血红蛋白的提取和分离课件.ppt

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1、血红蛋白的提取和分离课件现在学习的是第1页，共56页知识回顾知识回顾知识回顾知识回顾-有关蛋白质的几个问题：有关蛋白质的几个问题：有关蛋白质的几个问题：有关蛋白质的几个问题：1 1 1 1、含量、含量、含量、含量2 2 2 2、组成元素、组成元素、组成元素、组成元素3 3、相对分子质量、相对分子质量4 4 4 4、基本组成单位：、基本组成单位：、基本组成单位：、基本组成单位：结构简式：结构简式：种类：种类：5 5、氨基酸连接方式、氨基酸连接方式 占细胞干重的占细胞干重的5050以上，细胞中含量最多的有机物以上，细胞中含量最多的有机物C C、HH、OO、N N高分子化合物高分子化合物氨基酸氨基酸

2、R RHHC CCOOHCOOHNHNH2 2脱水缩合脱水缩合现在学习的是第2页，共56页知识回顾知识回顾知识回顾知识回顾-有关蛋白质的几个问题：有关蛋白质的几个问题：有关蛋白质的几个问题：有关蛋白质的几个问题：6 6 6 6、肽键、肽键、肽键、肽键7 7、分子结构、分子结构8 8 8 8、蛋白质多样性的原因：、蛋白质多样性的原因：、蛋白质多样性的原因：、蛋白质多样性的原因：(多样性的多样性的根本原因根本原因)9 9 9 9、蛋白质的鉴定方法、蛋白质的鉴定方法、蛋白质的鉴定方法、蛋白质的鉴定方法氨基酸氨基酸氨基酸氨基酸肽链肽链肽链肽链蛋白质蛋白质蛋白质蛋白质脱水缩合脱水缩合脱水缩合脱水缩合盘曲

3、折叠盘曲折叠盘曲折叠盘曲折叠（n n n n条）条）条）条）COCONHNH 氨基酸的种类不同；数目成百上千；排列顺序变化多端；多肽氨基酸的种类不同；数目成百上千；排列顺序变化多端；多肽氨基酸的种类不同；数目成百上千；排列顺序变化多端；多肽氨基酸的种类不同；数目成百上千；排列顺序变化多端；多肽链的空间结构千差万别链的空间结构千差万别链的空间结构千差万别链的空间结构千差万别1010、生理功能、生理功能 细细胞胞和和生生物物体体的的结结构构物物质质，是是人人体体发发育育和和组组织织更更新新的的主主要要原原料料，具具有有运运输输、调调节节、免免疫疫、催催化化等等作作用用，是是一一切切生生命命活动的主

4、要承担者活动的主要承担者双缩脲试剂双缩脲试剂现在学习的是第3页，共56页现在学习的是第4页，共56页 血红蛋白含有四条肽链血红蛋白含有四条肽链,每条肽链环绕一个每条肽链环绕一个亚铁血红亚铁血红素基团，素基团，此基团可携带此基团可携带一分子氧或一分子二氧化碳，一分子氧或一分子二氧化碳，血红血红蛋白因含有蛋白因含有血红素血红素而呈而呈红色。红色。现在学习的是第5页，共56页本课题的主要内容如下：本课题的主要内容如下：样品处理样品处理及粗分离及粗分离纯纯 化化纯度鉴定纯度鉴定血红蛋白的提取和分离血红蛋白的提取和分离方法原理方法原理方法原理方法原理方法原理方法原理方法原理方法原理凝胶色谱法凝胶色谱法电

5、电 泳泳现在学习的是第6页，共56页一、基础知识一、基础知识:样品处理及粗分离的原理样品处理及粗分离的原理:1 1、分离生物大分子的基本思路是什么？、分离生物大分子的基本思路是什么？2 2、不同蛋白质的特性在哪些方面存在差异？、不同蛋白质的特性在哪些方面存在差异？3 3、为什么不用鸡的血红细胞而用猪的血红细胞作为实、为什么不用鸡的血红细胞而用猪的血红细胞作为实验材料？验材料？4 4、用什么方法分离相对分子质量不同的蛋白质？、用什么方法分离相对分子质量不同的蛋白质？现在学习的是第7页，共56页一、基础知识一、基础知识-蛋白质提取和分离原理蛋白质提取和分离原理 1 1、选用一定的物理或者化学方法分

