动物细胞工程精.ppt

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1、动物细胞工程第1页，本讲稿共32页动物细胞培养动物细胞培养动物细胞融合动物细胞融合单克隆抗体技术单克隆抗体技术核移植核移植动物动物细胞细胞工程工程常用常用技术技术第2页，本讲稿共32页一、动物细胞培养一、动物细胞培养 1.1.发展历史发展历史:20 20世纪初，人们不知道神经纤维是由神经细胞的细胞质向世纪初，人们不知道神经纤维是由神经细胞的细胞质向外突出形成的，还是由神经细胞周围的其他细胞融合而成的。外突出形成的，还是由神经细胞周围的其他细胞融合而成的。生物学家们就这个问题展开了激烈的争论。生物学家们就这个问题展开了激烈的争论。19071907年，美国生物年，美国生物学家哈里森学家哈里森(Ha

2、rrison)(Harrison)从蝌蚪的脊索中分离出神经组织，把它从蝌蚪的脊索中分离出神经组织，把它放在青蛙的凝固的淋巴液中培养。蝌蚪的神经组织存活了好几放在青蛙的凝固的淋巴液中培养。蝌蚪的神经组织存活了好几周，并且从神经细胞中长出了神经纤维。哈里森的实验不仅解周，并且从神经细胞中长出了神经纤维。哈里森的实验不仅解决了神经纤维的起源问题，而且开创了动物组织培养的先河。决了神经纤维的起源问题，而且开创了动物组织培养的先河。此后，在许多科学家的不懈努力下，动物组织培养不断改进并此后，在许多科学家的不懈努力下，动物组织培养不断改进并逐渐发展成为动物细胞培养。逐渐发展成为动物细胞培养。第3页，本讲稿

3、共32页1.1.动物细胞培养的概念：动物细胞培养的概念：动物细胞培养就动物细胞培养就是从动物有机体中取是从动物有机体中取出相关的组织出相关的组织,将它将它分散成单个细胞分散成单个细胞,然然后后,放在适宜的培养放在适宜的培养基中基中,让这些细胞生让这些细胞生长和增殖长和增殖.一、动物细胞培养一、动物细胞培养第4页，本讲稿共32页动物动物胚胎胚胎或或幼龄幼龄动物动物的组织、器官的组织、器官胰蛋白酶胰蛋白酶剪碎剪碎单个细胞单个细胞加培养液加培养液制成制成细胞细胞悬浮悬浮液液10代代细胞细胞部分细胞部分细胞“癌变癌变”，无限传代，无限传代动物细胞培养不能动物细胞培养不能最终培养成动物体最终培养成动物体

4、50代细胞代细胞原原代代培培养养传代培养传代培养细细胞胞贴贴壁壁剥离、分瓶剥离、分瓶细胞细胞2.动物细胞培养过程：动物细胞培养过程：第5页，本讲稿共32页思考讨论：思考讨论：在动物细胞培养过程中，在动物细胞培养过程中，为什么要用胰蛋白酶对取出的动物为什么要用胰蛋白酶对取出的动物组织进行处理？组织进行处理？胰蛋白酶处理动物组织，可以使动物组织细胞间的胶原胰蛋白酶处理动物组织，可以使动物组织细胞间的胶原纤维和细胞外的其他成分酶解，获得单个细胞。纤维和细胞外的其他成分酶解，获得单个细胞。第6页，本讲稿共32页有关概念有关概念:原代培养：原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为从机体取出后立即培养的细胞

5、为原代细胞。培养的第原代细胞。培养的第1 1代细胞与传代细胞与传1010代以内代以内的细胞称为原代培养。的细胞称为原代培养。传代培养：传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。培养瓶中继续培养，称为传代培养。第7页，本讲稿共32页4 4、动物细胞培养的条件、动物细胞培养的条件无菌、无毒的环境：无菌处理、加抗生素、无菌、无毒的环境：无菌处理、加抗生素、定期更换培养液定期更换培养液营养：特别加入血清或血浆营养：特别加入血清或血浆温度和温度和PH：36.5度左右度左右P

6、H为为7.27.4气体环境：气体环境：O2细胞呼吸必需；细胞呼吸必需；C2O维维持持PH值值第8页，本讲稿共32页4.4.动物细胞培养技术的应用动物细胞培养技术的应用:1.1.蛋白质生物制品的生产蛋白质生物制品的生产 如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体2.2.健康细胞培养健康细胞培养 培养健康细胞用于烧伤病人皮肤移植培养健康细胞用于烧伤病人皮肤移植3.3.细胞的生理、药理、病理研究细胞的生理、药理、病理研究 第9页，本讲稿共32页植物组织培养和动物细胞培养的比较植物组织培养和动物细胞培养的比较比较项目原理培养基结果培养目的植物植物 组织组织培养培养动物动物 细胞细胞培

