实验植物细胞切片的制作精.ppt

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1、实验植物细胞切片的制作实验植物细胞切片的制作第1页，本讲稿共18页二、实验用品和材料二、实验用品和材料1、显微镜、尖嘴镊子、刀片、载玻片、显微镜、尖嘴镊子、刀片、载玻片、盖玻片、吸水纸、解剖针、纱布、碘盖玻片、吸水纸、解剖针、纱布、碘液液。2、蚕豆（芹菜）茎和叶、蚕豆（芹菜）茎和叶3、洋葱或玉米根尖纵切永久制片、洋葱或玉米根尖纵切永久制片4、南瓜或向日葵茎横、纵切永久制片、南瓜或向日葵茎横、纵切永久制片.5、洋葱鳞叶、马铃薯块茎。、洋葱鳞叶、马铃薯块茎。第2页，本讲稿共18页三、内容与方法三、内容与方法（一）临时切片制作（一）临时切片制作、徒手切片法（重点）、徒手切片法（重点）、整体装片、整体

2、装片 适合于植物体形小而扁平适合于植物体形小而扁平的材料。如菌丝、孢子束、藓类。的材料。如菌丝、孢子束、藓类。、涂抹法、涂抹法 用于极小的植物体或组织。用于极小的植物体或组织。如细菌，酵母，花粉，淀粉，晶体等。如细菌，酵母，花粉，淀粉，晶体等。第3页，本讲稿共18页4、撕片法撕片法 适用于某些植物茎、叶适用于某些植物茎、叶容易撕下表皮的植物，如洋葱鳞茎、容易撕下表皮的植物，如洋葱鳞茎、蚕豆叶等。蚕豆叶等。5、压片法、压片法 适用于幼嫩组织中细胞的适用于幼嫩组织中细胞的观察，如根尖，茎尖生长点的细胞有观察，如根尖，茎尖生长点的细胞有丝分裂及花粉母细胞染色体等。丝分裂及花粉母细胞染色体等。第4页，

3、本讲稿共18页徒手切片法徒手切片法第5页，本讲稿共18页徒手切片法徒手切片法 1、取材、取材 选取待观察的植物材料，初步选取待观察的植物材料，初步切取大约切取大约3cm长的小块，再依切片长的小块，再依切片的具体要求，将组织块修整为的具体要求，将组织块修整为0.5cm的材料块。的材料块。第6页，本讲稿共18页2、切片、切片1）以左手夹住材料，用右手平稳地握住刀片。）以左手夹住材料，用右手平稳地握住刀片。2）使刀片与材料的断面保持平行，刀口自左）使刀片与材料的断面保持平行，刀口自左上方斜向右下方，动作要均匀有力。上方斜向右下方，动作要均匀有力。3）材料与刀片须常以水湿润。）材料与刀片须常以水湿润。

4、4）切下的薄片，立即用毛笔蘸水后粘取，移入）切下的薄片，立即用毛笔蘸水后粘取，移入盛有清水的培养皿内。盛有清水的培养皿内。第7页，本讲稿共18页3、选片、选片1）切片完整，在培养皿中选择薄而均匀，）切片完整，在培养皿中选择薄而均匀，且切面完整的组织切片捞出且切面完整的组织切片捞出;2）放在载玻片上作临时水装片，然后置）放在载玻片上作临时水装片，然后置于显微镜下观察；于显微镜下观察；3）如果结构能被清晰地显示出来，则可）如果结构能被清晰地显示出来，则可制成永久保存封片。制成永久保存封片。第8页，本讲稿共18页 石石蜡蜡切切片片机机第9页，本讲稿共18页（二）永久装片的制作（二）永久装片的制作1、

5、材料预处理、材料预处理 将材料装在将材料装在25ml规格的小指管，规格的小指管，加入甘油加入甘油酒精软化剂（甘油酒精软化剂（甘油1份，份，70%酒精酒精1份）份）8ml封盖后在电热恒温封盖后在电热恒温水浴锅水浴锅5018h，第二天升温至，第二天升温至608h进行软化。进行软化。第10页，本讲稿共18页2、蜡块制取、蜡块制取1）逐级脱水）逐级脱水 将上述经软化的材料转入将上述经软化的材料转入250ml已洗净的输液瓶中加入已洗净的输液瓶中加入40ml，70%酒精酒精脱水脱水24h。分别加入各级酒精。分别加入各级酒精40ml，70%酒精酒精脱水脱水24h，85%酒精脱水酒精脱水12h，95%酒精脱水