6、离具有不同物理或化、选用一定的物理或者化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。学性质的生物大分子。2 2、形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附、形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别。性质、亲和力等千差万别。提取提取分离分离方法方法凝胶色谱法凝胶色谱法 现在学习的是第8页，共56页阅读并回答（阅读并回答（P64P64）1 1、凝胶色谱法另一个名称是什么？凝胶色谱法另一个名称是什么？2 2、凝胶色谱法分离蛋白质的依据是什么？凝胶色谱法分离蛋白质的依据是什么？3 3、凝胶的实质是什么？凝胶的实质是什么？4 4、凝胶色谱法的原理是什么？凝胶色谱法的原理是什么？基础

7、知识基础知识（一）（一）凝胶色谱法凝胶色谱法现在学习的是第9页，共56页1 1、凝胶色谱法的凝胶色谱法的别名：别名：分配色谱法分配色谱法 是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。3 3、凝胶实质、凝胶实质 性质：一些性质：一些微小的多孔球体微小的多孔球体，球球内含许多内含许多贯穿的通道；贯穿的通道；化学本质：化学本质：多糖类化合物：多糖类化合物：实例：实例：葡聚糖、琼脂糖：葡聚糖、琼脂糖：基础知识基础知识（一）（一）凝胶色谱法凝胶色谱法2 2、依据的特性、依据的特性蛋白质分子量的大小。蛋白质分子量的大小。4 4、原理、原理现在学习的是第10页

8、，共56页 原理：原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，相对当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（）的蛋白质容易进入凝胶）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（内部的通道，路程（），移动速度（），移动速度（），而（），而（）的蛋白质无法）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（进入凝胶内部的通道，只能在（）移动，路程（移动，路程（），移动速度（），移动速度（），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。离。分子质量较小分子质量较小较长较长较慢较慢相对分子质量较大相对分子质量较大凝胶外部凝胶外部较短较短较快较快基础知识基础知识（一）（一）凝胶色谱法凝胶色谱法现在学习的是第1

9、1页，共56页现在学习的是第12页，共56页用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质的蛋白质A A路程较长，移动速度较慢路程较长，移动速度较慢 B B路程较长，移动速度较快路程较长，移动速度较快C C路程较短，移动速度较慢路程较短，移动速度较慢 D D路程较短，移动速度较快路程较短，移动速度较快D现在学习的是第13页，共56页相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可表示为图中哪一个行过程可表示为图中哪一个B现在学习的是第14页，共56页1 1、之前在什么地方遇见过缓冲物质？之前在什么地方遇见过缓冲物质？2 2、缓冲物质

10、有哪些？作用是什么？缓冲物质有哪些？作用是什么？3 3、本实验加的是什么缓冲液？为何要加缓冲液？本实验加的是什么缓冲液？为何要加缓冲液？（二）、缓冲溶液（二）、缓冲溶液现在学习的是第15页，共56页由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成。由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成。如如H H2 2COCO3 3/NaHCO/NaHCO3 3，醋酸，醋酸/醋酸钠，醋酸钠，NaHNaH2 2POPO4 4/Na/Na2 2HPOHPO4 4等等缓冲溶液洗脱剂缓冲溶液洗脱剂组成：组成：作用：作用：抵制外界酸碱对溶液抵制外界酸碱对溶液pHpH的干扰，保持的干扰，保持 pH pH与体内环境与体内环境基本一致。基本一致。（二）、

11、缓冲溶液（二）、缓冲溶液现在学习的是第16页，共56页基础知识基础知识（三）电泳（三）电泳现在学习的是第17页，共56页阅读第阅读第65页的相关内容，回答以下问题：页的相关内容，回答以下问题：1、电泳的概念；、电泳的概念；2、电泳的原理；、电泳的原理；3、电泳的种类；、电泳的种类；4、SDS的作用。的作用。基础知识基础知识（三）电泳（三）电泳现在学习的是第18页，共56页2 2凝胶电泳法：凝胶电泳法：(三三)电泳电泳1.1.电泳的概念电泳的概念指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程.（1 1）原理：）原理：许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的

12、基团，在一定的许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的PHPH下，这些基团会带上正电或负电。下，这些基团会带上正电或负电。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。移动。电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小，形状的不同使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品的大小，形状的不同使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。中各种分子的分离。现在学习的是第19页，共56页(三三)电泳电泳（2 2）类型类

