生物蛋白质工程的崛起新人教选修.ppt
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1、生物蛋白质工程的崛起课件新人教选修现在学习的是第1页,共43页知识回顾1 1、蛋白质结构多样性、蛋白质结构多样性 的原因?的原因?2 2、遗传信息的流动方向(中心法则)、遗传信息的流动方向(中心法则)1 1 氨基酸的种类不同氨基酸的种类不同2 2 氨基酸是数目不同氨基酸是数目不同3 3氨基酸的排列顺序变化多端氨基酸的排列顺序变化多端4 4 肽链的空间结构千差万别肽链的空间结构千差万别DNADNARNARNA蛋白质蛋白质复复制制复复制制转录转录逆转录逆转录翻译翻译现在学习的是第2页,共43页一、蛋白质工程崛起的缘由一、蛋白质工程崛起的缘由1、基因工程的应用、基因工程的应用(1)基因工程的实质:)
2、基因工程的实质:将一种生物的基因转移到另一种生物体将一种生物的基因转移到另一种生物体内,使后者产生本不能产生的蛋白质,内,使后者产生本不能产生的蛋白质,进而表现出新的性状。进而表现出新的性状。在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质。在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质。(2)基因工程的不足:)基因工程的不足:现在学习的是第3页,共43页天然蛋白质是生物在长期进化过程中形成天然蛋白质是生物在长期进化过程中形成的,它们的结构和功能符合特定物种生存的,它们的结构和功能符合特定物种生存的需要,却的需要,却不一定完全符合人类生产和不一定完全符合人类生产和生活的需要生活的需要。2、天然蛋白质的不足、天然蛋白
3、质的不足3、蛋白质工程的目的、蛋白质工程的目的生产符合人类生产和生活的需生产符合人类生产和生活的需要的蛋白质。要的蛋白质。现在学习的是第4页,共43页例如:干扰素是由动物体内的效应干扰素是由动物体内的效应T T细胞产生细胞产生的一种糖蛋白,几乎能抵抗所有病毒的一种糖蛋白,几乎能抵抗所有病毒引起的感染。同时,在治疗癌症方面引起的感染。同时,在治疗癌症方面也有十分可观的疗效。但是,干扰素也有十分可观的疗效。但是,干扰素在体外保存相当困难。在体外保存相当困难。如果将其分子上的一个如果将其分子上的一个半胱氨酸半胱氨酸变成变成丝氨酸丝氨酸,在,在-70oC的条件下,可以的条件下,可以保存保存半年半年。现
4、在学习的是第5页,共43页玉米中赖氨酸的含量比较低。玉米中赖氨酸的含量比较低。赖氨酸的合成机理:赖氨酸的合成机理:天冬氨酸激酶天冬氨酸激酶二氢吡啶二羧酸合成酶二氢吡啶二羧酸合成酶前体物质前体物质赖氨酸赖氨酸负反馈调节负反馈调节天冬氨酸激酶天冬氨酸激酶(352位的苏氨酸)位的苏氨酸)二氢吡啶二羧酸合成酶二氢吡啶二羧酸合成酶(104位的天冬酰胺)位的天冬酰胺)改造改造天冬氨酸激酶天冬氨酸激酶(异亮氨酸)(异亮氨酸)二氢吡啶二羧酸合成酶二氢吡啶二羧酸合成酶(异亮氨酸)(异亮氨酸)现在学习的是第6页,共43页在已研究过的在已研究过的几千种几千种酶中,只有酶中,只有极少极少数数可以应用于工业生产,绝大多
5、数酶可以应用于工业生产,绝大多数酶都不能应用于工业生产,这些酶虽然都不能应用于工业生产,这些酶虽然在自然状态下有活性在自然状态下有活性,但,但在工业生产在工业生产中没有活性或活性很低中没有活性或活性很低。这是因为。这是因为工业生产中每一步的反应体系中常工业生产中每一步的反应体系中常常会有酸、碱或有机溶剂存在,反常会有酸、碱或有机溶剂存在,反应温度较高,在这种条件下,大多应温度较高,在这种条件下,大多数酶会很快数酶会很快变性失活变性失活。现在学习的是第7页,共43页 目前科学家尝试通过对目前科学家尝试通过对蛋白质蛋白质结构结构的改造,来延的改造,来延长酶的半衰期,提高酶的长酶的半衰期,提高酶的热
