医学生物化学课件精.ppt

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1、医学生物化学课件第1页，本讲稿共105页蛋白质的结构与功能蛋白质的结构与功能第第1 1章章Structure and Function of Protein第2页，本讲稿共105页n什么是蛋白质什么是蛋白质?蛋白质(protein)是由许多氨基酸(amino acids)通过肽键(peptide bond)相连形成的高分子含氮化合物。第3页，本讲稿共105页n蛋白质研究的历史蛋白质研究的历史18331833年年，从从麦麦芽芽中中分分离离淀淀粉粉酶酶；随随后后从从胃胃液液中中分分离到类似胃蛋白酶的物质。离到类似胃蛋白酶的物质。18641864年，血红蛋白被分离并结晶。年，血红蛋白被分离并结晶。1

2、919世世纪纪末末，证证明明蛋蛋白白质质由由氨氨基基酸酸组组成成，并并合合成成了了多种短肽。多种短肽。2020世世纪纪初初，发发现现蛋蛋白白质质的的二二级级结结构构；完完成成胰胰岛岛素素一级结构测定。一级结构测定。第4页，本讲稿共105页2020世世纪纪中中叶叶，各各种种蛋蛋白白质质分分析析技技术术相相继继建建立立，促促进进了蛋白质研究迅速发展；了蛋白质研究迅速发展；19621962年，确定了血红蛋白的四级结构。年，确定了血红蛋白的四级结构。2020世纪世纪9090年代，功能基因组与蛋白质组研究地展开。年代，功能基因组与蛋白质组研究地展开。第5页，本讲稿共105页n蛋白质的生物学重要性蛋白质的

3、生物学重要性分分布布广广：所所有有器器官官、组组织织都都含含有有蛋蛋白白质质；细细胞胞的各个部分都含有蛋白质。的各个部分都含有蛋白质。含含量量高高：蛋蛋白白质质是是细细胞胞内内最最丰丰富富的的有有机机分分子子，占占人人体体干干重重的的4545，某某些些组组织织含含量量更更高高，例例如如脾、肺及横纹肌等高达脾、肺及横纹肌等高达8080。1.蛋白质是生物体重要组成成分蛋白质是生物体重要组成成分第6页，本讲稿共105页作为生物催化剂（酶）作为生物催化剂（酶）代谢调节作用代谢调节作用免疫保护作用免疫保护作用物质的转运和存储物质的转运和存储运动与支持作用运动与支持作用参与细胞间信息传递参与细胞间信息传递

4、2.蛋白质具有重要的生物学功能蛋白质具有重要的生物学功能3.氧化供能氧化供能第7页，本讲稿共105页蛋白质的分子组成蛋白质的分子组成The Molecular Component of Protein第一节第一节第8页，本讲稿共105页n组成蛋白质的元素组成蛋白质的元素主要有C、H、O、N和 S。有些蛋白质含有少量磷或金属元素铁、铜、锌、锰、钴、钼，个别蛋白质还含有碘。第9页，本讲稿共105页 各种蛋白质的含氮量很接近，平均为各种蛋白质的含氮量很接近，平均为16。由于体内的含氮物质以蛋白质为主，因此，只要测定生物样品中的含氮量，就可以根据以下公式推算出蛋白质的大致含量：100克样品中蛋白质的含

5、量克样品中蛋白质的含量(g%)=每克样品含氮克数每克样品含氮克数 6.251001/16%n蛋白质元素组成的特点蛋白质元素组成的特点第10页，本讲稿共105页一、组成人体蛋白质的一、组成人体蛋白质的20种氨基酸均属种氨基酸均属于于L-氨基酸氨基酸 存在自然界中的氨基酸有300余种，但组成人体蛋白质的氨基酸仅有20种，且均属 L-氨基酸（甘氨酸除外）。第11页，本讲稿共105页H甘氨酸甘氨酸CH3丙氨酸丙氨酸L-L-氨基酸的通式氨基酸的通式RC+NH3COO-H第12页，本讲稿共105页非极性脂肪族氨基酸非极性脂肪族氨基酸极性中性氨基酸极性中性氨基酸芳香族氨基酸芳香族氨基酸酸性氨基酸酸性氨基酸碱

6、性氨基酸碱性氨基酸二、氨基酸二、氨基酸可根据侧链结构和理化性质进可根据侧链结构和理化性质进行分类行分类第13页，本讲稿共105页(一一)侧链含烃链的氨基酸属于非极性脂肪族氨基侧链含烃链的氨基酸属于非极性脂肪族氨基酸酸第14页，本讲稿共105页(二二)侧链有极性但不带电荷的氨基酸是极性中侧链有极性但不带电荷的氨基酸是极性中性氨基酸性氨基酸第15页，本讲稿共105页(三三)侧链含芳香基团的氨基酸是芳香族氨基酸侧链含芳香基团的氨基酸是芳香族氨基酸第16页，本讲稿共105页(四四)侧链含负性解离基团的氨基酸是酸性氨基酸侧链含负性解离基团的氨基酸是酸性氨基酸第17页，本讲稿共105页(五五)侧链含正性解

