第七节副溶血性弧菌精选PPT.ppt

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1、第七节副溶血性弧菌第1页，本讲稿共18页第第七节、副溶血性弧菌检验七节、副溶血性弧菌检验一、生物学特性一、生物学特性1、形态与染色、形态与染色 革兰氏阴性无芽胞多形态杆菌或稍弯曲革兰氏阴性无芽胞多形态杆菌或稍弯曲弧菌弧菌，有时呈棒状、甚至球状、丝状等。一，有时呈棒状、甚至球状、丝状等。一般两极浓染。单端鞭毛，长度约为菌体的般两极浓染。单端鞭毛，长度约为菌体的2倍，倍，运动活泼。无芽胞、无荚膜。运动活泼。无芽胞、无荚膜。第2页，本讲稿共18页2、培养特性培养特性本菌对营养要求不高，在普通的琼脂或蛋白胨水中均可生长本菌对营养要求不高，在普通的琼脂或蛋白胨水中均可生长需氧特别强，在厌氧条件下生长非常

2、缓慢需氧特别强，在厌氧条件下生长非常缓慢嗜盐，嗜盐，在在2%NaCL培养基中生长最好，无盐或食盐培养基中生长最好，无盐或食盐10%不能不能生长。生长。最适温度最适温度36，pH7.57.8在肉汤、蛋白胨水等培养基中呈现浑浊，表面形成菌膜在肉汤、蛋白胨水等培养基中呈现浑浊，表面形成菌膜在固体培养基上菌落呈圆形凸起，混浊不透明，表面光滑，在固体培养基上菌落呈圆形凸起，混浊不透明，表面光滑，较湿润，边缘不整齐。较湿润，边缘不整齐。在血平板上可见溶血环。在血平板上可见溶血环。第3页，本讲稿共18页3、生化特性、生化特性分解分解葡萄糖葡萄糖产酸不产气，不分解乳糖，蔗糖。产酸不产气，不分解乳糖，蔗糖。H

3、H2 2S S（）、V-PV-P（）、靛靛基基质质（吲吲哚哚试试验验）（+）、精精氨氨酸酸（）（）甲基红（甲基红（+）、赖氨酸（）、溶血）、赖氨酸（）、溶血/-/-第4页，本讲稿共18页V.P反应检测某种细菌分解碳水化合物产生乙酰甲基甲醇CH3CH（OH）COCH3的反应。通常把细菌培养在葡萄糖蛋白胨液体培养基中，加入强碱可见显有红色。此反应用于细菌的鉴别 第5页，本讲稿共18页1、吲哚试验、吲哚试验(indol test)indol test)细菌产生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲细菌产生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲哚），靛基质与试剂对二甲基氨基苯甲醛作

4、用，生成玫瑰靛基质。哚），靛基质与试剂对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基质。色氨酸色氨酸吲哚（无色）对二甲基氨基苯甲醛吲哚（无色）对二甲基氨基苯甲醛玫瑰吲哚玫瑰吲哚（红色，（红色，+大肠杆菌）大肠杆菌）不产吲哚（无色，不产吲哚（无色，-产气杆菌）产气杆菌）试验方法：取培养试验方法：取培养24h培养液，先加入少量乙醚，摇动试管培养液，先加入少量乙醚，摇动试管以提取和浓缩吲哚，待其浮于培养液表面后，再沿试管壁徐缓以提取和浓缩吲哚，待其浮于培养液表面后，再沿试管壁徐缓加入吲哚试剂数滴，在接触面呈红色，即为阳性。加入吲哚试剂数滴，在接触面呈红色，即为阳性。应用：用于肠道杆菌的鉴定应用：用于肠道杆菌的

5、鉴定6第6页，本讲稿共18页2、尿素酶（、尿素酶（Urease，脲酶）试验，脲酶）试验有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解、产生有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解、产生2个分子的氨，个分子的氨，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。尿素酶不是诱导酶，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。尿素酶不是诱导酶，因为不论底物尿素是否存在，细菌均能合成此酶。其活性因为不论底物尿素是否存在，细菌均能合成此酶。其活性最适最适pH为为7.0。酚红：酚红：黄色黄色红色红色（+普通变形杆菌）普通变形杆菌）黄色（黄色（-大肠杆菌）大肠杆菌）试验方法：挑取试验方法：挑取1824h待试菌培养物大量接种于液体培养待试菌培养物大量接种于液体

6、培养基管中，摇匀，于基管中，摇匀，于361培养，观察结果。或涂布并穿刺接培养，观察结果。或涂布并穿刺接种于琼脂斜面，不要到达底部，留底部作变色对照。培养种于琼脂斜面，不要到达底部，留底部作变色对照。培养24h左左右，观察结果，如阴性应继续培养至右，观察结果，如阴性应继续培养至4天，作最终判定，天，作最终判定，变为粉红色为阳性。变为粉红色为阳性。7第7页，本讲稿共18页3、氨基酸脱羧酶的测定、氨基酸脱羧酶的测定 有些细菌含有氨基酸脱羧酶，使羧基释出，生成胺类和二氧化有些细菌含有氨基酸脱羧酶，使羧基释出，生成胺类和二氧化碳。此反应在偏酸的条件下进行，当培养基含胺类时呈碱性反应，碳。此反应在偏酸的条