13、型：琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS)(SDS)（3 3）SDSSDS作用作用为了消除为了消除静电荷对迁移率的影响静电荷对迁移率的影响可以在凝胶中加可以在凝胶中加入入SDSSDS。电电泳泳结结果果阳阳极极现在学习的是第20页，共56页使用使用SDS-SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于质的电泳迁移率完全取决于A A 电荷的多少电荷的多少 B B 分子的大小分子的大小C C 肽链的多少肽链的多少 D D 分子形状的差异分子形状的差异电电泳泳结结果果阳阳极极现在学习的是第21页，共56页样品处理样品处

14、理粗粗 分分 离离纯纯 化化纯度鉴定纯度鉴定 血液组成成分血液组成成分 1.洗洗 涤涤 红红 细细 胞胞 2.释放血红蛋白释放血红蛋白 3.分离分离血红蛋白血红蛋白 4.透析血红蛋白透析血红蛋白血红蛋白的提取和分离血红蛋白的提取和分离跳转跳转现在学习的是第22页，共56页血液组成成分血液组成成分阅读思考：阅读思考：1.1.血液由血液由_和和_两部分组成。两部分组成。2.2.血细胞中血细胞中_细胞数量最多，红细胞的含量最高细胞数量最多，红细胞的含量最高的有机化合物是的有机化合物是_。3.3.该化合物是由该化合物是由 _ _和和_构构成的，其中每个亚基中都含有一个能与成的，其中每个亚基中都含有一个

15、能与O2O2和和CO2CO2结结合的合的_基团。基团。血浆血浆血细胞血细胞红细胞红细胞血红蛋白血红蛋白2 2条条-肽链肽链2 2条条-肽链肽链 亚铁血红素亚铁血红素返回返回现在学习的是第23页，共56页1.1.洗洗 涤涤 红红 细细 胞胞阅读思考：洗涤的目的是什么？阅读思考：洗涤的目的是什么？洗涤过程：洗涤过程：血液血液100mL100mL3g3g柠檬酸钠柠檬酸钠低速离心低速离心2 min2 min红细胞红细胞血血 浆浆吸出血浆吸出血浆红细胞红细胞5倍体积生理盐水倍体积生理盐水搅拌搅拌10min重复洗涤重复洗涤3 3次，直至上清液没有黄色次，直至上清液没有黄色现在学习的是第24页，共56页采集

16、得到猪血采集得到猪血现在学习的是第25页，共56页初次离心后的结果初次离心后的结果现在学习的是第26页，共56页3 3次洗涤后的结果次洗涤后的结果返回返回现在学习的是第27页，共56页2.2.释放血红蛋白释放血红蛋白阅读思考：阅读思考：1.1.释放血红蛋白过程中，在洗涤好的红细胞加入了哪些释放血红蛋白过程中，在洗涤好的红细胞加入了哪些物质？物质？2.2.为了加速释放过程，采取了什么措施？为了加速释放过程，采取了什么措施？目的分析：目的分析：蒸馏水的作用是蒸馏水的作用是_。加入甲苯的作用是加入甲苯的作用是_。充分搅拌的目的是充分搅拌的目的是_。使红细胞大量吸水胀裂使红细胞大量吸水胀裂溶解红细胞的

17、细胞膜溶解红细胞的细胞膜加速红细胞的破裂加速红细胞的破裂现在学习的是第28页，共56页(2)(2)血红蛋白的释放：血红蛋白的释放：加蒸馏水到原血液体积，再加加蒸馏水到原血液体积，再加4040体积的甲苯，置于体积的甲苯，置于磁力搅拌器上充分搅拌磁力搅拌器上充分搅拌1010分钟（加速细胞破裂）分钟（加速细胞破裂）,细胞破裂细胞破裂释放出血红蛋白。释放出血红蛋白。现在学习的是第29页，共56页磁力搅拌器磁力搅拌器返回返回现在学习的是第30页，共56页2 2、粗分离血红蛋白溶液：、粗分离血红蛋白溶液：过程：过程：将搅拌好混合液转移到离心管内，以将搅拌好混合液转移到离心管内，以2000r/min2000

18、r/min的速度离心的速度离心10 min10 min。试管中溶液层次：试管中溶液层次：4 4层。层。分离：分离：用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。现在学习的是第31页，共56页第第1 1层（最上层）：层（最上层）：甲甲苯层（无色透明）苯层（无色透明）第第第第2 2 2 2层（中上层）：层（中上层）：层（中上层）：层（中上层）：脂溶脂溶性物质沉淀层（白色薄性物质沉淀层（白色薄层固体）层固体）第第3 3层（中下层）：层（中下层）：血红蛋血红蛋血红蛋血红蛋白的水溶液层（红色透明