7、离基团的氨基酸属于碱性氨基侧链含正性解离基团的氨基酸属于碱性氨基酸酸第18页，本讲稿共105页n几种特殊氨基酸几种特殊氨基酸 脯氨酸脯氨酸（亚氨基酸）（亚氨基酸）CH2CHCOO-NH2+CH2CH2CH2CHCOO-NH2+CH2CH2第19页，本讲稿共105页 半胱氨酸半胱氨酸 +胱氨酸胱氨酸二硫键二硫键-HH-OOC-CH-CH2-S+NH3S-CH2-CH-COO-+NH3-OOC-CH-CH2-S+NH3S-CH2-CH-COO-+NH3-OOC-CH-CH2-SH+NH3-OOC-CH-CH2-SH+NH3HS-CH2-CH-COO-+NH3HS-CH2-CH-COO-+NH3第2

8、0页，本讲稿共105页三、三、20种氨基酸具有共同或特异的理化性质种氨基酸具有共同或特异的理化性质n两性解离及等电点两性解离及等电点氨基酸是两性电解质，其解离程度取决于所处氨基酸是两性电解质，其解离程度取决于所处溶液的酸碱度。溶液的酸碱度。等电点等电点(isoelectric point,pI)在在某某一一pH的的溶溶液液中中，氨氨基基酸酸解解离离成成阳阳离离子子和和阴阴离离子子的的趋趋势势及及程程度度相相等等，成成为为兼兼性性离离子子，呈呈电电中中性。此时溶液的性。此时溶液的pH值值称为该氨基酸的称为该氨基酸的等电点等电点。（一）氨基酸具有两性解离的性质（一）氨基酸具有两性解离的性质第21页

9、，本讲稿共105页pH=pI+OH-pHpI+H+OH-+H+pHpI氨基酸的兼性离子氨基酸的兼性离子 阳离子阳离子阴离子阴离子第22页，本讲稿共105页（二）含共轭双键的氨基酸具有紫外吸收性质（二）含共轭双键的氨基酸具有紫外吸收性质色氨酸、酪氨酸的最色氨酸、酪氨酸的最大吸收峰在大吸收峰在 280 nm 附近。附近。大大多多数数蛋蛋白白质质含含有有这这两两种种氨氨基基酸酸残残基基，所所以以 测测 定定 蛋蛋 白白 质质 溶溶 液液280nm的的光光吸吸收收值值是是分分析析溶溶液液中中蛋蛋白白质质含含量量的的快快速速简便的方法。简便的方法。芳香族氨基酸的紫外吸收芳香族氨基酸的紫外吸收第23页，本

10、讲稿共105页（三）氨基酸与茚三酮反应生成蓝紫色化合物（三）氨基酸与茚三酮反应生成蓝紫色化合物氨氨基基酸酸与与茚茚三三酮酮水水合合物物共共热热，可可生生成成蓝蓝紫紫色色化化合物，其最大吸收峰在合物，其最大吸收峰在570nm处。处。由由于于此此吸吸收收峰峰值值与与氨氨基基酸酸的的含含量量存存在在正正比比关关系，因此可作为氨基酸定量分析方法。系，因此可作为氨基酸定量分析方法。第24页，本讲稿共105页四、蛋白质是由许多氨基酸残基组成四、蛋白质是由许多氨基酸残基组成的多肽链的多肽链肽肽键键(peptide bond)是是由由一一个个氨氨基基酸酸的的-羧羧基基与与另另一一个个氨氨基基酸酸的的-氨氨基基

11、脱脱水水缩缩合合而而形形成成的的化化学键。学键。（一）（一）氨基酸通过肽键连接而形成肽氨基酸通过肽键连接而形成肽(peptide)第25页，本讲稿共105页+-HOH甘氨酰甘氨酸甘氨酰甘氨酸肽键第26页，本讲稿共105页肽是由氨基酸通过肽键缩合而形成的化合物。肽是由氨基酸通过肽键缩合而形成的化合物。两两分分子子氨氨基基酸酸缩缩合合形形成成二二肽肽，三三分分子子氨氨基基酸酸缩缩合则形成三肽合则形成三肽肽肽链链中中的的氨氨基基酸酸分分子子因因为为脱脱水水缩缩合合而而基基团团不全，被称为氨基酸残基不全，被称为氨基酸残基(residue)。由由十十个个以以内内氨氨基基酸酸相相连连而而成成的的肽肽称称为

12、为寡寡肽肽(oligopeptide)，由由更更多多的的氨氨基基酸酸相相连连形形成成的的肽肽称称多多肽肽(polypeptide)。第27页，本讲稿共105页N 末端：多肽链中有末端：多肽链中有游离游离-氨基氨基的一端的一端C 末端：多肽链中有末端：多肽链中有游离游离-羧基羧基的一端的一端n多肽链有两端：多肽链有两端：多多肽肽链链(polypeptide chain)是是指指许许多多氨氨基基酸酸之之间以肽键连接而成的一种结构。间以肽键连接而成的一种结构。第28页，本讲稿共105页N末端末端C末端末端牛核糖核酸酶牛核糖核酸酶第29页，本讲稿共105页（二）（二）体内存在多种重要的生物活性肽体内存

