稀有放线菌的选择性分离、鉴定及生物活性研究.doc

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1、稀有放线菌的选择性别离、鉴定及生物活性研究摘 要：聚乳酸PLA和丝蛋白粉分别作为选择性碳、氮可以有效进步稀有放线菌的别离效率，同时海洋环境中蕴藏着丰富的活性稀有放线菌，是发现新药的有效途径。为了挑选并鉴定海洋环境中产生活性物质的稀有放线菌，以聚乳酸和丝蛋白粉分别作为选择性碳、氮，配制6种别离培养基，用平板稀释法别离放线菌；并用滤纸片法和MTT法对供测菌株发酵产物进展活性挑选。结果说明：共别离出96株稀有放线菌，分属于11个属；其中，80株菌对7种靶标菌显示出一定的抗菌活性；78株菌对肿瘤细胞具有不同程度的细胞毒活性。另外，比拟了6种培养基对稀有放线菌的别离效果。从别离结果来看，最理想的是聚乳酸

2、培养基。【关键词】：p 】：稀有放线菌；选择别离；聚乳酸PLA；丝蛋白粉；活性挑选中图分类号：Q939.13 文献标识码：A 文章编号：1006-060_20_10-0004-03Abstract：Poly-L-lactic acid and silk protein powder as selective carbon， nitrogen for isolation of rare actinomycetes is worth further researches.Marine habitats are rich in rare actinomycetes with bioactivity

3、and may be an effective method of finding new medicine.This study was aimed to isolate and identify(转载自：.BdfQy. 千 叶帆 文摘:稀有放线菌的选择性别离、鉴定及生物活性研究) rare actinomycetes with bioactivity isolated from marine habitats.Rare actinomycetes were isolated using poly-L-lactic acid and silk protein as a selective c

4、arbon， nitrogen from si_ sles by agar plate dilution method.To test the biological active effects， we used paper-disk method with seven indicator organisms to detect the antimicrobial activity by its fermentation e_tracts， MTT assay with 2 human tumor cell lines to monitor anti-tumor activitiy.Among

5、 of them， by eliminating the same strains from one genus and then 120 strains were identified by 16SrRNA gene sequence analysis， 96 strains were classified into 11 genera besides Streptomyces.80 strains displayed anti-microbial activities.Meanwhile， 78 strains displayed anti-tumor activities.Si_ typ

6、es of culture medium for isolating rare actinomycetes had been pared， and results revealed that poly-L-lactic acid culture medium was the best for isolation.Key words： rare actinomycetes； selective isolation； poly-L-lactic acid； silk protein； bioactivity screening天然产物是生物活性物质、新化学构造、开发合成及半合成药物使用的先导化合物

7、的重要来1。它种类繁多，主要涵盖微生物、动物及植物领域。其中，微生物领域是寻找新型天然产物的宏大宝库，而开发天然产物的关键在于研究菌株能否产生多种构造新颖的化合物2。放线菌是一类重要的微生物资，目前产生的两万余种活性天然产物中3，有一半以上产生于放线菌4，包括各种抗生素5、酶类6、免疫抑制剂7及各种抗菌抗肿瘤物质8等。这些天然产物多数来自于链霉菌属，并且挑选重复率日益增高，因此研究者们逐渐将目光转向稀有放线菌。碳、氮是培养基的根本成分，不同类型放线菌可利用的碳、氮也不同，所以对于稀有放线菌的别离要采用不同于常规的别离方法3。聚乳酸Poly-L-lactic Acid PLA也称为聚丙交酯，单体

8、是乳酸，具有良好的耐热性、透明度、机械性能等，被认为是最理想的可降解绿色高分子材料9-12。目前，挑选出的可降解聚乳酸的微生物主要是Pseudonocardiaceae家族以及相关菌属13-15。明胶作为其诱导物，在一定程度上能加速PLA的降解。丝蛋白粉作为PLA的类似物，能有效诱导聚乳酸降解酶的产生，同时丝蛋白粉在一定程度上也能被放线菌生物降解15。研究选取聚乳酸、丝蛋白粉分别作为选择性碳、氮来别离放线菌，并对别离菌株进展16SrRNA基因序列分析p 。此外，还对别离菌株进展活性挑选，以期为开发新型微生物药物提供材料。1 材料与方法1.1 试验材料1.1.1 土样来 土样来详细情况见表1。将采集的土样置于4冰箱保存备用。第 4 页 共 4 页