药物色谱分析 (2)幻灯片.ppt

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1、药物色物色谱分析分析第1页，共37页，编辑于2022年，星期二一、高效液相色谱法的定义及分类一、高效液相色谱法的定义及分类二、高效液相色谱法的特点二、高效液相色谱法的特点三、高效液相色谱仪的基本装置三、高效液相色谱仪的基本装置主要内容第2页，共37页，编辑于2022年，星期二一、高效液相色谱法的定义一、高效液相色谱法的定义一、高效液相色谱法的定义一、高效液相色谱法的定义第3页，共37页，编辑于2022年，星期二高效液相色谱（高效液相色谱（HPLCHPLC）：）：在经典液相色谱法基础上在经典液相色谱法基础上,采用采用GCGCGCGC理论和实验技术理论和实验技术理论和实验技术理论和实验技术,以高压

2、输液系统、高效固定相、高灵以高压输液系统、高效固定相、高灵以高压输液系统、高效固定相、高灵以高压输液系统、高效固定相、高灵敏检测系统形成一种分离和分析方法。敏检测系统形成一种分离和分析方法。敏检测系统形成一种分离和分析方法。敏检测系统形成一种分离和分析方法。HPLCHPLCHPLCHPLC特点：特点：特点：特点：“三高三高”、“一快一快一快一快”、“一广一广一广一广”高选择性高选择性高选择性高选择性可将性质相似的组分分开；高效能可将性质相似的组分分开；高效能可将性质相似的组分分开；高效能可将性质相似的组分分开；高效能柱效可柱效可柱效可柱效可达达达达30000300003000030000块块块

3、块/米，多次利用组分性质差异进行分离；高灵米，多次利用组分性质差异进行分离；高灵米，多次利用组分性质差异进行分离；高灵米，多次利用组分性质差异进行分离；高灵敏度敏度1010-9-910-12-12g g g g，适于痕量分析；分析速度快，适于痕量分析；分析速度快，适于痕量分析；分析速度快，适于痕量分析；分析速度快几几几几 几几十分钟完成分离分析十分钟完成分离分析十分钟完成分离分析十分钟完成分离分析,一次可测多种样品；应用范围广一次可测多种样品；应用范围广一次可测多种样品；应用范围广一次可测多种样品；应用范围广80%有机物质能得到分析。有机物质能得到分析。第4页，共37页，编辑于2022年，星期

4、二二、高效液相色谱法与经典色谱法的比较二、高效液相色谱法与经典色谱法的比较主要区别：固定相、输液设备和检测手段差别主要区别：固定相、输液设备和检测手段差别主要区别：固定相、输液设备和检测手段差别主要区别：固定相、输液设备和检测手段差别经典经典经典经典LCLC仅做为一种分离手段仅做为一种分离手段仅做为一种分离手段仅做为一种分离手段,HPLC,HPLC可用于分离和分析可用于分离和分析可用于分离和分析可用于分离和分析项目项目项目项目经典柱色谱法经典柱色谱法经典柱色谱法经典柱色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法固定相粒度固定相粒度固定相粒度固定相粒度/mm75 50075 5

5、00310310固定相粒径分布固定相粒径分布固定相粒径分布固定相粒径分布/RSD/RSD20%30%20%30%5%5%柱长柱长柱长柱长/cm/cm1010010100525525柱内径柱内径柱内径柱内径/cm/cm25250.30.460.30.46柱入口压力柱入口压力柱入口压力柱入口压力/MPa/MPa0.0010.10.0010.1240240柱效柱效柱效柱效/每米理论塔板数每米理论塔板数每米理论塔板数每米理论塔板数10100101001 110104 41110106 6分析速度分析速度分析速度分析速度慢慢慢慢快快快快色谱柱使用情况色谱柱使用情况色谱柱使用情况色谱柱使用情况只可用一次只

6、可用一次只可用一次只可用一次可重复多次使用可重复多次使用可重复多次使用可重复多次使用在线检测在线检测在线检测在线检测不能在线检测不能在线检测不能在线检测不能在线检测能在线检测能在线检测能在线检测能在线检测定性定量准确度定性定量准确度定性定量准确度定性定量准确度一般较差一般较差一般较差一般较差好好好好第5页，共37页，编辑于2022年，星期二1 1 1 1、分析对象差别、分析对象差别、分析对象差别、分析对象差别GCGC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品，：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品，高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚物高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚物高沸点、挥发