13、在多种重要的生物活性肽 1.谷胱甘肽(glutathione,GSH)第30页，本讲稿共105页GSH过氧过氧化物酶化物酶H2O2 2GSH 2H2O GSSG GSH还原酶还原酶NADPH+H+NADP+nGSH与与GSSG间的转换间的转换 第31页，本讲稿共105页 体内许多激素属寡肽或多肽体内许多激素属寡肽或多肽 神经肽神经肽(neuropeptide)2.多肽类激素及神经肽多肽类激素及神经肽第32页，本讲稿共105页蛋白质的分子结构蛋白质的分子结构The Molecular Structure of Protein 第二节第二节第33页，本讲稿共105页n蛋白质的分子结构包括蛋白质的分

14、子结构包括:高级高级结构结构一级结构一级结构(primary structure)二级结构二级结构(secondary structure)三级结构三级结构(tertiary structure)四级结构四级结构(quaternary structure)第34页，本讲稿共105页n定义定义:蛋白质的一级结构指在蛋白质分子从蛋白质的一级结构指在蛋白质分子从N-端至端至C-端的端的氨基酸排列顺序氨基酸排列顺序。一、一、氨基酸的排列顺序决定蛋白质氨基酸的排列顺序决定蛋白质的一级结构的一级结构n主要的化学键主要的化学键:肽键肽键，有些蛋白质还包括二硫键。，有些蛋白质还包括二硫键。第35页，本讲稿共1

15、05页一级结构是蛋白质空间构象和特异生物学一级结构是蛋白质空间构象和特异生物学功能的基础功能的基础，但不是决定蛋白质空间构象的但不是决定蛋白质空间构象的唯一因素唯一因素。第36页，本讲稿共105页二、二、多肽链的局部主链构象为蛋白质多肽链的局部主链构象为蛋白质二级结构二级结构蛋蛋白白质质分分子子中中某某一一段段肽肽链链的的局局部部空空间间结结构构，即即该该段段肽肽链链主主链链骨骨架架原原子子的的相相对对空空间间位位置置，并并不不涉涉及及氨氨基基酸酸残残基基侧侧链链的的构构象象。n定义定义:n主要的化学键主要的化学键：氢键氢键 第37页，本讲稿共105页（一）参与肽键形成的（一）参与肽键形成的6

16、个原子在同一平面上个原子在同一平面上参参与与肽肽键键的的6个个原原子子C 1、C、O、N、H、C 2位位于于同同一一平平面面，C 1和和C 2在在平平面面上上所所处处的的位位置置为为反反式式(trans)构构型型，此此同同一一平平面面上上的的6个个原原子构成了所谓的子构成了所谓的肽单元肽单元(peptide unit)。第38页，本讲稿共105页（一）参与肽键形成的（一）参与肽键形成的6个原子在同一平面上个原子在同一平面上参参与与肽肽键键的的6个个原原子子C 1、C、O、N、H、C 2位位于于同同一一平平面面，C 1和和C 2在在平平面面上上所所处处的的位位置置为为反反式式(trans)构构型

17、型，此此同同一一平平面面上上的的6个个原子构成了所谓的原子构成了所谓的肽单元肽单元(peptide unit)。第39页，本讲稿共105页 -螺旋螺旋 (-helix)-折叠折叠 (-pleated sheet)-转角转角 (-turn)无规卷曲无规卷曲 (random coil)（二）（二）-螺旋结构是常见的蛋白质二级结构螺旋结构是常见的蛋白质二级结构n蛋白质二级结构蛋白质二级结构第40页，本讲稿共105页n-螺旋螺旋第41页，本讲稿共105页（三）（三）-折叠使多肽链形成片层结构折叠使多肽链形成片层结构第42页，本讲稿共105页（四）（四）-转角和无规卷曲在蛋白质分子中普转角和无规卷曲在蛋

18、白质分子中普遍存在遍存在-转角转角无规卷曲是用来阐述没有确定规律性的那部分肽无规卷曲是用来阐述没有确定规律性的那部分肽链结构。链结构。第43页，本讲稿共105页（五）模体（五）模体是具有特殊功能的超二级结构是具有特殊功能的超二级结构在许多蛋白质分子中，可发现二个或三个具有二级在许多蛋白质分子中，可发现二个或三个具有二级结构的肽段，在空间上相互接近，形成一个结构的肽段，在空间上相互接近，形成一个有规则的二有规则的二级结构组合，被称为级结构组合，被称为超二级结构超二级结构。二级结构组合形式有二级结构组合形式有3 3种：种：，。第44页，本讲稿共105页二个或三个具有二级结构的肽段，在空间上相二个或

19、三个具有二级结构的肽段，在空间上相互接近，形成一个特殊的空间构象，称为互接近，形成一个特殊的空间构象，称为模体模体(motif)。模体是具有特殊功能的超二级结构。模体是具有特殊功能的超二级结构。第45页，本讲稿共105页钙结合蛋白中结合钙钙结合蛋白中结合钙离子的模体离子的模体锌指结构锌指结构-螺旋螺旋-转角（或环）转角（或环）-螺旋模体螺旋模体链链-转角转角-链模体链模体链链-转角转角-螺旋螺旋-转角转角-链模体链模体n模体常见的形式模体常见的形式第46页，本讲稿共105页（六）氨基酸残基的（六）氨基酸残基的侧链对侧链对二二级结级结构形成的影响构形成的影响蛋白质二级结构是以一级结构为基础的。一

