鱼类的急性毒性实验 (2)幻灯片.ppt

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1、鱼类的急性毒性的急性毒性实验第1页，共18页，编辑于2022年，星期三Company LogoCompany Logo 目的与要求目的与要求 实验原理实验原理 实验材料实验材料3 3 实验步骤实验步骤 实验报告实验报告 注意事项注意事项6 64 41 12 25 5第2页，共18页，编辑于2022年，星期三Company LogoCompany Logo 通过本实验，熟悉和掌握鱼类急性毒性试验的设通过本实验，熟悉和掌握鱼类急性毒性试验的设计、条件、操作步骤，以及试验结果的计算、分析计、条件、操作步骤，以及试验结果的计算、分析和报告等全过程。和报告等全过程。1 1第3页，共18页，编辑于2022

2、年，星期三Company LogoCompany Logo 鱼类对水环境的变化反应十分灵敏，当水体中的污染物达鱼类对水环境的变化反应十分灵敏，当水体中的污染物达到一定程度时，就会引起一系列中毒反应，例如行为异常、生到一定程度时，就会引起一系列中毒反应，例如行为异常、生理功能紊乱、组织细胞病变、直至死亡。在规定的条件下，使理功能紊乱、组织细胞病变、直至死亡。在规定的条件下，使鱼接触含不同浓度受试物的水溶液，实验至少进行鱼接触含不同浓度受试物的水溶液，实验至少进行24h，最好，最好以以96 h为一个实验周期，在为一个实验周期，在24h、48h、72h、96h时记录实验时记录实验鱼的死亡率，确定鱼类

3、死亡鱼的死亡率，确定鱼类死亡50时的受试物浓度。鱼类毒性时的受试物浓度。鱼类毒性试验在研究水污染及水环境质量中占重要地位。通过鱼类试验在研究水污染及水环境质量中占重要地位。通过鱼类急性毒性试验可以评价受试物对水生生物可能产生的影响，急性毒性试验可以评价受试物对水生生物可能产生的影响，以短期暴露效应表明受试物的毒害性。鱼类急性毒性试验以短期暴露效应表明受试物的毒害性。鱼类急性毒性试验不仅用于测定化学物质毒性强度、测定水体污染程度、检不仅用于测定化学物质毒性强度、测定水体污染程度、检查废水处理的有效程度，也为制定水质标准、评价环境质查废水处理的有效程度，也为制定水质标准、评价环境质量和管理废水排放

4、提供环境依据。量和管理废水排放提供环境依据。2 2第4页，共18页，编辑于2022年，星期三Company LogoCompany Logo 1实验鱼的选择与驯养实验鱼的选择与驯养 试验用的鱼必须对毒物敏感，具有一定的代表性，便于试验用的鱼必须对毒物敏感，具有一定的代表性，便于实验条件下饲养，来源丰富，个体健康。我国可采用的试验实验条件下饲养，来源丰富，个体健康。我国可采用的试验鱼有四大养殖淡水鱼（青鱼、草鱼、鲢鱼和鳙鱼）、金鱼、鱼有四大养殖淡水鱼（青鱼、草鱼、鲢鱼和鳙鱼）、金鱼、鲫鱼、野生的食蚊鱼等。本实验选用鲫鱼作为实验鱼。鲫鱼、野生的食蚊鱼等。本实验选用鲫鱼作为实验鱼。在同一实验中要求试

5、验鱼必须同属、同种、同龄，最在同一实验中要求试验鱼必须同属、同种、同龄，最好是当年生。鱼的平均体长以好是当年生。鱼的平均体长以7cm以下为合适。金鱼体短、以下为合适。金鱼体短、身宽，一般以身宽，一般以3cm以下较为合适。同组鱼中最大的体长不以下较为合适。同组鱼中最大的体长不应超过最小的体长的应超过最小的体长的1.5倍。倍。3 3第5页，共18页，编辑于2022年，星期三Company LogoCompany Logo 选用的试验鱼在试验前必须在实验室内经过驯养，使之适应实验选用的试验鱼在试验前必须在实验室内经过驯养，使之适应实验室条件的生活环境和进行健康选择。驯养鱼应该与试验相同水质水温室条件

