特殊显微镜结构及操作技术讲稿.ppt

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1、关于特殊显微镜结构及操作技术第一页，讲稿共四十八页哦【实验用品实验用品】1试剂：10g/mL罗丹明123的磷酸缓冲液（PBS）荧光染料。2器材：倒置显微镜，相差显微镜附件（相差物镜、转盘聚光器、对中环形光阑和绿色滤色镜等），微分干涉显微镜附件（起偏镜、检偏镜和渥拉斯顿棱镜等），荧光显微镜附件（荧光发射器、激发滤片和阻断滤片等），载玻片，盖玻片，牙签，滤纸条，擦镜纸，镊子，滴管。第二页，讲稿共四十八页哦【实验原理和方法实验原理和方法】倒置显微镜是一种用于生物组织细胞离体培养观察的光学显微装置，能直接对培养皿、培养瓶的标本进行显微观察。由于它的物镜、物体和光源位置刚好与立式显微镜颠倒，被称为倒置显

2、微镜。倒置显微镜的物镜在下，聚光器在上，被观察样品置于位于上方的聚光器之下，聚光器具有远大于物镜的工作距离。因此，适应于培养皿或培养瓶中样品的观察。高档倒置显微镜可根据不同观察要求，增加相差、微分干涉反差物镜或荧光发射装置，构建成相差显微镜、微分干涉显微镜或荧光显微镜。第三页，讲稿共四十八页哦一、倒置显微镜的构造与使用一、倒置显微镜的构造与使用（一）倒置显微镜的构造n倒置显微镜由目镜、透射照明器、聚光器、载物台、物镜和显微镜机体等部件构成，以TE2000-U显微镜为例介绍。nTE2000-U 显微镜配有：T-DH 100W 透射照明器、LHS-H100P-1 12V100W 灯室、12V100

3、W 卤素灯、TE2-PS100W 电源、T-SR 矩形载物台、T-TD 双目镜筒D、CFI 10X 目镜、T-N6 六孔物镜转换器，系统聚光器、物镜、电源线等。第四页，讲稿共四十八页哦第五页，讲稿共四十八页哦1.目镜筒及目镜目镜筒及目镜 A:屈光度调节环 B:目镜 C:目镜筒转盘O:开 B:勃氏镜(带有聚焦螺钉)C:关(光闸)M:2.5 倍放大第六页，讲稿共四十八页哦2.显微镜机体显微镜机体第七页，讲稿共四十八页哦3.透射照明器透射照明器:透射照明器必须根据规定使用灯泡透射照明器必须根据规定使用灯泡(12V100W 或或6V30W)。T-DH 100W 透射照明透射照明器需灯室。器需灯室。A：

4、视场光阑调节杆 B：滤色片滑片C：聚光器再聚焦制动器 D：聚光器调焦旋钮E：聚光器固定螺钉 F：聚光器安装定位孔G：聚光器安装定位槽 H：聚光器转动指紧螺钉I：聚光器调中螺钉 J：聚光器安装(可转动)支架K：LHS-H100P-1 12V100W 灯室 L：灯室固定螺钉M：灯室盖指紧螺钉 N：聚光器支架(可移动)O：聚光器支架指紧螺钉 P：灯室线Q：聚光器支架下降定位螺钉第八页，讲稿共四十八页哦第九页，讲稿共四十八页哦T-DS 30W 透射照明器透射照明器 A：防尘滑片(可移动)B：F 堵口滑片(可移动)C：聚光器安装支架 D：6V30W 灯室 E：滤色片滑片 F：安装附加装置M4 螺纹孔第十

5、页，讲稿共四十八页哦系统聚光器系统聚光器T-DH 100W 透射照明器 A：聚光器孔径光阑B：聚光器模块C：聚光器模块固定螺钉D：聚光镜(有三种可选：ELWD、LWD、HMC)E：环形光阑调中螺钉(仅用于相差模块中)第十一页，讲稿共四十八页哦T-DS 30W透射照明器(霍夫曼观察)第十二页，讲稿共四十八页哦ELWD-S 聚光器A：调中杆指紧螺钉B：调中杆 C：转盘第十三页，讲稿共四十八页哦SLWD 聚光器聚光器第十四页，讲稿共四十八页哦T-SR矩形载物台矩形载物台A：载物环湾 B：载物台Y 轴方向移动控制旋钮 C：载物台X 轴方向移动控制旋钮第十五页，讲稿共四十八页哦（二）由TE2000-U，

