超临界co2萃取技术_丹参的传统提取工艺与超临界ＣＯ２萃取－大孔树脂联用工艺的比较研究.docx

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1、超临界co2萃取技术_丹参的传统提取工艺与超临界萃取大孔树脂联用工艺的比较研究 摘要：目的：对丹参的传统提取工艺与超临界CO2萃取-大孔树脂联用工艺进行比较探讨。方法：SFE-CO2萃取丹参中丹参酮（夹带剂为2倍药材量的95%的乙醇，20MPa、45提取1h）；萃取后药渣经水提取-大孔树脂吸附工艺（水提药液盐酸调pH至2，经AB-8型大孔树脂吸附，60%乙醇4倍量洗脱）。对丹参的超临界CO2萃取-大孔树脂吸附联用工艺与传统提取工艺进行了分别探讨，以丹参中的丹参酮和丹酚酸B的提取率为考察指标，比较了有效成分的含量，并比较了两种工艺的得膏率。结果：丹参的超临界CO2萃取-大孔树脂吸附工艺得膏率为6

2、.2%,大大低于传统提取工艺30%的得膏率；前者丹参酮的提取率达到80%以上，后者只有40%左右；两种工艺丹酚酸B的提取率相近，均为80%左右。结论：采纳超临界CO2萃取-大孔树脂吸附联用工艺可以有效富集有效部位,提高制剂的载药量。 关键词：丹参；传统提取工艺；超临界CO2萃取-大孔树脂联用工艺；比较探讨 中图分类号：R285 文献标识码：A 文章编号：1673-7717（2007）04-0736-03 丹参系唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎，具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦等功效。其主要有效成分为水溶性的酚酸类和脂溶性的二萜类物质1。其水溶性酚酸类

3、包括丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、迷迭香酸、丹参素、原儿茶醛等，药理探讨表明丹参酚酸类具有抗脂质过氧化和清除自由基作用，其中丹酚酸B是含量最高的成分，最具有代表性。脂溶性有效成分主要为丹参酮、隐丹参酮、丹参酮，它们均具有自然抗氧化、抗动脉粥样硬化、降低心肌耗氧量及抗菌消炎等作用，其中丹参酮是含量最高的代表性成分。 丹参的传统提取方法有乙醇回流法和水煎煮法等2。试验中对丹参的超临界CO2萃取大孔树脂吸附工艺与传统提取工艺进行了比较，以丹参中的丹参酮和丹酚酸B为考察指标，比较了有效成分的含量，并比较了两种工艺的得膏率。传统提取工艺是95%乙醇回流提取，50%乙醇回流提取和水煎煮，这样可以逐级提取丹

4、参中脂溶性成分和水溶性成分，但提取受热时间长，丹参酮破坏较多，且提取得膏率高，影响制剂载药量。超临界CO2萃取其脂溶性成分，工艺简洁、萃取时间短，操作温度接近室温，丹参酮几乎不发生降解；对其超临界CO2萃取所得药渣采纳水提取-大孔树脂吸附工艺,提取其水溶性成分，可以“去粗存精”,有效富集有效部位,提高制剂载药量，尤其适用于片剂、胶囊剂等的制备。 1仪器与材料 丹参药材（购于安徽亳州药材市场，经鉴定），丹参酮A比照品（中国药品生物制品检定所），丹酚酸B比照品（中国药品生物制品检定所），乙腈为色谱纯（ CALEDON LABORATORILES LTD），甲醇为色谱纯（淮阴精细化工探讨院所），水为

5、重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。 HA-9508型超临界萃取装置(江苏南通华安超临界提取设备公司),CO2气体为食品级(南京气体厂),Waters510型高效液相色谱,486型UV检测器。 2有效成分的测定 2.1丹参酮A的测定 2.1.1色谱条件3色谱柱：ChromasilC18柱；流淌相：甲醇-水(7525)；体积流量：1.0mL/min；检测波长：270nm；柱温：30；进样量：5L。丹参酮A保留时间约为37.0min,其它成分不影响。色谱图见图1。 2.1.2线性关系考察精密称取于60干燥至恒重的丹参酮A比照品1.12mg，置于10mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度,制成丹参酮A标准贮备液（

6、112g/mL）。采纳逐级稀释法再分别配成3.5g/mL、7g/mL、14g/mL、28g/mL、56g/mL的系列比照品液，分别吸取上述溶液5L进样，测定，以峰面积为纵坐标（Y），比照品量（g/mL）为横坐标（X），绘制标准曲线，得回来方程： Y(1.307104)X(5.021)； R1.0000。丹参酮A在3.556g/mL时峰面积与其质量浓度具有良好的线性关系。 2.1.3供试品溶液的制备丹参药材供试品溶液的制备3：取丹参药材粉末（过三号筛）约0.3g，精密称定，置具塞锥型瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，

7、即得。超临界萃取物供试品溶液的制备：取经真空干燥后的萃取物6mg,精密称定，置50mL量瓶中，加甲醇超声溶解,稀释至刻度,摇匀,即得。 2.2丹酚酸B的测定 2.2.1色谱条件3色谱柱:ChromasilC18柱；流淌相：甲醇-乙腈-甲酸-水(3010159)；体积流量：1.0mL/min；检测波长：286nm；柱温：30；进样量：5L。丹酚酸B保留时间约为9.8min,其它成分不影响。色谱图见图2。 2.2.2线性关系考察精密称取于60干燥至恒重的丹酚酸B比照品4.28mg，置于10mL容量瓶中，加70%甲醇稀释至刻度,制成丹酚酸B标准贮备液（428g/mL）。采纳逐级稀释法再分别配成13.