20、段蛋白质二级结构是以一级结构为基础的。一段肽链其氨基酸残基的侧链适合形成肽链其氨基酸残基的侧链适合形成-螺旋或螺旋或-折叠，折叠，它就会出现相应的二级结构。它就会出现相应的二级结构。第47页，本讲稿共105页三、三、在二级结构基础上多肽链进一步折叠形在二级结构基础上多肽链进一步折叠形成蛋白质三级结构成蛋白质三级结构疏水键、离子键、氢键和疏水键、离子键、氢键和 Van der Waals力等。力等。n主要的化学键主要的化学键:整条肽链中全部氨基酸残基的相对空间位置。整条肽链中全部氨基酸残基的相对空间位置。即肽链中所有原子在三维空间的排布位置。即肽链中所有原子在三维空间的排布位置。n定义定义:（一

21、）三级结构是指整条肽链中全部氨基酸残基（一）三级结构是指整条肽链中全部氨基酸残基的相对空间位置的相对空间位置第48页，本讲稿共105页第49页，本讲稿共105页 肌红蛋白肌红蛋白(Mb)N 端端 C端端第50页，本讲稿共105页纤连蛋白分子的结构域纤连蛋白分子的结构域（二）结构域（二）结构域是三级结构层次上的局部折叠区是三级结构层次上的局部折叠区分子量较大的蛋白质常可折叠成多个结构较为紧密的区分子量较大的蛋白质常可折叠成多个结构较为紧密的区域，并各行其功能，称为结构域域，并各行其功能，称为结构域(domain)。第51页，本讲稿共105页（三）分子伴侣（三）分子伴侣参与蛋白质折叠参与蛋白质折叠

22、分子伴侣分子伴侣(chaperon)通过提供一个保护环境从而加速通过提供一个保护环境从而加速蛋白质折叠成天然构象或形成四级结构。蛋白质折叠成天然构象或形成四级结构。分子伴侣可逆地与未折叠肽段的疏水部分结合随后分子伴侣可逆地与未折叠肽段的疏水部分结合随后松开，如此重复进行可防止错误的聚集发生，使肽松开，如此重复进行可防止错误的聚集发生，使肽链正确折叠。链正确折叠。分子伴侣也可与错误聚集的肽段结合，使之解聚后，再分子伴侣也可与错误聚集的肽段结合，使之解聚后，再诱导其正确折叠。诱导其正确折叠。分子伴侣在蛋白质分子折叠过程中二硫键的正确形成分子伴侣在蛋白质分子折叠过程中二硫键的正确形成起了重要的作用。

23、起了重要的作用。第52页，本讲稿共105页伴侣蛋白在蛋白质折叠中的作用伴侣蛋白在蛋白质折叠中的作用第53页，本讲稿共105页亚基之间的结合主要是氢键和离子键。亚基之间的结合主要是氢键和离子键。四、四、含有二条以上多肽链的蛋白质具有含有二条以上多肽链的蛋白质具有四级结构四级结构蛋白质分子中各亚基的空间排布及亚基接蛋白质分子中各亚基的空间排布及亚基接触部位的布局和相互作用，称为触部位的布局和相互作用，称为蛋白质的四级结蛋白质的四级结构构。有些蛋白质分子含有二条或多条多肽链，每一有些蛋白质分子含有二条或多条多肽链，每一条多肽链都有完整的三级结构，称为蛋白质的条多肽链都有完整的三级结构，称为蛋白质的亚

24、基亚基 (subunit)。第54页，本讲稿共105页由由2个个亚亚基基组组成成的的蛋蛋白白质质四四级级结结构构中中，若若亚亚基基分分子子结结构构相相同同，称称之之为为同同二二聚聚体体(homodimer)，若若亚亚基基分分子子结结构构不同，则称之为不同，则称之为异二聚体异二聚体(heterodimer)。血红蛋白的四血红蛋白的四级结构级结构第55页，本讲稿共105页五、蛋白质的分类五、蛋白质的分类n根据蛋白质组成成分根据蛋白质组成成分:单纯蛋白质单纯蛋白质结合蛋白质结合蛋白质=蛋白质部分蛋白质部分+非蛋白质部分非蛋白质部分n根据蛋白质形状根据蛋白质形状:纤维状蛋白质纤维状蛋白质球状蛋白质球状

25、蛋白质第56页，本讲稿共105页六、蛋白质组学六、蛋白质组学（一）蛋白质组学基本概念（一）蛋白质组学基本概念蛋白质组是指一种细胞或一种生物所表达的全蛋白质组是指一种细胞或一种生物所表达的全部蛋白质，即部蛋白质，即“一种基因组所表达的全套蛋白质一种基因组所表达的全套蛋白质”。第57页，本讲稿共105页（二）蛋白质组学研究技术平台（二）蛋白质组学研究技术平台 蛋白质组学是高通量，高效率的研究蛋白质组学是高通量，高效率的研究:双向电泳分离样品蛋白质双向电泳分离样品蛋白质 蛋白质点的定位、切取蛋白质点的定位、切取 蛋白质点的质谱分析蛋白质点的质谱分析 （三）蛋白质组学研究的科学意义（三）蛋白质组学研究