7、性差、热稳定性差、离子型及高聚物高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚物的样品不能检测（占有机物的的样品不能检测（占有机物的的样品不能检测（占有机物的的样品不能检测（占有机物的20%20%20%20%）HPLCHPLC：溶解后能制成溶液的样品，不受样品挥发：溶解后能制成溶液的样品，不受样品挥发性和热稳定性的限制，且分子量大、难气化、热稳性和热稳定性的限制，且分子量大、难气化、热稳性和热稳定性的限制，且分子量大、难气化、热稳性和热稳定性的限制，且分子量大、难气化、热稳定性差及高分子和离子型样品也可检测（占有机物定性差及高分子和离子型样品也可检测（占有机物的的的的80%80%80%80%）二、

8、高效液相色谱法与气相色谱法比较二、高效液相色谱法与气相色谱法比较第6页，共37页，编辑于2022年，星期二2 2 2 2、流动相差别、流动相差别、流动相差别、流动相差别GCGCGCGC：流动相为惰性气体，种类少，组分与流动相：流动相为惰性气体，种类少，组分与流动相：流动相为惰性气体，种类少，组分与流动相：流动相为惰性气体，种类少，组分与流动相无亲合作用力，组分只与固定相作用而实现分离无亲合作用力，组分只与固定相作用而实现分离 HPLCHPLCHPLCHPLC：流动相为液体，流动相与组分间有亲合作：流动相为液体，流动相与组分间有亲合作：流动相为液体，流动相与组分间有亲合作：流动相为液体，流动相与

9、组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、改善分离增加了有力因用力，为提高柱的选择性、改善分离增加了有力因用力，为提高柱的选择性、改善分离增加了有力因用力，为提高柱的选择性、改善分离增加了有力因素，且流动相种类较多，选择余地大。选用不同比素，且流动相种类较多，选择余地大。选用不同比素，且流动相种类较多，选择余地大。选用不同比素，且流动相种类较多，选择余地大。选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相，可以使难分例的两种或两种以上液体作为流动相，可以使难分例的两种或两种以上液体作为流动相，可以使难分例的两种或两种以上液体作为流动相，可以使难分离的组分得到很好的分离离的组分得到很好的分离离的组分得到很

10、好的分离离的组分得到很好的分离第7页，共37页，编辑于2022年，星期二3 3 3 3、操作条件差别、操作条件差别、操作条件差别、操作条件差别GCGCGCGC：加温操作：加温操作：加温操作：加温操作HPLCHPLC：室温高压操作（液体粘度大，峰展宽小）：室温高压操作（液体粘度大，峰展宽小）三、三、三、三、HPLCHPLCHPLCHPLC主要类型和分离方法主要类型和分离方法主要类型和分离方法主要类型和分离方法 四类基本类型色谱法四类基本类型色谱法 分配色谱法（组分在两相溶解性能的差异）分配色谱法（组分在两相溶解性能的差异）分配色谱法（组分在两相溶解性能的差异）分配色谱法（组分在两相溶解性能的差异

11、）吸附色谱法（组分在两相吸附作用力的差异）吸附色谱法（组分在两相吸附作用力的差异）离子交换色谱法（离子交换能力的差异）离子交换色谱法（离子交换能力的差异）离子交换色谱法（离子交换能力的差异）离子交换色谱法（离子交换能力的差异）空间排阻色谱法（组分分子线团尺寸差异）空间排阻色谱法（组分分子线团尺寸差异）空间排阻色谱法（组分分子线团尺寸差异）空间排阻色谱法（组分分子线团尺寸差异）第8页，共37页，编辑于2022年，星期二三、高效液相色谱仪的基本装置三、高效液相色谱仪的基本装置第9页，共37页，编辑于2022年，星期二三、高效液相色谱仪的基本装置三、高效液相色谱仪的基本装置1.1.高压输液系统高压输

12、液系统(一一)储液罐储液罐(对洗脱液化学惰性对洗脱液化学惰性,预先脱气预先脱气)常用脱气方式常用脱气方式:真空脱气机脱气法真空脱气机脱气法超声波脱气法：超声波脱气法：500ml500ml溶液约溶液约202030min30min吹氦脱气法吹氦脱气法第10页，共37页，编辑于2022年，星期二三、高效液相色谱仪的基本装置三、高效液相色谱仪的基本装置1.1.高压输液系统高压输液系统(二二)高压输液泵高压输液泵要求：要求：流量稳定、输出压力高、流量范围宽、耐酸流量稳定、输出压力高、流量范围宽、耐酸碱和缓冲液腐蚀、泵体易清洗碱和缓冲液腐蚀、泵体易清洗类型：类型：往复柱塞泵、注射泵、气动放大泵、液压隔往复