6、酒精脱水2h，无水酒精脱水，无水酒精脱水1h。同时回收各级酒精。同时回收各级酒精。2）染色）染色 番红酒精染液染色（番红酒精染液染色（1g番红溶于番红溶于100ml 50%酒精中，纱布过滤）染色酒精中，纱布过滤）染色24h。第11页，本讲稿共18页3）透明）透明 转入转入1/2二甲苯二甲苯1/2无水酒精混合液无水酒精混合液20ml透明透明1h，纯二甲苯，纯二甲苯20 ml透明透明1h,再用纯二再用纯二甲苯甲苯20ml透明透明40min，并回收各液。，并回收各液。4）浸蜡）浸蜡 将透明过的材料转入将透明过的材料转入50ml小烧杯小烧杯,在在恒温箱内加入预先在温度保持在恒温箱内加入预先在温度保持在

7、5658恒温恒温箱溶化并过滤的石蜡箱溶化并过滤的石蜡15ml，使材料完全被纯二，使材料完全被纯二甲苯与石蜡浸没，并使温度保持在甲苯与石蜡浸没，并使温度保持在3638,过过夜浸蜡夜浸蜡24h，待二甲苯完全挥发，回收石蜡，待二甲苯完全挥发，回收石蜡,再再加入溶化并过滤的纯石蜡加入溶化并过滤的纯石蜡40ml，温度保持在，温度保持在36381h，升温至，升温至56，使石蜡保持溶化状态。，使石蜡保持溶化状态。第12页，本讲稿共18页5）包埋：）包埋：将浸蜡完全的材料倒入预先制成将浸蜡完全的材料倒入预先制成的光滑的硬纸（的光滑的硬纸（10.01.01.0）制成的纸盒）制成的纸盒中制取蜡块，在恒温箱门的低坎

8、处摆好纸盒，中制取蜡块，在恒温箱门的低坎处摆好纸盒，并写上名称，使其一面紧贴恒温箱的受热金并写上名称，使其一面紧贴恒温箱的受热金属板，纸盒底面紧贴恒温箱底面金属板，倒属板，纸盒底面紧贴恒温箱底面金属板，倒入溶化石蜡入溶化石蜡0.20.3厚的薄层，厚的薄层，2min后待薄后待薄层稍有凝固时将材料依次排列于其上，再倒入溶层稍有凝固时将材料依次排列于其上，再倒入溶化石蜡，并用烧热的解剖针刺破其中的气泡，提化石蜡，并用烧热的解剖针刺破其中的气泡，提着纸盒两端预留的盒耳将纸盒浸入盛有冷水的盆着纸盒两端预留的盒耳将纸盒浸入盛有冷水的盆中冷却制成石蜡块。中冷却制成石蜡块。第13页，本讲稿共18页6）石蜡块的

9、修整：）石蜡块的修整：剥去纸盒，用锐利的单剥去纸盒，用锐利的单面刀片把石蜡块切分为面刀片把石蜡块切分为2长的小蜡块，并将各长的小蜡块，并将各小蜡块的各面修整平，再将其修成长楔形。小蜡块的各面修整平，再将其修成长楔形。3、切片、切片1）固定石蜡块：）固定石蜡块：用在酒精灯上预热好的解剖用在酒精灯上预热好的解剖刀，融化修整好的石蜡块中少许蜡后，立即粘牢刀，融化修整好的石蜡块中少许蜡后，立即粘牢在小木块（在小木块（2.5 21.5cm）上，待蜡完全凝固结）上，待蜡完全凝固结实后，将小木块夹入切片机的固定夹板中固定；实后，将小木块夹入切片机的固定夹板中固定；2）切片：）切片：调整切片机的切片厚度为调整

