抗生素类药物的分析 讲稿.ppt

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1、关于抗生素类药物的分析 第一页，讲稿共一百页哦第一节第一节 概述概述抗生素的定义抗生素的定义 在低微浓度下即可对某些生物（病原在低微浓度下即可对某些生物（病原微生物）的生命活动有特异抑制作用的化微生物）的生命活动有特异抑制作用的化学物质的总称学物质的总称 抗生素是细菌、放线菌和真菌等微生物的抗生素是细菌、放线菌和真菌等微生物的代谢产物，对各种病原微生物有强大的抑制或杀代谢产物，对各种病原微生物有强大的抑制或杀灭作用。灭作用。第二页，讲稿共一百页哦一、抗生素类药物的特点1.1.化学纯度低化学纯度低同系物多、异构体多、降解物多同系物多、异构体多、降解物多2.2.活性组分易发生变异活性组分易发生变异

2、微生物菌株的变化、发酵条件改变微生物菌株的变化、发酵条件改变3.3.稳定性差稳定性差分子结构大多不稳定，分子结构大多不稳定，降解后疗效下降、失效降解后疗效下降、失效或增加毒副作用或增加毒副作用第三页，讲稿共一百页哦二、抗生素类药物的质量分析（一）鉴别试验（一）鉴别试验1.1.化学方法化学方法利用某些官能团的特性，利用适当的试液与其反应显色利用某些官能团的特性，利用适当的试液与其反应显色2.2.物理化学方法物理化学方法紫外分光光度法、红外分光光度法紫外分光光度法、红外分光光度法3.3.生物学方法生物学方法特异的酶反应特异的酶反应第四页，讲稿共一百页哦二、抗生素类药物的质量分析（二）杂质检查（二）

3、杂质检查1.1.影响产品稳定性的指标影响产品稳定性的指标水分、酸碱度、干燥失重水分、酸碱度、干燥失重2.2.控制有机、无机杂质的指标控制有机、无机杂质的指标溶液的澄清度与颜色、重金属、残留溶剂、炽灼残渣溶液的澄清度与颜色、重金属、残留溶剂、炽灼残渣3.3.与临床安全性密切相关的指标与临床安全性密切相关的指标热源、细菌内毒素、无菌、降压物质热源、细菌内毒素、无菌、降压物质4.4.其他指标其他指标-内酰胺类抗生素：聚合物内酰胺类抗生素：聚合物第五页，讲稿共一百页哦（三）含量测定或效价测定（三）含量测定或效价测定1.1.微生物检定法微生物检定法以抗生素对微生物的杀伤或抑制程度为指标来衡量以抗生素对微

4、生物的杀伤或抑制程度为指标来衡量抗生素效价的一种方法。抗生素效价的一种方法。第六页，讲稿共一百页哦（三）含量测定或效价测定（三）含量测定或效价测定1.1.微生物检定法微生物检定法优点优点1、灵敏度高、需用量小、测定结果直观、灵敏度高、需用量小、测定结果直观2、测定原理与临床一致，适用范围广、测定原理与临床一致，适用范围广3、同一类型的抗生素无需分离，一次测定、同一类型的抗生素无需分离，一次测定总效价总效价缺点缺点1、操作繁琐、操作繁琐2、培养时间长、培养时间长3、测定误差大、测定误差大第七页，讲稿共一百页哦2.2.理化方法理化方法适用于提纯的以及化学结构已确定的抗生素适用于提纯的以及化学结构已

5、确定的抗生素优点优点1.操作简单、省时、方法准确操作简单、省时、方法准确2.专属性专属性1.不一定代表生物效价不一定代表生物效价缺点缺点2.易受杂质干扰易受杂质干扰第八页，讲稿共一百页哦3.3.抗生素活性表示方法抗生素活性表示方法效价：每效价：每mlml或每或每mgmg中含有某种抗生素的有效成分的中含有某种抗生素的有效成分的多少多少第九页，讲稿共一百页哦三、抗生素的分类三、抗生素的分类（按结构与性质）：（按结构与性质）：内酰胺类、内酰胺类、氨基糖苷类、氨基糖苷类、四环素类、四环素类、大环内酯类、大环内酯类、氯霉素类、氯霉素类、其他抗生素类其他抗生素类第十页，讲稿共一百页哦第二节第二节 内酰胺类

