【药学】药物分析_第08章__杂环类药物的分析.ppt

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1、第八章 杂环类药物的分析,制作人：温爱平,杂环化合物：指环状有机化合物的碳环中夹杂有非碳元素原子（如O、S、N等）的化合物,类型：杂环类药物按其所含杂原子种类与数目、环的元数与环数的不同可分为许多类，包括：,呋喃类吡唑酮类吡啶类 异烟肼、尼可刹米、硝苯地平哌啶类喹啉类 硫酸奎宁和奎尼丁、盐酸环丙沙星托烷类 硫酸阿托品、氢溴酸东莨菪碱吩噻嗪类 盐酸氯丙嗪苯并二氮杂卓类 地西泮、奥沙西泮、氯氮卓,第一节 吡啶类药物的分析,异烟肼（isoniazid）,吡啶（pyridine）,一、结构与性质,尼可刹米（nikethamide）,硝苯地平（nifedipine）,尼群地平（nitrendipine）

2、,尼莫地平（nimodipine）,（二）主要化学性质,1. 吡啶环 弱碱性 pKb8.8， 非水碱量法含量测定或沉淀反应鉴别 吡啶环可发生开环反应，可用于吡啶类药物的鉴别,2. 取代基：（1）异烟肼 位上酰肼基 弱酸性 非水酸量法 还原性 鉴别或氧化还原滴定法含量测定 可与某些羰基试剂发生缩合反应 鉴别或比色法含量测定 酰胺键易水解引入特殊杂质游离肼,（2）尼可刹米 位上酰胺基 易水解，遇碱水解后，释放出具有碱性的二乙胺，能使湿润的红色石蕊试纸变蓝色，故可以此进行鉴别。,（一） 吡啶环的开环反应,适用于吡啶 、未取代，以及 、 为烷基或羧基的衍生物,1. 戊烯二醛反应（Knig反应）,二、鉴

3、别试验,尼可刹米 ChP（2005） 【鉴别】（2）取本品 1 滴，加水 50 ml，摇匀，分取 2 ml，加溴化氰试液 2 ml与 2.5% 苯胺溶液 3 ml，摇匀，溶液渐显黄色。,（黄 色),异烟肼鉴别 时，应先氧化成异烟酸，再与溴化氰作用,2. 二硝基氯苯反应（Vongerichten反应）,在无水条件下，吡啶及其衍生物与2,4二硝基氯苯混合共热，冷却后，加醇制氢氧化钾溶液，即显紫红色。 烟酸 ChP（2005） 异烟肼注射液BP,采用本法鉴别异烟肼和尼可刹米时，需适当处理，即将酰肼氧化成羧酸或将酰胺水解为羧基后进行鉴别。异烟肼不经处理的反应：,（二）酰肼基团的反应,1. 还原反应,异

4、烟肼与氨制硝酸银反应，生成金属银黑色浑浊和气泡（氮气），并在试管壁上产生银镜，异烟肼被氧化为异烟酸铵。,异烟肼 ChP（2005） 【鉴别】 （2）取异烟肼约10 mg，置试管中，加水2 ml溶解后，加氨制硝酸银试液1 m1，即发生气泡与黑色浑浊，并在试管壁上生成银镜。,2. 缩合反应 与芳醛缩合形成腙， 如香草醛、水杨醛、二甲氨基苯甲醛,异烟肼 ChP（2005） 【鉴别】 （1）取本品约0.1 g，加水5 ml溶解后，加10香草醛的乙醇溶液1 m1，摇匀，微热，放冷，即析出黄色结晶，滤过，用稀乙醇重结晶，在105干燥后，测定熔点，其熔点为228231，熔融时同时分解。,具有芳香胺基或活性亚

