mg118遗传疾病的诊断doc-第18章遗传疾病的诊断2963.docx

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1、Evaluation Warning: The document was created with Spire.Doc for .NET.第十八章遗传病的诊断遗传病诊断是一项复杂的工作，需要多学科的密切配合。遗传病的诊断包括常规诊断和特殊诊断。常规诊断指与一般疾病相同的诊断方法，特殊诊断是指采用遗传学方法，包括染色体检查，家系分析等，是遗传病确诊的关键。目前，临床上遗传病诊断包括：临症诊断、症状前诊断（presymptomatic diagnosis）、出生前诊断和植入前诊断。第一节 临临症诊断断临症诊断（ssympptommatiic ddiaggnossis）是根据患者的各种临床表现进行分

2、析，确诊并判断遗传方式，是遗传病诊断的主要内容。一、病史、症症状和体体征（一）病史史遗传病大多多有家族族聚集倾倾向，因因此病史史的采集集非常重重要。在在采集病病史时要要准确、详详尽。另另外还要要收集病病人的家家族史、婚婚姻史和和生育史史等相关关信息。遗传病史的采集比其他疾病更重要，因为遗传病的家族聚集性和其传递的规律性决定了病史采集可能会获得更有用的信息，对后续的分析工作可能会有很大的帮助。病史采集的关键是材料的真实性和完整性。病史采集，主要是通过采集对象的描述和有关个体的病案查询工作来完成。实践中还应注意不同个体描述是否可以相互印证，以确定资料的可信度。对于发病原因、过程、时间、地点、治疗情

3、况等也应详细记录。（二）症状状与体症症遗传病除了了具有其其他疾病病相同的的体征外外，还有有特异性性征候群，这这些都为为初步诊诊断提供供线索。大大多遗传传病在婴婴儿和儿儿童期有有相应的的体征和和症状，如如Dowwn综合合征患儿儿的特殊殊面容和和智力低低下等，当然还还需要通通过染色色体检查查进一步步确诊。二、家系分分析根据对患者者及家族族成员发发病情况况的调查查结果绘绘制系谱谱，确定定单基因因病或多多基因病病，遗传传方式等等。系谱谱分析时时应注意：系谱的的完整性性和准确确性；单单基因遗遗传病的的分析非非常有用用，常染染色体显显性遗传传病、常常染色体体隐性遗遗传病，XX连锁显显性遗传传病，XX连锁隐

4、隐性遗传传病，YY连锁遗遗传病。单基因遗传分析中要注意外显不全，延迟显性，显、隐性的相对性，新的突变产生，遗传印记，动态突变，以及遗传异质性等问题，避免判断上的错误和发病风险的错误估计。线粒体遗传传病通过过母系遗遗传，主主要特点点是晚发发，进行行性。多多基因病病是一大大类常见见的疾病病，有家家族聚集集倾向，但但不遵循循孟德尔尔分离规规律。以往被认为为是多基基因病的的一些疾疾病，一一部分被被证明是是遗传异异质性所所致，即即受单个个主基因因决定，如如癫痫，先先天性心心脏病和和先天性性巨结肠肠等。三、细胞遗遗传学检检查细胞遗传学学检查染染色体检检查或核核型分析析，是辅辅助诊断断和对染染色体病病确诊的

5、的主要方方法。随随着显带带技术的的应用，特特别是高高分辨染染色体显显带技术术的发展展，能够够更准确确地发现现和确定定更多的的染色体体数目和和结构异异常，并并发现新新的微小小畸变综综合征。利用染色体显带技术，可以对许多疾病在染色体水平找到原发性改变，如肿瘤，发育缺陷、心血管疾病等，把疾病相关基因确定在一个较小的范围内。染色体原位位杂交是是应用标标记的DDNA片片段（探探针）与与玻片标标本上的的细胞、染染色体，以以及间期期的DNNA或RRNA杂杂交，研研究核酸酸片段的的位置、相相互关系系的技术术。一般般用生物物素、地地高辛等等标记探探针，原原位杂交交后，用用荧光染染料标记记的生物物素亲和和蛋白、抗

