微生物的实验室培养最新讲稿.ppt
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1、关于微生物的关于微生物的实验室室培养最新培养最新第一页,讲稿共七十五页哦微生物的类群微生物的类群微微生生物物原核类原核类:真核类真核类非细胞类:非细胞类:衣原体、支原体、衣原体、支原体、衣原体、支原体、衣原体、支原体、细菌、细菌、细菌、细菌、放线菌、蓝藻放线菌、蓝藻放线菌、蓝藻放线菌、蓝藻个体微小、结构简单个体微小、结构简单酵母菌、霉菌、食用菌酵母菌、霉菌、食用菌(蘑蘑菇,灵芝)菇,灵芝)真菌:真菌:原生生物:原生生物:显微藻类、原生生物显微藻类、原生生物(如:草履虫、变形虫等)(如:草履虫、变形虫等)(如:草履虫、变形虫等)(如:草履虫、变形虫等)病毒、类病毒、朊病毒病毒、类病毒、朊病毒微生
2、物的共同特点:微生物的共同特点:微生物基础知识微生物基础知识第二页,讲稿共七十五页哦自养型微生物自养型微生物:光能自养:光合细菌、蓝藻、显微藻类化能自养:硝化细菌、铁细菌、硫细菌异养型微生物:异养型微生物:绝大多数微生物第三页,讲稿共七十五页哦细菌的形态细菌的形态球菌球菌弧菌弧菌杆菌杆菌螺旋菌螺旋菌第四页,讲稿共七十五页哦(一)培养基(一)培养基 1.1.概念:人们按照微生物对营养物质的不概念:人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质。同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质。3 3.培养基的类型和用途培养基的类型和用途2.2.培养基的成分:培养基的成分:一般都含有一般都含
3、有水水、碳源碳源、氮源氮源、无机盐无机盐等等营养物质,另外还需要满足微生物生长对营养物质,另外还需要满足微生物生长对pHpH、特殊营养物质特殊营养物质以及以及氧气氧气等的要求。等的要求。第五页,讲稿共七十五页哦培养基的种类培养基的种类不加凝固剂不加凝固剂加凝固剂,如加凝固剂,如琼脂琼脂工业生产工业生产观察微生物的运动、观察微生物的运动、分类鉴定分类鉴定微生物分离、鉴定、活菌微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种计数、保藏菌种含化学成分不明确的含化学成分不明确的天然物质天然物质工业生产工业生产培养基成分明确培养基成分明确分类、鉴定分类、鉴定液体培养基液体培养基半固体培养基半固体培养基固体培养基固体
4、培养基第六页,讲稿共七十五页哦液体培养基:液体培养基:表面生长表面生长表面生长表面生长均匀混浊生长均匀混浊生长均匀混浊生长均匀混浊生长沉淀生长沉淀生长沉淀生长沉淀生长半固体培养基:半固体培养基:(是否运动是否运动)固体培养基:菌落固体培养基:菌落第七页,讲稿共七十五页哦菌落菌落.定义:定义:单个或者少数单个或者少数细菌细菌(或其他微生物)在固体或其他微生物)在固体培养基上大量繁殖时,会形成一个肉眼可见的、培养基上大量繁殖时,会形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的具有一定形态结构的子细胞群体子细胞群体,叫做,叫做菌落菌落。.特征:特征:大小、形状、光泽度、颜色、硬度、大小、形状、光泽度、颜色、
5、硬度、透明度等。透明度等。.功能:功能:每种细菌在一定条件下所形成的菌落,每种细菌在一定条件下所形成的菌落,可以可以作为菌种鉴定的重要依据作为菌种鉴定的重要依据。第八页,讲稿共七十五页哦几几种种菌菌落落及及其其形形态态第九页,讲稿共七十五页哦几几种种菌菌落落及及其其形形态态第十页,讲稿共七十五页哦(二)微生物需要的营养物质(二)微生物需要的营养物质1 1、碳源、碳源2 2、氮源、氮源3 3、无机盐、无机盐4 4、水、水.生长因子、维生素生长因子、维生素第十一页,讲稿共七十五页哦:凡是能为微生物提供所需:凡是能为微生物提供所需碳元素碳元素的营的营养物质。养物质。无机碳源:无机碳源:COCO2 2
