免疫组化应用精选PPT.ppt
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1、关于免疫组化应用关于免疫组化应用第1页,讲稿共42张,创作于星期日n n免疫组化介绍免疫组化介绍n n 免疫组化原理免疫组化原理n n Enlivision染色方法染色方法n n 免疫组化的使用范围免疫组化的使用范围n n各系统肿瘤的抗体表达各系统肿瘤的抗体表达第2页,讲稿共42张,创作于星期日免疫组化的原理免疫组化的原理n n根据抗原和抗体特异性反应的免疫学原理,应用标记抗体根据抗原和抗体特异性反应的免疫学原理,应用标记抗体根据抗原和抗体特异性反应的免疫学原理,应用标记抗体根据抗原和抗体特异性反应的免疫学原理,应用标记抗体检测组织中未知抗原的方法。检测组织中未知抗原的方法。检测组织中未知抗原
2、的方法。检测组织中未知抗原的方法。n n抗原抗原抗原抗原+抗体(标记)抗体(标记)抗体(标记)抗体(标记)抗原抗体复合物抗原抗体复合物抗原抗体复合物抗原抗体复合物n n通过抗原和抗体的特异性结合检测组织中的化学成分通过抗原和抗体的特异性结合检测组织中的化学成分通过抗原和抗体的特异性结合检测组织中的化学成分通过抗原和抗体的特异性结合检测组织中的化学成分(蛋白(蛋白(蛋白(蛋白抗原)抗原)抗原)抗原)n n显示系统:抗原抗体复合物显示系统:抗原抗体复合物显示系统:抗原抗体复合物显示系统:抗原抗体复合物+检测系统检测系统检测系统检测系统n n将将将将二抗二抗二抗二抗和和和和酶酶酶酶通过一个通过一个通
3、过一个通过一个多聚葡聚糖骨架多聚葡聚糖骨架多聚葡聚糖骨架多聚葡聚糖骨架联接成一个多聚体联接成一个多聚体联接成一个多聚体联接成一个多聚体(即(即(即(即EnVisionEnVision)第3页,讲稿共42张,创作于星期日Primary AntibodyPolymer complexSubstrate-chromogensolutiontissue第4页,讲稿共42张,创作于星期日Enlivision染色方法染色方法n n(1)(1)、将切片捞至、将切片捞至、将切片捞至、将切片捞至APESAPES胶片上,放入胶片上,放入胶片上,放入胶片上,放入6060温箱中烘烤温箱中烘烤温箱中烘烤温箱中烘烤1 1
4、小时。小时。小时。小时。n n(2)(2)、经二甲苯脱蜡,梯度酒精脱水后流水冲洗。、经二甲苯脱蜡,梯度酒精脱水后流水冲洗。、经二甲苯脱蜡,梯度酒精脱水后流水冲洗。、经二甲苯脱蜡,梯度酒精脱水后流水冲洗。n n(3)(3)、过、过、过、过3 3 HH2 2OO2 2中中中中20min20min后流水冲洗。后流水冲洗。后流水冲洗。后流水冲洗。n n(4)(4)、修复高火、修复高火、修复高火、修复高火3min3min后,低火后,低火后,低火后,低火15min15min后,自然冷却至室温。后,自然冷却至室温。后,自然冷却至室温。后,自然冷却至室温。n n(5)(5)、取出玻片放至湿盒,、取出玻片放至湿
5、盒,、取出玻片放至湿盒,、取出玻片放至湿盒,PBSPBS冲洗,冲洗,冲洗,冲洗,3minx33minx3。擦干玻片,每张玻片加。擦干玻片,每张玻片加。擦干玻片,每张玻片加。擦干玻片,每张玻片加1 1滴或滴或滴或滴或 50l 50l的第一抗体的第一抗体的第一抗体的第一抗体40min40min。n n(6)(6)、PBSPBS冲洗,冲洗,冲洗,冲洗,3minx33minx3。擦干玻片,每张玻片加。擦干玻片,每张玻片加。擦干玻片,每张玻片加。擦干玻片,每张玻片加1 1滴或滴或滴或滴或50l50l的聚合物增强剂的聚合物增强剂的聚合物增强剂的聚合物增强剂(试剂试剂试剂试剂A A),室温孵育),室温孵育)