5、甲基者均有此反应,(三) 二氢吡啶的解离反应,二氢吡啶类药物（硝苯地平、尼群地平）的丙酮或甲醇溶液与碱作用，可发生解离，形成p-共轭而发生颜色变化。硝苯地平的鉴别 ChP（2005） 取本品约25mg，加丙酮1ml溶解，加20%氢氧化钠35滴，振摇，溶液显橙红色,（四） 沉淀反应,1. 与铜盐的反应,尼可刹米 ChP（2005） 【鉴别】（3）取本品 2 滴，加水 1 ml ，摇匀，加硫酸铜试液 2 滴与硫氰酸胺试液 3 滴，即生成草绿色沉淀。,2. 与氯化汞的反应,二氢吡啶类药物（硝苯地平、尼莫地平）的乙醇或丙酮溶液也可与氯化汞形成沉淀。,（五）分解产物的反应,1. 尼可刹米 ChP（200

6、5） 【鉴别】 （1）取本品 10 滴，加氢氧化钠试液 3 ml ，加热，即发生二乙胺的臭气，能使湿润的红色石蕊试纸变蓝色。,异烟肼、尼可刹米 与,（六）紫外吸收光谱与红外光谱特征,本类药物因结构中含有芳杂环，在紫外光区有特征吸收，可利用最大吸收波长或百分吸收系数进行鉴别。 各国药典均采用IR作为原料药的鉴别。,三、有关物质检查,杂质来源 原料引入、降解产生,（一）异烟肼中游离肼的检查,1. 薄层色谱法（TLC） （1） ChP（2005） 杂质对照品法,取本品，加水制成每 1ml 中含 50mg的溶液，作为供试品溶液。另取硫酸肼加水制成每 1ml中含 0.20mg（相当于游离肼50g 的溶液

7、，作为对照溶液。吸取供试品溶液 10l 与对照溶液 2l 分别点于同一硅胶薄层板（用羧甲基纤维素钠溶液制备）上，以异丙醇丙酮（32）为展开剂，展开后，晾干，喷以乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液，15min后检视，在供试品主斑点前方与硫酸肼斑点相应的位置上，不得显黄色斑点。,（2） BP（2005）同时检查游离肼和 有关物质 游离肼 杂质对照品法 有关物质 高低浓度对比法,2. 比浊法 JP（15） 检查方法 灵敏度法 反应原理 游离肼+水杨醛水杨醛腙 要求5分钟内溶液不浑浊 优点：不用对照品，价廉、简单易行 缺点：专属性差,（二）尼可刹米中有关物质的检查,在生产和贮存过程中易引入N-乙基烟酰胺和结构

8、不明的有关物质ChP（2005） TLC 高低浓度对比法 配制两种不同浓度的对照溶液,（三） 二氢吡啶类药物中有关物质的检查,杂质来源 原料引入（生产）、降 解产生（贮藏） 检查方法 HPLC,第二节 喹啉类药物的分析 喹琳类药物分子结构中含有吡啶与苯稠合而成的喹啉杂环。 以本类最常用的典型药物硫酸奎宁、硫酸奎尼丁和盐酸环丙沙星为例，就其鉴别和杂质检查的有关问题进行讨论,基本结构与化学性质典型药物：,主要化学性质:,1. 碱性 奎宁和奎尼丁的分子式完全相同，但喹核碱部分立体结构不同，因此其旋光性、碱性和溶解性能也不同。奎宁为左旋体，碱性大于奎尼丁。,2. 旋光性 硫酸奎宁为左旋体，其比旋度为-

9、2370至-2440；硫酸奎尼丁为右旋体，其比旋度为2750至2900；而盐酸环丙沙星无旋光性。氧氟沙星为消旋体。,荧光特性 硫酸奎宁和硫酸奎尼丁在稀硫酸溶液中均显蓝色荧光，而盐酸环丙沙星则无荧光。,二. 鉴别反应 (一)绿奎宁反应,奎宁和奎尼丁为6位含氧喹啉衍生物，可以发生绿奎宁反应（Thalleioquin ) 。反应基本机制：6-位含氧喹啉，经氯水（或溴水）氧化氯化，再以氨水处理缩合，生成绿色的二醌基亚胺的铵盐。,鉴别方法（ChP）：取本品约5mg，加水5m1溶解后，加溴试液0.2ml滴与氨试液1 ml，即显翠绿色。,(二)光谱特征 1. 紫外吸收光谱特征 中国药典采用本法鉴别盐酸环丙沙