6、;NaHCONaHCO3 3等等有机碳源:有机碳源:糖类、脂肪酸、花生粉饼、糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等石油等构成细胞物质和一些代谢产物构成细胞物质和一些代谢产物异养微生物的能源异养微生物的能源.概念概念.来源:来源:.作用:作用:1.1.微生物的碳源微生物的碳源注:自养微生物的碳源为无机碳源注:自养微生物的碳源为无机碳源 异养微生物的碳源为有机碳源异养微生物的碳源为有机碳源第十二页,讲稿共七十五页哦无机氮源:无机氮源:N N2 2、NHNH4 4+、NONO3 3-、NHNH3 3等。等。有机氮源:有机氮源:尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等基酸等凡是能够为微生物提供凡
7、是能够为微生物提供N N元素元素的营养物质。的营养物质。主要用于合成蛋白质、核酸及含主要用于合成蛋白质、核酸及含N N的代谢产的代谢产物。物。2.2.微生物的氮源微生物的氮源.概念:概念:.来源:来源:.作用:作用:注:固氮菌的氮源为无机氮源注:固氮菌的氮源为无机氮源 第十三页,讲稿共七十五页哦练习练习1.1.不能作为异养微生物碳源的是(不能作为异养微生物碳源的是()A A糖类糖类 B B含碳有机物含碳有机物C C石油石油 D D含碳无机物含碳无机物D2.2.自养型微生物与异养型微生物的培养基的自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要差别是(主要差别是()A A碳源碳源B B氮源氮源C C无机
8、盐无机盐D D生长因子生长因子 A第十四页,讲稿共七十五页哦【典例解析典例解析】例例例例:关于微生物营养物质的叙述中,正确的是关于微生物营养物质的叙述中,正确的是关于微生物营养物质的叙述中,正确的是关于微生物营养物质的叙述中,正确的是()()()()A.A.A.A.是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源 B.B.B.B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量 C.C.C.C.除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无机物只提供无机盐 D.D.
9、D.D.无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量解析:解析:解析:解析:不同的微生物,所需营养物质有较大差别,要针对微生物不同的微生物,所需营养物质有较大差别,要针对微生物不同的微生物,所需营养物质有较大差别,要针对微生物不同的微生物,所需营养物质有较大差别,要针对微生物的具体情况分析。对于的具体情况分析。对于的具体情况分析。对于的具体情况分析。对于A A A A、B B B B选项,它的表达是不完整的。有的碳源只能选项,它的表达是不完整的。有的碳源只能选项,它的表达是不完整的。有的碳源只能选项,它的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源,如二氧化碳;有的碳
10、源可同时是氮源,如是碳源,如二氧化碳;有的碳源可同时是氮源,如是碳源,如二氧化碳;有的碳源可同时是氮源,如是碳源,如二氧化碳;有的碳源可同时是氮源,如NHNHNHNH4 4 4 4HCOHCOHCOHCO3 3 3 3;有的碳源同时;有的碳源同时;有的碳源同时;有的碳源同时是能源,如葡萄糖;有的碳源同时是氮源,也是能源,如蛋白胨。对于是能源,如葡萄糖;有的碳源同时是氮源,也是能源,如蛋白胨。对于是能源,如葡萄糖;有的碳源同时是氮源,也是能源,如蛋白胨。对于是能源,如葡萄糖;有的碳源同时是氮源,也是能源,如蛋白胨。对于C C C C选选选选项,除水以外的无机物种类繁多,功能也多样。如二氧化碳,可
