高效液相色谱精选PPT.ppt

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1、高效液相色谱第1 页，此课件共21 页哦2022/10/12 2022/10/12第三章高效液相色谱分析法一、高效液相色谱 仪HPLC二、高效液相色谱法的特点feature of HPLC三、流程及主要部件general process and main assembly of HPLC第一节第一节高效液相色谱的特高效液相色谱的特点与仪器点与仪器high performance liquid high performance liquid chromatograph chromatographfeature and instrument feature and instrument of HP

2、LC of HPLC第2 页，此课件共21 页哦2022/10/12 2022/10/12一、液相色谱仪器 high performance liquid chromatograph第3 页，此课件共21 页哦2022/10/12 2022/10/12液相色谱仪（2）第4 页，此课件共21 页哦2022/10/12 2022/10/12液相色谱仪（3）第5 页，此课件共21 页哦2022/10/12 2022/10/12液相色谱仪（4）第6 页，此课件共21 页哦2022/10/12 2022/10/12二、高效液相色谱法的特点 feature of HPLC 特点：高压、高效、高速 特点：高

3、压、高效、高速 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。第7 页，此课件共21 页哦2022/10/12 2022/10/12三、流程及主要部件 process and main assembly of HPLC1.流程第8 页，此课件共21 页哦2022/10/12 2022/10/122.主要部件(1)高压输液泵 主要部件之一，压力：主要部件之一，压力：150 150 35010 350105 5 Pa Pa。为 为 了 了 获 获 得 得 高 高 柱 柱 效 效 而 而 使 使 用 用 粒 粒 度 度 很 很 小 小 的 的 固

4、 固 定 定 相 相（10 10m m），液 液 体 体 的 的流 流 动 动 相 相 高 高 速 速 通 通 过 过 时 时，将 将 产 产 生 生 很 很 高 高 的 的 压 压 力 力，因 因 此 此 高 高 压 压、高 高 速 速 是 是 高 高效液相色谱的特点之一。效液相色谱的特点之一。应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性 应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性第9 页，此课件共21 页哦2022/10/12 2022/10/12(2)梯度淋洗装置外梯度 外梯度:利用两台高压输液泵，利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一 将两种不同极性的溶剂按一定的比

5、例送入梯度混合室，定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。混合后进入色谱柱。内梯度 内梯度:一台高压泵 一台高压泵,通过比 通过比例调节阀 例调节阀,将两种或多种 将两种或多种不同极性的溶剂按一定 不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混 的比例抽入高压泵中混合。合。第10 页，此课件共21 页哦2022/10/12 2022/10/12(3)进样装置 流路中为高压力工作状态，流路中为高压力工作状态，通常使用耐高压的六通阀进样装置，通常使用耐高压的六通阀进样装置，其结构如图所示：其结构如图所示：第1 1 页，此课件共21 页哦2022/10/12 2022/10/12(4)高效分离柱 柱体为

6、直型不锈钢管，内径 柱体为直型不锈钢管，内径1 1 6 6 mm mm，柱长 柱长5 5 40 40 cm cm。发展趋势 发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。是减小填料粒度和柱径以提高柱效。第12 页，此课件共21 页哦2022/10/12 2022/10/12(5)液相色谱检测器 a.a.紫外检测器紫外检测器 应用最广，对大部分有机化合物有响应。应用最广，对大部分有机化合物有响应。特点：特点：灵敏度高；灵敏度高；线形范围高；线形范围高；流通池可做的很小（流通池可做的很小（1 1mm 10mm mm 10mm，容积 容积 8 8L L）；）；对流动相的流速和温度变化不敏感；对流动相的流速

7、和温度变化不敏感；波长可选，易于操作；波长可选，易于操作；可用于梯度洗脱。可用于梯度洗脱。第13 页，此课件共21 页哦2022/10/12 2022/10/12b.光电二极管阵列检测器 紫外检测器的重要进展；紫外检测器的重要进展；光 光电 电二 二极 极管 管阵 阵列 列检 检测 测器 器：1024 1024 个 个 二 二 极 极 管 管 阵 阵 列 列，各 各 检 检 测 测 特 特 定 定 波 波 长 长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。第14 页，此课件共21 页哦2022/10/12 2022/10/12第15 页，此课件共21 页哦

8、2022/10/12 2022/10/12光电二极管阵列检测器第16 页，此课件共21 页哦2022/10/12 2022/10/12c.示差折光检测器（differential refractive index detector）除紫外检测器之外应用最多的检测器；除紫外检测器之外应用最多的检测器；可 可 连 连 续 续 检 检 测 测 参 参 比 比 池 池 和 和 样 样 品 品 池 池 中 中 流 流 动 动 相 相 之 之 间 间 的 的 折 折 光 光 指 指 数 数 差 差 值 值。差值与浓度呈正比；差值与浓度呈正比；通 通 用 用 型 型 检 检 测 测 器 器（每 每种 种 物

9、 物 质 质 具 具 有 有 不 不 同 同 的 的 折 折 光 光指数）；指数）；灵 灵 敏 敏 度 度 低 低、对 对 温 温 度 度 敏 敏感、不能用于梯度洗脱；感、不能用于梯度洗脱；偏 偏 转 转 式 式、反 反 射 射 式 式和干涉型三种；和干涉型三种；第17 页，此课件共21 页哦2022/10/12 2022/10/12示差折光检测器第18 页，此课件共21 页哦2022/10/12 2022/10/12d.荧光检测器（fluorescence detector）高灵敏度、高选择性；高灵敏度、高选择性；对 对 多 多 环 环 芳 芳 烃 烃，维 维 生 生 素 素B B、黄 黄 曲 曲霉 霉 素 素、卟 卟 啉 啉 类 类 化 化 合 合 物 物、农 农 药 药、药 药 物 物、氨 氨 基 基 酸 酸、甾 甾 类 类 化 化 合 合 物 物 等 等有响应；有响应；第19 页，此课件共21 页哦2022/10/12 2022/10/12电导检测器结构第20 页，此课件共21 页哦2022/10/12 2022/10/12响应特性 选择性检测器，对离子型化合物有响应 灵敏度高 受温度的影响大 不能梯度洗提第21 页，此课件共21 页哦2022/10/12 2022/10/12