10、星。 鉴别方法：取本品，加0. 1 mol/L盐酸溶液制成每1 ml中含8ug的溶液，照分光光度法测定，在277nm与315mn的波长处有最大吸收。,(三) 无机酸盐,2. 荧光光谱特征 利用硫酸奎宁和硫酸奎尼丁，在稀硫酸溶液中均显蓝色荧光，而盐酸环丙沙星则无荧光的特性，可用于本类药物的鉴别或区别。,、有关物质检查（一）硫酸奎宁中有关物质的检查 根据硫酸奎宁的合成工艺，产品中特殊杂质主要是合成中产生的中间体以及副反应产物，通过检查酸度、三氯甲烷-乙醇中不溶物和其他金鸡纳碱等加以控制。,1.酸度 本项检查主要控制药物中的酸性杂质。 检查方法：取本品约20mg，加水20m1溶解后，用酸度计进行测定

11、，pH值应为5.7一6.6。,2. 三氯甲烷一乙醇中不溶物 本项检查主要控制药物在制备过程中引人的醇中不溶性杂质或无机盐类等。 检查方法：取本品，加氯仿-无水乙醇(2:1)的混合液15m1，在50加热l0min后，用已称定重量的垂熔坩锅滤过，滤渣用上述混合液分5次洗涤，每次10 ml，在105干燥至恒重，遗留残渣不得超过2mg。,3. 其他金鸡纳碱 本项检查主要控制硫酸奎宁中其他生物碱。 ChP（2005）采用薄层色谱中的主成分自身对照法进行检查。 BP（2005）采用HPLC法（峰面积归一化法）（二）氧氟沙星中有关物质的检查 1. 溶液的澄清度与颜色 2. 有关物质 ChP和BP均采用HPL

12、C法,第三节 托烷类药物 托烷类药物大多数是由莨菪烷衍生的氨基醇与不同的有机酸缩合成酯的生物碱，常见的有颠茄生物碱和古柯生物碱，根据其结构特征均属于杂环类药物。现仅以典型药物硫酸阿托品和氢溴酸东莨菪碱为例进行讨论。,一 基本结构与化学性质（一）典型药物的结构,（二）主要化学性质,1.水解性 阿托品和东莨菪碱分子结构中，具有酯的结构，易水解。以阿托品为例，水解生成莨菪醇（I）和莨菪酸（II）,2.碱性 阿托品和东莨菪碱的分子结构中，五元脂环上含有叔胺氮原子，因此，具有较强的碱性，易与酸成盐。如阿托品的pKb1为4.35。,3.旋光性 氢溴酸东莨菪碱分子结构中含有不对称碳原子，呈左旋体。比旋度为-

13、240至-270，而阿托品结构中虽然也含有不对称碳原子，但因外消旋化而为消旋体，无旋光性。利用此性质可区别阿托品与东莨菪碱。,二、 鉴别试验（一）托烷生物碱一般鉴别试验 本类药物为酯类生物碱，水解后生成的莨菪酸，经发烟硝酸加热处理，转变为三硝基衍生物，再与氢氧化钾醇溶液和固体氢氧化钾作用，则转成有色的醌型产物，开始呈深紫色（称为Vitali反应）。以阿托品为例，其反应式为：,鉴别方法：取供试品约10mg,加发烟硝酸5滴，置水浴上蒸干，得黄色的残渣，放冷，加乙醇2一3滴湿润，加固体氢氧化钾一小粒，即显深紫色。,（二）氧化反应 本类药物水解后，生成的莨菪酸，可与硫酸和重铬酸钾在加热的条件下，发生氧

