急性有机氟杀鼠剂中毒0305.docx

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1、急性有机氟杀鼠剂中毒事件卫生应急处置技术方案有机氟杀鼠剂以氟乙酰胺、氟乙酸钠等最为常见。急性有机氟杀鼠剂中毒是短期内接触有机氟杀鼠剂后引起的以中枢神经系统和心脏损害为主的全身性疾病。1概述氟乙酰胺和氟乙酸钠为白色晶体,易溶于水,常温下化学性质稳定。有机氟杀鼠剂均为高毒或剧毒化学物,其中毒途径主要为经口摄入，绝大多数为污染、误用、投毒引起中毒，如食用有机氟杀鼠剂污染的食品和饮用水，也可经皮肤黏膜吸收。2中毒事件的调查和处理2.1现场处置人员的个体防护现场调查人员的个体防护无特殊要求。现场采样人员采集样品时，应当佩戴医用防护口罩，乳胶手套和防护眼罩，防护服无特殊要求。医疗救护人员在救护中毒病人时，

2、一般不必穿戴特殊防护装备。2.2中毒事件的调查调查人员到达中毒现场后，应当先了解中毒事件的概况，怀疑由餐饮食品引起的有机氟中毒时，应当及时向有关部门提出收集并封存所有可疑中毒食品和其他可能导致本次中毒事件物品的建议，然后进行中毒事件相关场所、人员等调查工作，主要包括人群流行病学调查和危害因素调查。中毒事件危害因素调查包括中毒事件涉及可疑食品的原料、生产加工、储存、运输、销售、食用等过程中的相关危害因素以及使用的原料和配料、调料、食品容器、使用的工具，食品的分装、储存条件以及食用方法等。人群流行病学调查对象应当包括中毒病人、目击证人以及其他相关人员（如生产加工人员、商店销售服务人员等）。调查内容

3、包括接触时间、接触物质、接触人数、中毒人数、中毒的主要症状、中毒事件的进展情况、已经采取的紧急措施以及可疑食品来源、生产单位、日期、批号，配方、加工工艺流程、生产经营过程危害因素控制、生产经营记录等信息。同时，还应当向临床救治单位进一步了解相关资料（如抢救过程、临床治疗资料、实验室检查结果等）。对现场调查的资料作好记录，进行现场拍照、录音等。取证材料要有被调查人的签字。在调查工作中要作好相关的记录，被调查者应当在记录上和其提供的材料上签字确认，拒绝签字的，由调查人员会同1名以上现场见证人员在相应材料上注明原因并签字。2.3现场中毒样品的快速检测怀疑氟乙酰胺中毒时，可以使用改良奈氏试剂法（附件2

4、）或异羟肟酸铁反应法（附件3）对中毒事件现场采集的可疑中毒食品、水以及中毒病人的呕吐物等样品进行快速定性检测。2.4 中毒事件的确认和鉴别2.4.1 中毒事件的确认标准同时具有以下三点，可以确认为急性有机氟杀鼠剂中毒事件：a) 中毒病人存在有机氟杀鼠剂接触机会；b) 中毒病人短时间内出现以癫痫样大发作、头痛、头晕等中枢神经系统损害和/或心律失常、心肌损伤等心脏损害为主的临床表现；c) 血、呕吐物和/或食物等样品中检出有机氟杀鼠剂。2.4.2 中毒事件的鉴别应当注意其它毒物中毒（如毒鼠强中毒、霉变甘蔗中毒、有机氯杀虫剂中毒等），以及乙型脑炎、流行性脑脊髓膜炎等传染病疫情、群体性癔病、急性心肌炎、

5、特发性癫痫等鉴别。2.5 现场医疗救援现场医疗救援首要措施是迅速控制中毒病人的抽搐发作，并保持呼吸道通畅。意识清晰的中毒病人应当立即进行催吐，有条件可给予活性炭（成人用量为50g，儿童用量为1g/kg）口服。当出现大批中毒病人，应当首先进行现场检伤分类，优先处理红标病人。2.5.1 现场检伤分类a) 红标，具有下列指标之一者：昏迷；癫痫样发作呈持续状态；窒息。b) 黄标，具有下列指标者：癫痫样大发作。c) 绿标，具有下列指标者： 出现局灶性癫痫样发作，以及头痛、头晕、乏力、胸闷、心悸、恶心、呕吐等症状。d) 黑标，同时具备下列指标者：意识丧失，瞳孔散大，无自主呼吸，大动脉搏动消失。2.5.2