6、抗生素内酰胺类抗生素 青霉素类青霉素类第十一页，讲稿共一百页哦头孢菌素类头孢菌素类第十二页，讲稿共一百页哦青霉素青霉素（青霉素（青霉素G、苄青霉素）、苄青霉素）第十三页，讲稿共一百页哦氨苄西林氨苄西林（氨苄青霉素）（氨苄青霉素）第十四页，讲稿共一百页哦阿莫西林阿莫西林（羟氨苄青霉素）（羟氨苄青霉素）第十五页，讲稿共一百页哦普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素第十六页，讲稿共一百页哦头孢氨苄头孢氨苄第十七页，讲稿共一百页哦头孢拉定头孢拉定第十八页，讲稿共一百页哦头孢羟氨苄头孢羟氨苄第十九页，讲稿共一百页哦头孢噻吩钠头孢噻吩钠第二十页，讲稿共一百页哦一、结构与性质一、结构与性质NaNa与碱金属与碱金属(N

7、a+、K+)成盐成盐 1.1.酸性和溶解度酸性和溶解度 易溶于水易溶于水 第二十一页，讲稿共一百页哦与有机碱与有机碱(普鲁卡因普鲁卡因)成盐成盐 难溶于水，易溶于甲醇难溶于水，易溶于甲醇普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素第二十二页，讲稿共一百页哦2.2.旋光性旋光性 头孢菌素类头孢菌素类 C6 C7青霉素类青霉素类 C3 C5 C6 第二十三页，讲稿共一百页哦 3.3.紫外吸收特征紫外吸收特征头孢菌素类头孢菌素类 母核有共轭体系母核有共轭体系 青霉素类青霉素类 母核无明显母核无明显UV 多数有苯环取代基多数有苯环取代基 第二十四页，讲稿共一百页哦4.-4.-内酰胺环的不稳定性内酰胺环的不稳定性 水溶

8、液水溶液 不稳定不稳定 干燥纯净干燥纯净 稳定稳定 不稳定性因素不稳定性因素四元环张力大四元环张力大 酰胺键易水解酰胺键易水解 第二十五页，讲稿共一百页哦例例青霉素的降解反应青霉素的降解反应青霉青霉素素青霉噻唑酸青霉噻唑酸H2O/OH青霉素酶青霉素酶青霉酸青霉酸H2OpH2100青霉噻唑酰基羟青霉噻唑酰基羟胺酸胺酸NH2OH青霉烯酸青霉烯酸pH4青霉胺青霉胺CO2青霉醛青霉醛HgCl2第二十六页，讲稿共一百页哦（一）呈色反应（一）呈色反应1.羟肟酸铁反应羟肟酸铁反应-内酰胺类内酰胺类NaOH呈色呈色硫酸铁铵试液硫酸铁铵试液H+二、鉴别第二十七页，讲稿共一百页哦2.茚三酮茚三酮反应反应-氨基氨基

9、第二十八页，讲稿共一百页哦2.双缩脲反应双缩脲反应-内酰胺类内酰胺类（开环分解）（开环分解）似肽键似肽键第二十九页，讲稿共一百页哦3.与重氮苯磺酸反应与重氮苯磺酸反应（偶合）（偶合）酚羟基酚羟基头孢哌酮头孢哌酮第三十页，讲稿共一百页哦（二）沉淀反应（二）沉淀反应1.遇酸遇酸在过量在过量HCl或或有机溶剂（乙醇、三氯甲烷、乙醚）中溶解有机溶剂（乙醇、三氯甲烷、乙醚）中溶解第三十一页，讲稿共一百页哦2.重氮化重氮化-偶合反应偶合反应 重氮化重氮化-偶合反应偶合反应芳伯氨基芳伯氨基第三十二页，讲稿共一百页哦K+、Na+反应反应（三）（三）焰色焰色鲜黄色鲜黄色 +醋酸氧铀锌醋酸氧铀锌黄黄 Na+焰色焰