14、化反应，生成苯甲醛，而逸出类似苦杏仁的臭味。,（三）沉淀反应 本类药物为生物碱，可与生物碱沉淀剂生成沉淀。如阿托品与氯化汞醇试液反应，则生成黄色沉淀，而东莨菪碱与氯化汞醇试液反应，则生成白色复盐沉淀。 （四）硫酸盐与溴化物反应,三、 有关物质检查（一）氢溴酸东莨菪碱中有关物质检查 氢溴酸东莨菪碱是从茄科植物颠茄、白曼陀罗、莨菪等中提取得到的莨菪碱的氢溴酸盐。我国是从茄科植物白曼陀罗的干燥品（洋金花）中提取东莨菪碱，然后制成氢溴酸盐。,1. 酸度 东莨菪碱碱性很弱，对石蕊试纸几乎不显碱性反应。氢溴酸东莨菪碱为强酸弱碱形成的盐，通过其5%水溶液的pH值为4.0-5.5，来控制本品中的酸性杂质。,2

15、.易氧化物 主要是检查本品在生产过程中可能引入的杂质阿扑阿托品及其它含有不饱和双键的有机物质，可使高锰酸钾溶液褪色。 检查方法：取本品0.15g，加水5m1溶解后，在15一20 加高锰酸钾滴定液（0. 02mo1/L )0.05 ml，l0min内红色不得完全消失。,检查方法（ChP）：取本品0.l0g，加水2m1溶解后，分成两等份：一份中加氨试液2一3滴，不得发生浑浊；另一份中加氢氧化钾试液数滴，只许发生瞬即消失的类白色浑浊。 BP采用TLC法检查,3.其他生物碱 本品的水溶液加入氨试液不得发生混浊。当有其他生物碱，如阿扑阿托品、颠茄碱存在时，则产生混浊；本品水溶液加入氢氧化钾试液，则有东莨

16、菪碱析出显浑浊。因东莨菪碱在碱性条件下水解，生成异东莨菪碱醇和莨菪酸，前者在水中易溶；后者生成钾盐在水中也能溶解，故可使瞬即发生的浑浊消失。,（ 二）硫酸阿托品中有关物质的检查,主要检查莨菪碱，利用旋光性差异进行检查。检查方法：取本品，按干燥品计算，加水制成每1 ml中含50 mg的溶液，依法测定，旋光度不得过-0.4。,第四节 吩噻嗪类药物的分析,一、吩噻嗪类药物的基本结构与性质 （一） 基本结构,典型药物：,奋乃静,癸氟奋乃静,盐酸氟奋乃静,盐酸三氟拉嗪,结构分析 ：,1. 硫氮杂蒽母核 （1）含S、N的三环共轭的大体系，S、N与苯环形成p-共轭具有紫外吸收光谱特征,（2）硫氮杂蒽环上硫原

17、子为-2价，具有还原性，易氧化呈色 （3）硫氮杂蒽环上硫原子有两对孤对电子，易与金属离子络合呈色,2. 取代基 R：脂烃胺基、哌嗪基，具碱性 R：卤素,（二）性质 1. 紫外与红外吸收光谱 本类药物的紫外特征吸收，主要由母核三环的系统所产生，一般具有三个峰值。即在 204209nm（205nm附近）、250265nm（254nm附近）和300325nm（300nm附近）。最强峰多在 250265nm。,2位上的取代基（R）不同，会引起吸收峰发生位移。 其结构中-2 价的硫，易氧化，氧化产物砜及亚砜有四个吸收峰。 吩噻嗪类药物随取代基 R 和R的不同，产生不同的红外吸收光谱。,2. 易被氧化呈色

18、 硫氮杂蒽环上二价硫原子易被氧化，遇不同氧化剂，硫酸，硝酸，三氯化铁，过氧化氢等，母核易被氧化成亚砜和砜。随取代基不同，有不同的颜色。 3. 易与金属离子络合呈色 分子中二价硫原子可与金属钯离子形成有色的（红色）配位化合物。4. 碱性,二、鉴别试验,（一）UV和IR奋乃静 ChP（2005）鉴别 （2）取本品，加无水乙醇制成每1ml 中含 7g 的溶液，照分光光度法（附录A）测定，在 258nm 的波长处有最大吸收，吸收度约为0.65。,（3）本品的红外吸收图谱应与对照的图谱（光谱集 243 图）一致,（二） 显色反应 1. 氧化剂显色反应氧化剂 硫酸、硝酸、过氧化氢 见表8-8盐酸氟奋乃静