8、375g/mL、26.75g/mL、53.5g/mL、107g/mL、214g/mL的系列比照品液，分别吸取上述溶液5L进样，测定，以峰面积为纵坐标（Y），比照品量（g/mL）为横坐标（X），绘制标准曲线，得回来方程：Y4.3736X-17.535； R1.0000。丹酚酸B在13.375214g/mL时峰面积与其质量浓度具有良好的线性关系。 2.2.3供试品溶液的制备丹参药材供试品溶液的制备3：取丹参药材粉末（过三号筛）约0.2g，精密称定，置具塞锥型瓶中，精密加入75%甲醇50mL，称定重量，加热回流1h，取出，放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。大孔

9、吸附树脂精制物供试品溶液的制备：取丹参大孔吸附树脂精制干燥物10mg,精密称定,置于50mL量瓶中,加60%乙醇超声溶解,稀释至刻度,即得。 3提取工艺的设计 3.1传统提取工艺 取丹参2000g，按文献中方法4提取得到浸膏，减压干燥（60），称定质量，计算得膏率；HPLC法测定其中丹参酮和丹酚酸B的含量，计算丹参酮和丹酚酸B的提取率。 3.2超临界CO2萃取-大孔树脂吸附工艺 3.2.1超临界CO2萃取工艺5-6取丹参药材细粉500g,装入超临界CO2萃取罐,夹带剂为1000mL 95%的乙醇，20MPa、45提取1h,收集萃取液,回收乙醇，浓缩，浓缩后所得物经真空干燥（60），得萃取物，称

10、定质量。HPLC法测定其中丹参酮的含量，计算丹参酮的提取率。 3.2.2药渣的大孔树脂精制工艺7-8上柱液的制备9：取丹参超临界萃取药渣100g,加水回流提取两次，第1次加11倍量水回流提取2h，100目滤过；第2次加11倍量水回流提取1.5h，100目滤过，合并两次水提液，离心，取上清液，加10%的盐酸调pH值至2。动态吸附的考察：取已预处理的AB-8型大孔树脂60mL(树脂干重7.5g),湿法装柱,溶液以1mL/min的速度上柱,收集过柱流出液,每50mL收集1份,结果确定0600mL药液为基本吸附区域，相当于最大上样量以丹酚酸B计为80.48mg/g干树脂。洗脱溶媒的考察：丹参提取液依法

11、上柱，分别以4倍柱体积的20%，40%，60%，80%，95%乙醇洗脱树脂柱，结果表明,60%乙醇可将95%以上的丹酚酸B洗脱下来。洗脱溶媒用量的考察：丹参提取液依法上柱，以60%乙醇洗脱树脂柱，每1倍柱体积收集1份,结果表明,4倍柱体积可洗脱95%以上吸附的丹酚酸B。重复试验：取丹参超临界萃取药渣200g,按3.2.2.1项下方法提取得到上柱液，药液上大孔吸附树脂柱,水洗至多糖的反应为阴性后,以4倍柱体积60%乙醇洗脱,合并洗脱液,回收乙醇,减压干燥（60）,称定质量,与超临界萃取物合并，计算得膏率；HPLC法测定其中丹酚酸B的含量，计算丹酚酸B的提取率。 3.3试验结果 两种提取工艺的试验

12、结果见表1。 表1丹参的传统提取工艺与超临界CO2 萃取大孔树脂联用工艺的比较（） 提取工艺得膏率丹参酮提取率丹酚酸B提取率 4探讨 超临界CO2萃取工艺主要提取小极性成分，大孔树脂吸附工艺主要提取大极性成分，丹参经2种工艺提取后，整个极性段的有效成分能得到较全面的提取。采纳SFE-CO2萃取丹参中丹参酮，提取率达到80%以上，而采纳传统提取工艺，丹参酮提取率只有40%左右；超临界CO2萃取所得药渣采纳水提取-大孔树脂精制工艺提取丹参中水溶性成分，以单酚酸B的提取率为考察指标，与传统提取工艺相比较，两者的提取率差不多，均为80%左右，但该联合工艺得膏率仅为6.2%,大大低于传统水提或醇提工艺30%的得膏率,采纳大孔树脂精制工艺，可以保留药材中有效成分,去除杂质,提高制剂的载药量。 本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文。