营养缺陷菌株筛选幻灯片.ppt

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1、营养缺陷菌株筛选第1页，共17页，编辑于2022年，星期二与营养要求有关的三类遗传型与营养要求有关的三类遗传型第2页，共17页，编辑于2022年，星期二2）营养缺陷型的筛选办法）营养缺陷型的筛选办法诱变剂处理诱变剂处理淘汰野生型淘汰野生型检出缺陷型检出缺陷型夹层培养法夹层培养法限量补充培养法限量补充培养法逐个检出法逐个检出法影印接种法影印接种法鉴定缺陷型鉴定缺陷型菌丝过滤法菌丝过滤法抗生素法抗生素法第3页，共17页，编辑于2022年，星期二淘汰野生型：淘汰野生型：在诱变后的存活个体中，营养缺陷型的比例较低（百分之在诱变后的存活个体中，营养缺陷型的比例较低（百分之几千分之几）。需选用适当的方法淘

2、汰为数众多的野生型菌株，达到几千分之几）。需选用适当的方法淘汰为数众多的野生型菌株，达到“浓缩浓缩”极少数营养缺陷型的目的。极少数营养缺陷型的目的。第4页，共17页，编辑于2022年，星期二过滤法是使能在基本培养基上生长形成菌丝体的野生型留在滤膜上，不能生长的营养缺陷型孢子则能透过滤膜。第5页，共17页，编辑于2022年，星期二营养缺陷型检出营养缺陷型检出逐个检出法逐个检出法涂布涂布培养培养基本培养基上不长菌落基本培养基上不长菌落完全培养基上长出菌落完全培养基上长出菌落含诱变剂的液体培养基含诱变剂的液体培养基菌种菌种营养缺陷型营养缺陷型第6页，共17页，编辑于2022年，星期二夹层检出法夹层检

3、出法第7页，共17页，编辑于2022年，星期二影印法影印法第8页，共17页，编辑于2022年，星期二限量补充培养法（同一培养皿）（同一培养皿）微量蛋白胨的基本培养基上微量蛋白胨的基本培养基上 小菌落是营养缺陷型突变株小菌落是营养缺陷型突变株第9页，共17页，编辑于2022年，星期二生生长谱法法方法方法简便；便；回回变和和污染不影响染不影响 结果果 测定物定物质可可为粉末粉末 或或纸片片 缺陷型缺陷型的鉴定的鉴定测定一般应分两阶段：测定一般应分两阶段：第一阶段：测定是哪类物质的缺陷第一阶段：测定是哪类物质的缺陷型；型；第第二二阶段段：根根据据第第一一阶段段确确定定的的范范围，进一一步步确定是哪种

4、具体化合物的确定是哪种具体化合物的缺陷缺陷型；型；第10页，共17页，编辑于2022年，星期二组合合营养物法养物法步骤（以氨基酸缺陷型的鉴定为例）：步骤（以氨基酸缺陷型的鉴定为例）：a.将多种将多种营养因子养因子编组；b.将将组合液的合液的纸片放在涂菌的基本培养基上培养；片放在涂菌的基本培养基上培养；c.结果分析；果分析；一一组：1 2 3 4 5 二二组：2 6 7 8 9 三三组：3 7 10 11 12 四四组：4 8 11 1313 14 五五组：5 9 12 14 15营养因子分养因子分组编排排时注意；注意；1）每）每组内无重复的内无重复的营 养因子养因子 2）每）每组中中应包含只出

5、包含只出 现一次的因子一次的因子 3）每）每组中其他因子中其他因子应 分分别出出现二次二次如：如：第11页，共17页，编辑于2022年，星期二 一一组：1 2 3 4 5 二二组：2 6 7 8 9 三三组：3 7 10 11 12 四四组：4 8 11 1313 14 五五组：5 9 12 14 15第12页，共17页，编辑于2022年，星期二营养缺陷型的应用营养缺陷型的应用 利用营养缺陷型突变株来生产氨基酸和核苷酸是典型的例子利用营养缺陷型突变株来生产氨基酸和核苷酸是典型的例子 第13页，共17页，编辑于2022年，星期二抗阻遏和抗反馈突变型抗阻遏和抗反馈突变型 抗阻遏和抗反馈突变型都是由

6、于代谢失调所造成的，在细胞中已抗阻遏和抗反馈突变型都是由于代谢失调所造成的，在细胞中已经有大量最终代谢产物时仍然继续不断地合成这一产物。经有大量最终代谢产物时仍然继续不断地合成这一产物。选育结构类似物抗性突变株选育结构类似物抗性突变株 结构类似物是指一些和细结构类似物是指一些和细菌体内氨基酸、嘌呤、维菌体内氨基酸、嘌呤、维生素等代谢产物结构相类生素等代谢产物结构相类似的物质似的物质 主要用于末端产物的积累主要用于末端产物的积累第14页，共17页，编辑于2022年，星期二抗性突变菌株的筛选抗性突变菌株的筛选 抗生素抗性突变株抗生素抗性突变株第15页，共17页，编辑于2022年，星期二条件抗性突变

7、条件抗性突变 因环境不同，能表现为因环境不同，能表现为 野生型野生型 菌株的特性和突变型菌株菌株的特性和突变型菌株特性的突变称为条件抗性突变或称为条件致死突变。特性的突变称为条件抗性突变或称为条件致死突变。以以温度敏感突变温度敏感突变为例：为例：筛选方法：筛选方法：用途：用途：常用于提高代谢物产量常用于提高代谢物产量原原因因：是是由由于于某某一一酶酶蛋蛋白白结结构构改改变变后，在高温下活力丧失后，在高温下活力丧失重重要要性性：如如果果此此酶酶为为蛋蛋白白质质、核核酸酸合合成成途途径径中中所所需需的的酶酶，则则此此变变异异株株在在高高温下的表型就是营养缺陷型。温下的表型就是营养缺陷型。第16页，

8、共17页，编辑于2022年，星期二u在富含生物素的培养基中进行发酵时：在富含生物素的培养基中进行发酵时：u先在先在30（允许条件）中进行培养以得到大量菌细胞，（允许条件）中进行培养以得到大量菌细胞，适当时间后提高温度（适当时间后提高温度（40，非允许条件），即能获得，非允许条件），即能获得谷氨酸的过量生产。谷氨酸的过量生产。应用举例应用举例v由谷氨酸产生菌乳糖发酵短杆菌由谷氨酸产生菌乳糖发酵短杆菌2256，经诱变处，经诱变处理得到温度敏感变异株理得到温度敏感变异株Ts88:v30培养时能正常生长培养时能正常生长v40时死亡，但能在富含生物素的培养基中积累时死亡，但能在富含生物素的培养基中积累谷氨酸（而野生型却受生物素的反馈抑制谷氨酸（而野生型却受生物素的反馈抑制）。）。第17页，共17页，编辑于2022年，星期二