11、作为自养项,除水以外的无机物种类繁多,功能也多样。如二氧化碳,可作为自养项,除水以外的无机物种类繁多,功能也多样。如二氧化碳,可作为自养项,除水以外的无机物种类繁多,功能也多样。如二氧化碳,可作为自养型微生物的碳源;型微生物的碳源;型微生物的碳源;型微生物的碳源;NaHCONaHCONaHCONaHCO3 3 3 3,可作为自养型微生物的碳源和无机盐;,可作为自养型微生物的碳源和无机盐;,可作为自养型微生物的碳源和无机盐;,可作为自养型微生物的碳源和无机盐;而而而而NaClNaClNaClNaCl则只能提供无机盐。对于则只能提供无机盐。对于则只能提供无机盐。对于则只能提供无机盐。对于D D D
12、 D选项,无机氮源提供能量的情况选项,无机氮源提供能量的情况选项,无机氮源提供能量的情况选项,无机氮源提供能量的情况还是存在的,如还是存在的,如还是存在的,如还是存在的,如NHNHNHNH3 3 3 3可为硝化细菌提供能量和氮源。可为硝化细菌提供能量和氮源。可为硝化细菌提供能量和氮源。可为硝化细菌提供能量和氮源。D D第十五页,讲稿共七十五页哦3 3 3 3.通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。在碳源为纤维素的培养基上,大部分微生所需的微生物
13、。在碳源为纤维素的培养基上,大部分微生所需的微生物。在碳源为纤维素的培养基上,大部分微生所需的微生物。在碳源为纤维素的培养基上,大部分微生物无法生长;在培养基中加入青霉素,可以抑制细菌和放物无法生长;在培养基中加入青霉素,可以抑制细菌和放物无法生长;在培养基中加入青霉素,可以抑制细菌和放物无法生长;在培养基中加入青霉素,可以抑制细菌和放线菌。利用上述方法能从混杂的微生物群体中分别分离出线菌。利用上述方法能从混杂的微生物群体中分别分离出线菌。利用上述方法能从混杂的微生物群体中分别分离出线菌。利用上述方法能从混杂的微生物群体中分别分离出()()()()大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌霉菌霉菌霉菌霉
14、菌放线菌放线菌放线菌放线菌纤维素分解菌纤维素分解菌纤维素分解菌纤维素分解菌A.A.A.A.B.B.B.B.C.C.C.C.D.D.D.D.解析:解析:选选A A。本题考查了微生物分离知识。纤维素分解菌可以。本题考查了微生物分离知识。纤维素分解菌可以利用纤维素,大部分微生物却不能;培养基中加入青霉素可以抑制利用纤维素,大部分微生物却不能;培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌,但霉菌能够生长。细菌和放线菌,但霉菌能够生长。第十六页,讲稿共七十五页哦 4、某细菌的培养基的组成成分是葡萄糖、尿、某细菌的培养基的组成成分是葡萄糖、尿素、琼脂、磷酸二氢钾、硫酸镁和蒸馏水等,其素、琼脂、磷酸二氢钾、硫酸镁
15、和蒸馏水等,其中凝固剂是中凝固剂是 ,碳源是碳源是 ,氮源是,氮源是 。已知只有能够合成脲酶的细菌才能在该培养基上。已知只有能够合成脲酶的细菌才能在该培养基上生长,该培养基属于生长,该培养基属于 培养基。从同化作用类型来看,用该培养培养基。从同化作用类型来看,用该培养基培养的细菌属于基培养的细菌属于()同化作用:自养型同化作用:自养型/异养型异养型异化作用:需氧型异化作用:需氧型/厌氧型厌氧型/兼性厌氧型兼性厌氧型琼脂琼脂葡萄糖葡萄糖尿素尿素选择选择异养型微生物异养型微生物第十七页,讲稿共七十五页哦思考思考?1.获得纯净培养物的关键获得纯净培养物的关键?2.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被
