实验八土壤中微生物的分离精.ppt

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1、实验八土壤中微生物的分离第1页，本讲稿共11页实验原理土壤是微生物生活的大本营 细菌数亿/g土壤，土壤中的细菌总重量估计为：10034 10 12 吨；根据某微生物的生长条件（营养,酸碱度，温度,氧气等）而供给它适宜的培养条件,或加入某种抑制剂造成只利于某种菌的生长,而抑制其他菌的生长;用稀释涂布平板法获得单菌落（并不能绝对保证是纯培养，需要结合观察其菌落特征、个体特征，进一步分离纯化）;第2页，本讲稿共11页实验目的熟悉常用微生物培养基;掌握利用平板分离法从土壤中分离微生物的基本操作;认识土壤环境中微生物的多样性。第3页，本讲稿共11页微生物的分离及稀释平板法微生物的分离及稀释平板法 计数计

2、数 （1）倾注平板法）倾注平板法 (混合平板法混合平板法)（2）涂布平板法）涂布平板法菌落计数菌落计数 稀释到适量浓度稀释到适量浓度 倾注或涂布平板倾注或涂布平板 培养培养 第4页，本讲稿共11页第5页，本讲稿共11页采用培养平板计数法要求操作熟练、准确，否则难以得到正确的结果：样品充分混匀；每支移液管及涂布棒只能接触一个稀释度的菌液；同一稀释度三个以上重复,取平均值；每个平板上的菌落数目合适，便于准确计数；一个菌落可能是多个细胞一起形成，所以在科研中一般用菌落形成单位（colony forming units，CFU）来表示，而不是直接表示为细胞数。第6页，本讲稿共11页实验步骤将10g土样

3、装入含90ml无菌水的锥形瓶中振荡20min取1ml迅速移入含9ml无菌水的试管中，吹吸均匀，为稀释10倍的样品依次进行梯度稀释涂布合适稀释度的样品0.1ml于已经倒好冷却的相应的培养基上，倒置培养第7页，本讲稿共11页实验安排10-610-710-8稀释度为细菌培养10-410-510-6 稀释度为放线菌培养10-210-310-4稀释度为真菌培养第8页，本讲稿共11页菌落计数：每克含菌样品中细菌每克含菌样品中细菌/放线菌放线菌/真菌真菌 活细胞数活细胞数 （同一稀释度平板上菌落平均数（同一稀释度平板上菌落平均数 10稀释倍数稀释倍数 10）含菌样品克数含菌样品克数稀释度10-410-510-6平板中的CFU数细菌123平均123平均123平均放线菌真菌第9页，本讲稿共11页观察结果：下星期三下午第10页，本讲稿共11页平板：5X45=2251毫升吸管：5X9=45涂布棒：5X3=15第11页，本讲稿共11页