【高中生物】生物:5.1《DNA的粗提取和鉴定》学案(1)(新人教版选修1).doc
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1、 课时1 DNA的粗提取与鉴定一、实验目的:初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法。二、实验原理:1DNA的溶解性:思考题1:DNA在氯化钠溶液中的溶解度有什么特点?对此有什么应用? 思考题2:利用什么原理来将DNA与蛋白质分离开? 2DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性:蛋白酶能水解 ,但对 没有影响。大多数蛋白质不能忍受 的高温,而DNA在 以上才会变性。 能够瓦解细胞膜,但对DNA没有影响。3细胞在 中易吸水而导致细胞膜和细胞核膜的破裂,据此可得到含有核DNA的溶液。4DNA的鉴定:思考题3:依据什么原理来鉴定DNA? 三、实验材料:鸡血细胞液思考题4:生活在牧区的人们,采集牛、羊和马血比较方便
2、,他们能否选用牛、羊、马血做实验材料?为什么? 四、实验步骤:1制备鸡血细胞液:在鸡血中加入质量浓度为01g/mL的 溶液,离心处理;2提取鸡血细胞的细胞核物质:向鸡血细胞液中加入蒸馏水,搅拌、过滤;思考题5:加入蒸馏水的目的是什么?为什么能达到此目的? 3溶解细胞核内的DNA:加入2mol/L的氯化钠溶液,搅拌,使DNA呈溶解状态;4析出含DNA的黏稠物:加入蒸馏水,用玻璃棒搅拌;思考题6:此时加入蒸馏水的目的是什么? 5滤取含DNA的黏稠物:过滤;思考题7:这次过滤与上次过滤的目的一样吗?为什么? 6将DNA的黏稠物再溶解:加入2mol/L的氯化钠溶液,搅拌,使DNA呈溶解状态;7过滤含有
3、DNA的氯化钠溶液:过滤;思考题8:这一步骤的目的是什么? 思考题9:为什么反复地溶解与析出DNA,能够去除杂质? 8提取含杂质较少的DNA:加入冷却的95%的酒精,搅拌;思考题10:这一步骤的目的是什么? 思考题11:为什么加入的酒精需要冷却的? 9DNA的鉴定:取两支试管,各加入0015mol/L的氯化钠溶液5mL,一支加入提取的DNA,两支各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后置于沸水中加热。思考题12:为什么要设置对照组?实验中能观察到什么现象? 五、课堂练习:1为了便于提取鸡血细胞中的DNA,下列所采取的措施中,最恰当的是:向经抗凝剂处理的鸡血液加入( )A蒸馏水BATPC0.3g/m
4、L的蔗糖溶液 D二氧化碳2下列不适宜作为DNA提取的实验材料是 ( ) A鸡血细胞 B蛙的红细胞 C人的成熟红细胞 D菜花3用过滤的方法得到细胞中的氯化钠溶液后,还要用酒精处理,可以得到较纯化的DNA这是因为: ( )ADNA易溶于酒精,而滤液中某些杂质不易溶于酒精BDNA不易溶于酒精,而滤液中某些杂质易溶于酒精CDNA和滤液中其他成分更易溶于酒精DDNA和滤液中其他成分都不溶于酒精4(多选)下表是关于DNA粗提取与鉴定实验中所使用的材料、操作及其作用的表述,正确的是: ( )试剂操作 作用A柠檬酸钠溶液 与鸡血混合防止血液凝固B蒸馏水与鸡血细胞混合保持细胞形状C蒸馏水加入到溶解有DNA的Na
5、Cl中析出DNA丝状物D冷却的酒精 加入到过滤后DNA的NaCl中产生特定的颜色反应5在进行DNA粗提取实验时,为得到含DNA的黏稠物,某同学进行了如下操作: 在新鲜鸡血中加入适量的柠檬酸,经离心后,除去血浆留下血细胞备用。 取510ml血细胞放入50ml的塑料烧杯中,并立即注入20ml 0.015molL的氯化钠溶液,快速搅拌5分钟后经滤纸过滤,取得其滤液。 滤液中加入40ml 2molL的氯化钠溶液,并用玻璃棒沿一个方向快速搅拌1分钟。 上述溶液中缓缓加入蒸馏水,同时用玻璃棒沿一个方向不停地轻轻搅拌,直到溶液中出现丝状物为止,再进行过滤而得到含DNA的黏稠物。实验结果是:所得到的含DNA的
6、黏稠物极少,导致下一步试验无法进行。(1)指出并改正上述实验操作中的错误: , ,。 (2)要进一步提取DNA时,需加入冷却的酒精,其作用是 和。(3)能否用牛血或牛肝代替鸡血做实验?为什么?6在DNA粗提取与鉴定的实验中,选择适当浓度的NaCl溶液就能充分溶解DNA而使杂质沉淀,或析出DNA过滤去除溶液中的可溶性杂质。请在右图中作出DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线。参考答案思考题:思考题1、DNA在氯化钠溶液中的溶解度,随着氯化钠的浓度的变化而改变的。当氯化钠的物质的量浓度为014mol/L时,DNA的溶解度最低。利用这一原理,可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出;思考题2、DNA不溶于酒
7、精,但细胞中的某些蛋白质则溶于酒精,利用这一原理,可以将DNA与蛋白质进一步地分离。思考题3、DNA遇二苯胺(沸水浴)被染成蓝色,所以可用二苯胺作鉴定。思考题4、不能。因为哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核,仅靠白细胞和淋巴细胞中的少数DNA,在实验中很难提取到。思考题5、加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂),从而释放出DNA;蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体,水分可以大量进入血细胞内,使血细胞胀裂。思考题6、使氯化钠溶液浓度接近014mol/L,使DNA最大限度地析出。思考题7、不一样;这次过滤是为了去除不溶于氯化钠溶液的杂质,而上次过滤是为了去除破裂的细胞膜等物质。思考题8、除去含有
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