16、其无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外,还有什么目的?他外来微生物污染外,还有什么目的?无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。(三)(三)无菌技术无菌技术防止外来杂菌的入侵防止外来杂菌的入侵第十八页,讲稿共七十五页哦3.消毒和灭菌有何不同?消毒和灭菌有何不同?芽孢:芽孢:某些特殊种群的细菌某些特殊种群的细菌休眠体,休眠体,对热、碱、对热、碱、酸、酸、高渗以及辐射均有强耐受性。高渗以及辐射均有强耐受性。第十九页,讲稿共七十五页哦煮沸消毒法:煮沸消毒法:100100煮沸煮沸5-6min5-6min。巴氏消毒法:巴氏消毒法:70-7
17、570-75下煮下煮30min30min或或 8080下煮下煮15min15min。化学药剂消毒法:化学药剂消毒法:用用75%75%酒精、新洁尔灭酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源。等进行皮肤消毒;氯气消毒水源。紫外线消毒紫外线消毒:照射照射30min30min。.消毒的方法:消毒的方法:4.4.常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法第二十页,讲稿共七十五页哦 针对物体针对物体表面和表面和空气中的微生物,所用器空气中的微生物,所用器械是械是 紫外灯紫外灯 。照射。照射30min30min,可先喷,可先喷洒石炭酸洒石炭酸或煤酚皂或煤酚皂溶液加强消毒溶液加强消毒效果。效果。紫外线消毒
18、紫外线消毒第二十一页,讲稿共七十五页哦第二十三页,讲稿共七十五页哦体积小,结构简单,易培养,生活周期短。体积小,结构简单,易培养,生活周期短。二二.实验操作实验操作以培养以培养大肠杆菌大肠杆菌为例为例:制备牛肉膏蛋白胨培养基:制备牛肉膏蛋白胨培养基:通过培养基的配制说明大肠杆菌(厌氧)的通过培养基的配制说明大肠杆菌(厌氧)的新陈代谢类型是:新陈代谢类型是:异养厌氧型异养厌氧型第二十六页,讲稿共七十五页哦第一步:制备牛肉膏蛋白胨培养基第一步:制备牛肉膏蛋白胨培养基1.1.计计 算算2.2.称称 量量3.3.溶溶 化:牛肉膏(连同称量纸)化:牛肉膏(连同称量纸)蛋白胨蛋白胨和氯化钠和氯化钠 琼脂琼
19、脂 补加蒸馏水至补加蒸馏水至100ml 100ml 4.4.灭灭 菌:菌:培养基培养基分装(分装前调分装(分装前调PHPH7.67.6中性中性或微碱性或微碱性)后高压蒸汽灭菌;)后高压蒸汽灭菌;培养皿培养皿干热灭菌。干热灭菌。5.5.倒平板:倒平板:5050、酒精灯火焰附近、酒精灯火焰附近 拔拔 灭口灭口 开皿、倒培养基、关皿开皿、倒培养基、关皿 冷却后冷却后倒置倒置 加热加热搅拌搅拌加热搅拌加热搅拌溶解溶解防止糊底防止糊底溶化溶化第二十七页,讲稿共七十五页哦 例题:关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述中,错误的例题:关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述中,错误的是()是()A.A.操作顺序为
20、计算、称量、溶化、倒平板、灭菌操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B.B.牛肉膏溶化并与称量纸分离后,用玻棒取出称量纸牛肉膏溶化并与称量纸分离后,用玻棒取出称量纸C.C.待培养基冷却至待培养基冷却至5050左右时,进行倒平板左右时,进行倒平板 D.D.待平板冷却凝固约待平板冷却凝固约5min5min10min10min后,将平板倒过来放置后,将平板倒过来放置解析:解析:选选A A。本题考查了牛肉膏蛋白胨固体培养。本题考查了牛肉膏蛋白胨固体培养基的制备过程。其顺序为:计算基的制备过程。其顺序为:计算称量称量溶化溶化灭灭菌菌倒平板,故倒平板,故A A项错误。项错误。第二十八页,讲稿共七十五页哦
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