6、现场医疗救援对于红标病人要保持复苏体位，立即建立静脉通道。抽搐发作者，立即缓慢静脉注射地西泮，必要时可联合应用苯巴比妥钠。黄标病人和红标病人出现呼吸节律明显不规律、窒息或严重缺氧等情况时，及时给予气道开放、呼吸支持。绿标病人脱离环境后，暂不予特殊处理，观察病情变化。2.5.3 病人转送中毒病人经现场急救处理后，应当立即就近转送至有血液净化条件的医院继续观察和治疗。3中毒样品的采集与检测3.1 采集样品的选择选择全血作为采集样品。3.2 样品的采集方法采血人员应当戴无粉乳胶或聚乙烯手套，在洁净的环境中，采用肝素锂(钠)抗凝采血管，同时采集2份全血样品，每份采集量不少于5ml。随机抽取与样品采集同

7、批号的采血管2份，作为样品空白。3.3 样品采集时机样品应当在接触毒物后尽快采集，6小时以内采集的样品可以进行氟乙酰胺、氟乙酸根离子定性定量检测，6小时到24小时之间采集的样品可以进行氟乙酸根离子定性定量检测。3.4 样品的保存和运输将采集后的样品和样品空白置于清洁容器中冷冻运输。样品采集后应当尽快送实验室进行分析测定。所有实验室检测完毕后的样品和未检样品，应当在冷冻（-80）条件下至少保存1周以上，以备样品复测。3.5 推荐的实验室检测方法3.5.1全血中氟乙酸根离子液相色谱质谱联用检测方法（附件4）。3.5.2全血中氟乙酰胺的气相色谱质谱检测方法（附件5）。3.5.3全血中氟乙酸根离子的离

8、子色谱检测方法（附件6）。3.5.4生物样品中氟乙酸根离子的气相色谱和气相色谱-质谱联用检验方法。（GA/T933-2011）4医院内救治4.1 病人交接中毒病人送到医院后，由接收医院的接诊医护人员与转送人员对中毒病人的相关信息进行交接，并签字确认。4.2诊断和诊断分级救治医生对中毒病人或陪护人员进行病史询问，对中毒病人进行体格检查和实验室检查，确认中毒病人的诊断，并进行诊断分级。4.2.1诊断及诊断分级中毒病人有明确的有机氟杀鼠剂接触证据（病人本身或共同暴露其他病人的生物材料中检出有机氟杀鼠剂，或相关食品、水等接触样品中检出有机氟杀鼠剂等），出现了以头痛、头晕、癫痫样发作等中枢神经系统损害和

9、/或心律失常、心肌损伤等心脏损害为主的特征性临床表现，可确认急性有机氟中毒的诊断。对于有有机氟杀鼠剂接触机会，无特征性临床症状者可作为观察对象。具体诊断分级如下：a) 轻度中毒：具有下列情况之一者：i出现头痛、头晕、恶心、呕吐、四肢无力等症状，可有局灶性癫痫样发作；ii心电图出现轻度缺血性改变，或CK-MB达到或超过正常参考值2倍以上至5倍以下，并伴有AST、LDH等酶相应增高，或肌钙蛋白检测阳性； 出现阵发性室上性心动过速，单源频发室性期前收缩，莫氏型房室传导阻滞等心律失常之一。b) 中度中毒：在轻度中毒基础上，具有下列之一者：i癫痫样大发作；ii精神病样症状，如幻觉、妄想等； 心电图有明显

10、缺血性改变，或CK-MB达到或超过正常参考值5倍以上，并伴有AST、LDH等酶相应增高； 出现阵发性室性心动过速，多源性室性期前收缩，成对或RonT型室性期前收缩，莫氏型房室传导阻滞等心律失常之一。c) 重度中毒：具有下列之一者：i癫痫样发作呈持续状态；ii 出现度房室传导阻滞、尖端扭转型室性心动过速、心室颤动或心室停搏等心律失常之一； 出现脑、心、肺、肾、肝等脏器功能衰竭。4.3 治疗接收医院对所接收的中毒病人确认诊断后，根据病情的严重程度将病人送往不同科室进行进一步救治。观察对象进行至少48h医学观察，轻、中度中毒病人住院治疗，重度中毒病人立即进行抢救治疗。4.3.1 清除体内毒物a) 催