6、,室温孵育),室温孵育20min20min。n n(7)(7)、PBSPBS冲洗,冲洗,冲洗,冲洗,3minx33minx3。擦干玻片,每张玻片加。擦干玻片,每张玻片加。擦干玻片,每张玻片加。擦干玻片,每张玻片加1 1滴或滴或滴或滴或50l50l的酶标鼠的酶标鼠的酶标鼠的酶标鼠/兔聚合物兔聚合物兔聚合物兔聚合物(试剂试剂试剂试剂B B),室),室),室),室温下孵育温下孵育温下孵育温下孵育30min30min。n n(8)(8)、PBSPBS冲洗,冲洗,冲洗,冲洗,3minx33minx3。擦干玻片,每张玻片加。擦干玻片,每张玻片加。擦干玻片,每张玻片加。擦干玻片,每张玻片加2 2滴或滴或滴或
7、滴或100l100l的的的的DABDAB液,显微镜下观察,液,显微镜下观察,液,显微镜下观察,液,显微镜下观察,10min10min显色。显色。显色。显色。n n(9)(9)、流水冲洗,苏木素复染、流水冲洗,苏木素复染、流水冲洗,苏木素复染、流水冲洗,苏木素复染1-2min1-2min,0.10.1盐酸分化,自来水冲洗后返蓝。盐酸分化,自来水冲洗后返蓝。盐酸分化,自来水冲洗后返蓝。盐酸分化,自来水冲洗后返蓝。n n(10)(10)、梯度酒精脱水干燥,二甲苯透明,中性树胶封片。、梯度酒精脱水干燥,二甲苯透明,中性树胶封片。、梯度酒精脱水干燥,二甲苯透明,中性树胶封片。、梯度酒精脱水干燥,二甲苯透
8、明,中性树胶封片。第5页,讲稿共42张,创作于星期日免疫组化的使用范围免疫组化的使用范围n n组织学标本中的应用组织学标本中的应用n n细胞块中的应用细胞块中的应用第6页,讲稿共42张,创作于星期日各系统肿瘤的抗体表达n n对肿瘤进行来源分类对肿瘤进行来源分类n n 上皮性肿瘤的标记物上皮性肿瘤的标记物上皮性肿瘤的标记物上皮性肿瘤的标记物 CK CKn n 间叶肿瘤的标记物间叶肿瘤的标记物间叶肿瘤的标记物间叶肿瘤的标记物 Vimentin Vimentinn n 淋巴造血系统肿瘤的标记物淋巴造血系统肿瘤的标记物淋巴造血系统肿瘤的标记物淋巴造血系统肿瘤的标记物 LCA LCAn n 神经内分泌肿
9、瘤的标记物神经内分泌肿瘤的标记物神经内分泌肿瘤的标记物神经内分泌肿瘤的标记物 Syn Syn、CgACgA、CD56CD56n n各系统肿瘤的抗体表达各系统肿瘤的抗体表达第7页,讲稿共42张,创作于星期日上皮性肿瘤中的腺癌上皮性肿瘤中的腺癌第8页,讲稿共42张,创作于星期日CK7+CK20-CK7+CK20-Villin+Villin+Villin-Villin-可见于可见于:胃腺癌:胃腺癌(41.67%)、乳头状肾细胞癌乳头状肾细胞癌(17.39%)、乳腺浸润性导管癌乳腺浸润性导管癌(5.36%)、卵巢浆液性腺癌卵巢浆液性腺癌(3.7%)少见于少见于:肺鳞癌、肺腺癌、:肺鳞癌、肺腺癌、肺小细
10、胞癌、肾透明细胞癌、肺小细胞癌、肾透明细胞癌、嫌色细胞癌、前列腺癌、嫌色细胞癌、前列腺癌、直肠腺癌、乳腺浸润性小叶癌、直肠腺癌、乳腺浸润性小叶癌、卵巢粘液性癌。卵巢粘液性癌。可见于可见于:乳腺浸润型小叶癌:乳腺浸润型小叶癌(100%(100%)、)、肺腺癌肺腺癌(95.83%(95.83%)、乳腺浸润型)、乳腺浸润型导管癌导管癌(78.57%)(78.57%)、卵巢浆液性腺癌、卵巢浆液性腺癌(70.37%(70.37%)、嫌色细胞癌)、嫌色细胞癌(66.67%(66.67%)、)、卵巢粘液性腺癌卵巢粘液性腺癌(37.5%(37.5%)、肺鳞癌)、肺鳞癌(11.43%(11.43%)、前列腺癌)
11、、前列腺癌(9.09%(9.09%)、)、直肠腺癌直肠腺癌(2.78%(2.78%)、胃腺癌)、胃腺癌(2.78%(2.78%)、肾透明细胞癌、肾透明细胞癌(2.33%(2.33%)。)。少见于少见于:肺小细胞癌、乳头状肾细:肺小细胞癌、乳头状肾细胞癌。胞癌。第9页,讲稿共42张,创作于星期日CK7+CK20+CK7+CK20+Villin+Villin+Villin-Villin-可见于可见于:胃腺癌:胃腺癌(13.89%(13.89%)、)、卵巢粘液性腺癌卵巢粘液性腺癌(12.5%(12.5%)、直肠)、直肠腺癌腺癌(5.56%(5.56%),乳头状肾细),乳头状肾细胞癌胞癌(4.35%(