7、件下进行，当培养基含胺类时呈碱性反应，使指示剂变色。使指示剂变色。接种与观察结果：用幼龄培养液作为菌种，直接接种。接种后封接种与观察结果：用幼龄培养液作为菌种，直接接种。接种后封油，对照管与测定管同时接种封油。肠肝菌科的细菌于油，对照管与测定管同时接种封油。肠肝菌科的细菌于37培培养养4天观察。天观察。当指示剂（溴甲酚紫）呈紫色或带红色调的紫色者为阳性，呈当指示剂（溴甲酚紫）呈紫色或带红色调的紫色者为阳性，呈黄色者为阴性。对照管应呈黄色反应。黄色者为阴性。对照管应呈黄色反应。8第8页，本讲稿共18页4、三糖铁（三糖铁（TSI）琼脂试验）琼脂试验试验方法：以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物，穿

8、刺试验方法：以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物，穿刺接种并涂布于斜面，置接种并涂布于斜面，置361培养培养1824h，观察结果。，观察结果。培养基：乳糖：蔗糖：葡萄糖培养基：乳糖：蔗糖：葡萄糖=10：10：1；加有酚红；加有酚红本试验可同时观察糖发酵产酸或产酸产气（变黄）；产生本试验可同时观察糖发酵产酸或产酸产气（变黄）；产生硫化氢（变黑）。硫化氢（变黑）。只能利用只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解葡萄糖被分解产酸产酸可使斜面先可使斜面先变变黄黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成细菌利用

9、培养基中含氮物质，生成碱性碱性产物，故使斜面后来产物，故使斜面后来又又变红变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。黄色。9第9页，本讲稿共18页O抗原（菌体抗原）：抗原（菌体抗原）：O1O1313种。种。H抗原（鞭毛抗原）：抗原（鞭毛抗原）：K抗原（荚膜抗原）：抗原（荚膜抗原）：K1K7165种。种。（缺编：缺编：K2、K14、K17、K35、K62）血清分型：血清分型：所有副溶血性弧菌的所有副溶血性弧菌的H抗原均相同，但是抗原均相同，但是O抗原和抗原和K抗原抗原存在差异，以存在差异，以13种种O抗原及抗原及65种种K抗原将

10、其分为抗原将其分为13个群和个群和845个型个型。4、抗原结构结构抗原结构结构第10页，本讲稿共18页二、致病性二、致病性1、致病因素、致病因素侵袭力：侵袭力：活菌活菌(105107/g)，可使人致病，可使人致病.产生溶血毒素：产生溶血毒素：内毒素，成分是脂多糖，内毒素，成分是脂多糖，10030min不被破坏。不被破坏。2、媒介食品、媒介食品主要是海产品（鱼、虾、蟹、蛤等），含主要是海产品（鱼、虾、蟹、蛤等），含盐量较高的食物亦可带菌。盐量较高的食物亦可带菌。3、所致疾病、所致疾病食物中毒、急性胃肠炎、败血症等。食物中毒、急性胃肠炎、败血症等。第11页，本讲稿共18页二、致病性二、致病性4、预

11、防措施、预防措施（1）海产品加工前用消毒水冲洗干净，接触过海产品的厨具、）海产品加工前用消毒水冲洗干净，接触过海产品的厨具、容器和手及水池等均要洗刷干净，以免污染食品容器和手及水池等均要洗刷干净，以免污染食品（2）若要吃凉拌菜应充分洗净，现在沸水中烫后，加醋，）若要吃凉拌菜应充分洗净，现在沸水中烫后，加醋，放置放置10min后，再放其他调味剂后，再放其他调味剂（3）严格执行生熟食品分开制度）严格执行生熟食品分开制度（4）剩饭菜，在食用前要回锅热透）剩饭菜，在食用前要回锅热透第12页，本讲稿共18页1、检验标准：、检验标准：GB/T4789.7-2008副溶血性弧菌检验副溶血性弧菌检验2、培养基

12、和试剂、培养基和试剂培养基：培养基：3氯化钠碱性蛋白陈水氯化钠碱性蛋白陈水APW)、硫代硫酸盐硫代硫酸盐-柠檬酸盐柠檬酸盐-胆盐胆盐-蔗糖（蔗糖（TCBS）琼脂）琼脂3氯化钠胰蛋白胨大豆氯化钠胰蛋白胨大豆TSA）琼脂）琼脂3氯化钠三糖铁（氯化钠三糖铁（TSI）琼脂）琼脂嗜盐性试验培养基嗜盐性试验培养基3氯化钠甘露醇试验培养基氯化钠甘露醇试验培养基3氯化钠赖氨酸脱狡酶试验培养基氯化钠赖氨酸脱狡酶试验培养基3氯化钠氯化钠MR-VP培养基培养基氯化钠结晶紫增菌液氯化钠结晶紫增菌液试剂：试剂：氧化酶试剂、革兰氏染色液、革兰氏染色液、氧化酶试剂、革兰氏染色液、革兰氏染色液、3%氯化钠溶液、氯化钠溶液、V

