析回答：1 1、方法、方法中受精卵中受精卵胚胎和方法胚胎和方法中形成重组卵所用到的中形成重组卵所用到的细胞工程技术是分别是细胞工程技术是分别是 、2 2、方法、方法中的卵细胞是什么样的？中的卵细胞是什么样的？分析子代牛的性别，肯定为雌性的是分析子代牛的性别，肯定为雌性的是 牛。牛。3 3、产生、产生F F牛的理论依据是牛的理论依据是 ，其生殖方式属于其生殖方式属于 。动物细胞培养动物细胞培养 细胞核移植细胞核移植 减二中期的卵母细胞减二中期的卵母细胞 F F 动物细胞核的全能性动物细胞核的全能性 无性繁殖无性繁殖 第34页，本讲稿共34页