12、4.35%)少见于少见于:肺鳞癌、肺腺癌、:肺鳞癌、肺腺癌、肺小细胞癌、肾透明细胞癌、肺小细胞癌、肾透明细胞癌、肾嫌色细胞癌、乳腺癌、肾嫌色细胞癌、乳腺癌、卵巢浆液性癌。卵巢浆液性癌。可见于可见于:卵巢粘液性腺癌:卵巢粘液性腺癌(12.5%(12.5%)乳腺浸润性导管癌乳腺浸润性导管癌(3.57%(3.57%)、胃腺)、胃腺癌癌(2.78%(2.78%)、直肠腺癌)、直肠腺癌(2.78%(2.78%)。)。少见于少见于:肺鳞癌、肺腺癌、肺小:肺鳞癌、肺腺癌、肺小细胞癌、肾透明细胞癌、细胞癌、肾透明细胞癌、乳头状乳头状肾细胞癌、嫌色细胞癌、前列腺肾细胞癌、嫌色细胞癌、前列腺癌、乳腺浸润性小叶癌、
13、卵巢浆液癌、乳腺浸润性小叶癌、卵巢浆液性癌。性癌。第10页,讲稿共42张,创作于星期日CK7-CK20-CK7-CK20-Villin+Villin+Villin-Villin-可见于可见于:乳头状肾细胞癌:乳头状肾细胞癌(43.47%(43.47%)、)、胃腺癌胃腺癌(18.06%(18.06%)、直肠腺癌)、直肠腺癌(16.67(16.67%)、卵巢粘液腺癌)、卵巢粘液腺癌(12.5%(12.5%)、嫌色)、嫌色细胞癌细胞癌(11.11%(11.11%)、前列腺癌)、前列腺癌(4.54%(4.54%)。)。少见于少见于:肺鳞癌、肺腺癌、肺小细胞癌、:肺鳞癌、肺腺癌、肺小细胞癌、肾透明细胞癌
14、、乳腺浸润型导管癌、肾透明细胞癌、乳腺浸润型导管癌、乳腺浸润性小叶癌、卵巢浆液性癌。乳腺浸润性小叶癌、卵巢浆液性癌。可见于可见于:肺小细胞癌:肺小细胞癌(100%(100%)、肾透明细胞癌)、肾透明细胞癌(42/43(42/43,97.67%97.67%)肺鳞癌)肺鳞癌(88.57%(88.57%)、前)、前列腺癌列腺癌(86.36%(86.36%)、乳头状肾细胞癌)、乳头状肾细胞癌(34.78(34.78%)、嫌色细胞癌)、嫌色细胞癌(22.22%(22.22%)、卵巢浆液腺)、卵巢浆液腺癌癌(18.52%(18.52%)、乳腺浸润型导管癌)、乳腺浸润型导管癌(16.07%(16.07%)、
15、胃腺癌、胃腺癌(13.89%(13.89%)、直肠腺癌)、直肠腺癌(5.56%(5.56%)、)、肺腺癌肺腺癌(4.17%(4.17%)。)。少见于少见于:乳腺浸润性小叶腺癌、卵巢粘液:乳腺浸润性小叶腺癌、卵巢粘液腺癌。腺癌。第11页,讲稿共42张,创作于星期日CK7-CK20+CK7-CK20+Villin+Villin+Villin-Villin-可见于可见于:直肠腺癌:直肠腺癌(52.78%)(52.78%)、卵巢粘、卵巢粘液性腺癌液性腺癌(25%)(25%)、胃腺癌、胃腺癌(6.94%)(6.94%)、卵巢浆液性癌卵巢浆液性癌(3.7%(3.7%)。)。少见于少见于:肺鳞癌、肺腺癌、肺
16、小细胞:肺鳞癌、肺腺癌、肺小细胞癌、肾透明细胞癌、乳头状肾细胞癌、肾透明细胞癌、乳头状肾细胞癌、嫌色细胞癌、前列腺癌、乳腺癌、嫌色细胞癌、前列腺癌、乳腺浸润性导管癌、乳腺浸润性小叶癌。浸润性导管癌、乳腺浸润性小叶癌。可见于可见于:直肠腺癌:直肠腺癌(13.89%(13.89%)、卵巢)、卵巢浆液性腺癌浆液性腺癌(3.7%(3.7%)。)。少见于少见于:肺鳞癌、肺腺癌、肺小细:肺鳞癌、肺腺癌、肺小细胞癌、肾透明细胞癌、乳头状肾胞癌、肾透明细胞癌、乳头状肾细胞癌、嫌色细胞癌、前列腺癌、细胞癌、嫌色细胞癌、前列腺癌、乳腺浸润性导管癌、乳腺浸润性乳腺浸润性导管癌、乳腺浸润性小叶癌、卵巢粘液性癌、胃腺癌
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