病毒感染的实验室诊断精选PPT.ppt
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1、关于病毒感染的实验室诊断第1页,讲稿共30张,创作于星期二病毒感染的实验诊断方法 病原学诊断病原学诊断 病毒分离培养病毒分离培养病毒分离培养病毒分离培养显微镜检查显微镜检查显微镜检查显微镜检查抗原检测抗原检测核酸检测核酸检测血清学诊断血清学诊断 抗体检测抗体检测抗体检测抗体检测 IgM、IgG第2页,讲稿共30张,创作于星期二一、标本采集与运送(一)标本采集(一)标本采集(一)标本采集(一)标本采集采集时间:尽早采集(越早越好)采集时间:尽早采集(越早越好)采集时间:尽早采集(越早越好)采集时间:尽早采集(越早越好)标本种类:根据感染的部位、可能感染的病毒类型选择标本种类:根据感染的部位、可能
2、感染的病毒类型选择标本种类:根据感染的部位、可能感染的病毒类型选择标本种类:根据感染的部位、可能感染的病毒类型选择第3页,讲稿共30张,创作于星期二(二)标本的运送与保存1.1.低温送检低温送检低温送检低温送检 4 4可保存数小时可保存数小时可保存数小时可保存数小时-7070可长期保存可长期保存可长期保存可长期保存 -10 10 -2020下病毒易灭活,不可用于保存病毒标本下病毒易灭活,不可用于保存病毒标本下病毒易灭活,不可用于保存病毒标本下病毒易灭活,不可用于保存病毒标本 对冷冻标本应避免反复冻融对冷冻标本应避免反复冻融对冷冻标本应避免反复冻融对冷冻标本应避免反复冻融2.2.保湿送检保湿送检
3、保湿送检保湿送检 50%50%甘油盐水保存送检甘油盐水保存送检甘油盐水保存送检甘油盐水保存送检 病毒转运培养基(病毒转运培养基(病毒转运培养基(病毒转运培养基(virus transport medium virus transport medium,VTMVTM)含)含)含)含0.5%0.5%明胶或牛血明胶或牛血明胶或牛血明胶或牛血清白蛋白的清白蛋白的清白蛋白的清白蛋白的HankHank s s液液液液3.3.无菌送检无菌送检无菌送检无菌送检 抑制细菌生长抑制细菌生长抑制细菌生长抑制细菌生长 100U/ml100U/ml青霉素青霉素青霉素青霉素100g/ml100g/ml链霉素链霉素链霉素链
4、霉素 抑制真菌生长抑制真菌生长抑制真菌生长抑制真菌生长 2.52.5gggg/ml/ml二性霉素二性霉素二性霉素二性霉素B B 或或或或40 g/ml40 g/ml制霉菌素制霉菌素制霉菌素制霉菌素第4页,讲稿共30张,创作于星期二二、病毒的分离与鉴定(一)病毒分离和鉴定的一般程序(一)病毒分离和鉴定的一般程序 动物接种动物接种组织培养组织培养标本采集标本采集标本处理后接种标本处理后接种鸡胚接种鸡胚接种卵黄囊膜卵黄囊膜尿囊液尿囊液羊膜腔液羊膜腔液绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜观察囊膜病变观察囊膜病变血凝试验血凝试验血凝抑制试验血凝抑制试验CPEEM包涵体包涵体空斑试验空斑试验红细胞吸附红细胞吸附中和试验中