26、的科学意义第58页，本讲稿共105页蛋白质结构与功能的关系蛋白质结构与功能的关系The Relation of Structure and Function of Protein第三节第三节第59页，本讲稿共105页（一）一级结构是空间构象的基础（一）一级结构是空间构象的基础一、蛋白质一级结构一、蛋白质一级结构是高级结构与是高级结构与功能的基础功能的基础牛核糖核酸酶的牛核糖核酸酶的一级结构一级结构二二硫硫键键第60页，本讲稿共105页 天然状态，天然状态，有催化活性有催化活性 尿素、尿素、-巯基乙醇巯基乙醇 去除尿素、去除尿素、-巯基乙醇巯基乙醇非折叠状态，无活性非折叠状态，无活性第61页，本

27、讲稿共105页（二）一级结构相似的蛋白质具有相似的高级结（二）一级结构相似的蛋白质具有相似的高级结构与功能构与功能胰岛素氨基酸残基序号A5A6A10B30人ThrSerIleThr猪ThrSerIleAla狗ThrSerIleAla兔ThrGlyIleSer牛AlaGlyValAla羊AlaSerValAla马ThrSerIleAla第62页，本讲稿共105页（三）（三）氨基酸序列提供重要的生物化学信息氨基酸序列提供重要的生物化学信息一些广泛存在于生物一些广泛存在于生物界的蛋白质如细胞色素界的蛋白质如细胞色素(cytochrome C)，比较它们，比较它们的一级结构，可以帮助了的一级结构，可以

28、帮助了解物种进化间的关系。解物种进化间的关系。第63页，本讲稿共105页（四）重要蛋白质的氨基酸序列改变可引起疾病（四）重要蛋白质的氨基酸序列改变可引起疾病n例：镰刀形红细胞贫血例：镰刀形红细胞贫血N-val his leu thr pro glu glu C(146)HbS 肽链肽链HbA 肽肽 链链N-val his leu thr pro val glu C(146)这种由蛋白质分子发生变异所导致的疾病，称为这种由蛋白质分子发生变异所导致的疾病，称为“分子病分子病”。第64页，本讲稿共105页n肌红蛋白肌红蛋白/血红蛋白血红蛋白含有血红素辅基含有血红素辅基血红素结构血红素结构 二、二、蛋

29、白质的功能依赖特定空间结构蛋白质的功能依赖特定空间结构（一）（一）血红蛋白亚基与肌红蛋白结构相似血红蛋白亚基与肌红蛋白结构相似第65页，本讲稿共105页n肌红蛋白肌红蛋白(myoglobin，Mb)肌肌红红蛋蛋白白是是一一个个只只有有三三级级结结构构的的单单链链蛋蛋白白质质，有有8 8段段-螺螺旋旋结结构。构。血血红红素素分分子子中中的的两两个个丙丙酸酸侧侧链链以以离离子子键键形形式式与与肽肽链链中中的的两两个个碱碱性性氨氨基基酸酸侧侧链链上上的的正正电电荷荷相相连连，加加之之肽肽链链中中的的F8F8组组氨氨酸酸残残基基还还与与FeFe2+2+形形成成配配位位结结合合，所所以以血血红红素素辅辅

30、基基与与蛋蛋白质部分稳定结合。白质部分稳定结合。第66页，本讲稿共105页n血红蛋白血红蛋白(hemoglobin，Hb)血血红红蛋蛋白白具具有有4个个亚亚基基组组成成的的四四级级结结构构，每每个个亚亚基基可可结结合合1 1个个血血红红素素并并携携带带1 1分子氧分子氧。Hb亚亚基基之之间间通通过过8对对盐盐键键，使使4个个亚亚基基紧紧密密结结合合而而形形成亲水的球状蛋白。成亲水的球状蛋白。第67页，本讲稿共105页Hb与Mb一样能可逆地与O2结合，Hb与O2结合后称为氧合Hb。氧合Hb占总Hb的百分数（称百分饱和度）随O2浓度变化而改变。（二）血红蛋白亚基构象变化可影响亚基与氧（二）血红蛋白

31、亚基构象变化可影响亚基与氧结合结合第68页，本讲稿共105页肌红蛋白肌红蛋白(Mb)和血红蛋白和血红蛋白(Hb)的氧解离曲线的氧解离曲线第69页，本讲稿共105页n协同效应协同效应(cooperativity)一个寡聚体蛋白质的一个亚基与其配体结合后，能影响此寡聚体中另一个亚基与配体结合能力的现象，称为协同效应。如果是促进作用则称为正协同效应(positive cooperativity)如果是抑制作用则称为负协同效应(negative cooperativity)第70页，本讲稿共105页第71页，本讲稿共105页O2血血红红素素与与氧氧结结合合后后，铁铁原原子子半半径径变变小小，就就能能进