10、色紫色紫色 +0.1%四苯硼钠四苯硼钠+Ac白白 K+第三十三页，讲稿共一百页哦 光谱法光谱法（四）（四）1、UV法法样品、分解产物样品、分解产物第三十四页，讲稿共一百页哦（五）（五）IR法法第三十五页，讲稿共一百页哦色谱法色谱法（五）（五）1、TLC法法对照品对照法对照品对照法2、HPLC法法第三十六页，讲稿共一百页哦三、特殊杂质的检查高分子杂质检查高分子杂质检查头孢他啶、头孢曲松钠、头孢哌酮钠头孢他啶、头孢曲松钠、头孢哌酮钠分子排阻色潽法、离子交换色谱法、反相色谱法分子排阻色潽法、离子交换色谱法、反相色谱法吸光度检查吸光度检查青霉素钠吸光度：青霉素钠吸光度：0.80-0.80.80-0.8

11、第三十七页，讲稿共一百页哦四、含量测定微生物检定法微生物检定法汞量法汞量法HPLCHPLC第三十八页，讲稿共一百页哦汞量法汞量法（一）（一）1.原理原理（水解）（水解）青霉素族青霉素族ChP青霉素与汞盐不反应青霉素与汞盐不反应降解产物与汞盐反应降解产物与汞盐反应巯基化合物与汞定量反应，可测得总巯基化合物与汞定量反应，可测得总青霉素含量青霉素含量第三十九页，讲稿共一百页哦2.方法方法青霉素钠含量测定青霉素钠含量测定 取本品约取本品约50mg，精密称定，加水，精密称定，加水5ml溶解后，加溶解后，加1mol/L氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液5ml，摇匀，放置，摇匀，放置15分钟，加分钟，加1mol/L硝

12、酸溶液硝酸溶液5ml，醋酸盐缓冲，醋酸盐缓冲(pH4.6)20ml及水及水20ml，摇匀，照电位滴定法，在，摇匀，照电位滴定法，在3540，用硝酸汞滴，用硝酸汞滴定液定液(0.02mol/L)缓慢滴定（控制滴定过程约为缓慢滴定（控制滴定过程约为15分钟）。分钟）。每每1ml硝酸汞滴定硝酸汞滴定(0.02mol/L)相当于相当于7.128mg的总青霉的总青霉素素 第四十页，讲稿共一百页哦另取本品约另取本品约0.5g，精密称定，加水与上述醋酸盐缓，精密称定，加水与上述醋酸盐缓冲液各冲液各25ml，振摇使完全溶解，在室温下，立即用硝，振摇使完全溶解，在室温下，立即用硝酸汞滴定液酸汞滴定液(0.02m

13、ol/L)滴定，终点判断方法同上。滴定，终点判断方法同上。每每1ml硝酸汞滴定液（硝酸汞滴定液（0.02mol/L）相当于）相当于7.128mg的的降解物。降解物。总青霉素的百分含量与降解物的百分含量之总青霉素的百分含量与降解物的百分含量之差值即为青霉素的含量。差值即为青霉素的含量。第四十一页，讲稿共一百页哦HPLC法法（二）（二）ChP 头孢菌素类头孢菌素类内标法校正因子内标法校正因子外标法外标法特点特点 快速、高效、灵敏快速、高效、灵敏 专属性强、重现性好专属性强、重现性好 一法多用（鉴别、检查、含测）一法多用（鉴别、检查、含测）第四十四页，讲稿共一百页哦第三节第三节 氨基糖苷类抗生素氨基

14、糖苷类抗生素常见药物：常见药物：硫酸链霉素硫酸链霉素 硫酸阿米卡星硫酸阿米卡星新霉素新霉素 卡那霉素卡那霉素硫酸庆大霉素硫酸庆大霉素 妥布霉素妥布霉素氨基环醇与氨基糖缩合形成氨基环醇与氨基糖缩合形成含有多羟基，又称为多羟基抗生素含有多羟基，又称为多羟基抗生素第四十五页，讲稿共一百页哦链霉素链霉素链霉胍链霉胍 +链霉糖链霉糖 +N-+N-甲基甲基-L-L-葡萄糖胺葡萄糖胺 苷元苷元糖糖链霉双糖胺链霉双糖胺第四十六页，讲稿共一百页哦链霉胍链霉胍链霉糖链霉糖N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺第四十七页，讲稿共一百页哦链霉胍链霉胍链霉糖链霉糖N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺第四十八页，讲稿共一百页哦