19、ChP（2005）鉴别 （1）取本品 5mg，加硫酸 5ml，即显淡红色；温热后变成红褐色。,癸氟奋乃静 ChP（2005）鉴别 （2）取本品约 5mg，加甲醇2ml 溶解后，加 0.1% 氯化钯溶液 3ml，即有沉淀生成，并显红色，再加过量的氯化钯溶液，颜色变深。,2. 与钯离子配合显色,（三）分解产物的反应癸氟奋乃静 ChP（2005）鉴别 （1）取本品 15 20mg，加碳酸钠与碳酸钾各约0.1g，混匀，在 600 炽灼 1520分钟，放冷，加水2ml 使溶解，加盐酸溶液（12）酸化，滤过，滤液加茜素锆试液0.5 ml，应显黄色。,三、有关物质检查 1. 癸氟奋乃静及其注射液 TLC 参

20、比杂质对照品法 以盐酸氟奋乃静为对照品 2. 其他药物 TLC 高低浓度对比法,第五节 苯并二氮杂卓类药物的分析,一、结构与性质,典型药物：,氯硝西泮,奥沙西泮,主要性质：,1. 苯并二氮杂卓母核 弱碱性，UV 2. 结构中的环一般比较稳定，但在强酸性溶液中可水解，形成相应的二苯甲酮衍生物。,二、鉴别试验,（一）化学反应 1. 沉淀反应,氯氮卓 ChP（2005）【鉴别】（2）取本品约 10mg，加盐酸溶液（91000）10ml 溶解后，加碘化铋钾试液 1 滴，即生成橙红色沉淀。,2. 水解后呈芳伯胺基反应 氯氮卓、奥沙西泮,氯氮卓 ChP（2005）鉴别 （1）取本品约 10mg，加盐酸溶液

21、（12）15ml，缓缓煮沸 15 分钟，放冷，溶液显芳香第一胺类的鉴别反应（附录）。,3. 硫酸荧光反应,地西泮 ChP（2005）鉴别 （1）取本品约 10mg，加硫酸3ml，振摇使溶解，在紫外灯（365nm）下检视，显黄绿色荧光。,试剂 硫酸 稀硫酸地西泮黄绿色 黄色 氯氮卓黄色 紫色,4. 分解产物的反应,地西泮 ChP（2005）鉴别 （2）取本品 20mg，用氧瓶燃烧法（附录 C）进行有机破坏，以 5% 氢氧化钠溶液 5ml 为吸收液，燃烧完全后，用稀硝酸酸化，并缓缓煮沸 2 分钟，溶液显氯化物的鉴别反应（附录 ）。,（二）UV 和 IR（三）色谱法 TLC HPLC,三、有关物质检

22、查,（一）氯氮卓中有关物质的检查 USP TLC 氧化物、氨基物 杂质对照品法 有关物质 参比杂质对照品法 BP TLC 高低浓度对比法 Ph.Eur HPLC ChP 酸性溶液的澄清度,（二） 三唑仑中有关物质的检查 ChP和USP 均采用GC法峰面积归一化法,第六节 含量测定,一、 非水溶液滴定法 原料药 水溶液中滴定突跃不明显，在非水介质中，碱性增强，使滴定顺利进行1. 非水溶剂种类（1） 酸性溶剂：冰醋酸、冰醋酸+醋酐（2） 碱性溶剂：二甲基甲酰胺 用于有机弱酸的测定,（3） 两性溶剂：兼有酸、碱两种性能， 最常用的为甲醇（4） 惰性溶剂：甲苯、氯仿、四氯化 碳、丙酮、二氧六环,2.