32、进入入卟卟啉啉环环的的小小孔孔中中，继继而而引引起起肽肽链链位置的变动。位置的变动。第72页，本讲稿共105页n变构效应变构效应(allosteric effect)蛋白质空间结构的改变伴随其功能的变化，称为变构效应。第73页，本讲稿共105页（三）蛋白质构象改变（三）蛋白质构象改变可引起疾病可引起疾病蛋蛋白白质质构构象象疾疾病病：若若蛋蛋白白质质的的折折叠叠发发生生错错误误，尽尽管管其其一一级级结结构构不不变变，但但蛋蛋白白质质的的构构象象发发生生改改变变，仍仍可可影影响响其其功功能能，严严重重时时可可导导致致疾疾病病发生。发生。第74页，本讲稿共105页蛋白质构象改变导致疾病的机理蛋白质构

33、象改变导致疾病的机理：有些蛋白质：有些蛋白质错误折叠后相互聚集，常形成抗蛋白水解酶的淀粉样错误折叠后相互聚集，常形成抗蛋白水解酶的淀粉样纤维沉淀，产生毒性而致病，表现为蛋白质淀粉样纤纤维沉淀，产生毒性而致病，表现为蛋白质淀粉样纤维沉淀的病理改变。维沉淀的病理改变。这类疾病包括这类疾病包括：人纹状体脊髓变性病、老年痴：人纹状体脊髓变性病、老年痴呆症、亨停顿舞蹈病、疯牛病等。呆症、亨停顿舞蹈病、疯牛病等。第75页，本讲稿共105页疯牛病是由朊病毒蛋白疯牛病是由朊病毒蛋白(prion protein,PrP)引起引起的一组人和动物神经退行性病变。的一组人和动物神经退行性病变。正常的正常的PrP富含富

34、含-螺旋，称为螺旋，称为PrPc。PrPc在某种未知蛋白质的作用下可转变成全为在某种未知蛋白质的作用下可转变成全为-折折叠的叠的PrPsc，从而致病。，从而致病。PrPc-螺旋螺旋PrPsc-折叠折叠正常正常疯牛病疯牛病n疯牛病中的蛋白质构象改变疯牛病中的蛋白质构象改变第76页，本讲稿共105页第四节第四节蛋白质的理化性质蛋白质的理化性质The Physical and Chemical Characters of Protein第77页，本讲稿共105页一、一、蛋白质具有两性电离的性质蛋白质具有两性电离的性质蛋蛋白白质质分分子子除除两两端端的的氨氨基基和和羧羧基基可可解解离离外外，氨氨基基酸

35、酸残残基基侧侧链链中中某某些些基基团团，在在一一定定的的溶溶液液pH条条件件下下都都可可解离成带负电荷或正电荷的基团。解离成带负电荷或正电荷的基团。当当蛋蛋白白质质溶溶液液处处于于某某一一pH时时，蛋蛋白白质质解解离离成成正正、负负离离子子的的趋趋势势相相等等，即即成成为为兼兼性性离离子子，净净电电荷荷为为零零，此此时时溶液的溶液的pH称为称为蛋白质的等电点。蛋白质的等电点。n蛋白质的等电点蛋白质的等电点(isoelectric point,pI)第78页，本讲稿共105页二、蛋白质具有胶体性质二、蛋白质具有胶体性质蛋蛋白白质质属属于于生生物物大大分分子子之之一一，分分子子量量可可自自1万万至

36、至100万万之之巨巨，其其分分子子的的直直径径可可达达1100nm，为为胶胶粒范围之内。粒范围之内。颗粒表面电荷颗粒表面电荷水化膜水化膜n蛋白质胶体稳定的因素蛋白质胶体稳定的因素:第79页，本讲稿共105页+带正电荷的蛋白质带正电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质在等电点的蛋白质在等电点的蛋白质水化膜水化膜+带正电荷的蛋白质带正电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质不稳定的蛋白质颗粒不稳定的蛋白质颗粒酸酸碱碱酸酸碱碱酸酸碱碱脱水作用脱水作用脱水作用脱水作用脱水作用脱水作用溶液中蛋白质的聚沉溶液中蛋白质的聚沉第80页，本讲稿共105页三、蛋白质空间结构破坏而引起变性三、蛋白质空间结

37、构破坏而引起变性在在某某些些物物理理和和化化学学因因素素作作用用下下，其其特特定定的的空空间间构构象象被被破破坏坏，也也即即有有序序的的空空间间结结构构变变成成无无序序的的空空间间结构，从而导致其理化性质改变和生物活性的丧失。结构，从而导致其理化性质改变和生物活性的丧失。n蛋白质的变性蛋白质的变性(denaturation)第81页，本讲稿共105页n造成变性的因素造成变性的因素:如如加热、乙醇等有机溶剂、强酸、强碱、重金加热、乙醇等有机溶剂、强酸、强碱、重金属离子及生物碱试剂等属离子及生物碱试剂等。n变性的本质变性的本质:破坏非共价键和二硫键，不改变蛋白破坏非共价键和二硫键，不改变蛋白质的一

