病毒感染的检查方法与防治原则PPT讲稿.ppt
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1、病毒感染的检查方法与防治原则1第1页,共53页,编辑于2022年,星期一病原学诊断的意义病原学诊断的意义有助于临床治疗(抗生素、干扰素等)为控制病毒学疾病的流行提供实验依据(疫苗等)2第2页,共53页,编辑于2022年,星期一第一节第一节 病毒感染的检查病毒感染的检查3第3页,共53页,编辑于2022年,星期一病毒感染的检查病毒感染的检查检测内容检测内容查病毒查病毒查特异性查特异性抗体抗体 病毒颗粒病毒颗粒 病毒抗原(如血凝素)病毒抗原(如血凝素)病毒核酸病毒核酸 (PCRPCR)病毒酶类:如逆转录酶病毒酶类:如逆转录酶 电镜直接观察电镜直接观察 光镜检查包涵体光镜检查包涵体 分离培养分离培养
2、(如(如 IgM、IgG)4第4页,共53页,编辑于2022年,星期一一、标本的采集与送检一、标本的采集与送检原则基本与细菌相似原则基本与细菌相似,但,但应注意:应注意:1.1.标本用标本用“双抗双抗”(2000-10000U2000-10000U)或两性霉素)或两性霉素B B(2ug/ml)2ug/ml)处理处理 2.2.低温保存低温保存,尽快送检尽快送检(冰块,(冰块,CO2CO2)3.3.血清学诊断采双份血清血清学诊断采双份血清(发病初,(发病初,2-32-3周)周)5第5页,共53页,编辑于2022年,星期一二、病毒的分离与鉴定二、病毒的分离与鉴定(一)病毒的分离培养(一)病毒的分离培
3、养 细胞培养细胞培养(cell culture)鸡胚接种鸡胚接种(egg inoculation)动物接种动物接种(animal inoculation)6第6页,共53页,编辑于2022年,星期一二、病毒的分离与鉴定二、病毒的分离与鉴定一般程序:一般程序:标本标本标本标本无菌处理无菌处理无菌处理无菌处理动物接种动物接种动物接种动物接种鸡胚培养鸡胚培养鸡胚培养鸡胚培养细胞培养细胞培养指标指标指标指标阳性阳性阳性阳性指标指标指标指标阴性阴性 病毒鉴定病毒鉴定病毒鉴定病毒鉴定 盲传盲传盲传盲传2 2 2 23 3 3 3代代代代指标阴性指标阴性指标阴性指标阴性病毒阴性病毒阴性病毒阴性病毒阴性7第7
4、页,共53页,编辑于2022年,星期一(一)病毒的分离培养(一)病毒的分离培养 1.1.细胞培养细胞培养(简述)(简述)单层细胞培养单层细胞培养单层细胞培养单层细胞培养(monolayer cell culturemonolayer cell culture)分类分类 悬浮细胞培养悬浮细胞培养悬浮细胞培养悬浮细胞培养(suspended cell culturesuspended cell culture)原代细胞原代细胞原代细胞原代细胞(primary cellprimary cell)细胞种类细胞种类 二倍体细胞(二倍体细胞(二倍体细胞(二倍体细胞(diploid celldiploid
5、cell)传代细胞系传代细胞系(continuous cell linecontinuous cell line)8第8页,共53页,编辑于2022年,星期一病毒的细胞培养病毒的细胞培养细胞培养瓶细胞培养瓶细胞培养瓶细胞培养瓶单层细胞单层细胞9第9页,共53页,编辑于2022年,星期一1.1.细胞培养细胞培养(1)(1)原代和次代细胞培养原代和次代细胞培养组织组织 组织块组织块 分散的单个细胞分散的单个细胞 单层细胞单层细胞 剪碎剪碎 培养基培养基(原代细胞原代细胞原代细胞原代细胞)单层细胞单层细胞单层细胞单层细胞(次代细胞次代细胞次代细胞次代细胞)传代培养传代培养传代培养传代培养蛋白酶蛋白酶