11、吐：对于意识清晰、经口中毒早期者，可进行催吐。1岁以下及不能配合的儿童不要进行催吐治疗。b) 洗胃：对经口中毒不足24h，无洗胃禁忌症的病人均要进行洗胃。重度中毒的病人洗胃后可保留洗胃管，以备反复灌入活性炭。c) 活性炭：无使用活性炭禁忌症的中毒病人均可考虑给予活性炭治疗。轻度中毒病人洗胃后给予活性炭1次，中、重度中毒病人可反复使用，使用剂量一般为成人每次30g50g，儿童每次1g/kg。d) 血液净化：首选血液透析治疗，中、重度中毒病人在保证生命体征平稳的情况下，应当早期进行血液净化治疗，可多次进行。4.3.2 特效解毒药物乙酰胺为特效解毒剂，需早期、足量应用。轻、中度中毒病人每次2.5g5

12、.0g，肌内注射，每日24次，连用57日；重度中毒病人首日每次可给予5.0g10.0g。儿童使用剂量为每次0.1g/kg0.3g/kg。4.3.3镇静止惊a) 地西泮：癫痫样大发作和癫痫样发作持续状态的首选药物。成人每次10mg20mg，儿童每次0.3mg/kg0.5mg/kg，或按（年龄+1）mg计算，如1岁2mg、2岁3mg等，儿童每次用量不超过10mg，婴幼儿每次用量不超过2mg，缓慢静脉注射。注射速度成人不大于5mg/min，儿童不大于2 mg/min，新生儿0.1mg/min0.2mg/min。必要时1520分钟可重复静脉注射。使用时应注意气道保护，防止发生呼吸抑制。b) 苯巴比妥钠

13、：为基础用药，可与其他镇静止惊药物合用。轻度中毒，每次0.1g，每8小时1次，肌内注射；中、重度中毒，每次0.1g0.2g，每6h8h时1次，肌内注射。抽搐停止后减量使用37天。儿童每次8mg/kg10mg/kg，每12小时1次，连用2天，每日最大用量不超过20mg/kg，以后再予每天3mg/kg5mg/kg维持。c) 咪达唑仑：控制癫痫样大发作和癫痫样发作持续状态。成人每次5mg10mg，儿童每次0.15mg/kg0.3mg/kg，缓慢静脉注射，注射速度成人不大于4mg/min，儿童不大于1.25mg/min。必要时1520分钟可重复静脉注射。发作频繁者，可以（0.10.4）mg/kg.h或

14、（26）g/kg.min持续静脉点滴，发作控制12小时后减量停用。使用时应注意气道保护，防止发生呼吸抑制。d）其他：癫痫持续状态超过30min，连续两次使用地西泮或咪达唑仑，抽搐仍不能得到有效控制，应及时使用静脉麻醉剂。4.3.4 保护心肌、控制心律失常 使用能量合剂、维生素C、辅酶Q10、1-6二磷酸果糖等药物以保护心肌、改善心肌细胞代谢；及时使用抗心律失常药物控制心律失常，出现莫氏型或度房室传导阻滞伴血流动力学不稳定者，可考虑安装临时起搏器。4.3.5 其他对症支持治疗加强营养、合理膳食，注意水、电解质及酸碱平衡，密切监护心、脑、肝、肾等重要脏器功能，出现呼吸衰竭、脑水肿、精神障碍以及肝肾

15、功能障碍时，应及时给予氧疗、呼吸机支持、脱水降颅压等相应对症支持治疗措施。5 应急反应的终止中毒食品和其他可疑毒物已经完全收缴和销毁，中毒相关危险因素已被有效控制，未出现新的中毒病人且原有病人病情稳定24h以上。附件1致痉挛性杀鼠剂的理化性质和毒性毒物名称CAS分子式物理特性化学性质毒性人最低致死剂量备注动物途径LD50（mg/kg）氟乙酰胺640-19-7C2H4OFN白色针状结晶，无臭无味，易溶于水、乙醇、丙酮，微溶于氯仿。空气中易潮解，熔点107108。常温下化学性质较为稳定。大鼠经口5.75 mg/kg可造成二次中毒。氟乙酸钠62-74-8FCH2COONa白色晶体，略带醋酸气味，极易