23、滴定剂：高氯酸的冰醋酸溶液 或高氯酸的二氧六环溶液,3. 指示终点的方法 电位法：玻璃甘汞电极系统 指示剂法：结晶紫、喹哪啶红等,（一）基本原理 本类药物中，尼可刹米、地西泮和氯氮卓为游离碱，可直接与高氯酸反应。盐酸环丙沙星、氢溴酸东莨菪碱和硫酸奎宁等盐类药物的高氯酸滴定过程，实际上是一个置换滴定，反应机理：,中国药典（2005年版）的测定方法为：取经适当方法干燥的供试品适量约消耗高氯酸滴定液（0.1 mol/L）8 ml，加冰醋酸1030 ml使溶解。若供试品为氢卤酸盐，应再加5醋酸汞的冰醋酸溶液35 m1，加各药品项下规定的指示液12滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定，并将滴定结果

24、用空白试验校正。,（二）一般方法,（三）问题讨论 1. 适用范围Kb10-8（pKb8）的有机弱碱及其盐类的含量测定。一般来说：,8pKb10 选冰醋酸作溶剂 10pKb12 选冰醋酸和醋酐作溶剂 pKb12 选醋酐作溶剂 冰醋酸中加入不同量的甲酸，也可使滴定突跃显著增大。,2. 酸根的影响,有机弱碱盐类被滴定时置换出的酸在冰醋酸中的酸性次序为：,高氯酸氢溴酸硫酸盐酸硝酸其它弱酸 （磷酸、有机酸）,置换出的氢卤酸的酸性较强，影响滴定终点，不能直接滴定，一般处理方法是加入Hg(Ac)2 的冰醋酸溶液，使其生成在醋酸中难解离的卤化汞以消除氢卤酸对滴定的干扰。,理论量13倍,（1）氢卤酸盐的测定,（

25、2）硫酸盐的测定： 生物碱的硫酸盐，可以用高氯酸直接滴定，但只能被滴定至生物碱的硫酸氢盐。 需注意药物的化学结构，正确判断反应的摩尔比。现以硫酸阿托品和硫酸奎宁为例，简述其测定方法的基本原理,a. 硫酸阿托品 HClO4直接滴定时，反应摩尔比为11,b. 硫酸奎宁测定 奎宁为二元碱，其中喹核碱的碱性较强，可与硫酸成盐，喹啉环的碱性弱，不与硫酸成盐，但可与高氯酸成盐。,滴定反应如下：,+3HClO4,+,用HClO4直接滴定硫酸奎宁时，摩尔比是13,硫酸奎宁片、硫酸奎尼丁片 片剂中许多赋形剂如硬脂酸盐、苯甲酸盐、羧甲基纤维素钠等都消耗高氯酸，因此片剂的测定一般需提取分离后才可进行。 经碱化处理后

26、，用有机溶剂提取，再用HClO4滴定时，反应摩尔比为14,硫酸奎宁片 ChP（2005） 取本品 10 片，除去糖衣后，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于硫酸奎宁 0.3g），置分液漏斗中，加氯化钠0.5g 与 0.1mol/L 氢氧化钠溶液10ml，混匀，精密加氯仿50ml，振摇10min，分取氯仿液，用干燥滤纸滤过。精密量取续滤液25ml，加醋酐5ml 与二甲基黄指示液2滴，用高氯酸滴定液（0.1mo1/L）滴定，至溶液显玫瑰红色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml 高氯酸滴定液（0.1 mol/L）相当于19.57mg的（C20H24N2O2）2 H2SO42H2O。,硝酸在冰醋

27、酸介质中酸性不强，滴定反应可进行完全。但因HNO3具有氧化性，可破坏指示剂使其变色，一般采用电位法指示终点。如硝酸士的宁、硝酸毛果芸香碱,（3） 硝酸盐的测定,磷酸、有机酸为弱酸，不干扰滴定。按常法直接测定，如磷酸氯喹、乳酸环丙沙星,（4） 磷酸盐与有机酸盐的测定,3. 滴定剂的稳定性 水的膨胀系数是0.2110-3/C 冰醋酸膨胀系数是1.110-3/C，较大，体积随温度变化较大，且还具有挥发性。 测定样品与标定标准溶液时温度不同，应对浓度进行校正。,校正公式：,其中： 0.0011：冰醋酸的膨胀系数 t0和t1：标定标准溶液和测定样品时的温度 N0和N1：t0和t1所对应的滴定液的浓度,说