6、抗亲和蛋蛋白的抗抗体进行行免疫检检测和杂杂交信号号放大，使使探针杂杂交的区区域发出出荧光，这这种原位位杂交称称荧光原原位杂交交（FIISH），灵灵敏度高高，特异异性强，可可以检测测染色体体微小结结构异常常，也可可应用在在基因定定位和基基因制图图等领域域。另外外还有双双色FIISH、多多色FIISH和和染色体体涂染等等方法，大大大提高高了染色色体畸变变的检出出率和准准确性。染色体检查查标本主主要有外外周血，羊羊水中胎胎儿脱落落细胞和和胎儿的的脐带血血，病人人的骨髓髓、胸腹腹水、手手术切除除的病理理组织，培养细胞等。染色体检查查适应症症包括：明明显智力力发育不不全者；生长迟迟缓或伴伴有其他他先天畸

7、畸形者；夫妻之之一有染染色体异异常，如如平衡异异位，嵌嵌合体等等；家族族中已有有染色体体异常或或先天畸畸形的个个体；多多发性流流产妇女女及其丈丈夫；原发性性闭经和和女性不不育症；无精子子症和不不育的男男性；两两性畸形形者；疑疑为先天天愚型的的患儿及及其父母母；原因因不明的的智力低低下并伴伴有大耳耳、大睾睾丸和多多动症者者；355岁以上上的高龄龄孕妇。四、生化检检查生化检查是是遗传病病诊断的的重要辅辅助手段段，主要要是对由由于基因因突变所所引起的的酶和蛋蛋白质的的定量和和定性分分析，对对单基因因病和先先天性代代谢病进进行诊断断，包括括一般的的临床生生化检验验和针对对遗传病病的特异异检查。目前已知

8、的的多种遗遗传性代代谢病中中，大多多数为酶酶缺陷。可可由于基基因突变变、基因因缺失、基基因表达达异常或或翻译后后加工修修饰缺陷陷所致。目目前临床床主要对对酶活性性和代谢谢产物进进行检测测，以血血液和尿尿液为主主要检材材，有的的可以制制成滤纸纸片和通通过显色色反应进进行检测测，随着着对遗传传病发病病机理认认识的深深入和检检测方法法的改进进，检测测将更加加简便、快快捷。第二节 出生前前诊断出生前诊断断或称产前诊诊断（pprennataal ddiaggnossis）是采用羊膜穿刺术或绒毛取样等技术，对羊水、羊水细胞和绒毛进行遗传学检验，对胎儿的染色体、基因进行分析诊断，是预防遗传病患儿出生的有效手

9、段，越来越广泛的被应用。一、出生前前诊断对对象根据遗传病病的危害害程度和和发病率率，可将将出生前前诊断的的对象排排列如下下：夫妇之之一有染染色体畸畸变，特特别是平平衡易位位携带者者，或者者夫妇染染色体正正常，但但生育过染染色体病病患儿的的孕妇；35岁岁以上的的孕妇；夫妇之之一有开开放性神神经管畸畸形，或或生育过这这种畸形形患儿的的孕妇；夫妇之之一有先先天性代代谢缺陷陷，或生生育过这这种患儿儿的孕妇妇；X连锁锁遗传病病致病基因因携带者者孕妇；有习惯性性流产史史的孕妇妇；羊水过过多的孕孕妇；夫妇之之一有致致畸因素素接触史史的孕妇妇；有遗传传病家族族史，又又系近亲亲结婚的孕孕妇。但但应当注注意，已出

10、现先先兆流产产、妊娠娠时间过过长、有有出血倾倾向者的的孕妇不不宜做产产前诊断断。二、出生前前诊断的的方法（一）B超超 B超是一种种安全无无创的检测测方法，能能够详细细检查胎胎儿的外外部形态态和内部部结构，使使许多遗遗传性疾疾病得到到早期诊诊断。可可以诊断断的疾病病有，神神经管缺缺陷、脑脑积水、无无脑畸形形；唇裂、腭腭裂，颈颈部淋巴巴管肿瘤瘤；先天天性心脏脏病，支支气管、肺肺发育异异常、胸腔积积液；其其他的异异常，如如先天性性单侧肾缺缺如，先先天性幽幽门狭窄窄、先天天性巨结结肠等。（二）羊膜膜穿刺羊膜穿刺是是在B超超的监视视下，用用消毒的的注射器器抽取胎胎儿羊水水（图118-11）。可可以对抽抽