15、庆大霉素庆大霉素 糖糖 苷元苷元绛红糖胺绛红糖胺 +脱氧链霉胺脱氧链霉胺 +加洛糖胺加洛糖胺 糖糖 第四十九页，讲稿共一百页哦绛红糖胺绛红糖胺紫素胺紫素胺2-脱氧链霉胺脱氧链霉胺加洛糖胺加洛糖胺N-甲基甲基-3-去氧去氧-4-甲甲基戊糖胺基戊糖胺第五十一页，讲稿共一百页哦二、二、性质性质多与硫酸成盐多与硫酸成盐链霉素链霉素 3个个庆大霉素庆大霉素 5个个碱性中心碱性中心碱性碱性1水溶性水溶性溶解性溶解性2.旋光性旋光性 第五十三页，讲稿共一百页哦链霉素链霉素 pH47庆大霉素庆大霉素 pH212 稳定稳定UV4.稳定性稳定性3.链霉素在链霉素在230nm处有紫外吸收处有紫外吸收第五十四页，讲稿

16、共一百页哦坂口反应坂口反应N-甲基葡萄甲基葡萄糖胺反应糖胺反应麦芽酚反应麦芽酚反应水解产物第五十五页，讲稿共一百页哦二、二、鉴别试验鉴别试验 茚三酮反应茚三酮反应（一）（一）羟基胺结构羟基胺结构第五十六页，讲稿共一百页哦链霉胍特有反应链霉胍特有反应（或或-萘酚萘酚）坂口反应坂口反应（二）（二）方法：取本品方法：取本品0.5mg，加水，加水4ml溶解，加氢氧溶解，加氢氧化钠试液化钠试液2.5ml与与0.1%8-羟基喹啉的乙醇溶液羟基喹啉的乙醇溶液1ml，放冷至，放冷至15，加次溴酸钠试液，加次溴酸钠试液3滴，即滴，即显橙红色显橙红色第五十七页，讲稿共一百页哦 麦芽酚反应麦芽酚反应（三）（三）链霉

17、糖特有反应链霉糖特有反应H+分子重排分子重排硫酸链霉素的反应：硫酸链霉素的反应：取本品约取本品约20mg，加水，加水5ml溶解后，加氢氧化钠溶解后，加氢氧化钠溶液溶液0.3ml，置水浴上加热，置水浴上加热5分钟，加硫酸铁铵分钟，加硫酸铁铵溶液溶液0.5ml，即显紫红色，即显紫红色第五十八页，讲稿共一百页哦N-甲基葡萄糖胺反应甲基葡萄糖胺反应（四）（四）乙酰丙酮乙酰丙酮 OH-吡咯衍生物吡咯衍生物对二甲氨基苯甲醛对二甲氨基苯甲醛H+红色红色（Elson-Morgan反应）反应）第五十九页，讲稿共一百页哦（五）（五）硫酸盐的鉴别反应硫酸盐的鉴别反应H+TLC法法（六）（六）第六十页，讲稿共一百页哦

18、三、三、特殊杂质检查及组分分析特殊杂质检查及组分分析链霉素杂质链霉素杂质链霉素链霉素B（水解后为甘露糖、链霉素）（水解后为甘露糖、链霉素）2.方法方法 TLC中的对照品法中的对照品法1.来源来源 反应中间体反应中间体第六十一页，讲稿共一百页哦薄层色谱法检查链霉素B取本品取本品0.25g0.25g，精密称定，置回流瓶中，加，精密称定，置回流瓶中，加5ml5ml新鲜配新鲜配制的硫酸制的硫酸-甲醇溶液溶解，加热回流甲醇溶液溶解，加热回流1 1小时，冷却，用甲小时，冷却，用甲醇冲洗冷凝管，合并冲洗液，并用甲醇定量稀释成每醇冲洗冷凝管，合并冲洗液，并用甲醇定量稀释成每1ml1ml中含中含10mg10mg