28、明： t1-t010C 或贮存时间超过30天 则在临用前必须重新标定标准溶液的浓度。,4. 终点指示方法 电位滴定法和指示剂法最常用的指示剂是：结晶紫 还有橙黄、喹哪啶红、孔雀绿等,紫蓝蓝绿黄绿黄（碱性区）（酸性区）终点的颜色应用电位法校准。,二、 氧化还原滴定法 （一）铈量法 二氢吡啶类药物 、吩噻嗪类在酸性介质中可被硫酸铈滴定，采用铈量法进行含量测定 。 1. 二氢吡啶类药物 ChP（2005）硝苯地平、尼群地平 指示剂：邻二氮菲 （橙红色淡蓝色或无色）,硝苯地平含量测定 ChP（2005）,2. 吩噻嗪类药物,自身指示终点或电位法、永停法指示终点,优点： 硫酸铈作滴定剂具有高的氧化电位，

29、且为一价还原；不存在对环上取代基的副反应，专属性高。 本法既可用于原料，亦可用于片剂的测定,（二）溴酸钾法 异烟肼具有较强的还原性，在酸性溶液中可以用溴酸钾滴定 ChP（2005）原料及制剂,反应摩尔比 32,（一）基本原理 在适当的pH介质中,三、酸性染料比色法 制剂,1. 水相中反应,离子对BH+In-被有机溶剂提取，使有机相呈色。剩余的酸性染料留于水相,3. 比色法测定,2. 有机溶剂提取,（1）定量分离出有机提取液，脱水后，测定A，求出有机碱含量,（2）定量分离出有机提取液，脱水后，碱化，与有机碱结合的酸性染料释放出来，测定In-的吸收度，再计算出有机碱的含量。 BH+In- + OH

30、- B + H2O + In-,（3）定量分离出有机提取液，脱水后，酸化，测定释放出的HIn的吸收度，间接求出有机碱的含量,BH+In- + H+ BH+ HIn,1. 水相最佳pH值的选择,（二）影响定量分析的因素, 要求： 能使有机碱全部以盐的形式存在，酸性染料能够解离成离子，以便它们定量地结合成离子对而转溶于有机相，且又能将剩余的染料完全保留在水相。, pH（酸性）BH+，InBH+In-，有机溶剂提取的是HIn, pH（碱性） In-，BH+BH+In-，有机溶剂提取的是B, 水相pH的选择方法：理论计算:根据有机药物和酸性染料的pK值以及两相中分配系数实验求得： 用待测的有机碱加入一

31、定的酸性染料，配制成一系列不同pH值的溶液，分别用有机溶剂提取后测定有机溶剂提取液的吸收度，吸收度值最大的溶液所对应的pH值就是水相的最佳pH值。,2. 酸性染料的选择 磺酞类指示剂常用溴甲酚绿、溴麝香草酚蓝（BTB）、甲基橙等,4. 水分的影响 严防水分的混入 有机层可加入无水硫酸钠等脱水剂或经干燥滤纸滤过,3. 有机溶剂的选择 CHCl3、CH2Cl2,（三）特点,1. 选择性高（选用适当pH缓冲液可消除干扰） 2. 灵敏度高、供试品用量少 3. 准确度差，不能用于原料药的测定，只能用于制剂分析,5. 有色杂质的排除：将缓冲液与酸性染料的混合液先用所选有机溶剂萃取弃去。,氢溴酸东莨菪碱片

32、ChP（2005）,对照法pH 4.3酸性染料：溴甲酚绿提取溶剂：三氯甲烷测定波长：420nm,（四）应用示例,四、分光光度法 直接分光光度法： 萃取后分光光度法 萃取-双波长分光光度法 二阶导数分光光度法 钯离子比色法,（一） 直接分光光度法,ChP（2005）奥沙西泮的含量测定定量方法：对照法,2. 盐酸氯丙嗪片： 测定波长为254nm（ 为915）3. 盐酸氯丙嗪注射液 为了消除抗氧剂维生素C（max 243nm）对测定的干扰，测定波长改为306nm（ 为115）。,（二） 萃取后分光光度法 盐酸异丙嗪注射液 USP,（三） 萃取双波长分光光度法（1）原理 在待测组分（a）的最大吸收波长