11、取的羊羊水及其其中的胎胎儿脱落落细胞进进行细胞胞培养，分分析染色色体，以及生化化和基因因的检测测。如羊水中中甲胎蛋蛋白浓度度过高时时，提示示胎儿可能能有无脑脑、开放放性脊柱柱裂、脊脊髓脊膜膜膨出和和脑积水水等异常常。羊膜穿穿刺一般般在妊娠娠1620周周进行，流流产的风风险相对对较小。图18-11 羊羊膜穿刺刺示意图图（三）绒毛毛取样法法绒毛取样一一般在妊妊娠79周进进行，是是妊娠早早期诊断断方法。也也是在B超超监视下下，用特特制的取取样器，从阴道经宫颈进入子宫，沿子宫壁到达取样部位，用内管吸取绒毛（图18-2）。绒毛取样的优点是检查时间早，需要作出选择性流产时，给孕妇带来的损伤和痛苦较小。缺点

12、是经子宫颈取样标本容易被污染，胎儿和母体感染和操作不便，引起流产的风险是羊膜穿刺的两倍。羊膜穿刺法法和绒毛毛取样可可用来诊诊断染色色体病，遗遗传代谢谢病，胎胎儿性别别鉴定，所所有可用用胚胎或或胎儿DDNA检检测的疾疾病，另另外，开开放性神神经管缺缺陷只能能采用羊羊膜穿刺刺术诊断断。图18-22 绒毛毛取样法法示意图图（四）脐带带穿刺术术脐带穿刺术术是在BB超的监监视下，用用细针经经腹壁、子子宫进入入胎儿脐脐带抽取取胎儿血血液。本本方法取取样最好好在妊娠娠18周周，常用用于因错错过绒毛毛取样或或羊膜穿穿刺最佳佳时机或或羊水检检查失败败的补救救措施，还还可以检检测胎儿儿的血液液系统疾疾病，先先天性

13、免免疫缺陷陷，某些些单基因因病。（五）胎儿儿镜检查查又称羊膜腔腔镜或宫宫腔镜检检查，它可在进进入羊膜膜腔后，直接观察胎儿的外形、性别和发育状况，是否有畸形，还可以同时抽取羊水或胎血进行检查，或进行宫内治疗。因此，理论上这是一种最理想的方法。但由于操作困难，容易引起多种并发症，目前还不能被广泛采用。胎儿镜检查的最佳时间是妊娠1820周，可以诊断大疱性表皮松懈症及某些皮肤病。（六）分离离孕妇外外周血中中的胎儿儿细胞目前用于出出生前诊诊断材料料的获得得对于胎胎儿和母母体都是是创伤性性的，存存在流产产和感染染等风险险。从220世纪纪90年年代末，开开始探索索一种无无创伤性性的出生生前诊断断方法。利利用

14、妊娠娠期少量量胎儿细细胞可以以通过胎胎盘进入入母体血血液中，采采用流式式细胞仪仪分离技技术，磁磁激活细细胞分选选技术，免免疫磁珠珠法，显显微操作作分选法法，分离离胎儿细细胞。用用这些方方法富集集的胎儿儿细胞很很少，需需要用高高灵敏的的技术方方法进行行下一步步分析检检测，目目前常用用的方法法是PCCR。（七）植入入前诊断断随着人工受受精，试试管婴儿儿和胚胎胎移植技技术的开开展，以以及单个个细胞基基因诊断断技术的的应用，目目前正探探索在胚胚胎植入入前诊断断（pree-impplanntattionn diiagnnosiisi）。在受精精后6天天胚胎着着床前，通过显微操作技术取出一个细胞，应用PC

15、R，FISH等技术进行特定基因和染色体畸变的检测，将人类的遗传缺陷掌控在最早阶段，这是遗传病产前诊断的重大突破。Indiccatiionss foor PPrennataal DDiaggnossis1.Advvancced matternnal agee (oofteen aat lleasst 335 yyearrs aat tthe exppectted datte oof cconffineemennt): Iff thheree iss noo prreviiouss hiistoory of a cchroomossomee abbnorrmallityy, iit iis oon