10、切片机的切片厚度为814 m,切切取石蜡块薄片。取石蜡块薄片。第14页，本讲稿共18页4、粘贴展平、粘贴展平 选取洁净的载玻片，于中央用火柴棒粘取明选取洁净的载玻片，于中央用火柴棒粘取明胶粘贴剂（明胶胶粘贴剂（明胶2g电热恒水浴锅电热恒水浴锅60水浴溶于水浴溶于1000ml蒸馏水，纱布过滤），展成一薄层或滴加蒸馏水，纱布过滤），展成一薄层或滴加一滴蛋白甘油（取鸡蛋一个敲破流出蛋清，甘油一滴蛋白甘油（取鸡蛋一个敲破流出蛋清，甘油即丙三醇，此粘贴剂较明胶粘贴剂理想），用细即丙三醇，此粘贴剂较明胶粘贴剂理想），用细玻棒展成一薄层，加蒸馏水一滴，挑取理想的蜡玻棒展成一薄层，加蒸馏水一滴，挑取理想的蜡带

11、贴于粘贴剂上，在酒精灯火焰稍过带贴于粘贴剂上，在酒精灯火焰稍过34来回，来回，或恒温或恒温37展片台展片台6min，使蜡展在粘贴剂上并展，使蜡展在粘贴剂上并展平。将展平的材料连同一侧贴有标签的载玻片，平。将展平的材料连同一侧贴有标签的载玻片，置于置于37电热恒温箱电热恒温箱24h，使水分蒸干，或恒温，使水分蒸干，或恒温37展片台展片台12h，或室内自然晾干。，或室内自然晾干。第15页，本讲稿共18页5、染色制片、染色制片1）脱蜡：）脱蜡：将粘有蜡片的载玻片排列在装片架将粘有蜡片的载玻片排列在装片架上，转入盛有上，转入盛有400ml纯二甲苯的纯二甲苯的1000ml大烧大烧杯中杯中20min，杯口

12、用塑料袋封严，再转入，杯口用塑料袋封严，再转入盛有盛有400ml纯二甲苯的纯二甲苯的1000ml大烧杯中大烧杯中10min，杯口同样用塑料袋封严，使石蜡完全，杯口同样用塑料袋封严，使石蜡完全溶解。溶解。2）过渡：）过渡：将脱蜡完全的装片架转入盛有将脱蜡完全的装片架转入盛有400ml1/2二甲苯二甲苯1/2纯酒精混合液的纯酒精混合液的1000ml大烧杯中过渡大烧杯中过渡5min，杯口仍用塑料，杯口仍用塑料袋封严。袋封严。第16页，本讲稿共18页3）下降至）下降至70%酒精（水）：酒精（水）：分别经分别经400 ml纯酒精、纯酒精、95%、85%、70%酒精割酒精割400 ml（50%及及30%酒

13、精下降至蒸馏水），并回酒精下降至蒸馏水），并回收各液。收各液。4）番红复染色：）番红复染色：400 ml 1%番红酒精（水液）番红酒精（水液）再染色再染色2h。回收染液，。回收染液，并用自来水洗去并用自来水洗去多余的染液。多余的染液。5）继续脱水：）继续脱水：用用30%、50%和和70%酒精酒精400 ml各处理各处理30s1 min，并回收各液。，并回收各液。6）固绿复染：）固绿复染：用用0.1%固绿的固绿的95%酒精酒精400 ml复染复染1030s，回收染液。，回收染液。第17页，本讲稿共18页7）再继续脱水：）再继续脱水：用用95%酒精和两次纯酒精酒精和两次纯酒精彻底脱水，每次彻底脱水，每次10 s1 min，回收各液。，回收各液。8）透明：）透明：用纯酒精和二甲苯各半的混合液用纯酒精和二甲苯各半的混合液400 ml处理处理5 min，再用，再用400 ml纯二甲苯浸纯二甲苯浸5 min，使材料完全透明，并回收各液。，使材料完全透明，并回收各液。9）封片：）封片：将载玻片自二甲苯中取出，立即将载玻片自二甲苯中取出，立即滴一滴用二甲苯溶解的加拿大树胶于材料滴一滴用二甲苯溶解的加拿大树胶于材料之上，加盖盖玻片。置玻片标本于烘箱中之上，加盖盖玻片。置玻片标本于烘箱中烘干即可。烘干即可。第18页，本讲稿共18页