19、液白的水溶液层（红色透明液白的水溶液层（红色透明液白的水溶液层（红色透明液体）体）体）体）第第第第4 4 4 4层（最下层）：层（最下层）：层（最下层）：层（最下层）：杂质沉淀杂质沉淀层（暗红色）层（暗红色）试管中溶液层次试管中溶液层次试管中溶液层次试管中溶液层次返回返回现在学习的是第32页，共56页4.4.透析血红蛋白透析血红蛋白现在学习的是第33页，共56页练习巩固1、随着人类跨入蛋白质组时代，对蛋白质的、随着人类跨入蛋白质组时代，对蛋白质的研究和应用越来越深入，首先要做的一步是研究和应用越来越深入，首先要做的一步是A 弄清各种蛋白质的空间结构弄清各种蛋白质的空间结构B 弄清各种蛋白质的功

20、能弄清各种蛋白质的功能C 弄清各种蛋白质的合成过程弄清各种蛋白质的合成过程D 获得高纯度的蛋白质获得高纯度的蛋白质现在学习的是第34页，共56页2、在采血容器中加入柠檬酸钠的目的是、在采血容器中加入柠檬酸钠的目的是A 调节调节pH B 维持红细胞的能量供应维持红细胞的能量供应C 防止微生物生长防止微生物生长 D 防止血液凝固防止血液凝固现在学习的是第35页，共56页样品处理样品处理粗粗 分分 离离纯纯 化化纯度鉴定纯度鉴定 血液组成血液组成成分成分 1.洗洗 涤涤 红红 细细 胞胞 2.释放释放血红蛋白血红蛋白 3.分离分离血红蛋白血红蛋白 4.透析血红蛋白透析血红蛋白血红蛋白的提取和分离血红

21、蛋白的提取和分离跳转跳转现在学习的是第36页，共56页纯化凝胶色谱操作纯化凝胶色谱操作1.1.凝胶色谱柱的凝胶色谱柱的制作制作：2.2.凝胶色谱柱的凝胶色谱柱的装填装填：教材图教材图5 519193.3.样品的样品的加入和洗脱加入和洗脱返回返回现在学习的是第37页，共56页装配好的凝胶柱色谱柱的制作过程：准备材料色谱柱的制作过程：准备材料加工橡皮加工橡皮塞塞安装色谱柱安装色谱柱现在学习的是第38页，共56页现在学习的是第39页，共56页（二）凝胶色谱操作（二）凝胶色谱操作（1 1）凝胶色谱柱的制作：）凝胶色谱柱的制作：取长取长4040厘米，内径厘米，内径1.61.6厘米的玻璃管，厘米的玻璃管，

22、两端需用砂纸磨平。两端需用砂纸磨平。底塞的制作：底塞的制作：打孔打孔挖出凹穴挖出凹穴安装移液管头部安装移液管头部覆盖尼覆盖尼龙网，再用龙网，再用100100目尼龙纱包好，插到玻璃管的一端目尼龙纱包好，插到玻璃管的一端。顶塞的制作：顶塞的制作：打孔打孔安装玻璃管安装玻璃管。组装：组装：将上述三者按相应位置组装成一个整体将上述三者按相应位置组装成一个整体。安装其他附属结构。安装其他附属结构。现在学习的是第40页，共56页返回返回现在学习的是第41页，共56页2.2.凝胶色谱柱的装填凝胶色谱柱的装填1 1、凝胶的选择材料、凝胶的选择材料?G?G代表意义代表意义?2 2、简单步骤？、简单步骤？3 3、

23、注意点：、注意点：实验操作实验操作 （二）凝胶色谱操作（二）凝胶色谱操作1 1、选择交联葡聚糖凝胶（、选择交联葡聚糖凝胶（G-75G-75）“G G”表示凝胶的交联程度，膨胀程度及分离范围表示凝胶的交联程度，膨胀程度及分离范围,75,75表示凝胶表示凝胶的吸水值，即每克凝胶膨胀时吸水的吸水值，即每克凝胶膨胀时吸水7.57.5克。克。2 2、固定色谱柱配凝胶悬液装填色谱柱洗涤、固定色谱柱配凝胶悬液装填色谱柱洗涤平衡平衡现在学习的是第42页，共56页3 3、凝胶色谱柱的装填注意事项：、凝胶色谱柱的装填注意事项：（1 1）、凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。）、凝胶装填时尽量紧密，以降低