16、lyy inn thhe aadvaanceed mmateernaal aage rannge thaat tthe rissk oof aa chhrommosoomallly abnnormmal fettus excceedds tthe rissk oof mmisccarrriagge ddue to thee prroceedurre iitseelf. Thhe aage cuttofff ussed varriess soomewwhatt ammongg diiffeerennt pprennataal ggeneeticcs ccentterss buut iis uus

17、uaallyy att leeastt 311 too 322 yeearss off agge.2.Preevioous chiild witth aa dee noovo chrromoosomme aabnoormaalitty: If thee paarennts of a cchilld wwithh a chrromoosomme aabnoormaalitty hhavee noormaal cchroomossomees tthemmsellvess, ttherre mmay nevvertthellesss bee a rissk oof tthe samme aabnoo

18、rmaalitty iin aa suubseequeent chiild. Foor eexammplee, iif aa woomann unnderr 300 yeearss off agge hhas a cchilld wwithh Doown synndroome, thhe rrecuurreencee riisk is aboout 1/1100, inn coompaarisson witth aa geenerral poppulaatioon rriskk off abboutt 1/8000. PPrennataal mmosaaiciism is posssibble

19、 expplannatiion of thee inncreeaseed rriskk.3.Preesennce of strructturaal cchroomossomee abbnorrmallityy inn onne oof tthe parrentts: Herre tthe rissk oof aan aabnoormaal cchilld iis uusuaallyy 200% oor llesss, bbut it mayy bee hiigheer. 4.Fammilyy hiistoory of somme ggeneeticc deefecct tthatt maay

20、bbe ddiaggnossed or rulled outt byy biiochhemiicall orr DNNA aanallysiis: Mosst oof tthesse ddisoordeers aree caauseed bby ssinggle-genne ddefeectss annd hhavee riiskss off 255% oor 550% in sibbs oof aaffeecteed cchilldreen. Casses in whiich thee paarennts havve bbeenn diiagnnoseed aas ccarrrierrs a

21、afteer aa poopullatiion scrreenningg teest rattherr thhan aftter thee biirthh off ann afffecctedd chhildd arre aalsoo inn thhis cattegoory. Evven befforee DNNA aanallysiss ennterred thee piictuure, nuumerrouss biiochhemiicall diisorrderrs ccoulld bbe iidenntiffiedd prrenaatallly, annd DDNA anaalyssi

22、s hass grreattly inccreaasedd thhe nnumbber.5.Fammilyy hiistoory of an X-llinkked dissordder forr whhichh thheree iss noo sppeciificc prrenaatall diiagnnosttic tesst: Wheen ttherre iis nno aalteernaativve mmethhod, thhe ppareentss maay uuse fettal sexx deeterrminnatiion to hellp tthemm deecidde wwhe

23、ttherr too coontiinuee orr teermiinatte tthe preegnaancyy. WWithh thhe ddeveeloppmennt oof DDNA anaalyssis forr prrenaatall diiagnnosiis oof XX-liinkeed ddisoordeers succh aas DDuchhennne mmuscculaar ddysttropphy andd heemopphillia A aand B, firrst thee feetall seex iis ddeteermiinedd, aand theen DD

24、NA anaalyssis is perrforrmedd iff thhe ffetuus iis mmalee.6.Rissk oof aa neeuraal ttubee deefecct (NTDD): Onlly ffirsst-aand seccondd-deegreee rrelaativves of NTDD paatieentss arre eeliggiblle ffor amnnioccenttesiis bbecaausee off a siggnifficaantlly iincrreassed rissk oof hhaviing a cchilld wwithh

25、ann NTTD, butt maany fettusees wwithh oppen NTDDs ccan noww bee deetecctedd byy ottherr teestss.第三节 基基因诊断断利用分子生生物学的的技术，检检测体内内DNAA或RNNA结构构或表达达水平变变化，从从而对疾疾病做出诊断的方方法，称称为基因因诊断（ggenee diiagnnosiis），通常又称称为分子子诊断（mmoleecullar diaagnoosiss）。基因诊诊断始于于19778年，应用限制性酶切长度多态性（RFLP）技术检测胎儿镰状细胞贫血症。 基因诊断技技术已逐逐步从实实验研究究进入

