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1、精选学习资料 - - - - - - - - - 1、基因工程是在 DNA分子水平上进行设计和施工的,又叫做DNA重组技术;2、基因工程的基本工具 限制性核酸内切酶( 限制酶)、DNA连接酶、运载体(常见的是质粒)3、限制性核酸内切酶的功能:能够识别特定的脱氧核苷酸序列 ,并在 特定位点将两个核苷酸之间的 磷酸二酯键断开,因此具有 专一性;切割时 不 能破坏目的基因、标记基因;4、DNA连接酶的作用是连接两个双链 DNA片段形成磷酸二酯键 ;6、基因工程的基本操作程序是: 目的基因的猎取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测与鉴定7、猎取目的基因的方法有:(1)从自然界中
2、已有的物种中分别 ;(2)人工合成(常用方法有 逆转录法(提取目的基因 mRNA _和化学合成法_);可从基因文库中猎取或利用 PCR技术扩增目的基因;9、基因工程的 核心 是基因表达载体的构建(限制酶+DNA连接酶处理质粒 和目的基因) ;基因表达载体的 组成是: 目的基因启动子终止子标记基因+复制原 点;标记基因的作用: 鉴定受体细胞中 是否含有目的基因 ,从而将 含有目的基 因的细胞挑选出来;常用的标记基因是 抗生素抗性基因(培育基中加入抗生素进行挑选);目的基因与标记基因一般不是同一种基因;11、(1)将目的基因导入植物细胞: 采纳最多 的方法是 农杆菌转化法(Ti 质粒上的 T-DN
3、A可转移至受体细胞的染色体),其次仍有 基因枪法和 花 粉管通道法等;受体细胞如是 体细胞,仍要利用 植物组织培育技术 ;名师归纳总结 - - - - - - -第 1 页,共 6 页精选学习资料 - - - - - - - - - 2)将目的基因导入动物细胞: 最常用的方法是是 受精卵(具有全能性) ;显微注射技术 ;受体细胞(3)将目的基因导入微生物细胞:钙离子处理,使细胞成为 感受态细胞;12、目的基因的检测与鉴定:第一要检测转基因生物的染色体 DNA上是否插入了目的基因 ,方法是采纳 DNA分子杂交技术 ;其次仍要检测 目的基因是否转录出了 mRNA,方法是采纳 分子杂交技 术;(都用
4、 基因探针 :放射性同位素标忘掉目的基因的单链;原理都是碱基互补配对)最终检测 目的基因是否翻译成蛋白质 ,方法是 抗原抗体杂交 ;以上都是观看有没有 杂交带;有时仍需进行 个体水平的鉴定,即接种试验(即用病原体感染或用虫子吃);意义(优势): 定向改造生物的遗传性状 14、蛋白质工程是指以 蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系 作为基 础,通过基因修饰或基因合成 ,对现有蛋白质进行 改造,或制造一种 新的 蛋白质,以满意人类的生产和生活的需求;基因工程在原就上只能生产自然界已存在 的蛋白质,而蛋白质工程生产的蛋白质是 自然界不存在的 ;15、植物组织培育技术 原理:前者原理是 植物细胞的全
5、能性 ;植物体细胞杂交技术 原理是: 细胞膜的流淌性和植物细胞的全能性 ;植物细胞全能性实现的条件:的外界条件;离体、肯定的养分物质、植物激素、相宜16、植物组织培育技术 无菌操作 脱分化再分化第 2 页,共 6 页名师归纳总结 - - - - - - -精选学习资料 过程: 离体的植物器官、组织或细胞- - - - - - - - - 愈伤组织胚状体、丛芽等 植物体 ;20、动物细胞培育的流程: 取动物组织块 (动物胚胎或幼龄动物的器官或组织)剪碎用 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 处理分散成 单个细胞制成 细胞悬液转入培育瓶中到 10 代(原代培育)显现 接触抑制的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理
6、分散成单个细胞连续传代培育到 50 代左右绝大多数细胞死亡,少数成为无限增殖的 细胞系(癌变特点) ;原理: 细胞增殖 21、动物细胞培育需要满意以下条件:无菌、无毒的环境:培育液应进行 无菌处理;通常仍要在培育液中添加 肯定量的 抗生素,以防培育过程中的污染;此外,应定期 更换培育液,防 止代谢产物积存对细胞自身造成危害 ;养分:合成培育基成分:糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素 等;通常需加入 血清、血浆等自然成分;温度:相宜温度:哺乳动物多是36.50.5;pH:7.2 7.4 ;气体环境:95%空气5%CO 2;O2是细胞代谢所必需的, CO 2的主要作用是维护培育液的 pH;2