19、的溶液，作为供试品溶液。的溶液，作为供试品溶液。第六十二页，讲稿共一百页哦薄层色谱法检查链霉素B精密称取甘露糖对照品精密称取甘露糖对照品36mg36mg，置回流瓶中，同法处理，置回流瓶中，同法处理后定量制成每后定量制成每1ml1ml中含中含72ug72ug的溶液，作为对照溶液的溶液，作为对照溶液取上述溶液，点于同一薄层板上，展开，晾干，显色取上述溶液，点于同一薄层板上，展开，晾干，显色供试品溶液所显链霉素供试品溶液所显链霉素B B斑点的颜色与对照溶液主斑点斑点的颜色与对照溶液主斑点比较，不得更深比较，不得更深第六十三页，讲稿共一百页哦四、四、含量测定含量测定链霉素、庆大霉素链霉素、庆大霉素微生

20、物检定法微生物检定法 本法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用量反应本法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用量反应平行线原理的设计，比较标准品与供试品两者对接种的试平行线原理的设计，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。第六十四页，讲稿共一百页哦第四节第四节 四环素类抗生素四环素类抗生素ABCD第六十五页，讲稿共一百页哦123456789101112第六十六页，讲稿共一百页哦四环素（TC）tetracycline第六十七页，讲稿共一百页哦金霉素(CTC)chlortetracycline氯四环素氯四环

21、素第六十八页，讲稿共一百页哦土霉素(OTC)oxytetracycline氧四环素氧四环素第六十九页，讲稿共一百页哦多西环素(DOTC)doxycycline脱氧土霉素脱氧土霉素第七十页，讲稿共一百页哦美他环素（美他环素（METC）metacycline第七十一页，讲稿共一百页哦（二）（二）性质性质酸碱性酸碱性1.与酸、碱均能成盐与酸、碱均能成盐强酸或强碱中溶解度强酸或强碱中溶解度 酚羟基、烯醇型羟基酚羟基、烯醇型羟基 弱酸性弱酸性二甲胺基二甲胺基 弱碱性弱碱性第七十三页，讲稿共一百页哦2.溶解性和吸湿性溶解性和吸湿性pH4.5-7.2pH4.5-7.2，难溶于水，难溶于水pHpH低于低于4

22、4或高于或高于8 8，溶解度增大，溶解度增大具引湿性，含有结晶水具引湿性，含有结晶水第七十四页，讲稿共一百页哦3.3.旋光性旋光性 用于定性或定量用于定性或定量4.4.紫外吸收和荧光性质紫外吸收和荧光性质第七十五页，讲稿共一百页哦5.不稳定性不稳定性（1）差向异构化）差向异构化淡黄淡黄黑黑蓝色荧光蓝色荧光第七十六页，讲稿共一百页哦（2）酸性条件下的降解）酸性条件下的降解max=445nmmax=435nm橙黄色橙黄色第七十九页，讲稿共一百页哦（3）碱性条件下的降解）碱性条件下的降解（荧光）（荧光）第八十一页，讲稿共一百页哦与金属离子生成有色配位化合物与金属离子生成有色配位化合物Ca2+Mg2+

23、Fe3+Al3+与金属离子络合与金属离子络合6.第八十二页，讲稿共一百页哦二、二、鉴别试验鉴别试验H2SO4反应反应（一）（一）第八十三页，讲稿共一百页哦FeCl3反应反应（二）（二）第八十四页，讲稿共一百页哦荧光法荧光法（三）（三）UV绿色荧光绿色荧光H+UV第八十五页，讲稿共一百页哦TLC法法（四）（四）正相分配薄层正相分配薄层 色谱色谱HPLC法法（五）（五）EDTA 克服痕量金属造成的克服痕量金属造成的 拖尾现象拖尾现象第八十六页，讲稿共一百页哦三、三、检查检查有关物质有关物质（一）（一）HPLC法（法（2010版）版）第八十七页，讲稿共一百页哦吸收度吸收度（二）（二）第八十八页，讲稿