26、临临床应用用，不仅仅适用于于遗传性性疾病，而而且已扩扩展到一一些感染染性疾病病、肿瘤瘤的诊断断。基因诊断具具有如下下特点：以特定定基因为为目标，检检测基因因的变化化，特异异性性强强；采用用分子杂杂交技术术和PCCR技术术具有信信号放大大作用，用用微量样样品即可可进行诊诊断，灵灵敏度高高；在疾病病尚无出出现临床床表现前前，胎儿儿出生前前的产前前诊断，以以及特定定人群的的筛查等等，应用用广泛；检测样样品获得得便利，不受个体发育阶段性和基因表达组织特异性的限制。 需要说明的的是，由由于基因因突变的的类型多多种多样样，除了了缺失、倒倒位、点点突变、动态突变可以进行基因的检测外，大多数基因突变的分析复杂

27、而繁琐，有一定的难度。一、基因诊诊断的主主要技术术方法基因诊断主主要采用用核酸分分子杂交交、PCCR和DNAA序列测测定等技技术。（一）核酸酸分子杂杂交核酸杂交技技术是在基因因诊断中中，用于于检测样样品中是是否存在在相应的的基因以以及相应应基因表表达状态态等等。其其中Soouthhernn印迹法主主要用于于基因组组DNAA的分析析，Norrtheern印印迹法用用于检测测样品中中RNAA的种类类和含量量。1. 斑点点印迹杂杂交 把待待检测的的核酸样样品点在在NC膜上，变变性后与与标记的的探针进进行结合合反应，经经过显色色和显影影后检测测杂交信信号的强强度，与与对照样样品比较较后确定定所测核核酸

28、量的的高低。根根据NCC膜上所所点核酸酸样品的的种类不不同，分分为DNNA ddot bloottiing和和 RNNA ddot bloottiing。点点样方式式如采用用狭缝点点样器点点样，得得到的线线状杂交交信号，称称狭线印印迹法。2. 原位位杂交 把把组织或或细胞样样品经过过适当处处理，用用探针与与核酸进进行杂交交。这种种方法不不需要提提取核酸酸，可以以确定被被检核酸酸在组织织或细胞胞，以及及中期染染色体中中的定位位，具有有重要的的生物学学和病理理学意义义。3. PCCR-AASO ASOO为等位位基因特特异性寡寡核苷酸酸杂交法法（alleele-speeciffic oliigonn

29、uclleottidee，ASSO）的的简称，是基于于核酸杂杂交的一一种方法法。根据据已知基基因突变变位点的的碱基序序列，设设计和制制备与野野生型或或突变型型基因序序列互补补的两种种探针，分分别与被被检测者者样品中中的DNNA分子子进行杂杂交，根根据样品品与两种种探针杂杂交信号号的强弱弱，确定定是否存存在基因因突变，判判断被检检者是突突变基因因的纯合合体或杂杂合体（图图18-3）。图18-33ASSO探针针杂交原原理示意意图4基因芯芯片技术术基因因芯片技技术是近近年来发发展十分分迅速的的大规模模、高通通量分子子检测技技术。基基本过程程是将许许多特定定的寡核核苷酸片片段或基基因片段段作为探探针，

30、有有规律地地排列固固定于支支持物上上，如玻片片、硅片片或尼龙龙膜等，形形成矩阵阵点。现现在的技技术可以以做到在在1cmm2上排列列成千上上万个“点”。样品品DNAA/RNNA通过过PCRR扩增、体体外转录录等技术术掺入荧荧光标记记分子，然后与待测样本进行杂交反应，再通过激光共聚焦荧光显微镜对芯片进行扫描，获取信息，电脑系统分析处理所得资料，对上千种甚至更多基因的表达水平、突变和多态性进行快速、准确的检测。基因芯片可可以进行行微量化化、大规规模、并并行化、高高度自动动化地处处理有价价值的生生物样品品，精细细地研究究各种状状态下分分子结构构变异，了了解组织织细胞基基因表达达情况。既可检测基因的多态