6、100W 透射照明器，系统聚光器，以及T-TD 目镜筒D 组成的显微镜系统。明视场明视场(BF)镜检镜检关键点：从光路中卸下其它形式观察需要的所有光学组件，聚光器调节好（调节聚焦和对中），转动孔径光阑调节好像的清晰度。第十六页，讲稿共四十八页哦1.复位复位1）逆时针转动，松开透射照明器中的“聚光器再聚焦指紧螺钉”。2）把“目镜筒转盘”设置到O位。3）把显微镜右侧的“中间放大倍数刻度盘”打到1X。4）逆时针转动，松开显微镜右侧粗微调旋钮后面的“物镜再聚焦定位环”第十七页，讲稿共四十八页哦第十八页，讲稿共四十八页哦2.打开透射照明器打开透射照明器1）把电源后部的“外部开关”打到开的位置；2）把电源

7、“电源开关”打开。(把开关拨至)；3）按下显微镜左侧的“照明器开关”接通灯泡。第十九页，讲稿共四十八页哦第二十页，讲稿共四十八页哦3.调节灯泡亮度保证色彩真实。调节灯泡亮度保证色彩真实。1）把显微镜左侧的“亮度调节盘”设置成12V100W；2）把透射照明器中的“NCB11 滤色片”插入光路中；3）把透射照明器中的“ND4 滤色片”插入光路中。第二十一页，讲稿共四十八页哦4.调节光路调节光路1）把10X 物镜转到光路中。2）把显微镜右侧的“光路转换盘”转到1的位置。（100%光到观察口）3）向上推透射照明器上的“视场光阑杆”完全打开视场光阑。4）将系统聚光器上的“孔径光阑杆”转至右侧极限处把“孔

8、径光阑”完全打开。5）转动聚光器调焦旋钮把聚光器调至最低位置。第二十二页，讲稿共四十八页哦第二十三页，讲稿共四十八页哦5.明视场观察时对显微镜的调整明视场观察时对显微镜的调整n把“聚光器转盘”转到A位置。第二十四页，讲稿共四十八页哦6调节视度及瞳距调节视度及瞳距1）将显微镜前部的“摄影取景框转盘”逆时针旋转，使摄影取景框进入光路。2）用左眼对着左侧目镜，转动目镜“屈光度调节环”，使取景框中的双十字线清晰成像。3）用右眼对着右侧目镜，转动目镜“屈光度调节环”，使取景框中的双十字线清晰成像。4）将显微镜前部的“摄影取景框转盘”顺时针旋转，使其退出光路。5）调节目镜瞳距，将两目镜视场所见的影像重合在

9、一起。第二十五页，讲稿共四十八页哦第二十六页，讲稿共四十八页哦7.调焦调焦1）将样品放置载物台中。2）转动同轴粗微调旋钮，将标本对好焦。第二十七页，讲稿共四十八页哦8.聚光器中心调节聚光器中心调节1）确信10X 物镜在光路中。2）将“视场光阑调节杆”降低直到能从目镜看到视场光阑像。3）转动“聚光器调焦钮”升降聚光器，使视场光阑像清晰地成象在标本面上。4）转动两个“聚光器中心调节螺钉”，使视场光阑像在视场中心。5）更换40X 物镜。6）调节“视场光阑调节杆”，使视场光阑的象与视场大致相同。7）转动两个“聚光器中心调节螺钉”，使视场光阑像在视场正中。第二十八页，讲稿共四十八页哦第二十九页，讲稿共四

10、十八页哦9.进行观察进行观察1）选择要使用的物镜2）移动系统聚光器上的“孔径光阑调节杆”，使孔径为物镜数值孔径的7080%。（“把目镜筒转盘”设到B位置，转动勃氏镜调焦螺钉使其聚焦，当观察到物镜的出瞳和孔径光栏的象时，调节其大小。）3）调节“视场光阑调节杆”使视场光阑像与视场相大致相同。4）把透射照明器里的“ND 减光片”进入或退出光路以调节视场亮度。第三十页，讲稿共四十八页哦第三十一页，讲稿共四十八页哦10.更换样品更换样品n利用显微镜主体上的“物镜再聚焦定位环”，照明器上的“倾斜装置”，“聚光器再聚焦指紧螺钉，可容易更换样品。第三十二页，讲稿共四十八页哦11.显微镜操作结束后显微镜操作结束