5、和试验观察发病观察发病抗原检测抗原检测抗体检测抗体检测病理检查病理检查第5页,讲稿共30张,创作于星期二(二)病毒的分离组织培养组织培养组织培养组织培养 鸡胚培养鸡胚培养鸡胚培养鸡胚培养动物接种动物接种动物接种动物接种第6页,讲稿共30张,创作于星期二1.组织培养将将将将人人人人或或或或动动动动物物物物离离离离体体体体的的的的活活活活组组组组织织织织或或或或分分分分散散散散的的的的活活活活细细细细胞胞胞胞在在在在体体体体外外外外人人人人工工工工控控控控制制制制的的的的条条条条件件件件下下下下使使使使其生长繁殖的一种技术。其生长繁殖的一种技术。其生长繁殖的一种技术。其生长繁殖的一种技术。组织培养
6、的类型组织培养的类型组织培养的类型组织培养的类型(1 1)组织块培养)组织块培养)组织块培养)组织块培养(2 2)器官培养)器官培养)器官培养)器官培养 人胚气管呼吸道病毒;人胚肠肠道病毒人胚气管呼吸道病毒;人胚肠肠道病毒人胚气管呼吸道病毒;人胚肠肠道病毒人胚气管呼吸道病毒;人胚肠肠道病毒(3 3)细胞培养)细胞培养)细胞培养)细胞培养 最常用最常用最常用最常用 原代和次代细胞培养原代和次代细胞培养原代和次代细胞培养原代和次代细胞培养 二倍体细胞培养二倍体细胞培养二倍体细胞培养二倍体细胞培养 传代细胞培养传代细胞培养传代细胞培养传代细胞培养第7页,讲稿共30张,创作于星期二 动动动动物物物物新
7、新新新鲜鲜鲜鲜组组组组织织织织(人人人人胚胚胚胚肾肾肾肾等等等等)胰胰胰胰酶酶酶酶消消消消化化化化营营营营养养养养液液液液培培培培养养养养单单单单层层层层细细细细胞胞胞胞(原代细胞)(原代细胞)(原代细胞)(原代细胞)原代细胞原代细胞原代细胞原代细胞胰酶消化胰酶消化胰酶消化胰酶消化转种培养(次代培养细胞)转种培养(次代培养细胞)转种培养(次代培养细胞)转种培养(次代培养细胞)对病毒敏感,但制备费时费力,只能传对病毒敏感,但制备费时费力,只能传对病毒敏感,但制备费时费力,只能传对病毒敏感,但制备费时费力,只能传2 23 3代。代。代。代。二二二二倍倍倍倍体体体体细细细细胞胞胞胞株株株株 原原原原
8、代代代代细细细细胞胞胞胞反反反反复复复复传传传传代代代代(50507070代代代代)仍仍仍仍保保保保持持持持二二二二倍倍倍倍体体体体染染染染色体特性。病毒分离和疫苗制备的首选细胞株。色体特性。病毒分离和疫苗制备的首选细胞株。色体特性。病毒分离和疫苗制备的首选细胞株。色体特性。病毒分离和疫苗制备的首选细胞株。传传传传代代代代细细细细胞胞胞胞系系系系 来来来来源源源源于于于于肿肿肿肿瘤瘤瘤瘤细细细细胞胞胞胞或或或或突突突突变变变变的的的的二二二二倍倍倍倍体体体体细细细细胞胞胞胞,能能能能在在在在体体体体外外外外无无无无限限限限增增增增殖殖殖殖。增增增增殖殖殖殖快快快快,不不不不易易易易衰衰衰衰老老
9、老老,易易易易于于于于传传传传代代代代保保保保存存存存。常常常常用用用用于于于于病病病病毒毒毒毒的的的的分分分分离离离离鉴鉴鉴鉴定定定定,但不能用于制备疫苗。但不能用于制备疫苗。但不能用于制备疫苗。但不能用于制备疫苗。原代和次代培养细胞原代和次代培养细胞第8页,讲稿共30张,创作于星期二2.鸡胚培养常用于粘病毒、疱疹病毒和痘类病毒的分离培养常用于粘病毒、疱疹病毒和痘类病毒的分离培养常用于粘病毒、疱疹病毒和痘类病毒的分离培养常用于粘病毒、疱疹病毒和痘类病毒的分离培养接种途径及方法接种途径及方法接种途径及方法接种途径及方法 新鲜受精卵新鲜受精卵新鲜受精卵新鲜受精卵 接种病毒接种病毒接种病毒接种病毒