13、-P试剂、甲基红试剂、靛基质试剂等。试剂、甲基红试剂、靛基质试剂等。三、检验方法三、检验方法第13页，本讲稿共18页3、检验程序、检验程序（1）样品处理及培养）样品处理及培养定量测定定量测定：样品用：样品用3%氯化钠蛋白胨水氯化钠蛋白胨水10倍连续稀释后取三个稀释度各接倍连续稀释后取三个稀释度各接3支含支含有该培养基的平皿，培养计数。有该培养基的平皿，培养计数。定性试验定性试验（2）分离培养：）分离培养：首先将样品接种到氯化首先将样品接种到氯化钠琼脂平板和钠琼脂平板和ss琼脂平板各一个，培养琼脂平板各一个，培养18-24h观察。也可增菌液直接分离。观察。也可增菌液直接分离。（3）可以菌落培养：

14、）可以菌落培养：挑取上述可疑菌落，挑取上述可疑菌落，转种转种3.5%氯化钠三糖铁斜面，观察结氯化钠三糖铁斜面，观察结果（下部变黄，有动力，不产果（下部变黄，有动力，不产H2S）（4）涂片镜检：挑取）涂片镜检：挑取可疑培养物镜检。可疑培养物镜检。（5）嗜盐性试验：）嗜盐性试验：将上述培养物接种无将上述培养物接种无盐胨水、盐胨水、7%、11%氯化钠胨水氯化钠胨水。（6）生化试验：）生化试验：V-P、靛基质、甲基红试、靛基质、甲基红试验等验等（7）动物实验）动物实验：（选做）：（选做）第14页，本讲稿共18页初步鉴定：初步鉴定：挑取纯培养的单个可疑菌落，进行副溶血性弧菌的初步鉴定：挑取纯培养的单个可

15、疑菌落，进行副溶血性弧菌的初步鉴定：副溶血性弧菌：副溶血性弧菌：氧化酶试验：氧化酶试验：阳性。阳性。涂片镜检：涂片镜检：G-，棒状、弧状、卵圆状等多形，棒状、弧状、卵圆状等多形态，无芽胞，有鞭毛。态，无芽胞，有鞭毛。3氯化钠三糖铁斜面氯化钠三糖铁斜面：底层变黄不变黑，底层变黄不变黑，无气泡，斜面颜色不变或红色加深，有动力。无气泡，斜面颜色不变或红色加深，有动力。嗜盐性试验：嗜盐性试验：分别接种于不同氯化钠浓度分别接种于不同氯化钠浓度的胰胨水中培养，在无氯化钠和的胰胨水中培养，在无氯化钠和10氯化氯化钠的胰胨水中不生长或微弱生长，在钠的胰胨水中不生长或微弱生长，在7氯化钠的胰胨水中生长旺盛。氯化

16、钠的胰胨水中生长旺盛。第15页，本讲稿共18页生化试验：生化试验：分别接种各类生化培养基，培养后观察结果。分别接种各类生化培养基，培养后观察结果。或或API20E生化鉴定试剂盒或生化鉴定试剂盒或VITEK全自动微生物检测系统鉴定。全自动微生物检测系统鉴定。生化性状符合下表要求时，为副溶血性弧菌生化性状符合下表要求时，为副溶血性弧菌。确定鉴定确定鉴定:项目项目结果结果项目项目结果结果革兰氏染色镜检革兰氏染色镜检阴性，无芽孢阴性，无芽孢乳糖乳糖氧化酶氧化酶硫化氢硫化氢动力动力赖氨酸脱梭酶赖氨酸脱梭酶蔗糖蔗糖V-P葡萄糖葡萄糖ONPG甘露醇甘露醇分解葡萄糖产气分解葡萄糖产气表表副溶血性弧菌的生化性状副溶血性弧菌的生化性状第16页，本讲稿共18页定性检测：定性检测：报告报告25g（ml）样品中是否检出副溶血性弧菌。）样品中是否检出副溶血性弧菌。定量检测：定量检测：根据证实为副溶血性弧菌阳性的试管管数，查根据证实为副溶血性弧菌阳性的试管管数，查MPN检索表，报告每克（毫升）副溶血性弧菌的检索表，报告每克（毫升）副溶血性弧菌的MPN值。值。报告：报告：第17页，本讲稿共18页思考题思考题1.副溶血性弧菌检验程序副溶血性弧菌检验程序2.注意事项注意事项第18页，本讲稿共18页