24、共一百页哦四、四、含量测定含量测定ChP、USPHPLC法（外标法）法（外标法）系统适用性试验系统适用性试验 1.防护柱防护柱2.预试溶液预试溶液 4-差向脱水四环素差向脱水四环素 四环素四环素3.RSD2.0%第八十九页，讲稿共一百页哦1 1 下下 列列 哪哪 个个 药药 物物 会会 发发 生生 羟羟 肟肟 酸酸 铁反应铁反应 A.A.青霉素青霉素 B.B.庆大霉素庆大霉素 C.C.红霉素红霉素 D.D.链霉素链霉素 E.E.维生素维生素C C 第九十页，讲稿共一百页哦2 2中国药典中国药典(2010(2010年版年版)测定头孢菌素类药测定头孢菌素类药物的含量时，多数采用的方法是物的含量时，

25、多数采用的方法是 A.A.微生物法微生物法 B.B.碘量法碘量法 C.C.汞量法汞量法 D.D.正相高效液相色谱法正相高效液相色谱法 E.E.反相高效液相色谱法反相高效液相色谱法第九十一页，讲稿共一百页哦3 3属于属于-内酰胺类的抗生素药物有内酰胺类的抗生素药物有 A.A.青霉素青霉素 B.B.红霉素红霉素 C.C.头孢菌素头孢菌素 D.D.庆大霉素庆大霉素 E.E.四环素四环素第九十二页，讲稿共一百页哦4 4能和茚三酮发生呈色反应的物质有能和茚三酮发生呈色反应的物质有 A A链霉素链霉素 B B庆大霉素庆大霉素 C C土霉素土霉素 D D氨基酸氨基酸 E E苯巴比妥苯巴比妥第九十三页，讲稿共

26、一百页哦5.5.青霉素类药物可用下面哪些方法测定青霉素类药物可用下面哪些方法测定 A.A.三氯化铁比色法三氯化铁比色法 B.B.汞量法汞量法 C.C.碘量法碘量法 D.D.硫醇汞盐法硫醇汞盐法 E.E.酸性染料比色法酸性染料比色法第九十四页，讲稿共一百页哦6 6能发生重氮化一偶合反应的抗能发生重氮化一偶合反应的抗 生素类药物是生素类药物是 A.A.青霉素青霉素 B.B.庆大霉素庆大霉素 C.C.苄星青霉素苄星青霉素 D.D.盐酸四环素盐酸四环素 E.E.普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素第九十五页，讲稿共一百页哦7.7.以下反应可适用的药物以下反应可适用的药物 A.A.青霉素青霉素 B.B.链霉素链

27、霉素 C.C.两者均能两者均能 D.D.两者均不能两者均不能 Kober Kober反应反应 羟肟酸铁反应羟肟酸铁反应 坂口反应坂口反应 N N甲基葡萄糖胺反应甲基葡萄糖胺反应 在酸性溶液中水解在酸性溶液中水解DABBC第九十六页，讲稿共一百页哦8 8：可以鉴别的药物是：可以鉴别的药物是 A.A.链霉素链霉素 B.B.庆大霉素庆大霉素 C.C.两者均可两者均可 D.D.两者均不可两者均不可 用用KoberKober反应反应 用坂口反应用坂口反应 用麦芽酚反应用麦芽酚反应 用三氯化铁反应用三氯化铁反应 用茚三酮反应用茚三酮反应DAADC第九十七页，讲稿共一百页哦问题问题46465050 A.A.茚三酮反应茚三酮反应 B.B.麦芽酚反应麦芽酚反应 C.C.坂口反应坂口反应 D.FeC1D.FeC13 3反应反应 E.E.羟肟酸铁反应羟肟酸铁反应 4646头孢唑林钠头孢唑林钠 4747金霉素金霉素 4848链霉素链霉素 4949庆大霉素庆大霉素 5050青霉素青霉素EDEAABC第九十八页，讲稿共一百页哦（）青霉素分子能与碘定量反应，）青霉素分子能与碘定量反应，因此可以根据消耗的碘量计算青霉素因此可以根据消耗的碘量计算青霉素的含量。的含量。第九十九页，讲稿共一百页哦感谢大家观看第一百页，讲稿共一百页哦