6、的生活环境和进行健康选择。驯养鱼应该与试验相同水质水温的水体中至少驯养的水体中至少驯养7d，使其适应试验环境，不应长期养殖（，使其适应试验环境，不应长期养殖（2个月）。驯养期间，应每天换水，可每天喂食个月）。驯养期间，应每天换水，可每天喂食1-2次，但在试验次，但在试验前一天应停止喂食，以免试验时，剩余饵料及粪便影响水质。驯养期前一天应停止喂食，以免试验时，剩余饵料及粪便影响水质。驯养期间试验鱼死亡率不得超过间试验鱼死亡率不得超过5，否则，可以认为这批鱼不符合试，否则，可以认为这批鱼不符合试验鱼的要求，应该继续驯养或者重新更换试验鱼进行驯养。验鱼的要求，应该继续驯养或者重新更换试验鱼进行驯养。

7、试验前必须挑选健康的鱼，即选择体色光泽、鱼鳍完整舒展、行试验前必须挑选健康的鱼，即选择体色光泽、鱼鳍完整舒展、行动活泼、逆水性强、大小无太大悬殊、无任何疾病的鱼作为试验鱼。动活泼、逆水性强、大小无太大悬殊、无任何疾病的鱼作为试验鱼。任何畸形鱼、外观上反常态的鱼都不得作试验鱼。任何畸形鱼、外观上反常态的鱼都不得作试验鱼。3 3第6页，共18页，编辑于2022年，星期三Company LogoCompany Logo 2实验仪器设备实验仪器设备 （1）实验容器）实验容器 实验容器一般用玻璃或其他化学惰性材质制成的水族箱或水实验容器一般用玻璃或其他化学惰性材质制成的水族箱或水槽。容器体积可根据试验鱼

8、的体重确定，通常以每升水中鱼的负槽。容器体积可根据试验鱼的体重确定，通常以每升水中鱼的负荷不得超过荷不得超过2g（最好为（最好为1g）。一些小型鱼类幼鱼可选择）。一些小型鱼类幼鱼可选择500mL或或 1000mL烧杯为实验容器。容器的深度必须超过烧杯为实验容器。容器的深度必须超过16cm，水体，水体表面积越大越好。同一实验应采用相同规格和质量的容器。表面积越大越好。同一实验应采用相同规格和质量的容器。为防止鱼类跳出容器，可在容器上加上网罩。实验容器使用为防止鱼类跳出容器，可在容器上加上网罩。实验容器使用后，必须彻底洗净，以除去所有毒性残留物。后，必须彻底洗净，以除去所有毒性残留物。（2）其他）

9、其他 溶解氧测定仪溶解氧测定仪、水硬度计水硬度计、温度控制仪温度控制仪、pH计计、分析天平分析天平。3 3第7页，共18页，编辑于2022年，星期三Company LogoCompany Logo 3实验用水（稀释水）及水质条件实验用水（稀释水）及水质条件 用来驯养和配置实验液的水，必须是未受污染的清洁水。一般用来驯养和配置实验液的水，必须是未受污染的清洁水。一般可采用天然河水、湖水或地下水，但需过滤以除去大的悬浮物质。可采用天然河水、湖水或地下水，但需过滤以除去大的悬浮物质。也可用自来水代替，但必须进行人工曝气或放置也可用自来水代替，但必须进行人工曝气或放置3d以上脱氯。如以上脱氯。如果试验

10、目的是评价工业废水或化学物质对接纳水体的影响时，果试验目的是评价工业废水或化学物质对接纳水体的影响时，则最好采用接纳水体的污染源上游水作为试验用稀释水。蒸馏则最好采用接纳水体的污染源上游水作为试验用稀释水。蒸馏水不适合做稀释水，因为蒸馏水中已除去了自然界水中的盐类，水不适合做稀释水，因为蒸馏水中已除去了自然界水中的盐类，与实际差距太大，另外由于蒸馏器的影响，有时使蒸馏水中带与实际差距太大，另外由于蒸馏器的影响，有时使蒸馏水中带有对鱼类不利的金属离子，影响试验结果。有对鱼类不利的金属离子，影响试验结果。3 3第8页，共18页，编辑于2022年，星期三Company LogoCompany Log

11、o 实验用水的水质条件一般是指水的温度、实验用水的水质条件一般是指水的温度、pH、溶解氧、溶解氧、硬度、水中的有机物和水量等。硬度、水中的有机物和水量等。（1）水温）水温 实验中应保持鱼类原来的适应温度，一般冷水鱼在实验中应保持鱼类原来的适应温度，一般冷水鱼在1218，温水鱼在，温水鱼在2028。为使得实验结果可靠，在同一。为使得实验结果可靠，在同一实验中，温度的波动范围不要超过实验中，温度的波动范围不要超过4（即（即2）。冬天可）。冬天可以通过加热室内的空气温度而达到调节水温的目的，也可以采以通过加热室内的空气温度而达到调节水温的目的，也可以采用电热棒直接控制调节水温。用电热棒直接控制调节水

