轮状病毒感染.docx

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1、轮状病毒感染 摘 要 目的：通过分子流行病学调查，探讨酒泉地区婴幼儿轮状病毒(RV)腹泻的分型特点。方法：采纳酶联免疫吸附试验(ELISA)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)，对2001年11月2002年12月酒泉地区收集的324例婴幼儿腹泻粪便标本中的204份进行轮状病毒病原检测，并对阳性标本进行分型。结果：ELISA法RV阳性率为54.9%，阳性率与性别无关。不同年龄段的感染率以718个月年龄段最高，但各年龄段间差异无显著性意义。不同月份的感染率差异具有显著性意义，发病高峰在2001年11、12月份和2002年10、11月份。在ELISA阳性标本中RT-PCR法检出G3者50例，G1者

2、16例、G2者6例，G9者2例，G3与G1混合感染6例，G3与G2混合感染2例，30例未能分型。G分型阳性标本中检出P8型24例，P4型14例，未发觉P6、P9、P10。结论：轮状病毒是酒泉地区婴幼儿非细菌性腹泻的主要病原，其流行的主要血清型为G3型及G1型。本次探讨结果从分子水平初步揭示了酒泉地区轮状病毒的流行状况，为轮状病毒疫苗在该地区的应用供应了流行病学资料。 关键词 腹泻 婴幼儿 轮状病毒 分子流行病学 基因型 资料和方法 2001年11月2002年12月共采集酒泉市人民医院儿科门诊和住院部婴幼儿腹泻粪便标本324例，置-70保存备用。采纳SPSS 11.0软件随机抽样选取204例标本

3、进行检测。 用ELISA法检测RV抗原，采纳IDEIATM Rotavirus试剂盒，购自英国DakoCytomation Ltd，按说明书操作。 用RT-PCR法对RV病毒株进行血清株与基因型的鉴定，Taq DNA聚合酶和AMV逆转录酶购自美国Promega Corporation；RNA酶抑制剂(RNasin)购自宝生物工程(大连)有限公司；TRIZOL购自Molecular Research Center Inc；dNTPs购自sbs赛百盛公司；DNA Maker DL 2,000购自宝生物工程(大连)有限公司。采纳PTC-100TM PCR仪(美国MJ RESEARCH公司)进行PCR

4、反应。用TRIZOL提取RV核酸。先逆转录合成病毒cDNA，后巢式PCR对RV标本进行分型，方法见文献1。 每批分别用已测序证明的粪便标本作为阳性和阴性比照。 统计学方法：采纳SPSS 11.0进行统计，计量资料用均数标准差表示，两组比较采纳非配对t检验，计数资料采纳X2检验。 结 果 RV腹泻的年龄分布：本探讨共采集酒泉市人民医院就诊婴幼儿腹泻粪便标本324例，电脑随机抽样选取204例标本(年龄11.287.76个月)进行检测，ELISA法检测RV阳性112例，阳性率为54.9。其中住院部患儿34例，门诊78例；男68例(年龄11.467.54个月)，女41例(年龄11.496.52个月)，

5、经非配对t检验显示两组间年龄差异无显著性意义(P0.05)，经X2检验显示RV阳性率也与性别无关(P0.05)。在所检出的112份RV阳性标本中，RV腹泻年龄范围224个月，平均11.167.21个月；在不同年龄段中以718个月年龄段RV阳性率最高，为62.07%72.73%，但经Pearson Chi-square检验显示不同年龄段间的阳性率差异无显著性意义 (P0.05)。 RV腹泻的流行季节：从连续13个月收集的204例腹泻患儿每月轮状病毒阳性检出率可见，酒泉地区婴幼儿轮状病毒腹泻全年均有发病，经X2检验显示不同月份的阳性检出率差异具有显著性意义 (P1,2，说明RV感染存在明显的地域差

6、别。酒泉地区在此探讨期间型别主要集中在G3型，其次为G1型。由于轮状病毒型别繁多，相互之间的交叉爱护作用差，因此在研制疫苗时必需考虑到涵盖相应的型别。 不同方法检测轮状病毒的比较：在进行VP7和VP4基因分型时，有相当一部分ELISA阳性标本，在做RT-PCR扩增时结果为阴性。在扩增VP7或VP4时都有这种现象，考虑部分是因为在处理过程中RNA丢失，或非特异性抑制物处理不完全，或部分标本中病毒dsRNA降解和含量太少，因此RT-PCR不能对部分RV dsRNA进行扩增。假如单纯是为了作出轮状病毒感染的诊断，用ELISA法检测RV病毒抗原即可。ELISA法具有便利、价廉的优点，但由于粪样中成分繁

7、杂，存在其他抗原成分，干扰轮状病毒抗原抗体的结合，所以结果有肯定的误差，可能出现假阳性或假阴性。本探讨中ELISA法检测的阳性率最高，但和RT-PCR法检测结果不符的例数也较多，证明了这点。RT-PCR具有很高的灵敏性和特异性，Gentsch3报道可检测101000个病毒颗粒，但技术要求高，设备昂贵，基层医院难以普及。将ELISA和RT-PCR结合起来，可以对所检测的轮状病毒有一个较全面的判定。 分子流行病学特点的意义：近20年在我国长春、大同、郑州、广州、上海、北京等城市不同时期的调查结果显示2,4，我国流行的轮状病毒血清型虽有所改变，但始终以G1型为主，占67.1%83.4%。我省兰州地区

8、从20012004年间流行的轮状病毒血清型则以G3型为主（61.44%），其次为G2型。国外文献报道近年来轮状病毒呈现新的分子流行病学特点，G3型轮状病毒感染呈上升趋势，部分地区G3占主导地位。本探讨结果及以上资料表明，轮状病毒感染在我国的流行也不是单一模式，这些资料为临床诊治和针对性地探讨HRV疫苗供应了重要的参考资料。 参考文献 1 方肇寅，晋圣瑾，秦树民，等PCR方法用于我国A组轮状病毒的分型探讨病毒学报，1994，10：316-321 2 袁丽娟，钱渊，刘军，等.北京等我国四个地区婴幼儿腹泻轮状病毒VP4及VP7型别的探讨病毒学报，1994，10：137-144 3 Gentsch JR，et al.Identification of group A rotavirus gene 4 types by polymerase china reaction.J Clin Microbiol，1992，30：1365-1373 4 曾玫，朱启，张又，等上海地区婴幼儿腹泻的轮状病毒分子流行病学探讨.中华儿科杂志，2004，42(1)：10-15