31、性，又能检测基因突变，特别适用于多个基因、多个位点的同时检测。这一技术目前处于发展和优化阶段，已经有多种针对遗传性疾病、肿瘤检测的基因芯片用于临床诊断。（二）其它它常用的的技术1. PCCR-RRFLPP 将聚合合酶链反反应（PPCR）与RFLP方法结合的一种检测技术。由于DNA序列的差异，造成了内切酶位点的变化，或是新酶切位点的产生；或是原酶切位点的消失等。通过酶切后电泳图谱的判断，确定检测结果。该方法包括PCR：利用一对或数对特异性引物，将目标DNA扩增；酶切：利用某些限制性内切酶消化PCR产物，如PCR产物中含有相应的酶切位点序列，DNA链则被切开；利用琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶分离酶切

32、后的PCR产物，根据电泳图谱判断结果。如果某DNNA序列列已经全全部确定定，则可可以通过过计算机机辅助设设计特异异性PCCR引物物；扩增增DNAA片段和进进行酶切切位点分分析，该该方法简简便易行行，精确确度也很很高。但但是该方方法也有有一定的的局限性性，如果果多态性性位点的的DNAA序列没没有相应应的内切切酶，则则该方法法不适用用。2. PCCR-SSSCPP 单链链构象多多态性（sinnglee-sttrannd cconfformmatiion pollymoorphhismm，SSSCP），是一种检测核酸序列中点突变的技术。当双链DNA变性为两条单链后，会在中性条件下形成各自特定的空间构

33、象，因而在电泳时将在不同的位置上出现不同的电泳条带。如果DNA序列发生改变，甚至仅有一个碱基变化时，空间构象有可能发生改变，电泳时表现出不同的迁移率，被检DNA电泳条带与已知序列的对照DNA电泳条带不一致，出现新生条带时，表明有突变存在（图18-4）。该方法与PCR联合应用，因此称PCR-SSCP，主要用于突变分子的初步筛查。图18-44 SSSCPP原理示示意图 33. RRT-PPCR 逆转转录PCCR以mRRNA为为模板合合成cDDNA，再再进行PPCR，用用于基因因表达水水平的检检测和分分析。 44. Wessterrn 印印迹技术术 Wessterrn 印印迹技术术是检测测特定蛋蛋白

34、质的的方法，可可用于某某种与遗遗传病相相关的蛋蛋白质定定性定量量分析。如如假肥大大型肌营营养不良良（DMMD）患患者基因因缺陷使使肌细胞胞的增强强蛋白（ddysttropphinn）合成成异常，采采用Weesteern 印迹法法检测患患者增强强蛋白，进进行诊断断。二、基因诊诊断技术术的应用用（一）基因因诊断在在遗传病病中的应应用1镰状细细胞贫血血的基因因诊断镰状细细胞贫血血症的基因因突变发发生在b珠珠蛋白基基因内部部，可以用用限制性性内切酶酶Mstt进行检检测。基基于编码码b珠蛋白白链的第66位密码码子由GGAG变为GTG，改变变了限制制性内切切酶Msst的酶切位点点。当酶切切正常人人DNAA

35、和患者者DNAA后再用用标记的的b珠蛋白白基因为为探针作作Souutheern杂杂交时，就就会出现现不同的的DNAA条带。限限制性内内切酶MMst切割的的序列是是CCTTNAGGG（其其中N是是任何一一种核苷苷酸），切切割正常常DNAA产生11.15kb DNAA片段；若切割割患者DDNA时时，形成成1.335kb b珠蛋白白的DNNA片段段，杂合合体则形形成1.15，11.355两个片片段（图图11-7）。2血友病病A的基基因诊断断血友友病A是是X连锁锁隐性遗遗传病，由由于遗传传性凝血血障碍所所致的出出血性疾疾病。该该病是凝凝血因子子（Faactoor，F）基因因的缺陷陷，其中中大范围围的基

36、因因重排（如如缺失、插插入和重重复）只只占5，主要要突变类类型为碱碱基取代代或少数数碱基的的缺失和和插入，这这些突变变产物可可能是不不完整的的、无活活性的或或不稳定定的因子子肽链，导导致临床床症状轻轻重不一一。采用用基因诊诊断方法法可以检检出有部部分基因因缺失的的患者和和女性携携带者，可可进行产产前检查查。对该该基因的的产前诊诊断可以以通过RRFLPP连锁分分析进行行，在基因因的内侧及及旁侧有有多组RRFLPP位点可可供基因因诊断。目目前多采采用PCCR技术术与RFFLP相相结合的的方法，先先用PCCR技术术将包含含突变DDNA的的片段扩扩增出来来，然后后用识别别该位点点的限制制酶来酶酶切，电