16、溶于水，微溶于丙酮、乙醇。在空气中易潮解成糖浆状。常温下化学性质较为稳定，但高于200可以分解。大鼠经口0.15 mg/kg可引起二次中毒甘氟80650-71-2C3H6OF2占70%80%，C3H6OFCl占20%30%无色或微黄色透明油状液体，具有挥发性，略带酸味，能与水、醇、乙醚混溶。化学性质稳定大鼠经口30可引起二次中毒。经皮66附件2改良奈氏试剂法定性测定食品、生物样品中氟乙酰胺1 适用范围适用于食品样品及部分生物样品(呕吐物、胃液和胃内容物)中氟乙酰胺的定性测定，测定结果可作为初步判断事件中毒物的重要参考，不能作为确定事件性质的依据。氟乙酰胺的检测目前无分析方法国家标准，遇重大突发

17、事件性质的判定，建议采用其他分析方法加以确证。2 原理氟乙酰胺水溶液遇到强碱性的奈氏试剂,逐渐水解出氨,与奈氏试剂作用,产生黄棕色沉淀。3 方法重要参数3.1 检出限：0.5g。 3.2 干扰：铵盐存在假阳性干扰。3.3 全程测定时间：20min。4 器材与试剂4.1 试剂奈氏试剂:11.5g碘化汞和8g碘化钾溶于少量水中,溶后加水稀释至50ml,再加入25%氢氧化钠50ml,静置过夜。取上清液置于棕色瓶中待用。4.2 阳性对照样品：5ml胃液中加50g氟乙酰胺。4.3 阴性对照样品：5ml胃液中加50g溴鼠隆。5 测定5.1 样品处理固体或半固体(胃内容物、呕吐物)样品,可采用有机溶剂直接提

18、取法。一般常用甲醇或乙醇浸泡,在50水浴上温浸1h2h。如用其他有机溶剂(乙酸乙酯、氯仿等)时,可在提取容器中充分振摇,然后过滤,滤液置60水浴上蒸发至近干,用适量甲醇溶解残渣(混浊时可过滤),溶液供检验用;液体样品(饮水、菜汤、饮料),可直接用氯仿等有机溶剂提取或用透析法处理,也可采用在水浴上蒸去水分后再用甲醇浸出。5.2 测定取处理后的样品溶液1ml2ml ,加奈氏试剂1ml2ml ,如有氟乙酰胺,在滴加试剂约0.5min，观察颜色变化。如测定食品样品氟乙酰胺，应同时与氟乙酰胺标准和水质等作对照。如测定胃液和胃容物中氟乙酰胺时，同时与阳性样品和阴性样品对照。6 结果判定阳性：淡黄色黄色亮黄

19、色深黄色，2min 后逐渐混浊，最后生成桔红色沉淀。阴性：无颜色反应。7 说明7.1 如有铵盐存在，滴加试剂后立即生成桔红色沉淀。7.2 对含量低的或含量高的样品要用几种检验方法来确证，以避免假阳性和假阴性，同时要以氟乙酰胺标准和水质等作对照试验，以便检查操作是否准确。7.3 样品分离提取后，得到的毒物数量往往很少，而且常常又不能重复采样，为此，在试验前以消耗少量的样品进行预试验后，再进行确证试验。附件3异羟肟酸铁反应法定性测定食品等样品中氟乙酰胺1 适用范围 本方法适用于食品、毒饵、水、呕吐物样品，可作为初步判断事件中毒物的重要参考，不能作为确定事件性质的依据。氟乙酰胺的检测目前无分析方法国

20、家标准，遇重大突发事件性质的判定，建议采用其他分析方法加以确证。2 原理氟乙酰胺与羟胺在碱性条件下，生成异羟肟酸，与三价铁离子作用发生变色反应，通过颜色变化，可对氟乙酰胺进行定性。3 方法重要参数3.1 检出限：50g/ml。3.2 干扰：碱度过高对其可造成假阳性干扰，酸度过高可造成假阴性干扰。3.3 全程测定时间：15min。4 试剂和仪器4.1 仪器：酒精灯1个（或电热杯1个）、试管若干、500ml烧杯1个、100ml烧杯2个、漏斗或滴管1个、玻璃棒1个、滤纸若干，PH试纸。4.2 试剂：活性炭或中性氧化铝、氢氧化钠溶液，盐酸羟胺溶液、盐酸溶液、三氯化铁。4.3 氟乙酰胺标准品可从公安部门