6、 10第10页,共53页,编辑于2022年,星期一特点特点特点特点:对多种病毒敏感对多种病毒敏感对多种病毒敏感对多种病毒敏感 生长能力有限生长能力有限生长能力有限生长能力有限(20202020代)代)代)代),获取成本高获取成本高获取成本高获取成本高 可携带潜伏病毒可携带潜伏病毒可携带潜伏病毒可携带潜伏病毒(EBEBEBEB)1.1.细胞培养细胞培养(1)(1)原代和次代细胞培养原代和次代细胞培养11第11页,共53页,编辑于2022年,星期一(2)(2)二倍体细胞培养二倍体细胞培养 体外分裂体外分裂体外分裂体外分裂50505050100100代仍保持二倍体染色体数代仍保持二倍体染色体数目目,
7、可用于病毒分离和疫苗生产可用于病毒分离和疫苗生产可用于病毒分离和疫苗生产可用于病毒分离和疫苗生产。特点特点:对多种病毒敏感对多种病毒敏感 不带异种蛋白不带异种蛋白(人源性人源性)不带病毒不带病毒,无致瘤潜能无致瘤潜能 可传可传5050-100-100代左右代左右1.1.细胞培养细胞培养12第12页,共53页,编辑于2022年,星期一(3)(3)传代细胞培养传代细胞培养特点特点特点特点:对多种病毒敏感性高对多种病毒敏感性高对多种病毒敏感性高对多种病毒敏感性高 繁殖能力高繁殖能力高繁殖能力高繁殖能力高,传代时间长传代时间长传代时间长传代时间长 有致癌危险,不能用于疫苗生产有致癌危险,不能用于疫苗生
8、产有致癌危险,不能用于疫苗生产有致癌危险,不能用于疫苗生产 (由肿瘤细胞或二倍体细胞突变而来由肿瘤细胞或二倍体细胞突变而来由肿瘤细胞或二倍体细胞突变而来由肿瘤细胞或二倍体细胞突变而来)1.1.细胞培养细胞培养13第13页,共53页,编辑于2022年,星期一2.2.鸡胚培养鸡胚培养 采用孵化采用孵化采用孵化采用孵化9 91414天的鸡胚天的鸡胚天的鸡胚天的鸡胚 绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜(allantocherionallantocherion)痘苗病毒、人类疱疹病毒痘苗病毒、人类疱疹病毒 尿囊腔尿囊腔尿囊腔尿囊腔(allantoic cavityallantoic cavity)接种部位接种部位接种
9、部位接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒流感病毒、腮腺炎病毒流感病毒、腮腺炎病毒流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔羊膜腔羊膜腔羊膜腔(amniotic cavityamniotic cavity)流感病毒的初次分离流感病毒的初次分离 卵黄囊卵黄囊卵黄囊卵黄囊(yolk sac)嗜神经病毒嗜神经病毒嗜神经病毒嗜神经病毒 14第14页,共53页,编辑于2022年,星期一尿囊腔尿囊腔尿囊腔尿囊腔15第15页,共53页,编辑于2022年,星期一2 2、鸡胚培养、鸡胚培养优点:优点:易管理易管理,不带微生物不带微生物,成本较低成本较低缺点:缺点:操作程序复杂操作程序复杂16第16页,共53页,编辑于2022年,星期
10、一17第17页,共53页,编辑于2022年,星期一18第18页,共53页,编辑于2022年,星期一3.3.动物接种动物接种 应用:应用:尚无敏感细胞的病毒培养尚无敏感细胞的病毒培养(HCVHCV等)等)等)等)动物:动物:兔、鼠、黑猩猩、猴等兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点:优点:优点:优点:结果易观察,可建立动物模型结果易观察,可建立动物模型结果易观察,可建立动物模型结果易观察,可建立动物模型 缺点:缺点:缺点:缺点:有饲养条件要求,费用高有饲养条件要求,费用高有饲养条件要求,费用高有饲养条件要求,费用高,动物动物动物动物 体内常带有潜伏病毒体内常带有潜伏病毒体内常带有潜伏病毒体内常带有潜伏病毒,
11、安全性要求高,安全性要求高19第19页,共53页,编辑于2022年,星期一1 1病毒增殖鉴定病毒增殖鉴定 (1)(1)(1)(1)细细胞胞病病变变效效应应(cytopathcytopathicic effect,effect,CPE CPE)细细细细胞胞胞胞变变变变圆圆圆圆、聚聚聚聚集集集集、坏坏坏坏死死死死、溶溶溶溶解解解解或或或或脱脱脱脱落等(多数病毒)落等(多数病毒)落等(多数病毒)落等(多数病毒);形形形形成成成成多多多多核核核核巨巨巨巨细细细细胞胞胞胞或或或或称称称称融融融融合合合合细细细细胞胞胞胞(麻麻疹疹病病毒毒、巨巨巨巨细细细细胞胞胞胞病病病病毒毒毒毒、呼呼呼呼吸吸吸吸道道道道