7、养培养植物植物植物植物细胞细胞细胞细胞全能全能全能全能性性性性细细细细胞胞胞胞增增增增殖殖殖殖固体固体营养物质营养物质植物激素植物激素液体液体营养物质营养物质动物血动物血清清培养成培养成植株植株培养成培养成细胞群细胞群快速繁殖快速繁殖培养无病毒培养无病毒植株植株获得细胞获得细胞或细胞产或细胞产物物第10页，本讲稿共32页思考：思考：2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？1、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？独特之处？3、为什么

8、培养前要将组织细胞分散成单个细胞？、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？4、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特之处有：主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特之处有：1、液体培养基、液体培养基 2、成分中有动物血清等、成分中有动物血清等因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养不能，动物细胞培

9、养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体物个体第11页，本讲稿共32页四、核移植技术四、核移植技术 动物核移植是将动物的一个细胞的动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核细胞核,移如入一个已经去掉细胞核移如入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中的卵母细胞中.使其重组并发育成一使其重组并发育成一个新的胚胎个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育这个新的胚胎最终发育为动物个体为动物个体.第12页，本讲稿共32页黑面绵羊去黑面绵羊去核卵细胞核卵细胞白面绵羊乳白面绵羊乳腺细胞核腺细胞核细胞核移植细胞核移植重组细胞重组细胞电脉冲刺激电脉冲刺激早期胚胎早期胚胎胚胎移

10、植胚胎移植另一头绵羊的子宫另一头绵羊的子宫妊娠、出生妊娠、出生克隆羊多利克隆羊多利1.克隆羊培育过程克隆羊培育过程第13页，本讲稿共32页2.体细胞核移植技术的应用前景体细胞核移植技术的应用前景第14页，本讲稿共32页思考下列问题：思考下列问题：1、什么叫动物细胞融合？、什么叫动物细胞融合？2、动物细胞在结构上有何区别？这与它们杂交或融合过程有什、动物细胞在结构上有何区别？这与它们杂交或融合过程有什么影响？么影响？3、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同？、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同？第15页，本讲稿共32页一、动物细胞融合一、动物细胞融合 细胞融合是正常的生

11、命活动细胞融合是正常的生命活动两个细胞正在融合两个细胞正在融合 受精作用受精作用第16页，本讲稿共32页动物动物细胞细胞融合融合第17页，本讲稿共32页细胞融合与诱导细胞融合物质：细胞融合与诱导细胞融合物质：诱导剂：仙台病毒、聚乙二醇诱导剂：仙台病毒、聚乙二醇诱导细胞融合的仙台病毒必须诱导细胞融合的仙台病毒必须灭活灭活。思考讨论：思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的病毒为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？需要灭活？不灭活行吗？因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭质分子重新排布，细胞膜打

12、开，细胞发生融合，不灭活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。细胞融合技术应用于哪些方面？细胞融合技术应用于哪些方面？细胞学、遗传学、免疫学及制备单克隆抗体。细胞学、遗传学、免疫学及制备单克隆抗体。第18页，本讲稿共32页植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目比较项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合细胞融合原理细胞融合原理细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞融合的方法细胞融合的方法 去除细胞壁后诱导去除细胞壁后诱导原生质体融合原生质体融合使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融

13、合导细胞融合诱导方法诱导方法物理（离心、振荡、物理（离心、振荡、电刺激）电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒用途用途获得杂种植株获得杂种植株制备单克隆抗体制备单克隆抗体第19页，本讲稿共32页二、单克隆抗体二、单克隆抗体什么是抗体？什么是抗体？抗体是机体受抗原刺激后产生的、抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。疫功能的球蛋白。B B淋巴细胞产生抗体。淋巴细胞产生抗体。第20页，本讲稿共32页B B淋巴细胞与抗体的关系：淋巴细胞与抗体的关系：B B淋巴细

14、胞受抗原刺激后，可以产生淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。抗体。动物体内的动物体内的B B淋巴细胞可以产生百万淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。异性免疫作用。每一个淋巴细胞只能产生一种特异每一个淋巴细胞只能产生一种特异性的抗体。性的抗体。所以传统的抗体的生产方法及缺陷是什么？所以传统的抗体的生产方法及缺陷是什么？怎样解决这个问题？怎样解决这个问题？第21页，本讲稿共32页单克隆抗体单克隆抗体 由单个由单个B B淋巴细胞经过无性繁殖（克淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，隆），形成基因型相同的细胞