37、电泳后直直接检测测多态性性位点的的状态。3. a地地中海贫贫血的基基因诊断断 aa地中海海贫血是是由于aa基因的的缺失造造成的。a链是由两对基因控制的，如果在一条16号染色体上的2个a基因都缺失，称为a0地贫；如果一条16号染色体上的2个基因缺失一个，称为a+地贫，这两种a地贫基因可以组合引起不同的综合征。在基因的两端设计引物，扩增后的片段电泳，可以检测缺失突变，确定被检测者的基因型，对可疑的胎儿进行产前诊断。（二）基因因诊断在在肿瘤中中的应用用肿瘤发生和和发展是是一个多多因素、多多步骤过过程，涉涉及多个个癌基因因的结构构改变和和表达异异常，如如抑癌基因因的缺失和突变等等。基因诊诊断除了了用于

38、肿肿瘤的早早期诊断断外，还还可以对对肿瘤进进行肿瘤瘤的临床床分类、预预后，对对肿瘤高高危人群群的筛选选，指导导个体化化治疗和和预防。1. 肺癌癌 近年年来对肺肺癌的细胞遗遗传学研研究表明明，肺癌癌发生时时常涉及及1，22，3，55，6，99，111，133，177号染色色体的缺缺失，易易位，rras 、mycc、 errb和 srrc癌基基因的扩扩增、突突变，以以及抑癌癌基因RRb 、pp53的的突变或或缺失，应应用PCCR-AASO，PPCR-SSCCP，测测序，以以及FIISH，可可以检测测其基因因突变或或缺失。肺肺癌患者者常存在在rass 、mycc、 errb和 srrc癌基基因的过过

39、表达，因因此可采采用Noorthhernn印迹方方法进行行RNAA检测与与分析，在在基因水水平诊断断肺癌。2. 乳腺腺癌 乳腺癌癌是女性性最常见见肿瘤之之一，癌癌基因nnue与与乳腺癌癌的发生生和预后后密切相相关，表表达产物物为表皮皮生长因因子（EEGF）样样受体，属属于受体体型酪氨氨酸蛋白白激酶（TTPK）家家族成员员。有NNue基基因扩增增的患者者复发和和转移率率高，可可作为乳乳腺癌预预后的一一项重要要指标。采用Southern印迹法，可以检测Nue基因的拷贝数；Northern印迹方法检测Nue基因表达水平，进行定量分析。 3. 大肠肠癌 在肠癌癌癌变的的过程中中存在抑抑癌基因因FAPP

40、（faamilly aadennomaatouus ppolyyposiis）、DCC、p53基因的丢失，p53基因的突变；癌基因K-ras的点突变、C-myc的过量表达等现象。ras基因因突变的的检测可可采用PPCR-ASOO方法进进行，已知raas基因因突变的的热点在在12、113及661密码码子，可可人工合合成位于于待测点点两侧的的引物，分分别扩增增含122、133及611位点的的基因片片段，将将扩增产产物结合合在NCC膜上分分别与相相应的碱碱基突变变特异性性寡核苷苷酸探针针杂交，检检测突变变类型。还可以采用PCR-SSCP方法，对ras基因突变进行初筛，再通过DNA测序检测点突变，简便、准确。p53基因因的缺失失、突变变、失活活是许多多肿瘤发发生的原原因，这这些肿瘤瘤包括成成骨肉瘤瘤、肺癌癌、结（直直）肠癌癌、神经经纤维肉肉瘤。脑脑瘤、乳乳腺癌等等。该基基因的突突变可引引起蛋白白质功能能的突变变，导致致细胞转转化或癌癌变。PPCR法法进行检检测p553突变变热点外外显子55-8，先先扩增外显显子5-8，再再进行突突变位点点的详尽尽分析，甚甚至测序序；或采采用PCCR-SSSCPP方法，然然后测序序。检测测p533基因的突变。（邹邹向阳）18