10、3839713d卵黄囊接种卵黄囊接种羊膜腔接种羊膜腔接种尿囊腔接种尿囊腔接种绒毛尿囊膜接种绒毛尿囊膜接种第9页,讲稿共30张,创作于星期二绒毛尿囊膜表现有痘病毒的特异性损伤绒毛尿囊膜表现有痘病毒的特异性损伤第10页,讲稿共30张,创作于星期二3.动物接种常常常常用用用用动动动动物物物物 小小小小鼠鼠鼠鼠、大大大大白白白白鼠鼠鼠鼠、豚豚豚豚鼠鼠鼠鼠、家家家家兔兔兔兔、猴猴猴猴等等等等。不不不不同同同同病病病病对对对对动动动动物物物物的的的的敏敏敏敏感感感感性不同,根据病毒种类加以选择。性不同,根据病毒种类加以选择。性不同,根据病毒种类加以选择。性不同,根据病毒种类加以选择。接种途径接种途径接种途
11、径接种途径 按病毒侵袭部位选择相应的接种途径:按病毒侵袭部位选择相应的接种途径:按病毒侵袭部位选择相应的接种途径:按病毒侵袭部位选择相应的接种途径:乙型脑炎病毒及狂犬病毒乙型脑炎病毒及狂犬病毒乙型脑炎病毒及狂犬病毒乙型脑炎病毒及狂犬病毒 小鼠脑内接种小鼠脑内接种小鼠脑内接种小鼠脑内接种 柯萨奇病毒柯萨奇病毒柯萨奇病毒柯萨奇病毒 乳鼠腹腔接种乳鼠腹腔接种乳鼠腹腔接种乳鼠腹腔接种乙肝病毒乙肝病毒乙肝病毒乙肝病毒 黑猩猩静脉注射黑猩猩静脉注射黑猩猩静脉注射黑猩猩静脉注射流感病毒流感病毒流感病毒流感病毒 鼻腔滴种鼻腔滴种鼻腔滴种鼻腔滴种用途用途用途用途分离鉴定病毒,制备疫苗,制备抗血清分离鉴定病毒,制
12、备疫苗,制备抗血清分离鉴定病毒,制备疫苗,制备抗血清分离鉴定病毒,制备疫苗,制备抗血清第11页,讲稿共30张,创作于星期二(三)病毒的鉴定病毒的初步鉴定病毒的初步鉴定病毒的初步鉴定病毒的初步鉴定 动物感染范围及潜伏期动物感染范围及潜伏期动物感染范围及潜伏期动物感染范围及潜伏期对鸡胚的敏感性对鸡胚的敏感性对鸡胚的敏感性对鸡胚的敏感性在细胞培养中的表现在细胞培养中的表现在细胞培养中的表现在细胞培养中的表现 理化性质的测定理化性质的测定理化性质的测定理化性质的测定最后鉴定最后鉴定最后鉴定最后鉴定 血清学鉴定血清学鉴定血清学鉴定血清学鉴定:中和试验、补体结合试验、血凝抑制试验等中和试验、补体结合试验、
13、血凝抑制试验等中和试验、补体结合试验、血凝抑制试验等中和试验、补体结合试验、血凝抑制试验等分离的新病毒,必须进行系统的鉴定分离的新病毒,必须进行系统的鉴定分离的新病毒,必须进行系统的鉴定分离的新病毒,必须进行系统的鉴定第12页,讲稿共30张,创作于星期二病毒在细胞培养中的表现(1 1)细胞代谢作用改变)细胞代谢作用改变)细胞代谢作用改变)细胞代谢作用改变(培养液颜色变化)(培养液颜色变化)(培养液颜色变化)(培养液颜色变化)正常细胞代谢:正常细胞代谢:正常细胞代谢:正常细胞代谢:培养液由红变黄培养液由红变黄培养液由红变黄培养液由红变黄 病毒增殖,抑制细胞代谢:培养液颜色不变或更红病毒增殖,抑制
14、细胞代谢:培养液颜色不变或更红病毒增殖,抑制细胞代谢:培养液颜色不变或更红病毒增殖,抑制细胞代谢:培养液颜色不变或更红第13页,讲稿共30张,创作于星期二 病病毒毒在在细细胞胞内内增增殖殖后后,使使宿宿主主的的形形态态发发生生不不同同程程度度改改变变,这这种种由由病病毒毒增增殖殖引引起起的的细细胞胞形形态变化,称为细胞病变效应。态变化,称为细胞病变效应。(2 2)细胞病变效应)细胞病变效应(cytopathic effect cytopathic effect,CPECPE)细胞变圆、融合、肿胀、细胞空泡、核浓细胞变圆、融合、肿胀、细胞空泡、核浓缩、形成嗜酸性或嗜碱性包涵体等。缩、形成嗜酸性或
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