21、获得。5 样品前处理由于现场所采集的样品成分复杂，除少数样品，例如市售鼠药或工业原粉，可直接用本方法检测外，其他样品均需进行样品前处理来以去除杂质干扰，提高灵敏度和降低假阳性率。5.1 鼠药和工业原粉直接取少量0.1g0.5g样品进行检测。5.2 固体样品（毒饵、米、面、茶叶、盐、呕吐物等）取固体样品（颗粒大的固体需先研磨碎）2g5g放入10ml比色管中，加入3倍于样品重的蒸馏水，振摇后过滤，将上清液用滤纸过滤，重复上述过程一次，合并上清液至一大试管内，将比色管置于沸水浴中，使滤液煮沸浓缩至1ml左右。注意：不要将已经挥发干的试管长时间置于沸水浴中，否则会影响回收率，出现假阴性结果。5.3 液

22、体样品（水、酒、饮料、酱油、醋等）取液体样品5ml放入大试管中，加入等量于样品重的蒸馏水或纯净水，充分振荡混匀，静置5min，用分液漏斗或滴管分离上清液，重复过程一次，合并上清液至大试管内，将试管置于沸水浴中，使滤液煮沸浓缩至1ml左右。酱油、醋、有颜色的饮料等液体样品使用少量活性炭或中性氧化铝进行脱色处理，以防止颜色干扰。6 样品测定取待检液1ml左右于试管中，加氢氧化钠溶液10滴，加盐酸羟胺溶液5滴，置沸水中水浴5min（使其充分水解成氟乙酸钠释放出氨）。取出放冷，加盐酸溶液910滴（调pH值至35）后，加三氯化铁溶液310滴（使其与氟乙酸反应），取出观察颜色变化。同时取一干净的空试管进行

23、同样操作作为对照。7 结果判定阳性：粉红或紫红色，尤其在滴加后的液面上更为明显。阴性：浅黄或黄色。8 说明8.1 加盐酸溶液9滴后要用pH试纸测试溶液pH值，若pH值太高(碱度过高)，加入三氯化铁溶液时可产生红棕色沉淀，影响结果判定，造成假阳性结果；若pH值太低(酸度过高)，加入三氯化铁溶液后氟乙酰胺显色不敏锐或不显色，易造成假阴性结果。pH值可用氢氧化钠溶液和盐酸溶液反向调整。8.2 空白对照试验，取与样品相同（不含氟乙酰胺）的物质与样品同时操作，以便于观察对比。对于呕吐物、胃内容物等样品，应加阳性对照试验。8.3 测定时做空白对照试验，阴性结果为浅黄或黄色，有些空白对照为黄棕色絮状沉淀，静

24、置后上层液变成无色或仅呈浅黄色。8.4 本方法不适于血液和组织器官样品的测定。8.5 三氯化铁溶液放置时间长时会有少量沉淀产生，须摇匀后使用。组合试剂的有效期为1年，阳性对照试验无反应时不可再用。9 质量控制检测时，应当同时做阴性样品及氟乙酰胺标准品。附件4 全血中氟乙酸根离子液相色谱-质谱联用检测方法1 适用范围适用于全血中氟乙酸根离子的定性定量分析。2 原理全血样品经乙腈沉淀蛋白后，采用液相色谱-质谱联用方法检测分析，以保留时间和特征离子定性，以标准曲线法定量。3 方法重要参数3.1 线性范围：5g/L500g/L；3.2精密度：批内、批间 RSD10%；3.3准确度（回收率）：80%10

25、5%；3.4方法检出限：1g/L。4 器材与试剂液相色谱质谱联用仪，振荡仪，离心机，微量加样器，氮吹浓缩仪，0.22m微孔滤膜（水系），氟乙酸钠标准，乙腈（色谱纯），甲酸铵（色谱纯）。5 操作步骤5.1 色谱参考条件色谱柱：CSH（氟苯基柱）或C18（50 mm2.1 mm, 1.7 m）；流动相：0.4%甲酸铵溶液:乙腈=70:30；流速：0.2mL/min。5.2 质谱参考条件离子源：电喷雾离子源（ESI）；检测模式：负离子检测模式；扫描模式：MRM模式；监测离子：7733.1；离子源电压：4.6 KV；离子源温度：550。5.3样品预处理将全血样品放至室温混匀后，取0.50ml于离心管中

