细胞融合和单细胞克隆.ppt

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1、关于细胞融合和单细胞克隆现在学习的是第1页，共30页教学目标教学目标n了解动物细胞融合的原理、过程和意义。n理解单克隆抗体制备的过程和应用现在学习的是第2页，共30页重点难点重点难点n1.教学重点：教学重点：单克隆抗体的制备和应用单克隆抗体的制备和应用n2.教学难点：教学难点：单克隆抗体的制备过程单克隆抗体的制备过程 现在学习的是第3页，共30页问题探讨问题探讨 “番茄马铃薯”（理想图）通过长期的实验，科学家通过长期的实验，科学家们采用体细胞杂交技术获得了们采用体细胞杂交技术获得了“番茄番茄马铃薯马铃薯”植株植株。现在学习的是第4页，共30页如果将奶牛的细胞与植物细胞杂交，得到绿色的小奶牛，那

2、如果将奶牛的细胞与植物细胞杂交，得到绿色的小奶牛，那岂不是只要晒晒太阳就可以挤出牛奶吗？岂不是只要晒晒太阳就可以挤出牛奶吗？动物细胞也能融合吗？动物细胞也能融合吗？现在学习的是第5页，共30页教学过程教学过程一一.动物细胞融合动物细胞融合1.动物融合的过程请同学们阅读课本P52动物融合现在学习的是第6页，共30页 动动物物细细胞胞融融合合过过程程示示意意图图不同DNA的两个细胞 灭活的病毒有丝分裂两个完整的杂交细胞现在学习的是第7页，共30页思考题思考题1.1.植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？酶解法，如纤维素酶或果胶酶酶解法，如纤维素酶或

3、果胶酶2.2.动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？无需，因为动物细胞无细胞壁无需，因为动物细胞无细胞壁3.3.植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？离心、电激等物理方法；离心、电激等物理方法；PEGPEG等化学方法等化学方法4.4.动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？能能 还可以利用灭活的病毒进行诱导还可以利用灭活的病毒进行诱导5.5.植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养形植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进

4、行组织培养形 成完整成完整的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？不能不能现在学习的是第9页，共30页7.7.你推测一下动物细胞融合有哪些方面的应用吗？你推测一下动物细胞融合有哪些方面的应用吗？思考题思考题 利用动物细胞融合技术诱导形成杂交瘤细胞利用动物细胞融合技术诱导形成杂交瘤细胞8.8.在生产实际中杂交瘤细胞有怎样的应用？在生产实际中杂交瘤细胞有怎样的应用？生产单克隆抗体生产单克隆抗体6.6.你能归纳出什么叫做动物细胞融合吗？你能归纳出什么叫做动物细胞融合吗？现在学习的是第10页，共30页主要用于制备单克隆抗体获得杂种植株主要用途物理

5、、化学方法（同左）灭活的病毒物理（离心、振动、电刺激）化学（聚乙二醇）诱导方法使细胞分散后诱导细胞融合去除细胞壁后诱导原生质体融合 细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性、植物细胞全能性细胞融合的原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较现在学习的是第11页，共30页2.动物细胞融合的概念 动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程，融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞称为杂交细胞杂交细胞。现在学习的是第12页，共30页二、动物细胞融合（细胞杂交）二、动物细胞融合（细胞杂交）2个或多个个或多个动物细胞结合形成一个细胞

6、的过程动物细胞结合形成一个细胞的过程细胞细胞A细胞细胞B杂种细胞杂种细胞灭活的病毒灭活的病毒物理法物理法化学法化学法仙台病毒仙台病毒疱疹病毒疱疹病毒新城鸡瘟病毒新城鸡瘟病毒现在学习的是第13页，共30页提问？1.1.抗体是由何种细胞产生的？抗体是由何种细胞产生的？效应效应B B细胞（浆细胞）。细胞（浆细胞）。2.2.一个淋巴细胞一个淋巴细胞(浆细胞浆细胞)能分泌多种抗体吗？能分泌多种抗体吗？每一个淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。每一个淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。3.3.一种抗原侵入机体之后，引起机体免疫反应产生的抗体只有一种吗一种抗原侵入机体之后，引起机体免疫反应产生的抗体只有一种吗？动物在免

7、疫反应过程中，体内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上。动物在免疫反应过程中，体内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上。4.4.简述获得抗体的传统途径？简述获得抗体的传统途径？抗原抗原 动物体动物体 抗体抗体 抗原不纯抗原不纯 抗体不纯抗体不纯二、单克隆抗体二、单克隆抗体刺激浆细胞现在学习的是第14页，共30页6.6.如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？体外培养单个淋巴细胞，提取分泌的抗体体外培养单个淋巴细胞，提取分泌的抗体7.7.体外培养淋巴细胞能无限增殖吗体外培养淋巴细胞能无限增殖吗?怎样解决这个问题？怎样解决这个问题？5.5.这种方法获得的抗体有什

8、么缺陷？这种方法获得的抗体有什么缺陷？产量低，纯度低，特异性差产量低，纯度低，特异性差现在学习的是第15页，共30页1.1.设计方案：设计方案：一个一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞能够无限增殖小鼠骨髓瘤细胞能够无限增殖杂种细胞杂种细胞二、单克隆抗体二、单克隆抗体2.2.制备过程：制备过程：现在学习的是第16页，共30页免疫小鼠培养骨髓瘤细胞融合骨髓瘤细胞B淋巴细胞注射特定抗原蛋白选择培养基上培养专一抗体检验阳性专一抗体检验阳性注射到小鼠体内体外培养单克隆抗体单克隆抗体克隆杂交细胞分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞 单单克克隆隆抗抗体体制