38、级结构。质的一级结构。第82页，本讲稿共105页n 应用举例应用举例:临床医学上，变性因素常被应用来消毒及灭菌。临床医学上，变性因素常被应用来消毒及灭菌。此外此外,防止蛋白质变性也是有效保存蛋白质制防止蛋白质变性也是有效保存蛋白质制剂（如疫苗等）的必要条件。剂（如疫苗等）的必要条件。第83页，本讲稿共105页若若蛋蛋白白质质变变性性程程度度较较轻轻，去去除除变变性性因因素素后后，蛋蛋白白质质仍仍可可恢恢复复或或部部分分恢恢复复其其原原有有的的构构象象和和功功能能，称为称为复性复性(renaturation)。第84页，本讲稿共105页 天然状态，天然状态，有催化活性有催化活性 尿素、尿素、-巯

39、基乙醇巯基乙醇 去除尿素、去除尿素、-巯基乙醇巯基乙醇非折叠状态，无活性非折叠状态，无活性第85页，本讲稿共105页在在一一定定条条件件下下，蛋蛋白白疏疏水水侧侧链链暴暴露露在在外外，肽肽链链融会相互缠绕继而聚集，因而从溶液中析出。融会相互缠绕继而聚集，因而从溶液中析出。变变性性的的蛋蛋白白质质易易于于沉沉淀淀，有有时时蛋蛋白白质质发发生生沉沉淀淀，但并不变性。但并不变性。蛋白质变性后的絮状物加热可变成比较坚固的凝蛋白质变性后的絮状物加热可变成比较坚固的凝块，此凝块不易再溶于强酸和强碱中。块，此凝块不易再溶于强酸和强碱中。n蛋白质沉淀蛋白质沉淀n蛋白质的凝固作用蛋白质的凝固作用(protein

40、 coagulation)第86页，本讲稿共105页四、蛋白质四、蛋白质在紫外光谱区有特征性吸收峰在紫外光谱区有特征性吸收峰由于蛋白质分子中含有共轭双键的酪氨酸和由于蛋白质分子中含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，因此在色氨酸，因此在280nm波长处有特征性吸收峰。波长处有特征性吸收峰。蛋白质的蛋白质的OD280与其浓度呈正比关系，因此可作与其浓度呈正比关系，因此可作蛋白质定量测定。蛋白质定量测定。第87页，本讲稿共105页蛋白质经水解后产生的氨基酸也可发生茚三酮蛋白质经水解后产生的氨基酸也可发生茚三酮反应。反应。蛋白质和多肽分子中肽键在稀碱溶液中与硫蛋白质和多肽分子中肽键在稀碱溶液中与硫酸铜共热，

41、呈现紫色或红色，此反应称为酸铜共热，呈现紫色或红色，此反应称为双缩脲双缩脲反应反应，双缩脲反应可用来检测蛋白质水解程度。，双缩脲反应可用来检测蛋白质水解程度。五、应用蛋白质呈色反应可测定蛋白质五、应用蛋白质呈色反应可测定蛋白质溶液含量溶液含量1.茚三酮反应茚三酮反应(ninhydrin reaction)2.双缩脲反应双缩脲反应(biuret reaction)第88页，本讲稿共105页第五节第五节蛋白质的分离纯化与结构分析蛋白质的分离纯化与结构分析The Separation and Purification and Structure Analysis of Protein第89页，本讲稿

42、共105页一、一、透析及超滤法可去除蛋白质溶液中的透析及超滤法可去除蛋白质溶液中的小分子化合物小分子化合物应用正压或离心力使蛋白质溶液透过有一定截留应用正压或离心力使蛋白质溶液透过有一定截留分子量的超滤膜，达到浓缩蛋白质溶液的目的。分子量的超滤膜，达到浓缩蛋白质溶液的目的。n透析透析(dialysis)n超滤法超滤法利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法开的方法。第90页，本讲稿共105页二、丙酮沉淀、盐析及免疫沉淀是常用二、丙酮沉淀、盐析及免疫沉淀是常用的蛋白质沉淀方法的蛋白质沉淀方法使用使用丙酮沉淀丙酮沉淀时，必须在时，必须在04低温下进行

43、，丙酮低温下进行，丙酮用量一般用量一般10倍于蛋白质溶液体积。蛋白质被丙酮沉倍于蛋白质溶液体积。蛋白质被丙酮沉淀后，应立即分离。除了丙酮以外，也可用乙醇沉淀后，应立即分离。除了丙酮以外，也可用乙醇沉淀。淀。盐析盐析(salt precipitation)是将硫酸铵、硫酸钠或氯化是将硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质沉淀。以及水化膜被破坏，导致蛋白质沉淀。第91页，本讲稿共105页免疫沉淀法：免疫沉淀法：将某一纯化蛋白质免疫动物可获得抗该将某一纯化蛋白质免疫动物可获得抗该蛋白的特异抗体。利用特异抗体

44、识别相应的抗原蛋白，蛋白的特异抗体。利用特异抗体识别相应的抗原蛋白，并形成抗原抗体复合物的性质，可从蛋白质混合溶液中并形成抗原抗体复合物的性质，可从蛋白质混合溶液中分离获得抗原蛋白。分离获得抗原蛋白。第92页，本讲稿共105页三、利用荷电性质可用电泳法将蛋白三、利用荷电性质可用电泳法将蛋白质分离质分离蛋蛋白白质质在在高高于于或或低低于于其其pIpI的的溶溶液液中中为为带带电电的的颗颗粒粒，在在电电场场中中能能向向正正极极或或负负极极移移动动。这这种种通通过过蛋蛋白白质质在在电电场场中中泳泳动动而而达达到到分分离离各各种种蛋蛋白白质质的的技技术术,称称为为电电泳泳(elctrophoresis)