13、柱塞泵、注射泵、气动放大泵、液压隔膜泵膜泵第11页，共37页，编辑于2022年，星期二三、高效液相色谱仪的基本装置三、高效液相色谱仪的基本装置1.1.高压输液系统高压输液系统(三三)梯度洗脱装置梯度洗脱装置低压梯度洗脱装置：低压梯度洗脱装置：高压梯度洗脱装置：高压梯度洗脱装置：第12页，共37页，编辑于2022年，星期二三、高效液相色谱仪的基本装置三、高效液相色谱仪的基本装置2.2.进样系统进样系统自动进样器进样自动进样器进样六通阀进样六通阀进样第13页，共37页，编辑于2022年，星期二三、高效液相色谱仪的基本装置三、高效液相色谱仪的基本装置3.3.色谱柱色谱柱要求要求:分离度高、柱容量大、

14、分析速度快分离度高、柱容量大、分析速度快结构：结构：增加色谱柱的柱长可以提高柱效，目前的增加色谱柱的柱长可以提高柱效，目前的装填设备和技术，只能保证柱长在装填设备和技术，只能保证柱长在100100250mm250mm之间之间获得好的效果。获得好的效果。第14页，共37页，编辑于2022年，星期二第15页，共37页，编辑于2022年，星期二第16页，共37页，编辑于2022年，星期二第17页，共37页，编辑于2022年，星期二第18页，共37页，编辑于2022年，星期二第19页，共37页，编辑于2022年，星期二第20页，共37页，编辑于2022年，星期二第21页，共37页，编辑于2022年，星

15、期二第22页，共37页，编辑于2022年，星期二第23页，共37页，编辑于2022年，星期二第24页，共37页，编辑于2022年，星期二第25页，共37页，编辑于2022年，星期二第26页，共37页，编辑于2022年，星期二第27页，共37页，编辑于2022年，星期二第28页，共37页，编辑于2022年，星期二第29页，共37页，编辑于2022年，星期二第30页，共37页，编辑于2022年，星期二第31页，共37页，编辑于2022年，星期二第32页，共37页，编辑于2022年，星期二三、高效液相色谱仪的基本装置三、高效液相色谱仪的基本装置4.4.检测器检测器要求要求:灵敏度高、响应对流动相流量

16、和温度不敏感、不灵敏度高、响应对流动相流量和温度不敏感、不引起柱外谱带展宽、线性范围宽、适用范围广引起柱外谱带展宽、线性范围宽、适用范围广类型：类型：紫外吸收检测器（紫外吸收检测器（UVDUVD），蒸发光散射检测器），蒸发光散射检测器（ELSDELSD），折光指数检测器（），折光指数检测器（RIDRID），电导检测器），电导检测器（ECDECD），荧光检测器（），荧光检测器（FLDFLD）和质谱检测器（）和质谱检测器（MSDMSD）第33页，共37页，编辑于2022年，星期二三、高效液相色谱仪的基本装置三、高效液相色谱仪的基本装置4.4.4.4.检测器检测器检测器检测器-光电二极管阵列紫外检测

17、器光电二极管阵列紫外检测器光电二极管阵列紫外检测器光电二极管阵列紫外检测器 同时得到多个波长的色谱图同时得到多个波长的色谱图同时得到多个波长的色谱图同时得到多个波长的色谱图 对每个色谱峰的指定位置实时记录吸收光谱图对每个色谱峰的指定位置实时记录吸收光谱图对每个色谱峰的指定位置实时记录吸收光谱图对每个色谱峰的指定位置实时记录吸收光谱图 在色谱运行期间逐点进行光谱扫描在色谱运行期间逐点进行光谱扫描在色谱运行期间逐点进行光谱扫描在色谱运行期间逐点进行光谱扫描,得到时间得到时间得到时间得到时间-波长波长波长波长-吸光度三维图形吸光度三维图形吸光度三维图形吸光度三维图形 可以选择整个波长范围内的宽谱带检

18、测可以选择整个波长范围内的宽谱带检测可以选择整个波长范围内的宽谱带检测可以选择整个波长范围内的宽谱带检测,一次进样一次进样一次进样一次进样,所有所有所有所有组分均能检测组分均能检测组分均能检测组分均能检测第34页，共37页，编辑于2022年，星期二三、高效液相色谱仪的基本装置三、高效液相色谱仪的基本装置4.4.检测器检测器-光电二极管阵列紫外检测器主要应用特色光电二极管阵列紫外检测器主要应用特色色谱峰的纯度检查色谱峰的纯度检查:比较光谱法比较光谱法 吸收比法吸收比法 双波长法双波长法色谱峰的鉴定色谱峰的鉴定谱带宽度检测谱带宽度检测峰抑制峰抑制选择最大波长选择最大波长第35页，共37页，编辑于2022年，星期二三、高效液相色谱仪的基本装置三、高效液相色谱仪的基本装置5.5.馏分收集器馏分收集器6.6.数据处理及色谱工作站数据处理及色谱工作站第36页，共37页，编辑于2022年，星期二谢谢各位！谢谢各位！第37页，共37页，编辑于2022年，星期二