12、温。3 3第9页，共18页，编辑于2022年，星期三Company LogoCompany Logo （2）pH 水的水的pH与水生生物的代谢作用有密切关系。对毒物与水生生物的代谢作用有密切关系。对毒物的毒性作用也有一定的影响。因此，在实验中应维持的毒性作用也有一定的影响。因此，在实验中应维持pH在鱼类适宜范围内。一般实验液的在鱼类适宜范围内。一般实验液的pH在在6.78.5为宜。如为宜。如需调节需调节pH，可用，可用1M或或0.1M的的HCl和和NaOH来调节受试物贮来调节受试物贮备液的备液的pH。调节贮备液的。调节贮备液的pH时不能使受试物浓度明显改变，时不能使受试物浓度明显改变，或发生化

13、学反应或沉淀。或发生化学反应或沉淀。（3）溶解氧）溶解氧 溶解氧是鱼类生存的必要条件，它能影响鱼类对毒物的敏溶解氧是鱼类生存的必要条件，它能影响鱼类对毒物的敏感性。一般温水鱼要求溶解氧在感性。一般温水鱼要求溶解氧在4mg/L以上，冷水鱼要求溶以上，冷水鱼要求溶解氧在解氧在 5mg/L以上。以上。（4）硬度）硬度 水的总硬度为水的总硬度为 10250 mg/L（以（以CaCO3计）。计）。3 3第10页，共18页，编辑于2022年，星期三Company LogoCompany Logo 1预实验预实验 用确定正式实验所需浓度范围，可选择较大范围的用确定正式实验所需浓度范围，可选择较大范围的浓度系

14、列，如浓度系列，如1000mg/L、100mg/L、10mg/L、1mg/L、0.1mg/L。每个浓度放入五条鱼，可用静态方式进行，。每个浓度放入五条鱼，可用静态方式进行，不设平行组，试验持续不设平行组，试验持续4896h。每日至少两次记录各容。每日至少两次记录各容器内的死鱼数，并及时取出死鱼。求出器内的死鱼数，并及时取出死鱼。求出24h100死亡浓度和死亡浓度和96h无死亡浓度。无死亡浓度。如果依次预试验结果无法确定正式试验所需的浓度如果依次预试验结果无法确定正式试验所需的浓度范围，应另选一浓度范围再次进行预试验。范围，应另选一浓度范围再次进行预试验。4 4第11页，共18页，编辑于2022

15、年，星期三Company LogoCompany Logo 2正式实验正式实验 根据预试验得出的结果，在包括使鱼全部死亡的最低根据预试验得出的结果，在包括使鱼全部死亡的最低浓度和浓度和96 h鱼类全部存活的最好浓度之间至少设置鱼类全部存活的最好浓度之间至少设置5个浓度组，个浓度组，并以几何级数排布。浓度间隔系数应并以几何级数排布。浓度间隔系数应2.2。每个试验浓度组应至少设每个试验浓度组应至少设23个平行，每一系列设一个空白个平行，每一系列设一个空白对照。如使用了助溶剂，应增设溶剂对照组，其浓度与试剂中的对照。如使用了助溶剂，应增设溶剂对照组，其浓度与试剂中的最高溶剂浓度相同。试验鱼的数目以每

16、组实验浓度最高溶剂浓度相同。试验鱼的数目以每组实验浓度1020尾合尾合适，不得少于适，不得少于10尾。尾。试验溶液调节至相应温度后，从驯养鱼群中随即取出鱼试验溶液调节至相应温度后，从驯养鱼群中随即取出鱼并随机迅速放入各试验容器中。转移期间处理不当的鱼均应并随机迅速放入各试验容器中。转移期间处理不当的鱼均应弃除。同一试验，所有试验用鱼应弃除。同一试验，所有试验用鱼应30min内分组完毕。内分组完毕。4 4第12页，共18页，编辑于2022年，星期三Company LogoCompany Logo 在在24h、48h、72h、96h后检查受试鱼的状况。如果没后检查受试鱼的状况。如果没有任何肉眼可见