45、。根据支撑物的不同，可分为薄膜电泳、凝胶电泳等。根据支撑物的不同，可分为薄膜电泳、凝胶电泳等。第93页，本讲稿共105页SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳，常用于蛋白质分子量的，常用于蛋白质分子量的测定。测定。等电聚焦电泳等电聚焦电泳，通过蛋白质等电点的差异而分离蛋，通过蛋白质等电点的差异而分离蛋白质的电泳方法。白质的电泳方法。双向凝胶电泳双向凝胶电泳是蛋白质组学研究的重要技术。是蛋白质组学研究的重要技术。n几种重要的蛋白质电泳几种重要的蛋白质电泳:第94页，本讲稿共105页四、四、应用相分配或亲和原理可将蛋白质进应用相分配或亲和原理可将蛋白质进行层析分离行层析分离待待分分离离蛋蛋白

46、白质质溶溶液液（流流动动相相）经经过过一一个个固固态态物物质质（固固定定相相）时时，根根据据溶溶液液中中待待分分离离的的蛋蛋白白质质颗颗粒粒大大小小、电电荷荷多多少少及及亲亲和和力力等等，使使待待分分离离的的蛋蛋白白质质组组分分在在两两相相中中反反复复分分配配，并并以以不不同同速速度度流流经经固固定定相相而而达达到到分分离离蛋蛋白质的目的。白质的目的。n层析层析(chromatography)分离蛋白质的原理分离蛋白质的原理第95页，本讲稿共105页离子交换层析：离子交换层析：利用各蛋白质的电荷量及性质不同利用各蛋白质的电荷量及性质不同进行分离。进行分离。凝胶过滤凝胶过滤(gel filtra

47、tion)又称分子筛层析又称分子筛层析，利，利用各蛋白质分子大小不同分离。用各蛋白质分子大小不同分离。n蛋白质分离常用的层析方法蛋白质分离常用的层析方法第96页，本讲稿共105页第97页，本讲稿共105页第98页，本讲稿共105页五、五、利用蛋白质颗粒沉降行为不同可利用蛋白质颗粒沉降行为不同可进行超速离心分离进行超速离心分离超速离心法超速离心法(ultracentrifugation)既可以用来分离既可以用来分离纯化蛋白质也可以用作测定蛋白质的分子量。纯化蛋白质也可以用作测定蛋白质的分子量。蛋白质在离心场中的行为用蛋白质在离心场中的行为用沉降系数沉降系数(sedimentation coeff

48、icient,S)表示，沉降表示，沉降系数与蛋白质的密度和形状相关系数与蛋白质的密度和形状相关。第99页，本讲稿共105页因因为为沉沉降降系系数数S大大体体上上和和分分子子量量成成正正比比关关系系，故故可可应应用用超超速速离离心心法法测测定定蛋蛋白白质质分分子子量量，但但对对分分子子形形状状的的高高度度不不对对称称的的大大多多数数纤纤维维状状蛋蛋白质不适用。白质不适用。第100页，本讲稿共105页六、应用化学或反向遗传学方法可分析多六、应用化学或反向遗传学方法可分析多肽链的氨基酸序列肽链的氨基酸序列分析已纯化蛋白质的氨基酸残基组成分析已纯化蛋白质的氨基酸残基组成测定多肽链的氨基末端与羧基末端为

49、何种氨基酸残基测定多肽链的氨基末端与羧基末端为何种氨基酸残基把肽链水解成片段，分别进行分析把肽链水解成片段，分别进行分析测定各肽段的氨基酸排列顺序，一般采用测定各肽段的氨基酸排列顺序，一般采用Edman降解法降解法一般需用数种水解法，并分析出各肽段中的氨基酸顺序，然一般需用数种水解法，并分析出各肽段中的氨基酸顺序，然后经过组合排列对比，最终得出完整肽链中氨基酸顺序的结果。后经过组合排列对比，最终得出完整肽链中氨基酸顺序的结果。第101页，本讲稿共105页n通过核酸来推演蛋白质中的氨基酸序列通过核酸来推演蛋白质中的氨基酸序列按照三联密码的原则推演出氨基酸的序列按照三联密码的原则推演出氨基酸的序列

50、分离编码蛋白质的基因分离编码蛋白质的基因测定测定DNA序列序列排列出排列出mRNA序列序列第102页，本讲稿共105页七、应用物理学、生物信息学原理可七、应用物理学、生物信息学原理可进行蛋白质空间结构测定进行蛋白质空间结构测定n二级结构测定二级结构测定通通常常采采用用圆圆二二色色光光谱谱(circular dichroism，CD)测测定定溶溶液液状状态态下下的的蛋蛋白白质质二二级级结结构构含含量量。-螺螺旋旋的的CDCD峰峰有有222nm222nm处处的的负负峰峰、208nm208nm处处的的负负峰峰和和198 198 nmnm处的正峰三个成分；而处的正峰三个成分；而-折叠的折叠的CDCD谱