26、，加3ml乙腈沉淀蛋白，振摇1min，10000rpm/min离心10min，取上清液，氮吹浓缩至干，加入流动相0.5ml复溶，经 0.22m微孔滤膜（极性）过滤后，滤液待测。5.4标准储备液的配制准确称取13mg氟乙酸钠标准品于10ml容量瓶中，用纯水定容至刻度，配制成浓度为1300g/ml的氟乙酸钠标准贮备液，即1000g/ml的氟乙酸根离子标准储备液。置于冰箱4冷藏保存备用。5.5样品检测5.5.1 样品定性检测 5.5.1.1特征离子和质谱条件的确定取氟乙酸根离子标准储备液，采用流动相稀释成浓度约为100g/L的标准溶液，以蠕动泵直接进样方式在电喷雾负离子模式下测定：首先在全扫描模式中

27、获得氟乙酸的准分子离子M-H-（m/z 77），优化毛细管电压及锥孔电压，使响应值最高。然后切换到子离子扫描模式，调节碰撞能量，获得碎片离子（m/z 33.1、m/z 56.9、m/z 48.8等）及相对离子丰度，确定特征离子和相应的质谱条件。 5.5.1.2用流动相稀释标准储备液成20g/L标准溶液，按上述仪器参考条件，进样检测后确定氟乙酸根离子的保留时间以及特征离子。 5.5.1.3检测试剂空白、样品空白、容器空白和空白对照样品（正常人全血样品），确认无干扰。 5.5.1.4 检测阳性对照（以空白对照样品加标作为阳性对照样品，加标浓度为2g/L），确认阳性对照样品能够检出。 5.5.1.5

28、 检测样品，将样品谱图与空白对照样品、标准谱图对比分析，以保留时间和特征离子定性。5.5.2样品定量检测 5.5.2.1定量离子的选择在5.5.1.1中选择相对丰度最强的碎片离子，与准分子离子组成特征离子对（参考：76.833.1）作为定量离子。 5.5.2.2 标准系列溶液的配制用流动相将标准储备液逐级稀释配制成5g/L、10g/L、100g/L、500g/L的氟乙酸根离子标准系列溶液。 5.5.2.3样品检测取样品滤液20l进样检测，以标准曲线定量。6 质量控制6.1 实验室应当对检测方法进行确认，各项指标达到方法要求。6.2 检测过程应采取质量控制措施，每个待测样品检测前必须进行试剂空白

29、检测，以确认进样针和色谱质谱仪器系统未受污染。附件5 全血中氟乙酰胺的气相色谱质谱检测方法1 适用范围适用于全血中氟乙酰胺的定性定量分析。2 原理全血中的氟乙酰胺用乙酸乙酯提取，氮吹浓缩后，用乙酸乙酯复溶，使用气相色谱-质谱仪进行检测，标准品对照，特征离子丰度比与保留时间定性，标准曲线法定量。 3 方法重要参数 3.1 线性范围：5.0g/ml80g/ml；3.2 精密度：批内、批间RSD10%； 3.3 准确度（回收率）：90%105%；3.4 方法检出限：0.2g/ml。4 器材与试剂 气相色谱质谱仪（四级杆），毛细管色谱柱（DB-1701MS或 DB-1MS，30m0.25mm0.25m

30、），涡旋振荡器，高速离心机，氮吹浓缩仪，乙酸乙酯（色谱纯），氟乙酰胺标准品。5 操作步骤 5.1 色谱参考条件 进样口温度：250；传输线温度：280；柱温：初始温度80，保持2min，以20/min的速率升温至280，保持5min；载气：高纯氦气，流速 1.0ml/min；进样模式：不分流进样；进样体积：1.0l。5.2 质谱参考条件离子源：EI；离子源能量：70eV；离子源温度：230；四极杆温度：150；扫描模式：SIM模式；扫描离子：44 m/z、77 m/z（定量离子）。5.3 样品预处理 将全血样品放至室温混匀后，取5ml置于试管中，加入5ml乙酸乙酯，充分振荡混匀，以2000r/