15、群，这一细胞群所产生的化学性质单一、这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。特异性强的抗体称为单克隆抗体。特点：特点：特异性强、灵敏度高特异性强、灵敏度高 第22页，本讲稿共32页如何大量生产单克隆抗体？如何大量生产单克隆抗体？利用淋巴细胞产生抗体的功能利用淋巴细胞产生抗体的功能利用肿瘤细胞无限增殖的特性利用肿瘤细胞无限增殖的特性利用细胞融合的技术将利用细胞融合的技术将两种细胞融两种细胞融合合获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特性获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特性的的杂交瘤细胞杂交瘤细胞利用动物细胞培养技术大量培养杂交利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞瘤细胞如何筛选？如何筛选？融

16、融合合方方式式？第23页，本讲稿共32页第24页，本讲稿共32页思考：思考：1 1、本过程利用了哪些原理？、本过程利用了哪些原理？免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理2 2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B B细胞融合？细胞融合？细胞同源越近细胞同源越近,越容易融合越容易融合.第25页，本讲稿共32页单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用与常规抗体相比，单克隆抗体产量高，特异性强，与常规抗体相比，单克隆抗体产量高，特异性强，灵敏度高，优越性十分明显。灵敏度高，优越性十分明显。应用主要有：应用主要有：1 1、临床诊断、临床诊断2 2、

17、作为载体，运载抗癌药物，形成、作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹生物导弹”治疗治疗肿瘤肿瘤资料资料：目前世界各国已经研制出数以百计的单克隆抗体。许多缺：目前世界各国已经研制出数以百计的单克隆抗体。许多缺乏良好诊断手段的传染病、免疫性疾病、血液病、内分泌疾病和遗传病，乏良好诊断手段的传染病、免疫性疾病、血液病、内分泌疾病和遗传病，用单克隆抗体作为诊断手段，是一个必然趋势。另外，用单克隆抗体做用单克隆抗体作为诊断手段，是一个必然趋势。另外，用单克隆抗体做体内诊断，借以鉴别和定位体内体内诊断，借以鉴别和定位体内“病灶病灶”也引起人们的注意，目前，也引起人们的注意，目前，主要用于肿瘤追踪及心肌梗塞

18、的诊断。主要用于肿瘤追踪及心肌梗塞的诊断。第26页，本讲稿共32页小结小结两个过程两个过程动物细胞培养过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程三个三个“一一”一个诱导细胞融合的新方法灭活一个诱导细胞融合的新方法灭活 病毒病毒 一个新细胞杂交瘤细胞一个新细胞杂交瘤细胞一个优势单克隆抗体特异性一个优势单克隆抗体特异性 强强 、灵敏度高的优势、灵敏度高的优势第27页，本讲稿共32页 下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案的实验方案2、该方案能达到预期效果吗？为什么？、该方案能达到预期效果吗？为什么？4、图

19、中、图中B为为_过程，常用过程，常用_作为诱导剂，该细胞继作为诱导剂，该细胞继承承_的遗传特性，既能的遗传特性，既能_,又能又能_。1、该实验方案的目的是、该实验方案的目的是_3、A是从小鼠的脾脏中取得是从小鼠的脾脏中取得_,该细胞能够产生该细胞能够产生_5、C过程指细胞培养，该过程包括过程指细胞培养，该过程包括_培养和培养和_培养两个阶段，其培养两个阶段，其中中_代以内的的细胞属于细胞株。代以内的的细胞属于细胞株。制备单克隆抗体制备单克隆抗体B细胞细胞抗体抗体细胞融合细胞融合灭活病毒灭活病毒双亲细胞双亲细胞分泌抗体分泌抗体无限增殖无限增殖原代原代传代传代50B体外培养体外培养骨髓瘤细胞骨髓瘤

20、细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群足够数量的细胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔AC第28页，本讲稿共32页1.动物细胞工程技术的基础是：（）动物细胞工程技术的基础是：（）A动物细胞融合动物细胞融合B胚胎移植胚胎移植C动物细胞培养动物细胞培养D核移植核移植第29页，本讲稿共32页在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）A结果是相同的结果是相同的B杂种细胞的形成过程基本相同杂种细胞的形成过程基本相同C操作过程中酶的作用相同操作过程中酶的作用相同D诱导融合的手段相同诱导融合的手段相同第30页，本讲稿共32页.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（）淋巴细胞淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞自身融合细胞淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞A BC D C第31页，本讲稿共32页再见第32页，本讲稿共32页