6、稳定性,延长药用蛋白热稳定性,延长药用蛋白的保存期,抵御由于重要的保存期,抵御由于重要氨基酸氧化引起的活性丧氨基酸氧化引起的活性丧失等,取得了一定的进展。失等,取得了一定的进展。现在学习的是第8页,共43页二、蛋白质工程的基本原理二、蛋白质工程的基本原理1 1、蛋白质工程的目标、蛋白质工程的目标 根据人们对根据人们对蛋白质功能蛋白质功能的特定需求,对蛋白的特定需求,对蛋白质的质的结构结构进行分子设计。进行分子设计。2 2、天然蛋白质的合成过程、天然蛋白质的合成过程DNADNA(基因)(基因)转录转录mRNAmRNA翻译翻译蛋白质蛋白质基因基因表达(转录和翻译)表达(转录和翻译)形成氨基酸序列的
7、多肽形成氨基酸序列的多肽链链形成具有高级结构的蛋白质形成具有高级结构的蛋白质行使生物功能行使生物功能由于基因决定蛋白质,要对蛋白质的结构进行设计改造,最终由于基因决定蛋白质,要对蛋白质的结构进行设计改造,最终还必须通过基因来完成还必须通过基因来完成现在学习的是第9页,共43页、蛋白质工程的基本途径、蛋白质工程的基本途径预期的蛋白质功能预期的蛋白质功能设计预期的蛋白质结构设计预期的蛋白质结构推测应有的氨基酸序列推测应有的氨基酸序列找到相对应的脱氧核苷酸序列找到相对应的脱氧核苷酸序列(基因)(基因)现在学习的是第10页,共43页蛋白质工程的流程蛋白质工程的流程基因基因DNA氨基酸序列氨基酸序列多肽
8、链多肽链蛋白质蛋白质三维结构三维结构预期功能预期功能生物功能生物功能mRNA转录转录翻译翻译折叠折叠DNA合成合成分子设计分子设计现在学习的是第11页,共43页4、蛋白质工程的概念、蛋白质工程的概念蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础,通过基及其与生物功能的关系作为基础,通过基因修饰或基因合成,对现有蛋白质进行改因修饰或基因合成,对现有蛋白质进行改造或制造一种新的蛋白质,以满足人类对造或制造一种新的蛋白质,以满足人类对生产和生活的需求。生产和生活的需求。(第二代基因工程)第二代基因工程)基础基础:了解蛋白质的结构和功能了解蛋白质的
9、结构和功能原理原理:改造基因(基因修饰或基因合成)改造基因(基因修饰或基因合成)目的:目的:定向改造或制造蛋白质定向改造或制造蛋白质现在学习的是第13页,共43页讨论:讨论:1、怎样得出决定这一段肽链的脱氧核苷酸序列?、怎样得出决定这一段肽链的脱氧核苷酸序列?请把相应的碱基序列写出来。请把相应的碱基序列写出来。讨论:讨论:某多肽链的一段氨基酸序列是:某多肽链的一段氨基酸序列是:-丙氨酸丙氨酸-色氨酸色氨酸-赖氨酸赖氨酸-甲硫氨酸甲硫氨酸-苯丙氨酸苯丙氨酸-丙氨酸:丙氨酸:GCU、GCC、GCA、GCG 色氨酸:色氨酸:UGG 赖氨酸:赖氨酸:AAA、AAG 甲硫氨酸:甲硫氨酸:AUG 苯丙氨酸
10、:苯丙氨酸:UUU、UUC 现在学习的是第14页,共43页每种氨基酸都有对应的三联密码子每种氨基酸都有对应的三联密码子,只要查一下遗传密码子表只要查一下遗传密码子表,就可以将上述氨基酸序列的编码序列查出来。但是由就可以将上述氨基酸序列的编码序列查出来。但是由于上述氨基酸序列中于上述氨基酸序列中有几个氨基酸是由多个三联密码子有几个氨基酸是由多个三联密码子编码编码,因此其碱基排列组合起来就比较复杂因此其碱基排列组合起来就比较复杂,至少可以排列至少可以排列出出16种。同学们可以根据学过的排列组合知识自己排列种。同学们可以根据学过的排列组合知识自己排列一下。首先应该根据三联密码子推出一下。首先应该根据
11、三联密码子推出mRNA序列为序列为GCU(或(或C或或A或或G)UGGAAA(或(或G)AUGUUU(或(或C),),再根据碱基互补配对规律推出脱氧核苷酸序列:再根据碱基互补配对规律推出脱氧核苷酸序列:CGA(或(或G或或T或或C)ACCTTT(或(或C)TACAAA(或(或G)。)。现在学习的是第15页,共43页2、确定目的基因的碱基序列后,怎样才能合、确定目的基因的碱基序列后,怎样才能合成或改造目的基因(成或改造目的基因(DNA)?)?可以通过人工合成的方法获取或基因的定点诱变技术可以通过人工合成的方法获取或基因的定点诱变技术来改变。来改变。现在学习的是第16页,共43页基因定位突变基因定