24、凝胶颗粒之间的空隙。（2 2）、装填凝胶柱时不得有气泡存在：因为气泡会搅乱洗脱）、装填凝胶柱时不得有气泡存在：因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。（3 3）、洗脱液面不要低于凝胶表面，否则可能有气泡混入，）、洗脱液面不要低于凝胶表面，否则可能有气泡混入，影响液体在柱内的流动与最终生物大分子物质的分离效果。影响液体在柱内的流动与最终生物大分子物质的分离效果。（4 4）、不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象。）、不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象。现在学习的是第43页，共56页3.3.样品加入与洗脱样品加入与洗脱注意：注意：正确的加样操作

25、是：正确的加样操作是：1 1、不要触及并破坏凝胶面。、不要触及并破坏凝胶面。2 2、贴、贴壁加样。壁加样。3 3、使吸管管口沿管壁环绕移动。、使吸管管口沿管壁环绕移动。现在学习的是第44页，共56页3.3.样品加入与洗脱样品加入与洗脱 调节缓冲液面：调节缓冲液面：打开下端出口，使柱内缓冲液缓慢下降到与打开下端出口，使柱内缓冲液缓慢下降到与凝胶面平齐，关闭出口。凝胶面平齐，关闭出口。滴加透析样品：滴加透析样品：吸管吸吸管吸1ml1ml样品加到色谱柱的顶端，滴加样品时，样品加到色谱柱的顶端，滴加样品时，吸管管口贴着管壁环绕移动加样，同时注意不要破坏凝胶面。吸管管口贴着管壁环绕移动加样，同时注意不要

26、破坏凝胶面。样品渗入凝胶床：样品渗入凝胶床：加样后打开下端出口，使样品渗入凝胶床内，加样后打开下端出口，使样品渗入凝胶床内，等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口。等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口。洗脱：洗脱：小心加入小心加入pH=7.0 pH=7.0 的的20mmol/l20mmol/l的磷酸缓冲液到适当高度，的磷酸缓冲液到适当高度，连接缓冲液洗脱瓶，打开下端出口进行洗脱。连接缓冲液洗脱瓶，打开下端出口进行洗脱。收集：收集：待待红色的蛋白质红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每5ml5ml收集一试管，连续收集收集一试管，连续收集。（在分离过

27、程中，如果红色区带均匀一致的。（在分离过程中，如果红色区带均匀一致的移动，说明色谱柱制作成功）移动，说明色谱柱制作成功）注意：注意：正确的加样操作：正确的加样操作：1 1、不要触及并破坏凝胶面。、不要触及并破坏凝胶面。2 2、贴、贴壁加样。壁加样。3 3、使吸管管口沿管壁环绕移动。、使吸管管口沿管壁环绕移动。现在学习的是第45页，共56页收集得到的纯化后的血红蛋白收集得到的纯化后的血红蛋白现在学习的是第46页，共56页样品的加入和洗脱的操作不正确的是样品的加入和洗脱的操作不正确的是A A 加样前，打开色谱柱下端的流出口，使柱加样前，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面

28、的下面内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面的下面B B加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶床加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内内C C等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口D D用吸管小心的将用吸管小心的将1ml1ml透析后的样品加到色谱透析后的样品加到色谱柱的顶端，不要破坏凝胶面柱的顶端，不要破坏凝胶面A现在学习的是第47页，共56页下列是有关血红蛋白提取和分离的相关操作，下列是有关血红蛋白提取和分离的相关操作，其中正确的是（其中正确的是（）A A可采集猪血作为实验材料可采集猪血作为实验材料 B B用蒸馏水重复洗涤红细胞用蒸馏水重复洗涤红细胞C C血红蛋

29、白释放后应低速短时间离心血红蛋白释放后应低速短时间离心 D D洗脱液接近色谱柱底端时开始收集流出液洗脱液接近色谱柱底端时开始收集流出液 A现在学习的是第48页，共56页 观察你处理的血液样品离心后观察你处理的血液样品离心后是否分层是否分层（见教科书（见教科书图图5-185-18），），如果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血如果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。浆蛋白的原因。此外，离心速度过高和时间过长，会使白此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。后