31、min离心2min，分离上清液。重复提取一次，合并上清液至试管内，用氮吹浓缩仪常温浓缩近干，加入0.5ml乙酸乙酯复溶后进行检测。 5.4标准储备液的配制 用乙酸乙酯准确配制浓度为800g/ml氟乙酰胺标准储备液。置于冰箱4冷藏保存。5.5样品检测5.5.1 样品定性检测 5.5.1.1用乙酸乙酯稀释标准储备液成10g/ml标准溶液，按上述仪器参考条件，进样检测后确定氟乙酰胺的保留时间和特征离子丰度比。 5.5.1.2检测试剂空白、样品空白、容器空白和空白对照样品（正常人全血样品），确认无干扰。 5.5.1.3 检测阳性对照（以空白对照样品加标作为阳性对照样品，加标量为每毫升全血含有1g氟乙酰

32、胺），确认阳性对照样品能够检出。 5.5.1.4 检测样品，将样品谱图与空白对照样品、标准谱图对比分析，以保留时间和特征离子定性。5.5.2样品定量检测 5.5.2.1 标准系列溶液的配制用乙酸乙酯将标准储备液逐级稀释配制成5.0g/ml、10g/ml、40g/ml、80g/ml氟乙酰胺标准系列溶液。 5.5.2.3样品检测取复溶样品溶液进样检测，以标准曲线定量。6 质量控制 6.1 实验室应当对检测方法进行确认，各项指标达到方法要求。6.2 检测过程应当采取质量控制措施，每个待测样品检测前必须进行试剂空白检测，以确认进样针和色谱质谱仪器系统未受污染。附件6 全血中氟乙酸根离子的离子色谱检测方

33、法1 适用范围 适用于全血中氟乙酸根离子的定性定量分析。 2 原理 全血中的氟乙酸根离子用纯水提取，用乙腈沉淀蛋白质并定容，采用离子色谱法检测分析，以保留时间定性，以标准曲线法定量。3 方法重要参数 3.1 线性范围：0.5g/ml20g/ml；3.2 精密度：批内、批间 RSD10%； 3.3 准确度（回收率）：85%105%； 3.4 方法检出限：0.1g/ml。 4 器材与试剂 离子色谱仪（配置电导检测器），阴离子交换柱（Dionex Ion pac AS11-HC）及其相应的保护柱（AG11-HC），旋涡混合器，离心机，微量加样器，0.22m微孔滤膜（水系），氟乙酸钠标准品，乙腈（色谱

34、纯），碳酸钠溶液，实验用水为超纯水。5 操作步骤 5.1 色谱参考条件 阴离子交换柱：Dionex Ion pac AS11-HC，250mm4mm i.d.；保护柱：AG11-HC，50mm4mm i.d.；抑制器电流：50 mA；淋洗液：9.0 mmol/L碳酸钠溶液，流速为1.0 ml/min；进样量：25l定量环。5.2样品预处理 将全血样品放至室温混匀后，取0.5ml置于10ml离心管中，加入 1.0 ml超纯水，用乙腈定容至10.0ml，在旋涡混合器上振荡混匀 3min后，3000rpm离心10min，取上清液9.0ml经0.22m微孔滤膜过滤后，滤液待测。5.3标准储备液的配制

35、准确称取13mg氟乙酸钠标准品于10ml容量瓶中，用纯水定容至刻度，配制成浓度为1000g/ml的氟乙酸根离子标准储备液。置于冰箱4冷藏保存。5.4 样品检测5.4.1 样品定性检测 5.4.1.1用纯水稀释标准储备液成10g/ml标准溶液，进样检测后确定氟乙酸根离子的保留时间。 5.4.1.2检测试剂空白、样品空白、容器空白和空白对照样品（正常人全血样品），确认无干扰。 5.5.1.3 检测阳性对照（以空白对照样品加标作为阳性对照样品，加标量为每毫升全血含有20g），确认阳性对照样品能够检出。 5.4.1.4检测样品，将样品谱图与空白对照样品、标准谱图对比分析，以保留时间定性。5.4.2 样品定量检测 5.4.2.1标准系列溶液的配制：用纯水将标准储备液逐级稀释配制成0.5g/ml、2.0g/ml、10g/ml和20g/ml的氟乙酸根离子标准系列溶液。 5.4.2.2 样品检测：取样品滤液25l进样检测，以标准曲线定量。 6 质量控制 6.1 实验室应当对检测方法进行确认，各项指标达到方法要求。6.2 检测过程应当采取质量控制措施，每个待测样品检测前必须进行试剂空白检测，以确认进样和色谱仪器系统未受污染。6.3 当保留时间有漂移时，须对阳性样品进行加标确认。 国家卫生计生委办公厅 2015年3月 日印发校对：韩玉红