11、后1)关闭电源开关(开关拨至O)2)灯室冷却后，把显微镜上的聚乙烯防尘罩盖好。第三十三页，讲稿共四十八页哦相差（相差（PH）显微术）显微术n 观察透明细胞或其他透明样品，需配相衬聚光器、相衬物镜、相衬环等附件。相衬板将衍射光推迟1/4波长，振幅相减，样品暗，背景亮，称正反差或暗反差，分正低（DL）、正低低（DLL）和中型暗相差（DM）。折光率较强的样品用后者。相衬板将直射光推迟1/4波长，振幅相加，样品亮，背景暗，称负反差或明反差，分负中（NM）和负高（NH）。折光率较小的样品用后者。第三十四页，讲稿共四十八页哦n关键点：将有ph 标记的物镜与物镜相同ph 标记的聚光器模块一起送入光路，在进行

12、显微术前，校正(对中)物镜里的相差板及聚光器模块里的环形光阑。第三十五页，讲稿共四十八页哦1.用明视场（用明视场（BF）显微术对样品聚焦。）显微术对样品聚焦。2.相差观察时对显微镜的调整。相差观察时对显微镜的调整。1)将ph 物镜转入光路。2)转动“聚光器转盘”，使其与在光路中的物镜(步骤1中所安置的)具有相同的ph 标记。3)向右转动聚光器上的“孔径光阑调节杆”，完全打开孔径光阑。第三十六页，讲稿共四十八页哦第三十七页，讲稿共四十八页哦3.对中环形光阑对中环形光阑1)把“目镜筒转盘”设到位置，转动勃氏镜聚焦螺钉，使环形光阑像清晰。2)用六角起子转动聚光器模块中的两个“环形光阑对中螺钉”，使环

13、形光阑像与物镜中的相差板环形像同心。3)把目镜筒转盘位置再转到上。调中心手轮第三十八页，讲稿共四十八页哦第三十九页，讲稿共四十八页哦4.进行观察进行观察1)把聚光器“孔径光阑”完全打开。2)移动透射照明器上的“视场光阑调节杆”，使视场光阑像大小与视场大小接近。3)把透射照明器上的“NCB11 滤色片”从光路中移开，把“GIF 滤色片”移进光路。(提高反差)4)可通过把“ND 滤色片”移进或移出光路来调节视场亮度。第四十页，讲稿共四十八页哦第四十一页，讲稿共四十八页哦5.使用不同放大倍数的物镜进行观察使用不同放大倍数的物镜进行观察1)把所需放大倍数的相差物镜移入光路。2)转动“聚光器转盘”，使其

14、与在光路上物镜（步骤1中所安置的）具有相同的ph 标记。3)调节放入光路中的环形光阑中心。(见程序3)第四十二页，讲稿共四十八页哦6.更换样品更换样品n利用使用显微镜主机上的“物镜再聚焦定位环”，透射照明器上的“倾斜”装置及“聚光器再聚焦指紧螺钉”，可容易更换样品。7.显微镜操作结束后与明视场显微术步骤显微镜操作结束后与明视场显微术步骤相同。相同。第四十三页，讲稿共四十八页哦微分干涉（微分干涉（DIC）显微术）显微术n可观察到样品的立体感，适用于显微操纵等，彩色图像。因塑料培养皿的不均衡张力在DIC下呈现干涉条纹、DIC不宜用于普遍使用的塑料培养皿。DIC的光通亮大，可用到100倍物镜。需配D

15、IC聚光器等附件，使用明场物镜。1用明场找到视野用明场找到视野2压入起偏器，选择相应模块压入起偏器，选择相应模块3调节孔径光栅至最佳效果。调节孔径光栅至最佳效果。第四十四页，讲稿共四十八页哦荧光（荧光（E）显微术）显微术n适用于本身属于或被染色后形成荧光体的样品。荧光体在一定波长光（紫外或可见）的激发下发光（即荧光，波长长于激发光）。需配荧光附件和滤光器等。前者主件为激发光源，一般分汞灯系统和卤灯系统，汞灯既适用于紫外光激发也适用于可见光激发，且能量较高；后者只适用于可见光激发。（此处插入拍摄图片）第四十五页，讲稿共四十八页哦1.操作之前要求：操作之前要求：（1）检查荧光装置的工作时间，如荧光灯的工作时间超过使用寿命，应予以更换。（2）使用物荧光载波片（3）每次使用之间必须间隔20分钟。第四十六页，讲稿共四十八页哦2.用明场找到视野。用明场找到视野。3.关闭明场光源，打开荧光电源预热关闭明场光源，打开荧光电源预热5分分钟。钟。4.开启荧光盘，并根据要求选择荧光通道。开启荧光盘，并根据要求选择荧光通道。5.激发荧光发生器，打开光闸，即可进行激发荧光发生器，打开光闸，即可进行观察。观察。第四十七页，讲稿共四十八页哦感谢大家观看第四十八页，讲稿共四十八页哦