9、制备备过过程程示示意意图图多种杂交细胞现在学习的是第17页，共30页 单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程 注射抗原注射抗原B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞细胞融合、筛选细胞融合、筛选杂交细胞杂交细胞细胞培养细胞培养筛选，继续培养筛选，继续培养足够数量的、能产生足够数量的、能产生特定抗体的细胞群特定抗体的细胞群体外培养体外培养注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔单克隆抗体单克隆抗体现在学习的是第18页，共30页3.3.单克隆抗体的应用：单克隆抗体的应用：在基础理论研究中具有重要意义在基础理论研究中具有重要意义 在疾病诊断、治疗和预防方面，具有在疾病诊断、治疗和预防方面，具有 生物导弹生物导弹二、

10、单克隆抗体二、单克隆抗体特异性强、灵敏度高特异性强、灵敏度高 等优越性。等优越性。现在学习的是第19页，共30页知识结构两个过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程三个“一”一个诱导细胞融合的新方法 灭活的病毒一个新细胞杂交瘤细胞一个优势单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势现在学习的是第22页，共30页教学反馈1.动物细胞融合技术最重要的用途是 （）A.克服远源杂交不亲和 B.制备单克隆抗体C.培育新物种 D.生产杂种细胞B2.单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的（）A.B淋巴细胞 B.T淋巴细胞 C.骨髓瘤细胞 D.杂交瘤细胞 D3.（多选）1975年米尔斯坦和柯勒成功地获得了单克隆抗体。下列细胞

11、中与单克隆抗体的制备有关的是（）A.效应B细胞 BT淋巴细胞C.骨髓瘤细胞 D杂交瘤细胞 A B C D现在学习的是第23页，共30页B B体外培养体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群足够数量的细胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔A AC C 4.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案制备单克隆抗体不能，没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞。(1).该实验方案的目的是：_(2).该方案能达到预期效果吗？为什么？(3).A是从小鼠的脾脏中取得_ 该细胞能够产生_。(4).图中B为_过程，常用_作为诱导剂，该细胞继承_的遗传特性，既能_,又能_。

12、(5).C过程指细胞培养，该过程包括_培养和_培养两个阶段，其中_代以内的的细胞属于细胞株。B淋巴细胞抗体细胞融合灭活的病毒双亲细胞分泌抗体无限增殖原代传代50现在学习的是第24页，共30页课后习题课后习题1.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是 （）淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞A.B.C.D.C2.动物细胞融合和植物原生质融合决定于 ()A.细胞膜的流动性 B细胞膜的选择透过性C.细胞质的流动性D细胞质酶的活性 A一.选择题现在学习的是第25页，共3

13、0页3.“生物导弹”是指 （）A.单克隆抗体 B.杂交瘤细胞C.产生特定抗体的B淋巴细胞 D.在单克隆抗体上连接抗癌药物 D4.只能使动物细胞融合的常用诱导方法是 （）APEG B灭活的病毒 C电刺激 D离心A二.简答题1.淋巴细胞是由动物体-中的-细胞分化发育而来的。2.杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是-骨髓造血干主动运输现在学习的是第26页，共30页三.思考与探究1.植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术有什么不同？2.制备单克隆抗体时，为什么要选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞？提示：植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术基本相同，不同的是植物体细胞融合前需去掉细

14、胞壁，然后再融合；动物细胞融合是两个体细胞直接融合。提示：哺乳动物感染抗原后，其体内会形成相应的B淋巴细胞，B淋巴细胞 能分泌相应的抗体凝聚或杀死这些抗原。动物在免疫反应的过程中，每一种B淋巴细胞能分泌一种特异性抗体，要想获得大量的特异性抗体，必须使能分泌该单一抗体的B淋巴细胞大量增殖。B淋巴细胞具有产生单一抗体的能力，但不能在体外增殖；骨髓瘤细胞是一种癌细胞，它能在体外培养条件下无限增殖，但不能产生抗体。因此，把一种B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合，产生杂交瘤细胞，它会兼有两个亲本细胞的特性在体外培养条件下能不断增殖，同时能产生出某种特异性的抗体。现在学习的是第27页，共30页教学参考教学

15、参考1.已成功的动物细胞融合实例还有哪些？生物种类 细胞来源 成功年代 酵母菌鸡 原生质体血红细胞 1975年人胡萝卜 腹水癌细胞原生质体 1976年人小鼠 纤维肉瘤细胞畸胎瘤细胞 1978年要知道更多的实例，需经常查阅更多科研报道。现在学习的是第28页，共30页2.为什么不用两个而要用多个细胞进行动物细胞间的融合？就目前常用的细胞融合方法来看，不管是用物理的、化学的方法，还是生物的方法，其融合率都不可能是100%。仅用两个细胞融合，其效率太低，不一定能得到融合细胞。更重要的是，即使两个细胞已发生融合，但并不一定是研究者期望得到的细胞类型。目前动物细胞融合技术最有价值的应用就是单克隆抗体的制备。我们以制备单克隆抗体为例来说明这一问题。我们知道，体内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上，但是每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体，如果仅取一个脾细胞（含B淋巴细胞）和一个瘤细胞杂交，我们不能确定该脾细胞分泌的抗体是否正是我们所需要的；若用大量的脾细胞和瘤细胞进行融合，就可以从融合细胞中筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。现在学习的是第29页，共30页感谢大家观看现在学习的是第30页，共30页