实验六 酵母菌形态的观察及死活细胞的鉴定.docx

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1、实验六 酵母菌形态的观察及死活细胞的鉴定一.实验目的与要求.1、观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；2、掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。二.基本原理酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见的细菌大几倍甚至十几倍，大 多数的酵母菌以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖;有性繁殖是通过接合产生子囊胞子。 本实验通过美蓝染液水浸片来观察酵母菌的出芽生殖方式。美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母菌的活细胞 进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧 化型变为无色的还原型。因此，具有还原力

2、的酵母活细胞是无色的，而死或代谢作用微弱的 衰老细胞那么呈现蓝色或淡蓝色，即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。三.实验材料和用具1、菌种：酿酒酵母cereK/s/ae）培养约2d的麦芽汁（或豆芽汁）斜面培 养物。2、溶液或试剂：0.05%和0. 1%吕氏碱性美蓝染色液，革兰氏染色用碘液。3、仪器或用具：显微镜.擦镜纸.接种环.酒精灯.载玻片.盖玻片.吸水纸.小滴管一.操作步骤：1、美蓝浸片的观察在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作用接种环挑取少量酵母 菌苔放在染液中，混合均匀。用镣子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。将制片放置约3m

3、in后镜检，先用低倍镜然后用高位镜观察酵母菌的形态和出芽情况，并 根据颜色来区别死活细胞。染色约0.5h后再进行观察，注意死细胞数量是否增加。用0. 05%吕氏碱性美蓝染液重复上述操作。2、的观察在载玻片中央加1小滴革兰氏染色用碘液，然后在其上加3小滴水，取少许酵母菌苔放 在水-碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。五.实验报告：1 .结果绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征。2 .思考题吕氏碱性美蓝染液的浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响？试分析其原 因。在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌。附：1、吕氏碱性美蓝染液A 液：美蓝（methylene blue）0. 6g95% 酒精30M1B 液：KOH0.01g蒸储水100M12、革兰氏碘液碘片1g碘化钾2g蒸储水300Ml先将碘化钾放在少量的水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中，等碘片全溶后，加足水分、 即成。每四人一个实验台：接种环4根，酒精灯4盏，菌种1支（酵母菌）载玻片3片/人，染色体2瓶，蒸储水1瓶，试管架2个，洗瓶4个废液缸4个，小号滤纸2盒，显微镜4台（附香柏油）油镜集中清洁：二甲苯1瓶，擦镜纸2个，在前台