激光共聚焦技术课件.ppt
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1、关于激光共聚焦技术第1页,此课件共23页哦Zeiss LSM 510 META激光共聚焦显微镜的基本结构激光共聚焦显微镜的基本结构激光光源激光光源 冷却系统冷却系统 扫描器扫描器 光学装置光学装置 荧光显微镜系统荧光显微镜系统 图象存储与处理及控制系统图象存储与处理及控制系统针孔光栏 分光镜 发射荧光单色器 检测器第2页,此课件共23页哦n n激光扫描共聚焦显微镜(激光扫描共聚焦显微镜(激光扫描共聚焦显微镜(激光扫描共聚焦显微镜(LSMLSM)是当今)是当今)是当今)是当今世界上最先进的分子生物学分析仪器之世界上最先进的分子生物学分析仪器之世界上最先进的分子生物学分析仪器之世界上最先进的分子生
2、物学分析仪器之一。一。一。一。n n它是在荧光显微镜成像的基础上加装了激它是在荧光显微镜成像的基础上加装了激它是在荧光显微镜成像的基础上加装了激它是在荧光显微镜成像的基础上加装了激光扫描装置,利用计算机进行图像处理,光扫描装置,利用计算机进行图像处理,光扫描装置,利用计算机进行图像处理,光扫描装置,利用计算机进行图像处理,使用紫外光或激光激发荧光探针,从而得使用紫外光或激光激发荧光探针,从而得使用紫外光或激光激发荧光探针,从而得使用紫外光或激光激发荧光探针,从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图像,到细胞或组织内部微细结构的荧光图像,到细胞或组织内部微细结构的荧光图像,到细胞或组织内部微细结构
3、的荧光图像,观察细胞的形态变化或生理功能的改变。观察细胞的形态变化或生理功能的改变。观察细胞的形态变化或生理功能的改变。观察细胞的形态变化或生理功能的改变。n n成为形态学、分子细胞生物学、神经科成为形态学、分子细胞生物学、神经科成为形态学、分子细胞生物学、神经科成为形态学、分子细胞生物学、神经科学、药理学和遗传学等领域中新的有力学、药理学和遗传学等领域中新的有力学、药理学和遗传学等领域中新的有力学、药理学和遗传学等领域中新的有力研究工具。研究工具。研究工具。研究工具。第3页,此课件共23页哦激光共聚焦显微镜在生物学中的应用激光共聚焦显微镜在生物学中的应用原位鉴定细胞或组织内生原位鉴定细胞或组
4、织内生物大分子、观察细胞及亚物大分子、观察细胞及亚细胞形态结构细胞形态结构l检测核酸检测核酸l检测蛋白质细胞定位检测蛋白质细胞定位l检测细胞凋亡检测细胞凋亡l细胞器的观察及测定细胞器的观察及测定l检测细胞融合检测细胞融合l观察细胞骨架观察细胞骨架l检测细胞间缝隙连接通讯检测细胞间缝隙连接通讯l检测细胞内脂肪检测细胞内脂肪活体细胞或组织功能的实时活体细胞或组织功能的实时动态监测动态监测l实时定量测定细胞内实时定量测定细胞内Ca2+变变化化l测定细胞内测定细胞内pH变化变化l检测膜电位变化检测膜电位变化l检测细胞内活性氧物种的产检测细胞内活性氧物种的产生生l检测药物等跨膜进入组织或检测药物等跨膜进
5、入组织或细胞过程及其定位细胞过程及其定位l检测荧光共振能量转移检测荧光共振能量转移l检测荧光漂白恢复检测荧光漂白恢复第4页,此课件共23页哦荧光显微镜系统荧光显微镜系统激光共聚焦显微镜所用的荧光显微镜大体激光共聚焦显微镜所用的荧光显微镜大体与常规荧光显微镜相同,但又有其特点。与常规荧光显微镜相同,但又有其特点。l需与需与扫描器扫描器连接。使激光能进入显微镜物镜照连接。使激光能进入显微镜物镜照射样品,并使样品发射的荧光到达检测器。射样品,并使样品发射的荧光到达检测器。l需有需有光路转换光路转换装置。即汞灯与激光转换,同时装置。即汞灯与激光转换,同时汞灯光线强度可调。汞灯光线强度可调。l荧光镜座要
6、有荧光镜座要有防震动防震动装置。装置。第5页,此课件共23页哦激光共聚焦显微镜工作原理示意图激光共聚焦显微镜工作原理示意图激光经放大、分激光经放大、分光后由物镜聚焦光后由物镜聚焦于焦平面上,同于焦平面上,同时,焦平面上被时,焦平面上被激光扫描的点激光扫描的点F所发所发出出的一定波的一定波长长的荧的荧光通过检光通过检测针孔测针孔光栏达光栏达到到检测器,检测器,并并成像成像于显示器上,得于显示器上,得到相应的荧光图到相应的荧光图象。象。第6页,此课件共23页哦激光共聚焦显微镜基本操作l获取共焦图像的步骤获取共焦图像的步骤l在在 VIS 模式中观察样品模式中观察样品l装入装入 LSM 配置配置l扫描
7、图像扫描图像l保存图像保存图像第7页,此课件共23页哦不同厚度光切图像不同厚度光切图像第8页,此课件共23页哦 Z轴扫描轴扫描 时间系列扫描时间系列扫描 Z轴扫描时间系列扫描轴扫描时间系列扫描Z轴扫描、时间系列扫描轴扫描、时间系列扫描第9页,此课件共23页哦组织和细胞样品中荧光的来源组织和细胞样品中荧光的来源l自发荧光自发荧光l荧光染色荧光染色l免疫荧光荧光抗体法产生荧光免疫荧光荧光抗体法产生荧光l外源性荧光物质进入组织细胞内产生荧光外源性荧光物质进入组织细胞内产生荧光l酶致荧光酶致荧光第10页,此课件共23页哦荧光样品的制备要求荧光样品的制备要求l荧光标记反应的特异性强、荧光定位准确荧光标记
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