7、2、动物体细胞核移植技术中选用去核卵 母 细胞做受体细胞的缘由: 含有使细胞核 表达全能性的物质 原理: 细胞核的全能性;24、植物体细胞杂交的 意义 :克服了 远缘杂交的不亲和的障碍;25、单克隆抗体的制备中必需事先对小鼠注射特定抗原 ,使其产生 浆细胞(B淋巴细胞),然后与 骨髓瘤细胞融合;需要经过两次挑选,第一次用 挑选性培育基 ,选出杂交瘤细胞,其次次需要进行 克隆化培育和抗体检测 ,选出能 分泌所需抗体的杂交瘤细胞 ;26、(1)杂交瘤细胞的特点:既能大量繁衍,又能产生 专一的抗体;名师归纳总结 - - - - - - -第 3 页,共 6 页精选学习资料 - - - - - - -
8、 - - (2)单克隆抗体的优点: 特异性强,灵敏度高,并能大量制备;27、精卵结合第一发生的是 顶体反应防止多精入卵的的两道屏障:透亮带反应,卵黄膜封闭作用判定受精的依据: 透亮带和卵黄膜间隙有两个极体28、动物早期胚胎发育的基本过程是:受精卵桑椹胚囊胚原肠胚(1)卵裂期的特点是:细胞有丝分裂,细胞数量不断增加,但胚胎的总体体积并不增加,或略有减小;(2)桑椹胚前细胞具有全能性;(3)囊胚的特点是: 囊胚期开头显现 分化(该时期细胞的全能性仍比较高),集合在胚胎一端个体较大的细胞称为内细胞团,将来发育成胎儿的各种组织,外围的细胞为 滋养层细胞,中间的空腔称为 囊胚腔; 29 、胚胎干细胞来源
9、于 早期胚胎或从原始性腺 中分别出来, 主要特性是:在形状上表现为 体积小,细胞核大,核仁明显;在功能上,具有 发育的全 能性,可分化为成年动物体内任何一种组织细胞;30、试管动物的培育过程: 体外受精、早期胚胎培育、胚胎移植;(1)体外受精过程是:卵母细胞的采集和培育精子的采集和获能受精;(2)采集的卵母细胞必需培育到 必需进行 获能处理;减数其次次分裂中期 ,采集的精子获得更多卵母细胞的方法:超数排卵处理(促性腺激素)31、胚胎移植时要移植到 同种的、生理状态相同的 其它雌性动物的体内,其中胚胎移植是 胚胎工程的最终一道“ 工序 ” ;胚胎移植的意义:充分发挥 32、胚胎移植的生理学基础:
10、雌性优良个体的繁衍才能 ;名师归纳总结 - - - - - - -第 4 页,共 6 页精选学习资料 - - - - - - - - - 动物发情排卵后,同种动物的供、受体生殖器官的生理变化是相同的 ;这就为供体的胚胎 移入受体供应了 相同的生理环境;早期胚胎在肯定时间内处于 受体对移入子宫的外来胚胎 活供应了可能;游离状态;这就为 胚胎的收集供应了可能;不发生 免疫排斥反应 ;这为胚胎在受体的存供体胚胎可与受体子宫建立正常的 生理和组织 联系,但供体胚胎的 遗传特性在孕育过程中不受影响;33、胚胎移植的基本程序主要包括:对供、受体的挑选和处理 ;【挑选:供体要求遗传性能和生产性能优秀的个体,
11、受体要求有健康的体质和正常 第一用激素对供体和受体母牛进行同期发情处理;然后用促性腺激素对供体母牛做超数排卵处理)】;配种或人工授精 ;对胚胎的收集、检查、培育或储存 ;胚胎移植;移植后检查受体是 否妊娠;产下胚胎移植的新个体;如何对胚胎进行性别鉴定?取滋养层细胞做 DNA分析34、胚胎分割一般挑选 发育良好,形状正常的 桑椹胚或囊胚 ; 对囊胚 阶段的胚胎分割时, 要将 内细胞团均等 分割,否就会影响 分割后胚胎的恢 复和进一步发育;意义: 提高胚胎的利用率;属于 无性繁衍;35、达到不同目的所利用的技术:(1)转基因植物:基因工程、植物组织培育;(受体多为体细胞)(2)转基因动物:基因工程、早期胚胎培育、胚胎移植;(受体多为受精卵)(3)克隆动物:动物细胞培育、细胞 核移植 、早期胚胎培育、胚胎移植;(4)转基因克隆动物: 基因工程、动物细胞培育、细胞核移植、早期胚胎培育、胚胎移植;名师归纳总结 - - - - - - -第 5 页,共 6 页精选学习资料 - - - - - - - - - (5)试管动物:体外受精 、早期胚胎培育、胚胎移植;(6)制备单克隆抗体: 动物细胞融合、动物细胞培育;36、你对转基因生物的态度?名师归纳总结 - - - - - - -第 6 页,共 6 页
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