12、合合合合胞胞胞胞病病病病毒毒毒毒等等等等);在在培培养养细细胞胞中中形形成成包包涵涵体体(狂狂狂狂犬犬犬犬病病毒、麻疹病毒等病病毒、麻疹病毒等病病毒、麻疹病毒等病病毒、麻疹病毒等)。)。)。)。(二)病毒的鉴定(二)病毒的鉴定 20第20页,共53页,编辑于2022年,星期一21第21页,共53页,编辑于2022年,星期一细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落(1 1)细胞病变效应细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)22第22页,共53页,编辑于2022年,星期一麻疹病毒感麻疹病毒感
13、麻疹病毒感麻疹病毒感染细胞染细胞染细胞染细胞呼吸道合胞病毒感呼吸道合胞病毒感呼吸道合胞病毒感呼吸道合胞病毒感染细胞染细胞染细胞染细胞形成多核巨细胞或称融合细胞形成多核巨细胞或称融合细胞(1 1)细胞病变效应细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)23第23页,共53页,编辑于2022年,星期一形成包涵体形成包涵体形成包涵体形成包涵体(inclusion bodyinclusion body)(1 1)细胞病变效应细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)24第24页,共53页,编辑于2022年,星期一腮腺炎病毒感染细胞腮腺炎病毒感染细胞腮腺炎病毒感染细胞腮腺炎
14、病毒感染细胞(2 2)红细胞吸附红细胞吸附(hemadsorption)病毒病毒囊囊囊囊膜表面血凝素膜表面血凝素膜表面血凝素膜表面血凝素(HAHA)红细胞红细胞红细胞红细胞表面表面表面表面HAHAHAHA受体受体受体受体25第25页,共53页,编辑于2022年,星期一(3 3)干扰现象干扰现象(interference)风疹病毒风疹病毒人胚肾细胞人胚肾细胞人胚肾细胞人胚肾细胞 病毒增殖,病毒增殖,病毒增殖,病毒增殖,CPECPECPECPE()埃可病毒埃可病毒埃可病毒埃可病毒人胚肾细胞人胚肾细胞 病毒增殖,病毒增殖,CPECPE()人胚肾细胞人胚肾细胞风疹病毒风疹病毒?埃可病毒埃可病毒埃可病毒
15、埃可病毒(+)CPE(-)CPE(-)CPE(-)CPE(-)风疹病毒风疹病毒风疹病毒风疹病毒(+)+)+)+)埃可病毒埃可病毒埃可病毒埃可病毒(-)(-)(-)(-)CPE(+)CPE(+)CPE(+)CPE(+)风疹病毒风疹病毒风疹病毒风疹病毒(-)(-)(-)(-)埃可病毒埃可病毒埃可病毒埃可病毒(+)(+)(+)(+)26第26页,共53页,编辑于2022年,星期一(4 4)细胞代谢改变细胞代谢改变 细胞代谢变慢细胞代谢变慢 pHpH改变改变改变改变 (adenovirusadenovirusadenovirusadenovirus)27第27页,共53页,编辑于2022年,星期一2
16、2.病毒形态学鉴定病毒形态学鉴定电子显微镜电子显微镜电子显微镜电子显微镜:设备、操作复杂,:设备、操作复杂,:设备、操作复杂,:设备、操作复杂,应用受限应用受限光学显微镜光学显微镜光学显微镜光学显微镜:可见:可见:可见:可见大病毒大病毒大病毒大病毒(痘类病毒),痘类病毒),痘类病毒),痘类病毒),对一般病毒检测对一般病毒检测对一般病毒检测对一般病毒检测意义不大意义不大意义不大意义不大28第28页,共53页,编辑于2022年,星期一3 3.病毒血清学鉴定病毒血清学鉴定 鉴定病毒种、型、亚型鉴定病毒种、型、亚型鉴定病毒种、型、亚型鉴定病毒种、型、亚型 (1 1 1 1)血凝抑制试验血凝抑制试验血凝
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