12、位突变根据三联体密码,编码根据三联体密码,编码DNADNA(目的基因)的确定位点,改(目的基因)的确定位点,改变其组成核苷酸的顺序或种类,使基因发生定向变异,使变其组成核苷酸的顺序或种类,使基因发生定向变异,使其控制合成的氨基酸种类、顺序发生改变,合成出具有预其控制合成的氨基酸种类、顺序发生改变,合成出具有预期氨基酸序列的修饰蛋白质。期氨基酸序列的修饰蛋白质。这种通过造成一个或几个碱基这种通过造成一个或几个碱基定点突变定点突变,以达到修饰蛋白,以达到修饰蛋白质分子结构目的的技术,称为基因定点突变技术质分子结构目的的技术,称为基因定点突变技术。现在学习的是第17页,共43页现在学习的是第18页,
13、共43页基因定点诱变技术与基因突变的比较基因定点诱变技术与基因突变的比较比较比较基因定点诱变基因定点诱变基因突变基因突变相相同同点点发生的发生的过程过程结果结果不不同同点点场所场所手段手段方向方向DNA复制过程中复制过程中产生新基因,从而产生新性状产生新基因,从而产生新性状生物体外生物体外生物体内生物体内定向改造定向改造不定向性不定向性PCR技术技术物理化学方法物理化学方法现在学习的是第19页,共43页三、蛋白质工程的进展和前景三、蛋白质工程的进展和前景1、蛋白质工程的进展:(1)对胰岛素的改造胰岛素的改造 天然胰岛素制剂在储存中易形成二聚体和六聚天然胰岛素制剂在储存中易形成二聚体和六聚体,延
14、缓胰岛素从注射部位进入血液,从而延缓了体,延缓胰岛素从注射部位进入血液,从而延缓了其降血糖作用,也增加了抗原性,这是胰岛素其降血糖作用,也增加了抗原性,这是胰岛素B23-B23-B28B28氨基酸残基结构所致。利用蛋白质工程技术改变氨基酸残基结构所致。利用蛋白质工程技术改变这些残基,则可降低其聚合作用,使胰岛素快速起这些残基,则可降低其聚合作用,使胰岛素快速起作用。该作用。该速效胰岛素速效胰岛素已通过临床实验。已通过临床实验。现在学习的是第20页,共43页(2)对水蛭素的改造)对水蛭素的改造 水蛭素是水蛭唾液腺分泌的凝血酶特异抑制剂,水蛭素是水蛭唾液腺分泌的凝血酶特异抑制剂,它有多种变异体,由
15、它有多种变异体,由65或或66个氨基酸残基组成。水蛭个氨基酸残基组成。水蛭素在临床上可作为抗栓药物用于治疗血栓疾病。为提素在临床上可作为抗栓药物用于治疗血栓疾病。为提高水蛭素活性,在综合各变异体结构特点的基础上提高水蛭素活性,在综合各变异体结构特点的基础上提出改造水蛭素主要变异体出改造水蛭素主要变异体HV2的设计方案,将的设计方案,将47位位的的Asn(天冬酰胺)变成(天冬酰胺)变成Lys(赖氨酸),使其与分(赖氨酸),使其与分子内第子内第4或第或第5位位Thr(苏氨酸)间形成氢键来帮助(苏氨酸)间形成氢键来帮助水蛭素水蛭素N端肽链的正确取向,从而提高抗凝血效率,端肽链的正确取向,从而提高抗凝
16、血效率,试管试验活性提高试管试验活性提高4倍,在动物模型上检验抗血栓倍,在动物模型上检验抗血栓形成的效果,提高形成的效果,提高20倍。倍。现在学习的是第21页,共43页(3)对生长激素的改造生长激素的改造 生长激素通过对它特异受体的作用促进细胞和机体的生长激素通过对它特异受体的作用促进细胞和机体的生长发育,然而它不仅可以结合生长发育,然而它不仅可以结合生长激素受体生长激素受体,还可以结,还可以结合许多种不同类型细胞的合许多种不同类型细胞的催乳激素受体催乳激素受体,引发其他生理过,引发其他生理过程。在治疗过程中为减少副作用,需使人的重组生长激素程。在治疗过程中为减少副作用,需使人的重组生长激素只
17、与生长激素受体结合,尽可能减少与其他激素受体的结只与生长激素受体结合,尽可能减少与其他激素受体的结合。经研究发现,二者受体结合区有一部分重叠,但并不合。经研究发现,二者受体结合区有一部分重叠,但并不完全相同,有可能通过改造加以区别。由于人的生长激素完全相同,有可能通过改造加以区别。由于人的生长激素和催乳激素受体结合需要锌离子参与作用,而它与生长激和催乳激素受体结合需要锌离子参与作用,而它与生长激素受体结合则无需锌离子参与,于是考虑取代充当锌离子素受体结合则无需锌离子参与,于是考虑取代充当锌离子配基的氨基酸侧链,如第配基的氨基酸侧链,如第18和第和第21位位His(组氨酸)和第(组氨酸)和第17
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