17、的运动，如鳃的扇动、碰触尾柄后无反应等，有任何肉眼可见的运动，如鳃的扇动、碰触尾柄后无反应等，即可判断该鱼已死亡。观察并记录死鱼数目后，将死鱼从容即可判断该鱼已死亡。观察并记录死鱼数目后，将死鱼从容器中取出。应在试验开始后器中取出。应在试验开始后3h或或6h观察各处理组鱼的状况，并观察各处理组鱼的状况，并记录试验鱼的异常行为（如鱼体侧翻、失去平衡，游泳能力和呼吸记录试验鱼的异常行为（如鱼体侧翻、失去平衡，游泳能力和呼吸能力减弱，色素沉积、受惊吓后运动状况等）。能力减弱，色素沉积、受惊吓后运动状况等）。试验开始和结束时要测定试验开始和结束时要测定pH、溶解氧和温度。试验期间，、溶解氧和温度。试验

18、期间，每天至少测定一次。每天至少测定一次。至少在试验开始和结束时，测定实验容器中试验液的受试至少在试验开始和结束时，测定实验容器中试验液的受试物浓度。物浓度。试验结束时，对照组的死亡率不得超过试验结束时，对照组的死亡率不得超过10。4 4第13页，共18页，编辑于2022年，星期三Company LogoCompany Logo 1数据处理数据处理 以暴露浓度为横坐标，死亡率为纵坐标，在计算机以暴露浓度为横坐标，死亡率为纵坐标，在计算机或对数概率纸上，绘制暴露浓度对死亡率的曲线。用直或对数概率纸上，绘制暴露浓度对死亡率的曲线。用直线内插法或常用统计程序计算出线内插法或常用统计程序计算出 24h

19、、48h、72h、96h的半致死浓度（的半致死浓度（LC50）值，并计算）值，并计算95的置信限。的置信限。如果试验数据不适于计算如果试验数据不适于计算LC50，可用不引起死亡的最，可用不引起死亡的最高浓度和引起高浓度和引起100死亡的最低死亡浓度估算死亡的最低死亡浓度估算LC50的近似的近似值，即这两个浓度的集合平均值。值，即这两个浓度的集合平均值。5 5第14页，共18页，编辑于2022年，星期三Company LogoCompany Logo 2化学物质急性毒性分级化学物质急性毒性分级 依据依据LC50值的大小，可以将化学物质的急性毒性分为剧值的大小，可以将化学物质的急性毒性分为剧毒、高

20、毒、中等毒、低毒和微毒毒、高毒、中等毒、低毒和微毒5级，如实验表级，如实验表3-1所示。所示。5 5实验实验表表3-1 鱼类鱼类急性毒性急性毒性实验实验毒性分毒性分级标级标准准鱼起始鱼起始LC50（mg/L）11100100100010001000010000毒性分级毒性分级剧毒剧毒高毒高毒中等毒中等毒低毒低毒微毒（无毒）微毒（无毒）第15页，共18页，编辑于2022年，星期三Company LogoCompany Logo 3编写报告编写报告 在实验报告中应包括：试验名称、目的、试验原理、试在实验报告中应包括：试验名称、目的、试验原理、试验的准确起止日期，还有如下几项：验的准确起止日期，还有

21、如下几项：（1）试验鱼的种名、来源、体重、体长、健康和驯化状况。）试验鱼的种名、来源、体重、体长、健康和驯化状况。（2）受试物质名称、来源物化性质和保存方法。）受试物质名称、来源物化性质和保存方法。（3）实验用水的来源、物化性质和实验前的处理等。）实验用水的来源、物化性质和实验前的处理等。（4）实验溶液的浓度与配置方法、实验温度。）实验溶液的浓度与配置方法、实验温度。（5）实验条件，如容器形式、实验液的体积与深度、受试生物）实验条件，如容器形式、实验液的体积与深度、受试生物数目及负荷率。数目及负荷率。（6）实验开始后）实验开始后24h、48h、72h、96h时的时的LC50值，及其值，及其毒性

22、分级。毒性分级。5 5第16页，共18页，编辑于2022年，星期三Company LogoCompany Logov（1）试验期间，对照组鱼死亡率不得超过）试验期间，对照组鱼死亡率不得超过10。v（2）试验期间，受试物实测浓度不能低于设置浓度的）试验期间，受试物实测浓度不能低于设置浓度的80。如果试验期间受试物实测浓度与设置浓度相差超过如果试验期间受试物实测浓度与设置浓度相差超过20，则应，则应该以实测受试物浓度来表达试验结果。该以实测受试物浓度来表达试验结果。v（3）试验期间，尽可能维持恒定条件。）试验期间，尽可能维持恒定条件。5 5第17页，共18页，编辑于2022年，星期三Company LogoCompany Logo第18页，共18页，编辑于2022年，星期三