30、续血红蛋白的提取纯度。三、实验结果分析与评价三、实验结果分析与评价 1 1、你是否完成了对血液样品的处理？你能描述处理后的样、你是否完成了对血液样品的处理？你能描述处理后的样品发生了哪些变化吗？品发生了哪些变化吗？现在学习的是第49页，共56页 2 2、你装填的凝胶色谱柱是否有气泡产生？你的色谱、你装填的凝胶色谱柱是否有气泡产生？你的色谱柱装填得成功吗？你是如何判断的？柱装填得成功吗？你是如何判断的？由于凝胶是一种半透明的介质，因此可以在凝胶柱旁放一由于凝胶是一种半透明的介质，因此可以在凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯，检查凝胶是否装填得均匀。此外，支与凝胶柱垂直的日光灯，检查凝胶是否装填得

31、均匀。此外，还可以加入大分子的有色物质，例如蓝色葡聚糖还可以加入大分子的有色物质，例如蓝色葡聚糖20002000或红色或红色葡聚糖，观察色带移动的情况。如果色带均匀、狭窄、平整，葡聚糖，观察色带移动的情况。如果色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱柱的性能良好。如果色谱柱出现纹路或是气泡，说明凝胶色谱柱的性能良好。如果色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体以消除气泡，消除不了时要重新装柱。轻轻敲打柱体以消除气泡，消除不了时要重新装柱。现在学习的是第50页，共56页 如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄

32、、平整，随着能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。3 3、你能观察到蛋白质的分离过程中，红色区带的、你能观察到蛋白质的分离过程中，红色区带的移动吗？请描述红色区带的移动情况，并据此判断分移动吗？请描述红色区带的移动情况，并据此判断分离效果？离效果？现在学习的是第51页，共56页知识总结知识总结血血红红蛋蛋白白的的提提取取和和分分离离蛋白质分子的差异性蛋白质分子的差异性凝胶色谱法凝胶色谱法原原 理理分

33、离过程分离过程凝胶电泳法凝胶电泳法缓冲溶液缓冲溶液组组 成成作作 用用蛋白质的蛋白质的提取分离提取分离样品处理样品处理粗粗 分分 离离纯纯 化化纯度鉴定纯度鉴定现在学习的是第52页，共56页3 3电泳是指带电粒子在电场的作用下向着与其所带电荷（电泳是指带电粒子在电场的作用下向着与其所带电荷（）的电极移动。）的电极移动。A A相同相同 B B相反相反 C C相对相对 D D相向相向4.4.哺乳动物和人的成熟的红细胞中的（哺乳动物和人的成熟的红细胞中的（）与氧气）与氧气的运输有关。的运输有关。A A血红蛋白血红蛋白 B B肌红蛋白肌红蛋白 C C肌动蛋白肌动蛋白 D D肌球蛋白肌球蛋白BA现在学习

34、的是第53页，共56页5 5血液由血浆和各种血细胞组成，其中（血液由血浆和各种血细胞组成，其中（）的含量最多。）的含量最多。A A白细胞白细胞 B B血小板血小板 C C红细胞红细胞 D D淋巴细胞淋巴细胞6 6为防止血液凝固，在采血容器中要预先加入抗凝血剂为防止血液凝固，在采血容器中要预先加入抗凝血剂（）。）。A.NaCl B.A.NaCl B.甲苯甲苯 C.C.蒸馏水蒸馏水 D.D.柠檬酸钠柠檬酸钠CD现在学习的是第54页，共56页7 7将搅拌好的混合液转移到离心管中，离心后，可以明显看到试将搅拌好的混合液转移到离心管中，离心后，可以明显看到试管中的溶液分为管中的溶液分为4 4层，其中第层

35、，其中第3 3层是（层是（）A A无色透明的甲苯层无色透明的甲苯层 B B脂溶性物质的沉淀层脂溶性物质的沉淀层 C C血红蛋白的水溶液血红蛋白的水溶液 D D其他杂质的暗红色沉淀物其他杂质的暗红色沉淀物C现在学习的是第55页，共56页教学反馈教学反馈 1 1凝胶色谱法是根据（凝胶色谱法是根据（）分离蛋白质的有效方法。）分离蛋白质的有效方法。A A分子的大小分子的大小 B B相对分子质量的大小相对分子质量的大小 C C带电荷的多少带电荷的多少 D D溶解度溶解度2 2缓冲液的作用是：在一定范围内，抵制外界的影响来维持缓冲液的作用是：在一定范围内，抵制外界的影响来维持（）基本不变。）基本不变。A A温度温度 B pH B pH C C渗透压渗透压 D D氧气浓度氧气浓度BB现在学习的是第56页，共56页