33、（测定波长，1）处测定待测组分和干扰组分（b）吸收度的总和；另选一适当波长（参比波长，2）测定吸收度，并使干扰组分在测定波长和参比波长处的吸收度相等，即 ，而待测组分在这两个波长处吸收度的差值足够大。,（2）定量依据 样品在二波长下吸收度差值（A）：,即，吸收度差值（A）仅与待测组分的浓度有关，而与干扰组分无关，干扰组分的干扰被消除。,（3）必要条件 干扰组分在两个波长处吸收度相等 待测组分在两个波长处吸收度相差足够大,（4）应用,USP采用此法测定盐酸氯丙嗪、盐酸三氟拉嗪等制剂的含量，可消除样品中氧化产物的干扰盐酸氯丙嗪注射液含量USP法 测定波长 254nm 参比波长 277nm 对照法定

34、量,（四） 二阶导数分光光度法 盐酸氟奋乃静片含量BP测定法,盐酸氟奋乃静可从其二阶导数光谱量取峰266nm谷258nm距离，对照法定量,（五）钯离子比色法,反应在 pH20.1 的缓冲液中进行,优点： 钯离子比色法可选择性地用于未被氧化的吩噻嗪类药物的测定,奋乃静糖浆含量USP测定法,五、气相色谱法,USP采用GC法测定硫酸阿托品、硫酸莨菪碱及氢溴酸东莨菪碱等制剂的含量。 六、高效液相色谱法 RP-HPLC应用 扫尾剂：三乙胺、二乙胺、醋酸铵 七、液-质联用法,95：131盐酸氯丙嗪的含量测定方法有A. 中和法B. 非水滴定法C. 紫外法 D. 旋光法E. 铈量法,99x：87. 中国药典（

35、2005年版）对盐酸异丙嗪注射液的含量测定，选用299nm波长处测定，其原因是 A. 299nm处是它的最大吸收波长 B. 为了排除其氧化产物的干扰 C. 为了排除抗氧剂的干扰 D在299nm处，它的吸收系数最大 E. 在其他波长处，因其无明显吸收,99x：78. 有氧化产物存在时，吩噻嗪类药物的鉴别或含量测定方法为A. 非水溶液滴定法B. 紫外分光光度法C. 荧光分光光度法D. 钯离子比色法E. pH指示剂吸收度比值法,例1. 中国药典(2005年版)中地西泮原料药中2-甲氨基-5-氯二苯酮的检查法为A. TLCB. HPLCC. GCD. 沉淀法E. 显色法,例2. 检查盐酸氯丙嗪中“有关

36、物质”时，采用的对照溶液为A. 杂质的标准溶液B. 标准“有关物质”溶液C. 供试品溶液D. 供试液的稀释溶液E. 对照溶液,例3. 某药物于酸性溶液中，加硫酸铈试液则产生红色，继续滴加硫酸铈试液，红色由浅变深，继由深又变浅直至红色消失，该药物应为A. 雌二醇B. 氯丙嗪C. 诺氟沙星D. 硫酸镁E. 苯巴比妥钠,例4. 吩噻嗪类药物与钯离子反应，需在以下哪种酸性条件下进行A. pH4B. pH33.5C. pH20.1D. pH1E. pH5,99：85. 硫酸荧光反应为地西泮的特征鉴别反应之一。地西泮加硫酸溶解后，在紫外光下显A. 红色荧光 B. 橙色荧光C. 黄绿色荧光 D. 淡蓝色荧光E. 紫色荧色,例1. 某药物经酸水解后呈茚三酮反应，溶液显紫色，该药为A. 氯氮卓B. 地西泮C. 盐酸普鲁卡因D. 阿司匹林E. 尼可刹米,例2. 某药物经酸水解后可用重氮化偶合反应鉴别，此药物是A. 盐酸氯丙嗪B. 氯氮卓C. 地西泮D. 醋酸氢化可的松E. 维生素C,